專利名稱：卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及卡介菌多糖核酸的用途，具體地說，是卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的藥物中的用途。
背景技術：
慢性支氣管炎、哮喘、變態反應性鼻炎、變態反應性皮膚病均為春季常見多發疾病。臨床上抗菌、抗組織胺、激素類藥物較多，對這些疾病發作時癥狀控制已不是難題，但無法控制其反復發作。卡介菌多糖核酸的應用推廣，又多了一種可控制這些疾病復發的有效方法。但是，臨床上傳統應用卡介菌多糖核酸的施藥手段是肌肉注射方式，雖然其注射途徑療效是肯定的，但存在以下幾個缺點一是臨床上注射途徑用藥不方便，二是卡介菌多糖核酸臨床用藥療程較長，如患者中途放棄治療，將貽誤病情。卡介菌多糖核酸注射液治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘，采用肌肉注射給藥難以達到直接作用于病灶部位的目的，不能滿足局部給藥。

發明內容
本發明的目的是提供卡介菌多糖核酸的新的給藥途徑，具體的說，是提供其在制備口腔局部給藥的藥物中的用途。
本發明的另一目的是提供這種新的藥物制劑的制備方法。
本發明的技術方案本發明提供卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的具有雙向免疫調節功能的藥物的用途。
具體的是卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物中的用途。
同時，本發明還提供有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的具有雙向免疫調節功能的藥物組合物。
進一步的是，有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物組合物。
所述藥物組合物為口腔局部用藥的固體制劑或液體制劑，具體的說所述固體制劑是口含片、口腔粘附片或膜劑，更具體地說這種口含片、口腔粘附片或膜劑，含有卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/片，所述的液體制劑是噴霧劑，其中，含卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/撳。
本發明還提供了所述藥物組合物的制備方法，包括a、液體浮膜培養或固體培養制備卡介菌菌體；b、熱酚乙醇提取卡介菌多糖核酸；c、在b步驟中制備的有效量卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料混合，制成口腔局部給藥的藥物制劑。
卡介菌多糖核酸可通過口腔粘膜吸收而發揮其雙向免疫調節功能，一方面通過增強單核——巨噬細胞功能，增強人體血液中T細胞總數，提高NK細胞的活性，提高IgG及C3含量等機制，增強免疫功能低下患者的免疫功能，故對免疫功能低下所致的疾病如呼吸道反復感染；流感有很好的療效；另一方面，通過提高TH1/TH2的比值穩定肥大細胞膜，產生抗體封閉作用等，對免疫功能過強所致的疾病如哮喘，過敏性鼻炎，過敏性皮炎等也有很好的療效。除此機理之外，本發明中卡介菌多糖核酸是采用口腔粘膜用藥而引發的粘膜免疫反應，產生強的TH1型細胞免疫應答，從而產生r-干擾素等免疫刺激細胞因子以及激活免疫效應機制，因此，本發明的卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的制劑主要用于預防和治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘等疾病。
卡介菌多糖核酸采用口腔局部用藥具有療效佳，毒性小，副作用少，安全性高，服藥方便等優點。
具體實施例方式
以下通過試驗來進一步闡述本發明所述藥物的有益效果，包括藥效試驗和毒理試驗。試驗例1卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的動物效力試驗一、材料1、試驗動物豚鼠300-450g雌雄各半，共計80只2、試劑小牛血清、卡介菌多糖核酸(半成品粉劑)、蔗糖、淀粉、生理鹽水、卡舒寧(卡介菌多糖核酸針劑)。
3、試驗器材燒杯、三角瓶、注射器及針頭、量筒、電子天平、醫用剪刀、醫用鑷子等。二、步驟1、配置小牛血清(10mg/ml，1mg/ml)，輔形劑(比例為蔗糖1∶1淀粉)2、將80只豚鼠分別稱重并按隨機分組法分成五組，每組12只且雌雄各半，每只豚鼠分別肌肉注射小牛血清(0.5mg/ml/只)進行致敏，隔日一次，共計3次，末次注射后，各組分別做以下處理第一組分別肌肉注射卡舒寧，隔日一次，共計10次；第二組分別灌胃卡舒寧(1支/只)，隔日一次，共計10次；第三組分別口腔噴含卡介菌多糖核酸(0.5mg/只)+輔形劑，隔日一次，共計10次；第四、五組分別口腔噴含等量的輔形劑，隔日一次，共計10次；各組做完以上處理后，末次次日，第一、二、三、四各組選10只健康豚鼠分別后肢靜脈注射小牛血清(10mg/ml/只)進行攻擊，第五組用生理鹽水(1ml/只)后肢靜脈攻擊。每只動物在攻擊后觀察其30分鐘內的反應情況，各組按以下標準進行打分，并通過計算各組間的P值來判斷差異。
3、反應打分標準反應級數 反應癥狀0無明顯反應1有抓鼻、顫抖或豎毛2有幾次咳嗽有抓鼻、顫抖或豎毛3多次或連續咳嗽，伴有呼吸困難，痙攣4痙攣、抽搐、休克死亡四結果見下表表1卡介菌多糖核酸的幾種服藥方案的藥效狀況

五分析與討論以上結果中第一組作為試驗的脫敏陽性對照，二、三組為不同口服途徑及方案的試驗組，第四組為脫敏陰性對照，第五組為整個試驗的致敏系統的陰性對照。
計算各試驗組分別與脫敏陰性和陽性組間的P值，以及陰陽組間的P值。得到以下結果1組、3組分別與4組間的P值均為＜0.051組分別與3組間的P值均為 ＞0.052組與4組間的P值為 ＞0.05根據以上P值結果可以說明本次脫敏試驗設立的陰陽性對照(4組與1組)是成立的，即二者間存在顯著差異，同樣試驗組中第3組與陰性對照組存在顯著差異，并與陽性對照組間無顯著差異。
第二組卡介菌多糖核酸(灌服卡舒寧)與第三組噴含卡介菌多糖核酸兩組試驗結果為反應級別零 一 二 三 四灌服組各級別動物數(C1) 1 1 1 3 3口腔噴含組各級別動物數(C2) 2 4 3 - 1經計算兩種結果之間統計學P值為0.034，且小于0.05，從而說明二者間存在顯著性差異。
上述試驗表明口腔噴含卡介菌多糖核酸的脫敏效果與肌注方式近似，而優于口服卡介菌多糖核酸。試驗二卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的急毒性試驗一、試驗材料1、試劑和器材卡舒寧、輔形劑(蔗糖與淀粉1∶1配制)、電子分析天平、微量進樣器、乳缽、燒杯等。
2、動物選用25±2g健康昆明種小鼠，每一實驗組16只，雌雄各半。二、試驗方法1、劑量試驗組卡介菌多糖核酸口含采用3個劑量，分別為卡介菌多糖核酸1mg+輔形劑9mg/只、卡介菌多糖核酸2mg+輔形劑8mg/只、
卡介菌多糖核酸4mg+輔形劑6mg/只；對照組口含輔形劑10mg/只。
2、分組與觀察小鼠按性別隨機分成8組，其中雌性4組，雄性4組；三個實驗組分別按上述劑量一次給予小鼠，對照組只給予等量輔形劑，小鼠給藥后連續10天觀察動物死亡情況，10天后各組進行稱重。三、實驗結果1、小鼠給藥后觀察和稱重結果如表2所示表2卡介菌多糖核酸口含片急毒性試驗劑量卡介菌多 途徑 動物觀察日/動物健康 存活數及糖核酸 口腔 性別情 況 (死亡率)+輔形劑 噴含 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101mg 口 雄8只 ------ ---- 8(0.0％)+9mg/只 含 雌8只 ------ ---- 8(0.0％)2mg 口 雄8只 ------ ---- 8(0.0％)+8mg/只 含 雌8只 ------ ---- 8(0.0％)4mg 口 雄8只 ------ ---- 8(0.0％)+6mg/只 含 雌8只 ------ ---- 8(0.0％)0mg 口 雄8只 ------ ---- 8(0.0％)+10mg/只 含 雌8只 ------ ---- 8(0.0％)-注口含日期 “-”表示動物健康2、10日后動物稱重情況第一組(口含卡介菌多糖核酸1mg+9mg輔形劑)雄性平均體重32.6g雌性平均體重31.4g第二組(口含卡介菌多糖核酸2mg+8mg輔形劑)雄性平均體重33.3g雌性平均體重31.5g第三組(口含卡介菌多糖核酸4mg+6mg輔形劑)雄性平均體重31.9g雌性平均體重31.2g第四組(口含輔形劑10mg即對照組)雄性平均體重32.4g雌性平均體重32.1g四、結論以上三組中不同劑量的卡介菌多糖核酸口含給小鼠后均未引起動物死亡。根據人用劑量以2mg/50kg來計算，試驗的三組劑量分別為人用劑量的1000倍，2000倍，4000倍，且各組動物體重均未出現明顯減輕，反而是表現為正常生長的增重現象，這些均表明口含卡介菌多糖核酸人用劑量是安全的、低毒的。
下面通過實施例的方式來進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。實施例1卡介菌多糖核酸口含片制備a.液體浮膜培養技術及固體培養技術制備卡介菌菌體涉及特定的蘇通氏培養基配制處方(1000ml)MgSO40.5gK2HPO40.5g檸檬酸2g味精 8g甘油 60ml檸檬酸鐵銨0.05g1‰硫酸鋅 1ml方法加熱水溶，氨水調節PH為7.5，0.1Mpa30分鐘滅菌。卡介菌菌體培養技術將保存于蘇通馬鈴薯培養基的卡介菌菌種接種于上述特定的蘇通氏培養基，在38±0.5℃條件下培養7天后為S1菌膜，將S1菌膜接種于蘇通氏培養基內連續培養10-12天即為SII菌膜，用SII菌膜再繼續接種上述含味精蘇通氏培養基21天制備沙膜，收取沙膜用于卡介菌多糖核酸的制備。b.卡介菌菌體經熱酚法提取制備卡介菌多糖核酸粉末取破碎菌懸液與等量熱酚混勻，以靜止法或離心沉淀菌體，吸取上清液以透析法或其它適宜方法除酚，加入適量乙醇沉淀多糖核酸，搜集沉淀物。分別以乙醇、乙醚混勻洗滌，離心后干燥即得精制多糖核酸。c.輔料(乳糖)混合制備濕軟材，將濕軟材過篩，干燥，制備成空白顆粒。d.將卡介菌多糖核酸粉末與空白顆粒充分混合，在常溫條件下直接壓片，每片含卡介菌多糖核酸0.5mg。實施例2卡介菌多糖核酸口含片制備步驟a和b，同實施例1，c、淀粉乳糖混合制備濕軟材，將濕軟材過篩，干燥，制備成空白顆粒。d、將卡介菌多糖核酸粉末與空白顆粒充分混合，在常溫條件下直接壓片，每片含卡介菌多糖核酸6mg。實施例3卡介菌多糖核酸口含片制備步驟a和b同實施例1，c、淀粉乳糖混合制備濕軟材，將濕軟材過篩，干燥，制備成空白顆粒。d、將卡介菌多糖核酸粉末與空白顆粒充分混合，在常溫條件下直接壓片，每片含卡介菌多糖核酸2mg。實施例4卡介菌多糖核酸粘附片制備步驟a和b同實施例1，c、將輔料、卡介菌多糖核酸分三層下層用HPC/CP作基質，中層為卡介菌多糖核酸，上層為乳糖，直接壓片，每片含卡介菌多糖核酸2mg。實施例5卡介菌多糖核酸膜劑制備步驟a和b同實施例1，c、用聚乙烯作基質，用膜壓機直接壓片成膜劑，每片含卡介菌多糖核酸6mg。實施例6卡介菌多糖核酸噴霧劑步驟a和b同實施例1，c、用常規的噴霧劑輔料與卡介菌多糖核酸混合，制備成卡介菌多糖核酸噴霧劑，規格3mg/撳。
權利要求
1.卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的具有雙向免疫調節功能的藥物的用途。
2.卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物中的用途。
3.有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的具有雙向免疫調節功能的藥物組合物。
4.有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物組合物。
5.根據權利要求3，4所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為口腔局部用藥的固體制劑或液體制劑。
6.根據權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述固體制劑是口含片、口腔粘附片或膜劑。
7.根據權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述口含片、口腔粘附片或膜劑，含有卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/片。
8.根據權利要求5述的藥物組合物，其特征在于所述液體制劑是噴霧劑。
9.根據權利要求8所述的藥物組合物，其特征是所述的噴霧劑含卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/撳。
10.權利要求3所述的藥物組合物的制備方法，其特征是a、液體浮膜培養或固體培養制備卡介菌菌體；b、熱酚乙醇提取卡介菌多糖核酸；c、在b步驟中制備的有效量卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料混合，制成口腔局部給藥的藥物制劑。
全文摘要
本發明涉及卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的藥物中的新用途，通過口腔局部給藥可以達到雙向免疫調節，以治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘。本發明還提供了有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的具有雙向免疫調節功能的藥物組合物，該組合物具有治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘等功能。采用卡介菌多糖核酸的口腔局部用藥具有療效佳，毒性小，副作用少，安全性高，服藥方便等優點。
文檔編號A61P37/02GK1433770SQ0311733
公開日2003年8月6日 申請日期2003年2月21日 優先權日2003年2月21日
發明者晏子厚, 屈戈, 周如嬌, 何莉, 曹慧, 徐永革, 吳先勇, 楊永芳 申請人:成都生物制品研究所