專利名稱：卡鉑前體脂質體注射劑及其制造方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物制劑及其制造方法，特別是涉及抗癌藥物卡鉑的新劑型及其制造方法。
迄今為止，治療癌癥的最有效途徑除了手術治療就是抗癌藥結合化療。卡鉑是一種療效顯著的傳統抗癌藥，抗癌藥卡鉑的分子式為順式-1，1-環丁烷二羧酸二氨鉑，為白色粉末或結晶性粉末，易溶于水，水中溶解度為10mg/ml，對光敏感，易分解。作用機理為通過抑制腫瘤細胞DNA(脫氧核糖核酸)的合成而抑制腫瘤細胞的生長。
但在實際應用中，一種癌癥被有效治療的同時，卡鉑及其產物對人體血液、肝臟和腎臟等正常組織所造成的嚴重損害也是不能忽略的，這不僅給癌癥的治療帶來了難度，也給病人造成了嚴重的損失和經濟負擔。因此，為有效治療癌癥，提高抗癌藥療效，降低抗癌藥毒副作用，開發研制高效低毒的抗癌藥新品種勢在必行。
脂質體作為抗癌藥載體可以提高藥物治療指數，降低抗癌藥毒性和減少抗癌藥副作用并減少劑量。脂質體適合體內降解，無毒性和無免疫原性，脂質體的靶向性和長效作用更使脂質體在醫學和生物學領域中倍受青睞。
常用的脂質體均為液體狀態，脂質體在液體狀態下存在著許多問題，如藥物的滲漏、粒子的聚集以及磷脂在液體狀態下的氧化、水解等，這些也影響了脂質體的工業化大生產，更影響了脂質體在臨床上的應用。
為解決液體型脂質體的不穩定問題，本專利發明了一種穩定的、固體型的卡鉑前體脂質體注射劑。
本發明的卡鉑前體脂質體注射劑，由下列重量份數比的成分組成卡鉑4000-12000磷脂500-1000
膽固醇 50-100氯化鈉 9000凍干保護劑 100-1000其中，優選的是由下列重量份數比的成分組成的藥物卡鉑7500-8500磷脂750-900膽固醇 70-90氯化鈉 9000凍干保護劑 400-600所述凍干保護劑選自氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它們的混合物。
本發明的另一目的是提供一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法。
一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，包括以下步驟1)備置下述重量及體積份數比的原料卡鉑 4000-12000毫克磷脂 500-1000毫克膽固醇50-100毫克氯化鈉9000毫克氨基乙酸 100-1000毫克有機溶劑 500-700毫升蒸餾水1000毫升2)將卡鉑溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉，得到與血漿等滲的卡鉑水溶液；3)將磷脂和膽固醇用有機溶劑溶解，并高速注入到上述卡鉑水溶液中；4)揮發除凈有機溶劑；5)注入溶解于蒸餾水中的凍干保護劑，攪拌；6)真空冷凍干燥得到粉末狀的固體卡鉑前體脂質體注射劑。
所述凍干保護劑優選氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它們的混合物。所述有機溶劑優選氯仿、乙醚、乙醇或任意兩種的混合物。
所述將卡鉑溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉調整溶液與血漿等滲，將磷脂和膽固醇的有機溶劑高速注入卡鉑氯化鈉水溶液中，在注入溶解的過程中，應一直持續攪拌，并保持溶液溫度維持在10℃-15℃。
所述揮發除凈有機溶劑采用攪拌過夜的方法。
為了使凍干保護劑與卡鉑的脂質體溶液能充分結合，所述加入凍干保護劑后，攪拌30-50分鐘后，進行真空冷凍干燥。
所述真空冷凍干燥是在-50℃～-60℃，0.5～0.1mPa條件下進行的。
得到的固體卡鉑前體脂質體注射劑為白色、疏松、流動性好的粉末狀。稱重、分裝于5ml安瓿中，沖氮氣，封口，滅菌，即可出廠。
臨用前將安瓿中卡鉑前體脂質體用注射用水溶解，則立即分散成均勻的卡鉑脂質體水溶液，其有效活性成分為其中的卡鉑脂質體，具體用量根據醫囑而定。掃描電鏡測得本發明卡鉑前體脂質體水合后脂質體的平均粒徑小于1μm，75％的粒子粒徑在200-600μm之間。
卡鉑前體脂質體注射劑中卡鉑的體外制劑檢測條件為高效液相色譜(HPLC)內標法。色譜條件為ODS-C18柱(250×4.6mm，10μm)，檢測波長229nm，流動相5％的甲醇水溶液，流速1.0ml/min，柱溫室溫，內標尿苷。
本發明還檢測了卡鉑前體脂質體注射劑在生物體內的分布情況，由于卡鉑前體脂質體注射劑在生物體內分布廣，生物體組織中卡鉑含量低，所以卡鉑的生物體內組織分布由靈敏度高的原子吸收分光光度法進行檢測。檢測結果表明，卡鉑前體脂質體注射劑中的卡鉑與卡鉑水制劑中的卡鉑相比，生物體內組織分布特點有顯著不同，表現在不同組織中藥物濃度的變化。卡鉑被制成脂質體后，使卡鉑在肺、脾、肝組織中的藥物濃度提高，而在腎和血中的藥物濃度降低。卡鉑在臨床通常被用作治療肺癌的抗癌藥，并且卡鉑的最主要毒性是對骨髓的抑制作用，使白細胞、血小板減少，卡鉑脂質體提高了卡鉑在靶器官肺組織中的濃度，降低了卡鉑在血液和腎臟中的濃度，最終達到了降低毒性，提高治療效果的作用。
卡鉑前體脂質體注射劑的刺激性試驗和溶血性試驗結果表明，卡鉑前體脂質體注射劑安全可靠，無刺激性，并且沒有溶血反應。
由于本發明的卡鉑前體脂質體注射劑水合后，卡鉑脂質體的粒徑小，對肺、脾組織有天然的靶向性，而在腎中濃度相對降低，因此提高了抗癌藥卡鉑在肺組織中的累積，降低了卡鉑對腎臟的毒性。因此本發明的卡鉑前體脂質體注射劑是一種低毒、高效的抗癌藥物新劑型。同時，由于將卡鉑前體脂質體以固體的形式貯存，臨用前加入分散介質分散形成溶液型脂質體，不但方便了儲存、運輸，而且從根本上解決了液體型脂質體的不穩定問題。
本發明生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法工藝簡單，不需要特殊的設備，因而生產成本低，適合于大規模的工業化生產。
下面結合附圖及具體實施例對本發明做進一步說明。


圖1為肺中卡鉑濃度-時間變化曲線2為脾中卡鉑濃度-時間變化曲線3為肝中卡鉑濃度-時間變化曲線4為腎中卡鉑濃度-時間變化曲線5為血中卡鉑濃度-時間變化曲線圖實施例2、生產卡鉑前體脂質體注射劑與實施例1的步驟相同，不同的是原料的配方如下卡鉑 11000毫克磷脂 400毫克膽固醇90毫克氯化鈉9000毫克山梨酸及山梨醇的混合物(山梨酸∶山梨醇＝4∶6) 900毫克乙醚 600毫升蒸餾水1000毫升實施例3、生產卡鉑前體脂質體注射劑與實施例1的步驟相同，不同的是原料的配方如下卡鉑 3000毫克磷脂 950毫克膽固醇60毫克氯化鈉9000毫克葡萄糖200毫克乙醇及乙醚的混合物(乙醇∶乙醚＝5∶5) 550毫升蒸餾水1000毫升實施例4、卡鉑前體脂質體對卡鉑在生物體內組織分布的影響實驗設置了卡鉑前體脂質體實驗組和卡鉑水溶液對照組兩組，實驗對象為小鼠，用相同卡鉑活性成分的卡鉑前體脂質體注射液和卡鉑水溶液小鼠尾靜脈注射，在不同的時間點分別將小鼠的不同臟器組織(肝、脾、肺、腎)取出，用最靈敏、先進的原子吸收法測定其中藥物含量隨時間的變化情況，同時還監測了小鼠血中藥物濃度的變化情況，結果如圖1、圖2、圖3、圖4、圖5所示。
從圖1-5中可以看出，卡鉑被制成卡鉑前體脂質體注射劑后，改變了卡鉑在生物體內的分布，使卡鉑在肺、脾、肝中的生物利用度提高，而在腎和血中藥物的生物利用度降低。
實施例5、卡鉑前體脂質體注射劑的刺激性試驗1、大耳白家兔兔耳緣皮下注射法試驗方法選擇健康無耳疾大耳白家兔6只，體重2.0-3.0kg，隨機分兩組。給藥組耳緣皮下注射卡鉑前體脂質體注射液0.05ml，對照組大耳白家兔耳緣皮下注射0.9％生理鹽水注射液。觀察一小時。
觀察指標注射時，兔安靜，無因刺激所致搖頭動作，注射后，兔耳緣皮下有一藥液鼓包，白色，給藥兔耳無紅腫，充血等受刺激現象。一小時后，可以看到，給藥兔耳與對照組兔耳相比，兔耳給藥局部藥物吸收良好，無結硬塊或壞死現象。
結論卡鉑前體脂質體注射劑給家兔耳緣皮下注射后，對兔耳組織無刺激損傷作用。
2.大耳白家兔點眼法試驗方法選擇健康無眼疾大耳白家兔6只，體重2.0-3.0kg。兔單側眼中滴加卡鉑前體脂質體注射液0.2ml，對側家兔眼中滴入0.9％生理鹽水注射液0.2ml。觀察30分鐘。
觀察指標滴藥前，兔眼清澈，眼中無分泌的異物。單側兔眼滴藥、對側兔眼滴生理鹽水時，兔安靜，無因刺激所致搖頭動作。單側兔眼滴藥后，觀察30分鐘，與對側兔眼比較，兔眼無眼分泌物過多，紅腫，眨眼等異常現象發生。
結論卡鉑前體脂質體注射劑給家兔滴眼后，對兔眼組織無刺激損傷作用。
3、小白鼠靜脈注射法試驗方法選擇健康昆明種小白鼠10只，體重20.0-25.0g，隨機分兩組。一組5只小鼠，尾靜脈注射0.2ml卡鉑前體脂質體注射液，對照組5只小鼠，尾靜脈注射同劑量0.9％生理鹽水。
觀察指標給藥后一小時內，觀察給藥小鼠無任何異常行為，無刺激性反應，小鼠活動和飲食不受影響，所注射的卡鉑前體脂質體注射劑對血管無刺激性。
結論卡鉑前體脂質體注射劑給小鼠尾靜脈注射后，對小鼠血管靜脈組織無刺激損傷作用。
4、小白鼠腹腔注射法試驗方法選擇健康昆明種小白鼠10只，體重20.0-25.0g，隨機分兩組。一組5只小鼠，腹腔注射0.3ml卡鉑前體脂質體注射液，對照組5只小鼠，腹腔注射同劑量0.9％生理鹽水。
觀察指標給藥后至給藥后一小時內，觀察給藥小鼠無任何異常行為，無刺激性扭體反應，小鼠活動和飲食不受影響，所注射的卡鉑前體脂質體注射劑無刺激性。
結論卡鉑前體脂質體注射劑給小鼠腹腔注射后，對小鼠腹腔組織無刺激損傷作用。
在上述各實驗中，試驗動物均未見有刺激性異常反應。試驗結果表明，卡鉑前體脂質體注射劑安全可靠。
實施例6、卡鉑前體脂質體注射劑的溶血和紅細胞凝集試驗試驗方法取家兔一只，心臟取血10ml，玻璃棒攪除纖維蛋白原，使成脫纖血液，加入100ml生理鹽水搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水洗滌4次至上清液不顯紅色，將所得紅細胞3ml，加生理鹽水150ml，制備成2％紅細胞混懸液代用。
取試管7支，標明1-7號，按下表排比，依次加入2％紅細胞混懸液和生理鹽水，置37℃恒溫箱內30分鐘，然后加入不同量的卡鉑前體脂質體注射液，第6管為陰性對照管，第7管為陽性溶血樣本。搖勻后，置37℃恒溫箱內約隔20分鐘觀察一次，觀察至6小時，1-5管與6管相比，上清液的澄清度相同，均未出現透明紅色和紅棕色絮狀沉淀物，7管血細胞完全溶血，1-5管與7管相比，現象完全相反。試驗結果見表1表1 卡鉑脂質體凍干粉注射劑溶血、凝集試驗試管編號 1 2 3 4 5 6 7受試藥液(ml) 0.10.20.30.40.5 0 0生理鹽水(ml) 2.42.32.22.12.02.50去離子水(ml) 0 0 0 0 0 02.52％紅細胞混懸液(ml) 2.52.52.52.52.52.5 2.5結果判斷1-5管在2-6小時內，其上清液與6管相比基本相同，均未出現透明紅色和棕色絮狀沉淀物。1-5管在2-6小時內，與7管相比，則現象完全相反，7管出現了全部的紅色溶血現象。
結論卡鉑前體脂質體注射劑無凝血、無紅細胞凝集作用，注射劑安全可靠，可供臨床注射用藥。
權利要求
1.卡鉑前體脂質體注射劑，由下列重量份數比的成分組成卡鉑 4000-12000毫克磷脂 500-1000毫克膽固醇 50-100毫克氯化鈉 9000毫克凍干保護劑 100-1000毫克
2.根據權利要求1所述的卡鉑前體脂質體注射劑，其特征在于所述注射劑由下列重量份數比的成分組成卡鉑 7500-8500磷脂 750-900膽固醇 70-90氯化鈉 9000凍干保護劑 400-600
3.根據權利要求1或2所述的卡鉑前體脂質體注射劑，其特征在于所述凍干保護劑為氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它們的混合物。
4.一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，包括以下步驟1)備置下述重量及體積份數比的原料卡鉑 4000-12000毫克磷脂 500-1000毫克膽固醇50-100毫克氯化鈉9000毫克凍干保護劑100-1000毫克有機溶劑 500-700毫升蒸餾水1000毫升2)將卡鉑溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉，得到與血漿等滲的卡鉑溶液；3)將磷脂和膽固醇用有機溶劑溶解，并高速注入到上述卡鉑水溶液中4)揮發除凈有機溶劑；5)注入溶解于蒸餾水中的凍干保護劑，攪拌；6)真空冷凍干燥得到粉末狀的固體卡鉑前體脂質體注射劑。
5.根據權利要求4所述的一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，其特征在于所述凍干保護劑為氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它們的混合物。
6.根據權利要求4所述的一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，其特征在于所述有機溶劑為氯仿、乙醚、乙醇或任意兩種的混合物。
7.根據權利要求4或5或6所述的一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，其特征在于所述將卡鉑溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉，及高速注入用有機溶劑溶解的磷脂和膽固醇的過程中，一直進行攪拌，并保持溶液溫度維持在10℃-15℃。
8.根據權利要求4或5或6所述的一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，其特征在于所述揮發除凈有機溶劑采用攪拌過夜的方法。
9.根據權利要求4或5或6所述的一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，其特征在于所述加入凍干保護劑后，攪拌30-50分鐘后再進行真空冷凍干燥。
10.根據權利要求4或5或6所述的一種生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，其特征在于所述真空冷凍干燥是在-50℃～-60℃，0.5～0.1mPa條件下進行的。
全文摘要
本發明的名稱為卡鉑前體脂質體注射劑及其制造方法。本發明的目的是提供一種毒副作用較低的固體型卡鉑前體脂質體注射劑。本發明的卡鉑前體脂質體注射劑，由下列重量份數比的成分組成卡鉑，4000－12000；磷脂，500－1000；膽固醇，50－100；氯化鈉，9000；凍干保護劑100－1000；有機溶劑500－700；蒸餾水1000。生產卡鉑前體脂質體注射劑的方法，包括以下步驟1)備置上述重量及體積份數比的原料；2)將卡鉑溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉，得到與血漿等滲的卡鉑水溶液；3)將磷脂和膽固醇用有機溶劑溶解，并高速注入到上述卡鉑水溶液中；4)揮發除凈有機溶劑；5)加入凍干保護劑，攪拌；6)真空冷凍干燥得到粉末狀的固體卡鉑前體脂質體注射劑。
文檔編號A61K9/127GK1435167SQ0210055
公開日2003年8月13日 申請日期2002年1月31日 優先權日2002年1月31日
發明者羅國安, 張奇, 王義明 申請人:清華大學