專利名稱：防治白細胞減少癥的中藥制劑及制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥領域，涉及治療白細胞減少癥的中藥制劑及其制備工藝。
當人體周圍血液白細胞計數持續低于4×109/L時，稱為白細胞減少癥。其病因有化學性、放射性、感染性等繼發性原因。該癥表現為面色無華或萎黃、頭暈目眩、乏力、低熱盜汗、惡心、食欲不振、機體免疫力低下、易患感冒和誘發多種疾病，嚴重影響人們的生活質量和健康水平。該癥常用西藥如鯊肝醇、利血生、維生素B4治療，效果不太理想，其有效率僅為44.26～66.70％(陳慧珍等，中國中西醫雜志，1992年12月第三期；朱憶等，上海中醫藥雜志，1992年12月；王海等，北京中醫，1992年第二期)。應用激素、鋰鹽治療，療效雖有提高，但副作用較大。應用進口藥生白能等治療，療效較好，但價格昂貴。而應用中醫藥理論進行辨證施治，常獲良效。
本發明的目的是提供一種防治白細胞減少癥的中藥制劑及制備工藝，該中藥制劑有效率高，無副作用。
本發明的防治白細胞減少癥的中藥，其特征在于是由以下重量份數的中藥原料制成當歸9～12、黃芪9～30、黨參或人參9～15、枸杞子9～15、女貞子9～15、雞血藤或阿膠10～30、陳皮6～10、大棗9～12、甘草6～12。
所述中藥原料最好還包括熟地黃10～30、茯苓9～15、麥芽6～15中的1～3種。
本發明組方以當歸、黃芪為君藥，當歸為補血要藥，味甘、辛，性溫，既能補血又能行血而利血生；黃芪，甘溫益氣，升陽固表，二藥相須為用，共助氣血互生。黨參，補氣，生津養血善治里虛，以助黃芪補氣之力，大補脾肺之氣，以資生血之源；熟地黃、雞血藤為補血要品，熟地黃滋陰養血，生精補髓，雞血藤既能補血又能行血，補而不滯，以助當歸補血之功，更用枸杞子、女貞子以滋腎益肝精足血旺；五藥為臣補血力著，佐以云苓健脾益中，麥芽、陳皮消食理氣以防重補滋膩；大棗入血分補益心脾，善于和營，甘草補脾益氣，且能調和諸藥，二藥為使，相得益彰。諸藥合用共承補氣養血、健脾益腎之功。
本發明黨參可用人參替代，雞血藤可用阿膠替代。
以上所述各中藥原料可以制成中藥上可接受的各種劑型，本發明重點介紹一種口服液劑型。
制備口服液的工藝如下各中藥原料加水煎煮，煎煮液經過濾、濃縮得到褐色濃縮液，褐色濃縮液加濃度為55～70％的乙醇進行冷藏，冷藏后過濾，回收乙醇，得到棕紅色水液，再經冷藏、過濾、調整容量即得到口服液。
所述冷藏溫度為2～10℃。
各中藥原料的有效成分多為水溶性成分，因此以水為溶媒最大限度地提取水溶性物質是保證制劑療效的根本，各中藥原料采用水煎煮三次的方式，每次的加水量分別為中藥原料總重的8、6、6倍，每次煎煮時間為1～1.5小時。藥液過濾后，含有大量的水，所以先濃縮蒸去部分水，濃縮液的重量可以為中藥原料總重的2倍。水煎煮時因同時提出了大量的大分子酚類、樹脂等無效成分，所以采用將濃縮液加低濃度醇冷藏除去。考慮到諸藥的許多有效成分為多糖類，高濃度醇雖能使藥液的澄明度更好，但會造成多糖丟失，因此采用低濃度醇冷藏(48小時以上)過濾除雜質，回收乙醇后再次冷藏除雜質的方法，既保證了澄明度，又最大限度地保存了有效成分，使制劑質量穩定，療效可靠。最后調整容量是使濾液的重量與中藥原料的總重相同。
本發明的功能與主治健脾益腎、補氣生血，用于防治因化療、放療或其他多種原因引起的白細胞減少癥，亦可作為滋補強壯劑服用。以口服液為例，一次10～20毫升，每日兩次。化療、放療或接觸可能引起白細胞減少的因素等情況之前服用本藥可以起到預防白細胞減少的作用。對已經患有白細胞減少癥的患者有治療作用。
本發明的優點1、本發明為純中藥制劑，不含任何附加劑，服用方便，價格適中。
2、經毒理學研究，安全，無毒副作用。
3、藥效學研究證明(1)能顯著對抗環磷酰胺(CTX)引起的白細胞下降，相對升高白細胞；(2)能改善骨髓細胞的活躍程度，促進骨髓有核細胞的新生，具有保護骨髓細胞，促進骨髓造血的作用；(3)能維護肝脾組織細胞的完整性，增加肝枯否氏細胞，使脾淋巴小結數明顯增加，被膜下邊緣區白細胞增生。說明該制劑既能保護肝脾組織細胞，又能增強機體的免疫力，還能促進髓外造血灶的產生；(4)能增加胸腺與脾的重量，具有增強機體免疫力的作用；(5)具有促進食欲的作用。
4、經臨床研究表明具有健脾益腎、補氣生血之功效，能提高白細胞數量，改善白細胞減少癥的臨床癥狀，對于因職業因素、化療及其他原因引起的白細胞減少癥具有明顯療效。有效率可達81％以上。
對本發明制成的口服液樣品進行的藥品檢驗報告如下檢驗項目標準規定 檢驗結果性狀 應為棕紅色液體，味甘 為棕紅色液體，味甘鑒別 應檢出黃芪甲甙 檢出黃芪甲甙檢查PH值4.0～5.0 4.5相對密度應不低于1.060 1.074細菌數 不得過100個/毫升 小于10個/毫升霉菌和酵母菌數 不得過100個/毫升 小于10個/毫升大腸桿菌不得檢出 未檢出活螨不得檢出 未檢出含量測定 含當歸以阿魏酸計，應不少于 12.3μg/ml10μg/ml以下為急毒實驗及升白作用效果的實驗一、實驗材料動物昆明種小白鼠，體重20+2g，由中國醫學科學院動物繁育中心提供。
藥物本發明口服液10ml瓶，每毫升含生藥1g，臨用前濃縮或用新鮮蒸餾水稀釋至所需濃度。環磷酰胺(CTX)200mg/瓶，上海第十二制藥廠生產，批號921203，臨用前用生理鹽水溶解并稀釋至所需濃度。
二．實驗方法與結果(1)急性毒性試驗(最大耐受量測定)取80只小白鼠隨機分為4組，每組20只，雌雄各半。一日內分別用不同濃度的本發明口服液灌胃3次，詳細觀察7天，并記錄小鼠的反應情況。計算出總給藥量以及相當于擬推薦臨床用藥的倍數，結果見表1。
表1．本發明口服液藥物耐受性試驗情況(n=20)
該試驗最大濃度最大劑量用到330g/kg.d，此劑量相當于臨床用藥的330倍，試驗動物全部存活，無一死亡。說明試驗動物對該藥的耐受量很大，LD50無法測出，該制劑的用藥安全性是可靠的。
(二)．升白試驗取雄性小鼠78只，隨機分為6組，每組13只，從尾尖取血，顯微鏡下人工白細胞計數，組間白細胞數無顯著性差異。然后逐日給予所試藥物，每日灌胃兩次，其中對照組與CTX組以生理鹽水灌胃處理(0.5ml)，給藥第四天，按小鼠實際體重給予腹腔注射CTX 100mg/Kg.d，再繼續給藥四天后，采血測白細胞數，結果經統計學處理，見表2。
表2．本發明口服液(不同劑量)對白細胞的影(n=13)
表2可見，本發明口服液在對抗CTX的毒性，保護造血功能，相對升高白細胞，具有非常顯著的作用，且隨劑量的增大而增強。顯效劑量組間量效回歸方程為Y=4.9011+0.0125X r=0.9896
(三)．免疫功能及食欲試驗取雄性小鼠30只，隨機分為三組，每組10只，對照組與CTX組以生理鹽水每日兩次灌胃(0.5ml/次)，試藥組用藥劑量以25g/kg.d，分兩次灌胃，連續十二天，第四、八天分別給CTX組與試藥組腹腔注射CTX(100mg/kg)各一次，每日兩次投入定量食料，并記錄各組動物的存食情況；第十三天眼眶放血處死，剖取脾、胸腺稱重，結果經統計學處理，見表3。
表3．本發明口服液對脾、胸腺重量及食欲的影響(n=10)
注與CTX組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001由表3可知，本發明口服液對于CTX的免疫抑制作用，具有顯著的對抗作用，能相對增加胸腺重量，提高機體免疫能力，抵消CTX引起的食欲下降，增加脾重及納食量，說明其補脾作用確切。
三．討論該實驗證實本發明口服液能顯著對抗CTX的免疫抑制、胃腸道反應等毒副作用，相對升高白細胞，促進造血功能，提高機體免疫力，促進食欲。所以可認為該制劑具有健脾益腎、補氣升血之功效，且該制劑是安全的。因此，可用于防治化療、放療及其他原因引起的白細胞減少癥，尤其適用于脾腎兩虛、氣血不足之患者，亦可作為滋補強壯劑服用。
以下為本發明口服液對血細胞再生功能及肝脾組織影響的實驗本發明口服液能顯著對抗CTX的免疫抑制作用、胃腸道反應等毒副作用，相對升高白細胞，提高機體免抑能力，促進食欲，具有健脾益腎、補氣生血之功效。為進一步探討本發明口服液的藥理作用，我們又進行了如下實驗。
一．實驗材料動物昆明種小白鼠，雄性，體重20±2g，由中國醫學科學院動物繁育中心提供。
藥物本發明口服液(SBY),10ml/瓶，每毫升含生藥1g；環磷酰胺(CTX),200mg瓶，上海第十二制藥廠生產，批號921203，臨用前用生理鹽水稀釋至所需濃度。
二．方法與結果(一)．血細胞再生功能試驗取小鼠36只，隨機分為四組，每組9只。1、2組用生理鹽水，3、4組用SBY灌胃，每日兩次，每次0.5ml/20g(相當于生藥25g/Kg.d)，連續給藥十三天，2、3組在給藥第八、九、十天的同時，每日腹腔注射CTX一次，劑量為120mg/kg，在第十三天最后一次給藥1小時后，使小鼠頸椎脫位處死，剖取一根股骨用3％醋酸液10ml沖出骨髓內細胞，顯微鏡下人工計骨髓有核細胞數；取另一根股骨做骨髓涂片，瑞氏染色，在顯微鏡下觀察骨髓細胞活躍程度，增生不良記-1，增生活躍記1，明顯活躍記2；上述結果經統計學處理，見表4。
(二)．對肝脾組織的影響實驗方法同“血細胞再生功能實驗”，處死小鼠后剖取肝脾，以10％的福爾馬林固定，切片染色，在顯微鏡下觀察，結果見表5。
成氏組織學指出動物骨髓造血功能受到抑制時，其肝脾組織尚具髓外造血功能，小鼠脾的粒系造血灶生成部位靠近脾被膜、小梁或遭受破壞的脾淋巴小結處；肝枯否細胞具有內吞、參加脂蛋白代謝、免疫應答、抗腫瘤等作用。由表5可見，本發明口服液對肝脾具有保護作用，可促進枯否細胞的增生及肝脾的髓外造血，可明顯提高脾淋巴小結的數量。結合免疫功能及食欲試驗，可進一步證明該制劑具有促進髓外造血、提高機體免疫力的作用。
表4．本發明口服液對骨髓細胞的影響(n=9)組別骨髓有核細胞計數(×107)活躍程度x±s x±s對照組1.8128±0.3643* 0.3331±1.000CTX組 1.3694±0.2700 0.5556±0.8819SBY+CTX組 1.8806±0.3060**1.5556±1.0138*#SBY組 2.1141±0.4542*** 2.0000±0***###注與CTX組比較*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001與對照組比較#p＜0.05 ### p＜0.001
表5．本發明口服液對小鼠肝脾組織的影響
三．討論該實驗證實本發明口服液能對抗CTX的骨髓抑制，使骨髓有核細胞數增多及其活躍程度的提高，改善血細胞的造血功能，促進骨髓造血具有顯著作用；亦可提高脾淋巴小結數量，促進枯否細胞的增生，加強肝脾組織的髓外造血功能。說明該制劑升高血中白細胞數、增強機體免疫力的作用是確切的。還證明該制劑能能對抗CTX對肝臟的損壞，具有一定的保肝護肝作用。對調脂、抗腫瘤也似有一定的意義，還有待進一步研究。
以下為本發明口服液治療白細胞減少癥臨床療效觀察總結我們應用該藥對各種原因引起的白細胞減少癥患者進行了臨床療效觀察。臨床完成病例149例，其中對照組50例，經臨床觀察該藥在癥狀的改善和白細胞數目的升高方面均具有明顯的療效，取得滿意效果，現總結如下一、資料與方法(一)病例來源受試者149例，試驗組(本發明口服液)99例，男56例，女43例，年齡16-70歲(平均40.82±12.97)；對照組50例，男32例，女18例，年齡24-69歲(平均42.82±14.06)。
(二)病例標準1．納入病例標準符合本病診斷且血象檢查連續3次WBC＜4.0×109/L者。
2．排除病例標準(1)年齡在16周歲以下或70周歲以上，妊娠期或哺乳期婦女。
(2)合并有心血管、肝、腎等嚴重原發性疾病，精神病患者。
(3)不符合納入標準，未按規定服藥，或資料不全難以進行療效評價者。
(三)研究方法1．病例分組按2∶1隨機分為試驗組和對照組，試驗組99例，對照組50例。
2．臨床療效觀察觀察時間1-2個療程(1個療程為一個月)。試驗組口服本發明口服液，每日2次，每次2支(10ml/支)。對照組口服鯊肝醇(100mg/次，3次/日)及利血生(20mg/次，3次/日)。同時記錄臨床癥狀變化。
(四)觀測指標采用觀察表記錄法1．安全性觀測(1)一般體檢項目；(2)血、尿常規化驗；(3)心、肝、腎功能檢查。
2．療效性觀測(1)詳細詢問病史，觀察癥狀和體征；(2)血象(白細胞及分類、血紅蛋白、血小板等)檢查；(3)肝、腎功能檢查。
(五)療效判定標準顯效臨床癥狀顯著改善，白細胞升至4.0×109/L以上，隨訪隨訪三個月病情穩定或維持進步者。
有效臨床癥狀有一定改善，白細胞升高1.0×109/L以上，但仍低于4.0×109/L。
無效經充分治療后癥狀、血象不能達到有效者。
二、結果1．本發明口服液對白細胞數量的影響(表6)2．本發明口服液對血小板數量的影響(表7)3．本發明口服液對血紅蛋白數量的影響(表8)4．本發明口服液對紅細胞數量的影響(表9)5．本發明口服液臨床療效觀察表(表10)6．本發明口服液臨床癥狀觀察表(表11)7．治療組用藥前后(分病種)血細胞及血紅蛋白變化表(表12)
8．治療組用藥前后(分病種)臨床療效觀察表(表13)表6用藥前后白細胞變化表
表7用藥前后血小板變化表
表8用藥前后血紅蛋白變化表
表9用藥前后紅細胞變化表
表10本發明口服液臨床療效觀察表
表11用藥前后臨床癥狀變化表
表12治療組用藥前后(分病種)血細胞及血紅蛋白變化表
表13治療組用藥前后(分病種)臨床療效觀察表
三、討論本研究結果提示本發明口服液在治療白細胞減少癥方面有顯著的臨床意義，臨床結果支持基礎實驗研究結果，即能升高白細胞數量，促進機體造血功能。同時也顯示本發明口服液具有健脾益腎、補氣升血之功效，能顯著改善白細胞減少癥的臨床癥狀和提高外周白細胞數量，對化療、放療及其他原因引起的白細胞減少癥具有明顯療效。整個臨床實驗中未發現任何毒副作用。
1．試驗組(服用本發明口服液)與對照組(服用鯊甘醇、利血生)治療白細胞減少癥的有效率分別為81.82％和44.00％(見表10)，兩組進行卡方檢驗有極顯著差異(p＜0.001)，即試驗組臨床療效明顯優于對照組。對照組療效與文獻報道的療效相似(文獻報道服用鯊甘醇、利血生的臨床療效為44.26％-66.70％)。
2．臨床結果顯示本發明口服液對白細胞減少癥患者的白細胞、紅細胞、血紅蛋白及血小板均有明顯升高作用(見表6,7,8,9)，治療前后經T檢驗有顯著差異(白細胞p＜0.001，其他均為p＜0.05)；對照組僅對白細胞有明顯升高作用(p＜0.001)，而對其他血細胞及血紅蛋白無明顯改善作用(p＞0.05)。這與動物實驗結果中本發明口服液能改善髓內髓外造血機能相符。
3．動物實驗證實該制劑具有相對升高白細胞，促進造血機能，提高機體免疫力，促進食欲等功能。臨床證實本發明口服液可明顯改善白細胞減少癥的臨床癥狀(見表11)，對白細胞減少癥患者出現的乏力、頭暈、失眠、心悸、頭痛癥狀的改善明顯優于對照組(經卡方檢驗均為p＜0.01)，對睡眠的改善情況與對照組相似(經卡方檢驗p＞0.05)。
4．本發明口服液對職業因素、放、化療因素和其他因素引起的白細胞減少均有明顯的升高作用(治療前后T檢驗p＜0.001)。其有效率分別為85.19％、88.89％和61.11％(見表13)。另外該制劑對職業因素引起的白細胞減少癥的血紅蛋白和紅細胞數量也有明顯的升高作用(治療前后T檢驗p＜0.05)；對放、化療患者的血小板(p＜0.01)、血紅蛋白(p＜0.05)有升高作用；而對職業因素患者的血小板(p＞0.05)、放、化療患者的紅細胞(p＞0.05)無明顯影響，對其他因素患者只對白細胞影響明顯，對其他影響較小(見表12)。提示可能與不同因素導致骨髓抑制特點不同有關。有待于進一步探討。
5．本發明口服液對慢性再障性貧血(CAA)患者的臨床效果一般，但具有治療價值。治療組中觀察8例CAA患者中，有效2例，對照組觀察4例均無效。
6．在該臨床試驗中，所有應用本發明口服液的患者均未出現任何毒副反應，使用安全。
以下實施例為重量份數。
實施例一當歸12、黃芪30、黨參12、枸杞子12、女貞子12、雞血藤15、陳皮10、大棗10、甘草6、熟地黃15、茯苓12、麥芽10。
取各藥用水煎煮三次，每次加水量分別為中藥原料總重的8、6、6倍，每次煎煮1小時，合并藥液，過濾，濾液在蒸汽夾層鍋中煎煮濃縮，濃縮液為中藥原料總重的2倍，然后加濃度為60％的乙醇進行冷藏48小時，然后過濾，回收乙醇，得到棕紅色水液，再經冷藏24～48小時、過濾，濾液加新沸蒸餾水調整容量到藥液與中藥原料總重相同的重量，灌封、消毒即得到本發明的口服液。
實施例二當歸9、黃芪20、黨參15、枸杞子15、女貞子9、雞血藤10、陳皮6、大棗9、甘草8、熟地黃25、茯苓15、麥芽6。
實施例三當歸10、黃芪9、黨參9、枸杞子9、女貞子15、雞血藤25、陳皮8、大棗12、甘草12、熟地黃30、茯苓9、麥芽12。
實施例四當歸11、黃芪15、黨參11、枸杞子13、女貞子13、雞血藤30、陳皮7、大棗11、甘草10、熟地黃10、茯苓13、麥芽8。
實施例五當歸12、黃芪30、黨參12、枸杞子12、女貞子12、雞血藤15、陳皮10、大棗10、甘草6。
實施例六當歸11、黃芪15、黨參11、枸杞子9、女貞子15、雞血藤25、陳皮8、大棗12、甘草12、熟地黃30。
實施例七當歸10、黃芪30、黨參12、枸杞子9、女貞子15、雞血藤15、陳皮6、大棗10、甘草12、茯苓15、麥芽15。
實施例八當歸9、黃芪20、黨參9、枸杞子15、女貞子13、雞血藤25、陳皮10、大棗10、甘草6、熟地黃15、麥芽10。
權利要求
1.一種防治白細胞減少癥的中藥制劑，其特征在于是由以下重量份數的中藥原料制成當歸9～12、黃芪9～30、黨參或人參9～15、枸杞子9～15、女貞子9～15、雞血藤或阿膠10～30、陳皮6～10、大棗9～12、甘草6～12。
2.根據權利要求1所述的防治白細胞減少癥的中藥制劑，其特征在于中藥原料還包括熟地黃10～30、茯苓9～15、麥芽6～15中的1～3種。
3.根據權利要求1或2所述的防治白細胞減少癥的中藥制劑，其特征在于為口服液劑型。
4.一種制備權利要求1或2所述防治白細胞減少癥的中藥口服液的工藝，其特征在于經過如下工藝各中藥原料水煎煮，煎煮液經過濾、濃縮得到褐色濃縮液，褐色濃縮液加濃度為55～70％的乙醇進行冷藏，冷藏后過濾，回收乙醇，得到棕紅色水液，再經冷藏、過濾、調整容量即得到口服液。
5.根據權利要求4所述的工藝，其特征在于所述冷藏溫度為2～10℃。
6.根據權利要求4所述的工藝，其特征在于各中藥原料水煎煮三次，每次的加水量分別為中藥原料總重的8、6、6倍，每次煎煮時間為1～1.5小時。
全文摘要
本發明的防治白細胞減少癥的中藥,其特征在于是由以下重量份數的中藥原料制成:當歸9～12、黃芪9～30、黨參9～15、枸杞子9～15、女貞子9～15、雞血藤10～30、陳皮6～10、大棗9～12、甘草6～12。所述中藥原料最好還包括熟地黃10～30、茯苓9～15、麥芽6～15中的1～3種。本發明具有健脾益腎、補氣生血的功效,用于防治因化療、放療或其他原因引起的白細胞減少癥,有效率高,亦可作為滋補強壯劑服用。
文檔編號A61P7/00GK1306848SQ0011086
公開日2001年8月8日 申請日期2000年1月26日 優先權日2000年1月26日
發明者劉玉川, 王有剛, 初建設 申請人:中國石化集團齊魯石油化工公司