體外受精培養篩及體外受精方法
【專利摘要】本發明公開了一種體外受精培養篩，包括篩體，篩體邊緣設有上側邊框和下側邊框，篩體上設有一能使吸管通過的小孔及孔道，孔道位于篩體上側，篩體上遍布孔徑小于卵子直徑且能使正常精子自由通過的微孔。采用本發明的體外受精培養篩進行體外受精的方法為：(1)將體外受精培養篩放置入體外培養四孔皿的孔中，將培養液添加至體外培養四孔皿中；(2)將通過取卵術獲得的卵冠丘復合體放置在培養篩上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，將精子通過小孔加入到體外培養四孔皿的底部，進行體外受精。本發明的體外受精培養篩，可達到優選精子受精的目的，且能減少凋亡細胞對受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發育。
【專利說明】體外受精培養篩及體外受精方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種體外受精培養篩，是一種生殖醫學試驗中使用的設備及方法。

【背景技術】
[0002]體外受精(In vitro Fertilizat1n, IVF)技術是應用特殊方法獲取精子和成熟卵子，在體外完成受精過程的技術。受精卵在體外分裂成為胚胎后再將胚胎植入女方子宮內，使胚胎成長為胎兒。這種體外受精一胚胎移植技術的誕生打破了傳統的女性輸卵管阻塞生育無望的定論，使無數家庭享受到生兒育女的快樂。
[0003]獲取精子后精子需要經體外處理以篩選優質精子，經典的做法是應用密度梯度離心法分離精子，有的實驗室還要經過一次上游過程，以獲得優質精子，處理后前向運動精子能達到90?95%，但仍有部分質量差的精子混于其中，因此，有些實驗室會采用二次上游的方法繼續篩選，但如此做費事費力，還會因增加離心次數進而造成對精子的損傷。
[0004]體外受精通常是卵泡成熟后利用取卵術獲取卵冠丘復合體放入盛有培養液的培養皿，適時加入處理后的精子。最常用的培養皿是四孔培養皿。這種培養皿沒有特殊設計，精子和卵冠丘復合體簡單的放在一起完成受精過程。隨著受精過程的進行，卵冠丘復合體顆粒細胞不斷有細胞凋亡進而脫離復合體，隨培養時間的延長，也會有一些精子死去，但由于培養皿過于簡單的結構致使凋亡細胞和死精子積聚在受精卵周圍，這可能會影響受精卵和胚胎發育。


【發明內容】

[0005]針對上述現有技術，為解決體外受精過程中死精子及卵子周圍的顆粒細胞凋亡后積聚在卵子周圍有可能對受精卵發育造成不良影響的問題，本發明提供了一種體外受精培養篩及體外受精方法，利用本發明的體外受精培養篩進行體外受精，可使受精過程中產生的死精子和凋亡顆粒細胞遠離受精卵，從而以利于受精卵發育。
[0006]本發明是通過以下技術方案實現的:
[0007]一種體外受精培養篩，包括篩體，篩體邊緣設有上側邊框和下側邊框，篩體上設有一能使吸管通過的小孔及孔道，孔道位于篩體上側，篩體上分布多個孔徑小于卵子直徑(卵子直徑約100 μ m)且能使正常精子自由通過的微孔。
[0008]優選的,所述小孔設在篩體邊緣處或靠近邊緣處。
[0009]優選的，所述篩體呈圓形，直徑為200mm,厚度0.2mm,上側邊框高0.5mm,下側邊框高2mm，小孔直徑2mm，孔道高0.5mm,微孔直徑10 μ m(大約為3?4倍精子頭部寬度)。
[0010]優選的，所述體外受精培養篩的材質為聚苯乙烯。
[0011]本發明的體外受精培養篩，使用時與經典的體外培養四孔皿結合使用(放入體外培養四孔皿的孔內，由于下側邊框的存在，可使篩體距離孔底部一定的距離，約為孔深的1/3)，采用本發明的體外受精培養篩進行體外受精的方法為:(I)將本發明的體外受精培養篩放置入體外培養四孔皿的孔中，然后通過小孔將培養液添加至體外培養四孔皿中，培養液液面高出篩體2_ ;在CO2培養箱內平衡過夜；(2)將通過取卵術獲得的卵冠丘復合體(卵子)放置在培養篩上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，分離的精子用培養液洗滌一次后，利用吸管將精子通過小孔加入到體外培養四孔皿的底部，精子會通過微孔上游到培養篩上層，與卵子相遇，進行體外受精。在受精過程中，活動力好的精子會通過微孔較早上游到篩體上方與卵子結合，達到優選精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘復合體的顆粒細胞也會脫離受精卵進而沉入體外培養四孔皿底部，從而減少了凋亡細胞對受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發育。與經典體外受精技術(精子、卵子同時放入四孔培養皿中)相比，本發明的體外受精方法將卵子和精子分別放置；卵子放置在篩體上，而精子放在篩體底部，精子需經過上游至篩體上與卵子結合，通過上游法篩選高質量精子；同時受精過程中會產生凋亡顆粒細胞和死亡精子，這些細胞會通過微孔沉入四孔培養皿底部，以免凋亡細胞對受精卵發育造成的不良影響。
[0012]本發明的體外受精培養篩，使用時與經典的體外培養四孔皿結合使用，靠近培養篩邊緣處有一能使吸管通過小孔，小孔上設有孔道以高出培養篩平面，以防卵子落入小孔。篩體上遍布孔徑小于卵子且能使正常精子自由通過的微孔，體外受精時，加入培養液后，洗滌過的精子用吸管通過小孔加到四孔皿的底部，卵冠丘復合體(包含卵子)放在培養篩上，活動力好的精子會較早上游到培養篩上與卵子結合，達到優選精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘復合體的顆粒細胞也會脫離受精卵而沉入四孔皿底部，從而減少了凋亡細胞對受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發育。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1:本發明的體外受精培養篩的結構示意圖。
[0014]圖2:本發明的體外受精培養篩的俯視圖。
[0015]圖3:圖2中A處結構放大示意圖。
[0016]圖4:常規的體外培養四孔皿示意簡圖(俯視圖)。
[0017]圖5:常規的體外培養四孔皿的照片。
[0018]其中，1、篩體；2、上側邊框；3、下側邊框；4、小孔；5、孔道；6、微孔。

【具體實施方式】
[0019]下面結合實施例對本發明作進一步的說明。
[0020]一種體外受精培養篩，包括篩體，如圖1、圖2所示，篩體邊緣設有上側邊框和下側邊框，篩體邊緣處設有一能使吸管通過的小孔及孔道，孔道位于篩體上側，篩體上分布多個孔徑小于卵子直徑(卵子直徑約100 μ m)且能使正常精子自由通過的微孔，如圖3所示。
[0021]所述篩體呈圓形，直徑為200mm,厚度0.2mm,上側邊框高0.5mm,下側邊框高2mm,小孔直徑2mm，孔道高0.5mm,微孔直徑10 μ m(大約為3?4倍精子頭部寬度)。
[0022]所述體外受精培養篩的材質為聚苯乙烯。
[0023]本發明的體外受精培養篩，使用時與經典的體外培養四孔皿(如圖4、圖5所示)結合使用(放入體外培養四孔皿的孔內，由于下側邊框的存在，可使篩體距離孔底部一定的距離，約為孔深的1/3)，采用本發明的體外受精培養篩進行體外受精的方法為:(I)將本發明的體外受精培養篩放置入體外培養四孔皿的孔中，然后通過小孔將培養液添加至體外培養四孔皿中，培養液液面高出篩體2mm ;在CO2培養箱內平衡過夜；(2)將通過取卵術獲得的卵冠丘復合體(卵子)放置在培養篩上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，分離的精子用培養液洗滌一次后，利用吸管將精子通過小孔加入到體外培養四孔皿的底部，精子會通過微孔上游到培養篩上層，與卵子相遇，進行體外受精。在受精過程中，活動力好的精子會通過微孔較早上游到篩體上方與卵子結合，達到優選精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘復合體的顆粒細胞也會脫離受精卵進而沉入體外培養四孔皿底部，從而減少了凋亡細胞對受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發育。與經典體外受精技術(精子、卵子同時放入四孔培養皿中)相比，本發明的體外受精方法將卵子和精子分別放置；卵子放置在篩體上，而精子放在篩體底部，精子需經過上游至篩體上與卵子結合，通過上游法篩選高質量精子；同時受精過程中會產生凋亡顆粒細胞和死亡精子，這些細胞會通過微孔沉入四孔培養皿底部，以免凋亡細胞對受精卵發育造成的不良影響。
【權利要求】
1.一種體外受精培養篩，其特征在于:包括篩體，篩體邊緣設有上側邊框和下側邊框，篩體上設有一能使吸管通過的小孔及孔道，孔道位于篩體上側，篩體上分布多個孔徑小于卵子直徑且能使正常精子自由通過的微孔。
2.根據權利要求1所述的體外受精培養篩，其特征在于:所述小孔設在篩體邊緣處或靠近邊緣處。
3.根據權利要求1所述的體外受精培養篩，其特征在于:所述篩體呈圓形，直徑為200mm,厚度0.2mm,上側邊框高0.5mm,下側邊框高2mm,小孔直徑2mm,孔道高0.5mm,微孔直徑 10 μ m。
4.根據權利要求1所述的體外受精培養篩，其特征在于:所述體外受精培養篩的材質為聚苯乙烯。
5.利用權利要求1?4中任一項所述的體外受精培養篩進行體外受精的方法，其特征在于:包括以下步驟:(I)將體外受精培養篩放置入體外培養四孔皿的孔中，然后通過小孔將培養液添加至體外培養四孔皿中，培養液液面高出篩體2mm ;在CO2培養箱內平衡過夜；(2)將卵冠丘復合體放置在篩體上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，分離的精子用培養液洗滌一次后，利用吸管將精子通過小孔加入到體外培養四孔皿的底部，精子會通過微孔上游到培養篩上層，與卵子相遇，進行體外受精。
【文檔編號】C12M1/00GK104450496SQ201410717130
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月2日 優先權日:2014年12月2日
【發明者】張麗紅, 蓋凌, 張偉, 王時燦, 孫林, 丁海清, 劉蓓, 王琳琳, 蔣寶宏, 呂雪梅, 李青 申請人:張麗紅