一種粘質沙雷氏菌及其篩選方法和應用的制作方法
【專利摘要】一種粘質沙雷氏菌，命名為Serratia?marcescens?subsp.PGPRB，保藏號為CCTCC?No：M2013617；篩選方法由菌株分離、鑒定步驟組成，粘質沙雷氏菌Serratia?marcescens?subsp.PGPRB用于制備靈菌紅素prodigiosin，用于制備脂肽serrawettin?W2。
【專利說明】一種粘質沙雷氏菌及其篩選方法和應用 【技術領域】
[〇〇〇1] 本發明屬于微生物【技術領域】，具體涉及到粘質沙雷氏菌。 【背景技術】
[0002] 植物病害一直嚴重地威脅著農業生產，人類防治植物病害可以追溯到幾千年前， 上世紀40年代初期，有機合成農藥大量產生，有效地控制了病害，但抗藥性、環境污染和人 類健康受到威脅，即人們常說的三害。三害的出現引起了人們的廣泛關注，于是生物防治 的研究開發應用被提到了議事日程上來，并得到各國政府的重視。植物根際促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)是存在于植物根際的一些對植物生長有促進和 保護作用的微生物。其中研究較深入的是假單胞菌屬和芽孢桿菌屬，近年來沙雷氏菌屬細 菌作為生防細菌逐漸受到很多學者的重視。沙雷氏菌通常可產生多種抗生性代謝產物，如 靈菌紅素、環脂肽類物質（ 8抓四冊《丨1111、12、13)、硝批咯菌素、大環內酯類抗生素、水解酶 (幾丁質酶和1，3-葡聚糖酶）和嗜鐵素等抗菌物質，對多種植物病原真菌具有抑制作用。 已報道普城沙雷氏菌（Serratia plymuthica HR0-C48、A21-4、IC14 和 IC1270)、粘質沙雷 氏菌（S. marcenscens N4-5)可防治多種土傳、氣傳和采后病害的發生。
[0003] 靈菌紅素是一類具有甲氧基吡咯環結構的天然色素的總稱。目前已報道的靈菌 紅素及其類似物有 prodigiosin，metacycloprodigiosin，butyl-meta-cycloheptylpro digiosin, butylcycloheptyl-prodigiosin, nonylprodigiosin 等，含甲氧基三批咯環組 成的基本骨架結構，具有抗細菌、抗瘧疾、抗真菌、抗原生動物等生物活性。目前最另人們 感興趣的是其具有免疫抑制活性和引起腫瘤細胞凋亡作用。如靈菌紅素類似物GX15-070 (Obatoclax)，在臨床上已被用于治療多種癌癥。同時靈菌紅素及其類似物在由各種藻類引 起的海洋赤潮和淡水水華等方面具有極佳的治理效果，且不會給水體帶來二次污染；另外 靈菌紅素對天然纖維和化學纖維具有較強的著染力及抗菌性能，可作為生態染料。
[0004] 粘質沙雷氏菌產生的脂肽類物質主要有serrawettin Wl、serrawettin W2和 serrawettin W3。研究發現serrawettin對細菌、真菌卵菌具有抑制作用，Escobar-D/ az 等研究表明AT514 (serrawettin W1)能誘導人癌細胞和B-慢性淋巴細胞性白血病細胞凋 亡，目前在腫瘤治療領域正處于臨床開發階段。
[0005] 隨著全球高致病耐藥菌，如耐甲氧西林金葡菌（MRSA)、耐萬古霉素腸球菌（VRE) 和耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP)等的不斷出現，臨床上對新型抗生素的需求變得十分迫切。 玫瑰孢鏈霉菌（Streptomyces roseosporus)產生的環脂肽類抗生素家族的第一個產品一 達托霉素（Daptomycin)對以上耐藥菌均有很好的殺菌效果，且制劑用藥方便，毒副作用小； 類芽孢菌屬（Paenibacilluspolymyxa)所產多粘菌素（Polymyxins)已在臨床上用于治療 革蘭氏陰性菌感染。粘質沙雷氏菌屬所產的多種環脂肽和靈菌紅素可作為潛在的抗生素 類藥物被開發，具有很好的應用前景。
【發明內容】

[0006] 本發明所要解決的技術問題在于提供一種能應用于生防領域的粘質沙雷氏菌。
[0007] 解決上述技術問題所采用的技術方案是：命名為Serratia marcescens subsp. PGPRB的粘質沙雷氏菌，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址武漢，保藏日期為2013年 11 月 28 日，保藏號為 CCTCC NO :M 2013617 ;
[0008] 粘質沙雷氏菌 Serratia marcescens subsp. PGPRB 的 16S rDNA 核苷酸序列為：
[0009]
【權利要求】
1. 一種粘質沙雷氏菌，命名為Serratia marcescens subsp. PGPRB，保藏號為CCTCC NO ：M2013617〇
2. 一種權利要求1粘質沙雷氏菌Serratia marcescens subsp. PGPRB的篩選方法，其 特征在于由下述步驟組成： (1) 菌株分離 取煙草根際土樣置于離心管中，加入10倍質量的無菌水制成土壤懸液，置于漩渦震蕩 儀震蕩15分鐘，靜置5分鐘，吸取上清液分別加入10倍、100倍、1000倍、10000倍體積的無 菌水制成菌懸液，取不同濃度的菌懸液分別涂布于KB固體培養基平板上，每種濃度的菌懸 液做三個重復，在恒溫培養箱內28°C倒置培養24?48小時，挑取紅色菌落，重復劃線3次， 得到粘質沙雷氏菌，命名為Serratia marcescens subsp. PGPRB，在冰箱_20°C低溫保存； 上述的KB培養基1L中含蛋白胨20g、MgS04. 7H201. 5g、K2HP04. 3H202g、甘油10ml、氨芐 青霉素 40mg、氯霉素 13mg、放線菌酮素 lOOmg，調pH至7· 0 ; (2) 菌株鑒定 將得到的粘質沙雷氏菌通過形態學、分子測序、生理生化分析、脂肪酸分析進行鑒定。
3. 權利要求1所述的粘質沙雷氏菌Serratia marcescens subsp. PGPRB在制備靈菌紅 素 prodigiosin中的用途。
4. 權利要求1所述的粘質沙雷氏菌Serratia marcescens subsp. PGPRB在制備脂肽 serrawettin W2 中的用途。
【文檔編號】C12R1/43GK104109642SQ201410140700
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年4月8日 優先權日:2014年4月8日
【發明者】孫燕, 向照舉, 李治, 劉清梅 申請人:陜西師范大學