專利名稱：檢測dna樣品中預定位點的突變的試劑盒、方法及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及檢測DNA樣品中預定位點的突變的試劑盒、引物組合、方法及應用。
背景技術：
在特定位點形成突變是分子生物學實驗中常用的研究手段，可以有助于分析特定位點的點突變對于基因功能的作用。通常而言，在構建了目標突變體后，如何對該位點是否正確發生了突變，是本領域技術人員所面臨的問題。然而，目前分子生物學領域中，對于特定位點突變的檢測仍有待改進。

發明內容
本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種能夠有效檢測DNA樣品中預定位點的突變的方法。根據本發明的第一方面，本發明提出了一種檢測DNA樣品中預定位點的突變的方法。根據本發明的實施例，該方法包括以下步驟使用擴增引物對所述DNA樣品進行PCR擴增反應，以便獲得擴增產物，所述擴增產物包含所述預定位點；使用延伸引物以及ddNTP， 以所述擴增產物為模板，進行寡核苷酸延伸反應，以便獲得在所述延伸引物的3’端連接一個堿基的延伸產物，其中，所述延伸引物的3’端緊鄰所述預定位點；對所述延伸產物進行分子量檢測，以便獲得所述延伸產物的分子量；以及基于所述延伸產物的分子量，確定所述預定位點的突變類型。由于延伸反應是以包含預定位點的擴增產物為模板，并且進行延伸反應的延伸引物的3’端緊鄰所述預定位點，并且在進行延伸反應時使用ddNTP作為原料， 因而可以保證延伸反應可以僅延伸一個堿基，即對應預定的位點，基于各個不同堿基的分子量存在較為顯著的區別，因而，通過對延伸產物的分子量進行檢測，可以通過所獲得的延伸產物的分子量，來確定在預定位點是否發生了突變，以及所發生突變的類型。由此，可以廣泛應用于分子生物領域，例如檢測是否成功構建了相應的突變體。根據本發明的實施例，上述檢測DNA樣品中預定位點的突變的方法還可以具有下列附加技術特征根據本發明的一個實施例，所述DNA樣品為人全基因組DNA。由此，可以有效地對人類中的基因突變進行檢測。根據本發明的一個實施例，所述預定位點的突變為選自GJB2基因、GJB3基因、 SLC26A4基因以及mtDNA的至少一種基因的突變。由此，可以有效地檢測與耳聾相關的基因突變。根據本發明的一個實施例，所述GJB2基因的突變為選自35delG、167delT、 176-191dell6、299_300delAT和235delC的至少一種，所述GJB3基因的突變為選自位點 538C > T和547G > A的至少一種，所述SLC26A4基因的突變為選自^lC > T、589G > A、 919-2A > G、1174A > T、1226G > A、1229C > T、1975G > C、2027T > A、2162C > T、2168A > G和IVS15+5G > A的至少一種，以及所述mt DNA的突變為選自1494C > !“和1555A > G的至少一種。由此，可以有效地檢測遺傳性耳聾相關的基因突變。根據本發明的一個實施例，所述擴增引物包括第一引物和第二引物，其中，針對所述GJB2基因的35deKi突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 1所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :2所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :33所示；針對所述GJB2基因的167delT突變， 所述第一引物為如SEQ ID NO :3所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :4所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:34所示；針對所述GJB2基因的176-191dell6突變，所述第一引物為如 SEQ ID NO :5所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 35 所示；針對所述GJB2基因的^9_300delAT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 7所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :36所示；針對所述GJB2 基因的235delC突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :9所示，所述第二引物為如SEQID NO 10所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:37所示；針對所述GJB3基因的538C>T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :11所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :12所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:38所示；針對所述GJB3基因的M7G > A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :13所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 14所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :39所示；針對所述SLC26A4基因的突變，所述第一引物為如SEQ ID NO: 15所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :16所示，所述延伸引物為如SEQID NO :40所示；針對所述SLC26A4 基因的589G> A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 17所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 18所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 41所示；針對所述SLC26A4基因的919-2A > G 突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :19所示，所述第二引物為如SEQ ID N0:20所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 42所示；針對所述SLC26A4基因的1174A > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 43所示；針對所述SLC26A4基因的> A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 44所示；針對所述SLC26A4基因的> T突變，所述第一引物為如SEQID NO 21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :45所示；針對所述SLC26A4 基因的1975G> C突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:47所示；針對所述SLC26A4基因的2027T>A 突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 48所示；針對所述SLC26A4基因的2162C > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :27所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 49所示；針對所述SLC26A4基因的2168A > G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 27所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J8所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:50所示；針對所述SLC26A4基因的IVS15+5G>A突變，所述第一引物為如SEQ ID N0:23所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 24所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 46所示；針對所述mtDNA 基因的1494C> T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO : 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :30所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :51所示；以及針對所述mt DNA基因的1555A> G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :31所示，所述第二引物為如SEQ ID N0:32所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:52所示。為方便表述，將上述引物組合分別總結與下表1和2中。
表1 針對上述20個耳聾基因突變位點的擴增引物。
權利要求
1. 一種檢測DNA樣品中預定位點的突變的方法，其特征在于，包括以下步驟使用擴增引物對所述DNA樣品進行PCR擴增反應，以便獲得擴增產物，所述擴增產物包含所述預定位點；使用延伸引物以及ddNTP，以所述擴增產物為模板，進行寡核苷酸延伸反應，以便獲得在所述延伸引物的3’端連接一個堿基的延伸產物，其中，所述延伸引物的3’端緊鄰所述預定位點；對所述延伸產物進行分子量檢測，以便獲得所述延伸產物的分子量；以及基于所述延伸產物的分子量，確定所述預定位點的突變類型，其中，優選所述DNA樣品為人全基因組DNA，優選所述預定位點的突變為選自GJB2基因、GJB3基因、SLU6A4基因以及mtDNA的至少一種基因的突變，更優選，所述 GJB2 基因的突變為選自35ddG、167delT、176-191dell6J99_300delAT 和235delC的至少一種，所述GJB3基因的突變為選自位點538C > !“和M7G > A的至少一種，所述 SLC26A4 基因的突變為選自 281C > T、589G > A、919_2A > G、1174A > TU226G > A、1229C > T、1975G > C、2027T > A、2162C > T、2168A > 6和 IVS15+5G > A 的至少一種， 以及所述mt DNA的突變為選自1494C > T和1555A > G的至少一種，所述擴增引物包括第一引物和第二引物，優選，針對所述GJB2基因的35deKi突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :1所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :2所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 33所示；針對所述GJB2基因的167delT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :3所示，所述第二引物為如SEQID NO :4所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :34所示；針對所述GJB2基因的176-191dell6突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :5所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :35所示；針對所述GJB2基因的 299_300delAT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :7所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 8 所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 36所示；針對所述GJB2基因的235delC突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :9所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 10所示，所述延伸引物為如 SEQ ID NO 37所示；針對所述GJB3基因的538C > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 11所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :12所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:38所示；針對所述GJB3基因的M7G>A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 13所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 14所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 39所示；針對所述SLC26A4基因的^1C>T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 15所示，所述第二引物為如SEQ ID NO: 16所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:40所示；針對所述SLC26A4基因的589G>A突變， 所述第一引物為如SEQ ID NO :17所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :18所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:41所示；針對所述SLC26A4基因的919-2A>G突變，所述第一引物為如SEQID NO :19所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :20所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 42所示；針對所述SLC26A4基因的1174A > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 21 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:43所示；針對所述SLC26A4基因的> A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :44所示；針對所述SLC26A4基因的> T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO: 22所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:45所示；針對所述SLC26A4基因的1975G>C突變， 所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 47所示；針對所述SLC26A4基因的2027T > A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 48所示；針對所述SLC26A4基因的2162C > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 27 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :49所示；針對所述SLC26A4基因的2168A > G突變，所述第一引物為如SEQID NO 27所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :50所示；針對所述SLC26A4基因的IVS15+5G>A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :23所示，所述第二引物為如SEQ ID NO : 所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :46所示；針對所述mt DNA基因的1494C > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO : 所示，所述第二引物為如SEQ ID N0:30所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:51所示；以及針對所述mt DNA基因的1555A > G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :31所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :32所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 52 所示，優選所述第一引物和第二引物的5’端均具有標簽序列，所述標簽序列為如SEQ ID NO 53所示，優選在進行所述寡核苷酸延伸反應之前，進一步包括使用堿性磷酸酶對所述擴增產物進行處理的步驟。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，通過MALDI-T0F質譜檢測對所述延伸產物進行分子量檢測，優選在對所述延伸產物進行MALDI-T0F質譜檢測之前，進一步包括對所述延伸產物進行純化的步驟，優選利用陰離子樹脂對所述延伸產物進行純化。
3.一種用于檢測DNA樣品中預定位點的突變的系統，其特征在于，包括DNA樣品擴增裝置，所述DNA樣品擴增裝置，用于對所述DNA樣品進行PCR擴增，以便獲得擴增產物，所述擴增產物包含所述預定位點；擴增產物延伸裝置，所述擴增產物延伸裝置與所述DNA樣品擴增裝置相連，以便從所述DNA樣品擴增裝置接收擴增產物，并且對所述擴增產物進行寡核苷酸延伸反應，以便獲得在所述延伸引物的3’端連接一個堿基的延伸產物，其中，所述延伸引物的3’端緊鄰所述預定位點；分子量檢測裝置，所述分子量檢測裝置與所述擴增產物延伸裝置相連，以便確定所述延伸產物的分子量；以及突變分析裝置，所述突變分析裝置基于所述延伸產物的分子量，確定所述預定位點的突變類型，其中，優選所述DNA樣品擴增裝置內設置有擴增引物對，所述擴增產物延伸裝置內設置有延伸引物，優選所述預定位點的突變為選自GJB2基因、GJB3基因、SLa6A4基因以及mtDNA的至少一種基因的突變，更優選所述GJB2基因的突變為選自35ddG、167delT、176-191dell6、299_300delAT和235delC的至少一種，所述GJB3基因的突變為選自位點538C > !“和M7G>A的至少一種，所述SLC26A4基因的突變為選自281C > T、589G > A、919_2A > G、1174A>T、1226G > A、1229C > T、1975G > C、2027T > A、2162C > T、2168A > G 和 IVS15+5G > A的至少一種，以及所述mt DNA的突變為選自1494C > T和1555A > G的至少一種，所述擴增引物包括第一引物和第二引物，優選針對所述GJB2基因的35deKi突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :1所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :2所示，所述延伸引物為如 SEQ ID N0:33所示；針對所述GJB2基因的167delT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 3 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :4所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :34所示；針對所述GJB2基因的176-191dell6突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :5所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :35所示；針對所述GJB2基因的 299_300delAT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :7所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 8 所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:36所示；針對所述GJB2基因的235delC突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :9所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 10所示，所述延伸引物為如 SEQ ID NO 37所示；針對所述GJB3基因的538C > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 11所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :12所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:38所示；針對所述GJB3基因的M7G>A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 13所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 14所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 39所示；針對所述SLC26A4基因的^1C>T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 15所示，所述第二引物為如SEQ ID NO: 16所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :40所示；針對所述SLC26A4基因的589G>A突變， 所述第一引物為如SEQ ID NO :17所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :18所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:41所示；針對所述SLC26A4基因的919-2A>G突變，所述第一引物為如SEQ IDNO 19所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :20所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 42所示；針對所述SLC26A4基因的1174A > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 21 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :43所示；針對所述SLC26A4基因的> A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :44所示；針對所述SLC26A4基因的> T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO: 22所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:45所示；針對所述SLC26A4基因的1975G > C突變， 所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 47所示；針對所述SLC26A4基因的2027T > A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 48所示；針對所述SLC26A4基因的2162C > T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 27 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :49所示；針對所述SLC26A4基因的2168A > G突變，所述第一引物為如SEQID NO 27所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :50所示；針對所述SLC26A4基因的 IVS15+5G > A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :23所示，所述第二引物為如SEQ IDNO 24所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:46所示；針對所述mt DNA基因的1494C > T突變， 所述第一引物為如SEQ ID NO : 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :30所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:51所示；以及針對所述mt DNA基因的1555A > G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 31所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 32所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 52所示，優選進一步包括擴增產物凈化裝置，所述擴增產物凈化裝置分別與所述DNA樣品擴增裝置和所述擴增產物延伸裝置相連，以便對所述擴增產物進行凈化處理，并將經過凈化的擴增產物輸入至所述擴增產物延伸裝置。
4.根據權利要求3所述的系統，其特征在于，所述分子量檢測裝置為MALDI-T0F質譜裝置。
5.根據權利要求4所述的系統，其特征在于，進一步包括延伸產物純化裝置， 其中，所述延伸產物純化裝置分別與所述擴增產物延伸裝置和所述MALDI-T0F質譜裝置相連，以便對所述延伸產物進行純化處理，并將經過純化的延伸產物輸入至所述MALDI-T0F 質譜裝置，優選所述延伸產物純化裝置為陰離子樹脂。
6.一種診斷遺傳性耳聾的方法，其特征在于，包括以下步驟 提取懷疑患有遺傳性耳聾的受試者的DNA樣品；根據權利要求1和2所述的方法對所述DNA樣品中預定位點的突變進行分析；以及基于所述DNA樣品中存在所述預定位點的突變，確定所述受試者患有遺傳性耳聾。
7.一種產前診斷遺傳性耳聾的方法，其特征在于，包括以下步驟分離胎兒的DNA樣品，優選所述胎兒的DNA樣品是從絨毛膜、羊水或臍帶血取樣中提取的；根據權利要求1或2所述的方法對所述胎兒的DNA樣品中預定位點的突變進行分析；以及基于所述胎兒的DNA樣品中存在所述預定位點的突變，推測所述胎兒患有遺傳性耳ο
8.一種預測電子耳蝸效果的方法，其特征在于，包括以下步驟 提取耳聾患者的DNA樣品；根據權利要求1或2所述的方法對所述DNA樣品中預定位點的突變進行分析； 基于所述DNA樣品中存在所述預定位點的突變，確定所述耳聾患者患有遺傳性耳聾； 基于所述耳聾患者患有遺傳性耳聾，預測電子耳蝸對于所述耳聾患者有效。
9.一種引物組合，其特征在于，包括擴增引物對，所述擴增引物對適于對DNA樣品進行PCR擴增反應，以便獲得擴增產物， 所述擴增產物包含預定位點；以及延伸引物，所述延伸產物適于利用ddNTP，以所述擴增產物為模板，進行寡核苷酸延伸反應，以便獲得在所述延伸引物的3’端連接一個堿基的延伸產物，其中，所述延伸引物的 3’端緊鄰所述預定位點，所述預定位點的突變為選自GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因以及mtDNA的至少一種基因的突變，所述GJB2基因的突變為選自35delG、167delT、176_191del 16、 299_300delAT和235delC的至少一種，所述GJB3基因的突變為選自位點538C > T和M7G>A的至少一種，所述SLC26A4基因的突變為選自281C > T、589G > A、919_2A > G、1174A>Τ、1226G > A、1229C > Τ、1975G > C、2027T > A、2162C > T、2168A > G 和 IVS15+5G > A 的至少一種，以及所述mt DNA的突變為選自1494C > T和1555A > G的至少一種，所述擴增引物包括第一引物和第二引物，其中，針對所述GJB2基因的35deKi突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :1所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :2所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :33所示；針對所述GJB2基因的 167delT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :3所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :4所示， 所述延伸引物為如SEQ ID NO 34所示；針對所述GJB2基因的176_191dell6突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :5所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :6所示，所述延伸引物為如 SEQ ID NO 35所示；針對所述GJB2基因的^9_300delAT突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :7所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :36所示； 針對所述GJB2基因的235delC突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :9所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :10所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:37所示；針對所述GJB3基因的538C>T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 11所示，所述第二引物為如SEQ ID NO: 12所示， 所述延伸引物為如SEQ ID NO 38所示；針對所述GJB3基因的M7G > A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :13所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 14所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :39所示；針對所述SLC26A4基因的^1C>T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO: 15所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :16所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:40所示；針對所述SLC26A4基因的589G>A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 17所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :18所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :41所示；針對所述SLC26A4基因的919-2A>G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 19所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :20所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :42所示；針對所述SLC26A4基因的1174A > T 突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID N0:22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 43所示；針對所述SLC26A4基因的> A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 44所示；針對所述SLC26A4基因的> T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 21所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :22所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:45所示；針對所述SLC26A4基因的1975G > C突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :47所示；針對所述SLC26A4 基因的2027T> A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :25所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J6所示，所述延伸引物為如SEQ ID Ν0:48所示；針對所述SLC26A4基因的2162C>T 突變，所述第一引物為如SEQID NO :27所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 49所示；針對所述SLC26A4基因的2168A > G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :27所示，所述第二引物為如SEQ ID NO J8所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 50所示；針對所述SLC26A4基因的IVS15+5G > A突變，所述第一引物為如SEQ ID NO 23所示，所述第二引物為如SEQ ID NO : 所示，所述延伸引物為如SEQ ID N0:46所示；針對所述mt DNA基因的1494C> T突變，所述第一引物為如SEQ ID NO : 所示，所述第二引物為如SEQ ID NO 30所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO 51所示；以及針對所述mt DNA基因的1555A> G突變，所述第一引物為如SEQ ID NO :31所示，所述第二引物為如SEQ ID NO :32所示，所述延伸引物為如SEQ ID NO :52所示，優選所述第一引物和第二引物的5’端均具有標簽序列，所述標簽序列為如SEQ ID NO 53所示。
10. 一種試劑盒，其特征在于，包括 權利要求9所述的一種引物組合，優選所述試劑盒用于選自檢測DNA樣品中預定位點的突變、診斷遺傳性耳聾、產前診斷遺傳性耳聾、以及預測電子耳蝸效果的至少一種。
全文摘要
本發明涉及檢測DNA樣品中預定位點的突變的引物、試劑盒、方法及應用。檢測DNA樣品中預定位點的突變的方法包括以下步驟使用擴增引物對DNA樣品進行PCR擴增反應，使用延伸引物以及ddNTP，以所述擴增產物為模板，進行寡核苷酸延伸反應，以便獲得在所述延伸引物的3’端連接一個堿基的延伸產物；以及基于延伸產物的分子量，確定所述預定位點的突變類型。可以有效地確定在預定位點是否發生了突變，以及所發生突變的類型。
文檔編號C12Q1/68GK102409089SQ20111030171
公開日2012年4月11日 申請日期2011年10月8日 優先權日2011年10月8日
發明者馮大飛, 劉興旺, 楊煥明, 汪建, 王俊, 王夏曼, 鄒婧 申請人:深圳華大基因研究院, 深圳華大基因科技有限公司