Hrnbp3基因及其表達產物在疾病中的新用圖
【技術領域】
[0001 ]本發明屬于生物技術領域，涉及HRNBP3基因及其表達產物在疾病中的新用途，具 體地涉及HRNBP3基因及其表達產物在直腸腺癌診治中的新用途。
【背景技術】
[0002] 在國外，直腸腺癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，其發病率一直處于較高水平。在 中國，隨著人們生活方式、飲食結構改變，直腸腺癌的發病率也呈逐年上升趨勢，在南方的 一些城市里，直腸腺癌的發病年齡有年輕化的趨勢，嚴重危害人類健康。直腸腺癌的致病因 素是多樣且復雜的，是多因素多步驟發生發展的結果，但至今其具體的發病機制尚未清楚。 目前認為直腸癌的發病機制大致有兩條途徑：（1)染色體不穩定途徑:遵循"正常粘膜-腺 瘤-腺癌"的組織發生順序。此途徑認為引起直腸腺癌的原因是染色體的不穩定引起的癌基 因的激活和抑癌基因的失活突變。（2)錯配修復途徑:是由于錯配修復系統功能障礙導致的 微衛星不穩定。微衛星不穩定陽性的散發直腸腺癌是由鋸齒狀腺瘤發展而來，其不遵循傳 統的"腺瘤-腺癌"的模式。目前，臨床上直腸腺癌的治療仍然以手術和化療、放療為主，患者 的復發率和5年生存期并未得到明顯改善。
[0003] 迄今為止，早發現、早診斷、早治療的"三早策略"仍然是提高直腸腺癌遠期療效最 為有效的手段。近年來，盡管早期診斷和綜合治療領域也有了長足的進步，但腫瘤轉移、復 發仍然是影響預后的首要原因。臨床確診為早期階段的直腸腺癌其5年總體生存率可高達 90%，伴有局部淋巴結轉移時下降為65%，而一旦合并遠處轉移時則不足10%。這些數據顯 示絕大多數直腸腺癌死于轉移、復發的分子機制。因此進一步尋找與直腸腺癌相關的癌基 因和抑癌基因作為評價其生物學行為的輔助指標和作為靶向治療的靶點是目前直腸腺癌 研究的熱點之一。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于提供一種可用于直腸腺癌診療的分子標志物。與傳統的診斷方 法相比，使用基因標志物來診斷直腸腺癌具有及時性、特異性和靈敏性，從而使患者在疾病 早期就能知曉風險，針對風險高低，采取相應的預防和治療措施。
[0005] 為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
[0006] 本發明提供了一種基因及其表達產物在制備診斷直腸腺癌的產品中的應用，所述 基因為HRNBP3。
[0007] 進一步，上面所提到的產品包括:通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交 或芯片檢測HRNBP3基因及其表達產物的表達水平以預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌 是否發生轉移的產品。
[0008] 進一步，所述用RT-PCR來預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的 產品至少包括一對特異擴增HRNBP3基因的引物;所述用實時定量PCR預判直腸腺癌轉移風 險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的產品至少包括一對特異擴增HRNBP3基因的引物;所述用 免疫檢測預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的產品包括:與HRNBP3蛋白 特異性結合的抗體;所述用原位雜交預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移 的產品包括:與HRNBP3基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片預判直腸腺癌轉移風險、診 斷直腸腺癌是否發生轉移的產品包括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括與HRNBP3 蛋白特異性結合的抗體，基因芯片包括與HRNBP3基因的核酸序列雜交的探針。
[0009] 優選地，所述產品包括芯片、試劑盒。
[0010] 進一步，所述基因芯片可用于檢測包括SHR00M4基因在內的多個基因（例如，與直 腸腺癌相關的多個基因）的表達水平。所述蛋白質芯片可用于檢測包括SHR00M4蛋白在內的 多個蛋白質(例如與直腸腺癌相關的多個蛋白質）的表達水平。通過將多個與直腸腺癌的標 志物同時檢測，可大大提高直腸腺癌診斷的準確率。
[0011] 本發明提供了一種診斷直腸腺癌的產品，所述產品能夠通過檢測直腸組織中 HRNBP3基因的表達水平來診斷患者是否患有直腸腺癌。
[0012] 進一步，所述產品包括芯片、或試劑盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質芯 片;所述基因芯片包括固相載體以及固定在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針 包括用于檢測HRNBP3基因轉錄水平的針對HRNBP3基因的寡核苷酸探針;所述蛋白質芯片包 括固相載體以及固定在固相載體的HRNBP3蛋白的特異性抗體;所述試劑盒包括基因檢測試 劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒;所述基因檢測試劑盒包括用于檢測HRNBP3基因轉錄水平的試 劑;所述蛋白免疫檢測試劑盒包括HRNBP3蛋白的特異性抗體。
[0013] 進一步，所述固相載體包括無機載體和有機載體，所述無機載體包括但不限于有 硅載體、玻璃載體、陶瓷載體等;所述有機載體包括聚丙烯薄膜、尼龍膜等。
[0014] 進一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或芯片方法 檢測HRNBP3基因表達水平過程中所需的試劑。優選地，所述試劑包括針對HRNBP3基因的引 物和/或探針。根據SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列信息設計出可以用于檢測HRNBP3基因表 達水平的引物和探針。
[0015] 針對HRNBP3基因寡核苷酸探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生 物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何 長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度 可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效 率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過30 個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列最 好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。
[0016] 進一步，所述HRNBP3蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述HRNBP3 蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗體、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與HRNBP3蛋白的結合能力即可。用于蛋白質水 平的抗體的制備時本領域技術人員公知的，并且本發明可以使用任何方法來制備所述抗 體。
[0017] 本發明還提供了HRNBP3基因及其表達產物在制備治療直腸腺癌的藥物中的應用。
[0018] -方面，本發明所述的"治療直腸腺癌的藥物"包括能夠括抑制細胞生長、促進細 胞凋亡。
[0019] 另一方面，本發明所述的"治療直腸腺癌的藥物"包含HRNBP3基因和/或其表達產 物的抑制劑。所述抑制劑包括抑制HRNBP3基因表達的物質、抑制HRNBP3基因表達產物穩定 性的物質、和/或抑制HRNBP3基因表達產物活性的物質。
[0020] 進一步，本發明所述的治療直腸腺癌的藥物包括:通過干擾RNA抑制HRNBP3基因表 達的雙鏈核糖核酸，或基于HRNBP3抗原蛋白的腫瘤疫苗，或用于抑制HRNBP3蛋白活性的蛋 白質。
[0021] 優選的，所述抑制劑是針對HRNBP3的siRNA
[0022] 本發明還提供了一種用于治療直腸腺癌的藥物，所述藥物包含HRNBP3基因和/或 其表達產物抑制劑。所述抑制劑包括抑制HRNBP3基因表達的物質、抑制HRNBP3基因表達產 物穩定性的物質、和/或抑制HRNBP3基因表達產物活性的物質。
[0023] 進一步，本發明所述抑制劑包括:通過干擾RNA抑制HRNBP3基因表達的雙鏈核糖核 酸，或基于HRNBP3抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制HRNBP3蛋白活性的蛋白質。
[0024] 進一步，本發明的藥物還包括藥學上可接受的載體，這類載體包括(但并不限于）： 稀釋劑、賦形劑如乳糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;填充劑如淀粉、蔗糖等;粘合劑如 單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮;濕潤劑如 甘油；崩解劑如干淀粉、海藻酸鈉、海帶多糖粉末、瓊脂粉末、碳酸鈣和碳酸氫鈉;吸收促進 劑季銨化合物、十二烷基硫酸鈉等;表面活性劑如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基 硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、十六烷醇等;致濕劑如甘油、淀粉等;潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣 和鎂、聚乙二醇、硼酸粉末等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫土、硅膠、高嶺土和皂粘土等。
[0025] 本發明的藥物還可與其他治療直腸腺癌的藥物聯用，其他治療性化合物可以與主 要的活性成分(例如，HRNBP3蛋白或編碼所述蛋白的核酸）同時給藥，甚至在同一組合物中 同時給藥。還可以以單獨的組合物或與主要的活性成分不同的劑量形式單獨給予其它治療 性化合物。主要成分(如HRNBP3蛋白或編碼所述蛋白的核酸)的部分劑量可以與其它治療性 化合物同時給藥，而其它劑量可以單獨給藥，多種藥物聯合使用可以提高治療直腸腺癌的 成功率。
[0026] 本發明的藥物可以使用不同的添加劑進行制備，例如殺菌劑、緩沖劑、穩定劑、等 滲劑、螯合劑、pH控制劑及表面活性劑。添加劑緩沖劑可以包括硼酸、磷酸、乙酸、梓檬酸、谷 氨酸及相應的鹽（它們的堿金屬或堿性稀土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及