專利名稱：流感疫苗血凝素含量分析方法
技術領域：
本發明屬生物醫藥分析技術領域，具體涉及人用或獸用傳統疫苗、基因工程疫苗、單克隆抗體和免疫診斷試劑等抗原或抗體的標準化定量分析。
背景技術：
應用單向免疫擴散方法進行抗原或抗體含量的測定已廣泛應用于生物醫藥的檢測、分析及質量控制領域，中國藥典(2005版)四部收錄的多種生物制品的制造及檢定規程中采用此種方法進行抗原含量的測定。接種流感疫苗(滅活疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗)是目前有效預防流行性感冒的有效手段。流感疫苗的成分標識為血凝素含量，經國家食品藥品監督管理局批準上市的流感疫苗制造檢定規程中血凝素含量測定采用單向免疫擴散方法。目前該方法在數據采集、數據處理過程中仍采用手工測量、手工計算的方式，費時費工，誤差較大，無法適應GMP、GLP的標準。

發明內容
本發明的目的提供一種流感疫苗血凝素含量分析方法，以解決現有技術存在的在數據采集、數據處理過程中仍采用手工測量、手工計算的方式，費時費工，誤差較大，無法適應GMP、GLP的標準的問題。
本發明采用以下技術方案該方法在常規連接的圖片采樣儀器、計算機和輸出設備上實施，包括數據收集、數據處理、誤差分析、數據存儲輸出步驟；所述的圖片采樣儀器為高端掃描儀。
所述的輸出設備為顯示器或打印機。
本發明的有益效果是應用本發明對流感疫苗血凝素含量進行測定，符合生物制品質量標準及其質量控制的標準化、數字化、規范化的要求。與當前的測量方法對比具有以下的優勢1、單向免疫擴散試驗圖片能夠實現永久保存，同時其電子文本可以方便傳輸。2、數據采集采用多種方式，自動計算出平行樣的平均值，減少人為測量誤差。3、自動繪制標準曲線，比較直觀觀察標準品及樣品點在標準曲線中的分布情況，對實驗結果進行評價。4、利用誤差分析系統自動計算出一組標準品數據的相關系數，實現對樣品結果可信度評價。同時可以制定相關系數的可信度標準。5、能夠自動實現檢定原始數據的永久性電子存檔，同時依據需要輸出在同一圖片中含有不同批號組合的檢定報告。


圖1是本發明的流程圖；圖2是本發明實施例所處理的流感疫苗血凝素單向免疫擴散圖片；圖3是本發明實施例的標準品的X-Y曲線。
具體實施例方式
參見圖1，本發明包括該方法包括依次進行的數據收集步驟1、數據處理步驟2、誤差分析步驟3和數據存儲輸出步驟4。其中數據收集步驟1包括(1)圖片的導入和命名采用圖片采集儀器(如掃描儀)將流感疫苗血凝素測定圖片以jpg格式的導入到計算機內，并將其命名和保存在圖片文檔中。
(2)標準品數據的采集操作人員可以采用平行線測量或點線測量方法對所述圖片上的標準品沉淀環直徑進行測量，其測量結果自動存入數據庫中，通過對二個或三個平行樣的測定，自動計算其(沉淀環直徑)平均值。同理依次對若干個標準品進行測量采集；(3)被測樣品數據采集依據上述“標準品數據的采集(2)”的方法進行樣品數據采集，采集數據前需輸入樣品的稀釋倍數；采集系統同時支持手工錄入、修改及刪除功能。
數據處理步驟2包括(1)標準曲線的繪制系統采用最小二乘法求出方程Y2＝A+BX中的A、B值，并繪制標準曲線。
(2)樣品測量值的計算利用方程Y2＝A+BX，依據稀釋倍數求出樣品的X值，其中Y為標準品或樣品的沉淀環直徑(系統采集數據)，標準品的X值為手工錄入值，樣品的X值即為流感疫苗的血凝素含量。A為標準曲線的截距，B為標準曲線的斜率。
誤差分析步驟3通過對標準品實驗數據的測量，利用誤差分析軟件(給出軟件具體的名稱和來源)計算出此組數據的具有統計學意義相關系數，對實驗誤差進行定量分析；同時也可通過觀察標準品及樣品點在標準曲線中的分布情況，對實驗結果進行評價說明測量值與真實值的誤差及測量結果是否在標準曲線可讀范圍內。
數據存儲輸出步驟4標準品和樣品的測量結果分別存儲，可以選用實驗序號或樣品批號調出所需要的實驗及樣品報告，并分別進行輸出。
所述的圖片導入步驟采用的圖片采樣儀器為高端掃描儀，并與計算機連接。
所述的數據處理、誤差分析和數據存儲輸出步驟均在計算機及與其連接的輸出設備上進行。
所述的輸出設備為顯示器或打印機。
下面結合實施例對本發明的過程作進一步詳細說明實施例本發明采用的設備由高端掃描儀、計算機和輸出設備(顯示器或/和打印機)，采用常規連接方式相互連接。
一、首先進行數據采集步驟1、待分析圖片備好如圖2所示的樣品(即流感疫苗血凝素單向免疫擴散圖片)。圖片為瓊脂糖濃度為1％凝膠(內含抗體)，內圈為上樣圈，周圍環形部分為抗原擴散環。圖2中的中間一排從左邊數4個圖形為抗原標準品，下面一排從左邊數4個圖形為抗原標準品復孔，中間一排最右邊的二孔為陰性對照圖形(B、H3N2型別的流感血凝素標準品42μg/ml)，下面一排最右邊的一孔為陰性對照圖形(H1N1型別的流感血凝素標準品0μg/ml)。圖中的上面一排為被側樣品，其中1、2號樣為單孔，3、4號樣為復孔。抗原標準品1-4的濃度分別為56μg/ml、42μg/ml、28μg/ml、14μg/ml。
2、圖片采集采用所述的高端掃描儀將圖2所示的待分析圖片進行圖片掃描采集，將該掃描得到的圖片以jpg格式命名和保存在圖片文檔中。
二、數據處理步驟1、圖片分析(1)血凝素標準品數據輸入、標準品擴散圈直徑數據的采集選擇標準品序號，并輸入標準品的標準抗原含量如下標準品1血凝素56μg/ml；標準品2血凝素42μg/ml；標準品3血凝素28μg/ml；標準品4血凝素14μg/ml。
采用平行線法或點線法多次采集數據庫中標準品圖樣的擴散圈的直徑，并計算出多次采集的各數據的平均值。
采用相同的方法采集樣品擴散圈直徑數據，并計算出多次采集的各數據的平均值。
(2)樣品測量值的計算利用方程Y2＝A+BX，依據稀釋倍數求出樣品的X值，其中Y為標準品或樣品的沉淀環直徑(系統采集數據)，標準品的X值為手工錄入值，樣品的X值即為流感疫苗的血凝素含量。各數據參見表1，表1中的血凝素值為標準品輸入值，直徑的平方值及平均值為采集數據值。
三、標準品曲線輸出和誤差分析將上述表1中處理的標準品數據繪制成圖3所示的Y-X曲線，圖3的橫坐標表示X值(X值為輸入標準品數值或待測樣品的血凝素值)圖像(斜線)是依據Y2＝A+BX方程得出，并進行相關系數的誤差分析，得到相關系數為99.54％(參見表2)。表2的A、B回歸系數依據Y2＝A+BX方程得出，線性相關性檢驗與相關系數是依據下列公式得出。
對于變量y與x的一組觀測值來說，我們把r=Σi=1x(xi-x‾)(yi-y‾)Σi=1x(xi-x‾)2Σi=1x(yi-y‾)2=Σi=1xxiyi-nx‾y‾(Σi=1xxi2-nx‾2)(Σi=1xyi2-ny‾2)]]>稱為變量y與x之間的樣本相關系數(相關系數)
|r|≤1當|r|越接近于1，相關程度越大；當|r|越接近于0，相關程度越小。
四、樣品結果數據存儲輸出將上述的樣品的批號、稀釋倍數、血凝素測量值結果(參見表3)、標準品的數據采集圖表、標準曲線、誤差分析等結果儲存在微機數據庫中，可在顯示器顯示，也可用打印機打印輸出。表3中樣品批號和稀釋倍數均為手工輸入值，直徑的平方值及平均值為采集數據值，血凝素值為依據Y2＝A+BX方程得出。
表1

表2分析結果

回歸方程Y＝2588.5447+113.9039X表3樣品表格

權利要求
1.一種流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于該方法在常規連接的圖片采樣儀器、計算機和輸出設備上實施，包括數據收集、數據處理、誤差分析、數據存儲輸出步驟；其中數據收集步驟包括(1)圖片的導入和命名通過所述的圖片采集儀器將流感疫苗血凝素測定圖片以jpg格式的導入到計算機內，并將其命名和保存在圖片文檔中；(2)標準品數據的采集采用平行線測量或點線測量方法對所述圖片上的標準品沉淀環直徑進行測量，其測量結果自動存入計算機的數據庫中，通過對二個或三個平行樣的測定，自動計算其平均值；同理依次對若干個標準品進行測量采集；(3)待測樣品數據采集依據上述步驟(2)的方法進行樣品采集；數據處理步驟包括(1)標準曲線的繪制系統采用最小二乘法求出方程Y2＝A+BX中的A、B值，并繪制標準曲線；(2)樣品測量值的計算利用方程Y2＝A+BX，依據稀釋倍數求出樣品的X值，其中Y為標準品或樣品的沉淀環直徑(系統采集數據)，標準品的X值為手工錄入值，樣品的X值即為流感疫苗的血凝素含量；誤差分析步驟包括利用誤差分析軟件對所述的標準品的測量數據進行定量誤差分析并繪出相應的誤差曲線；同時通過觀察標準品及樣品點在標準曲線中的分布情況，對實驗結果進行評價，即說明測量值與真實值的誤差及測量結果是否在標準曲線可讀范圍內。數據存儲輸出步驟包括標準品和樣品的測量結果分別存儲，可以選用實驗序號或樣品批號調出所需要的實驗及樣品報告，并分別通過輸出設備進行輸出。
2.根據權利要求1所述的流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于所述的圖片采樣儀器為高端掃描儀。
3.根據權利要求1或2所述的流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于所述的輸出設備為顯示器或打印機。
全文摘要
一種流感疫苗血凝素含量分析方法，該方法在常規連接的圖片采樣儀器、計算機和輸出設備上實施，包括數據收集、數據處理、誤差分析、數據存儲輸出步驟。本發明與當前的測量方法對比具有以下的優勢單向免疫擴散試驗圖片能夠實現永久保存，同時其電子文本可以方便傳輸。數據采集采用多種方式，自動計算出平行樣的平均值，減少人為測量誤差。自動繪制標準曲線，比較直觀觀察標準品及樣品點在標準曲線中的分布情況，對實驗結果進行評價。利用誤差分析系統自動計算出一組標準品數據的相關系數，實現對樣品結果可信度評價。同時可以制定相關系數的可信度標準。能夠自動實現檢定原始數據的永久性電子存檔，同時依據需要輸出含有不同批號組合的檢定報告。
文檔編號G06K9/00GK1892227SQ20051008034
公開日2007年1月10日 申請日期2005年7月1日 優先權日2005年7月1日
發明者石晶, 劉培嵩, 王茂祥 申請人:長春創新藥物器械研究有限公司