一種用液相色譜法分離測定克利貝特及其有關物質的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分析化學領域，具體涉及液相色譜法分離測定克利貝特及其有關物質 的方法。
【背景技術】
[0002] 克利貝特是一類一線降脂藥物，可降低總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和載 脂蛋白B的濃度，對于各種類型的高脂血癥均有效。英文名稱為Clinofibrate，化學名稱 為 2, 2'-(4, 4'-Cyclohexylidenediphenoxy)_2, 2'-dimethyldibutaoic acid，分子式為 。28氏6〇6。
[0004] 在合成克利貝特的過程中，有幾個重要的中間體可能由于去除不完全而影 響藥物的純度，這些影響藥物純度的雜質稱為工藝雜質；而降解雜質是在藥物生產或 貯藏過程中產生的。上述有關物質皆無治療作用，還可能影響藥物的穩定性和療效， 甚至危害人體健康，對于克利貝特主要控制的有關物質有5個，分別是有關物質1 : 4,4'-(Cyclohexane-l，l_diyl)diphenol;有關物質 2:[2,2'-(4,4'_cyclohexylidene diphenoxy)]_2, 2,-dimethyl diethyl butyrate;有關物質 3:2-{4-[l-(4-Hydroxy-phenyl) -cyclohexyl] -phenoxy} -2-methyl-butyric acid ethyl ester ;有關物質 4 : 2-{4-[I-(4-Hydroxy-phenyl)-cyclohexyl]-phenoxy}-2-methyl-butyric acid ;有關物 M 5:2- (4-{1-[4- (1-Ethoxycarbonyl-lmethyl-propoxy)-phenyl]-cyclohexyl}-phenoxy )-2-methyl-butyric acid。結構式分別為：
[0005]
[0007] 對于合成克利貝特中引入的有關物質和貯藏過程中產生的降解雜質，在原料藥中 是需要進行質量控制的。因此，實現克利貝特及其有關物質的分離，在克利貝特的質量控制 方面具有重要的現實意義。

【發明內容】

[0008] 本發明的目的在于提供一種分析克利貝特的純度以及分離其有關物質的方法，從 而實現克利貝特與其有關物質的分離和測定，以保證克利貝特的純度，實現其終產品的質 量控制。
[0009] 本發明所述的用液相色譜法分析克利貝特的純度以及分離其有關物質的方法，是 采用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的緩沖鹽溶液-有機相為流動相。
[0010] 上述所說的色譜柱以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料，選自Alltima、Kromasil或 Apollo等品牌。
[0011] 上述所說的有機相選自以下化合物：甲醇、乙腈、異丙醇、四氫呋喃，優選乙腈。
[0012] 上述所說的方法，其流動相緩沖鹽溶液-有機相采用梯度洗脫。
[0013] 上述所說的方法中，緩沖鹽溶液中包含的緩沖鹽選自磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、檸 檬酸鹽、高氯酸鹽等，優選磷酸鹽。
[0014] 其中緩沖鹽溶液中包含的緩沖鹽的濃度為0. 03mol/L。
[0015] 本發明所述的分離測定方法，可按照以下方法實現：
[0016] 1)取克利貝特樣品適量，用流動相溶解樣品，配制成每ImL含克利貝特及其有關 物質0. 1~I. 5mg的樣品溶液。
[0017] 2)設置流動相流速為0. 5~2. 5mL/min，流動相流速優選1.0 mL/min，檢測波長為 205~250nm，檢測波長優選231nm，柱溫箱溫度為20~40°C，柱溫箱溫度優選25°C。
[0018] 3)取1)的樣品溶液10~50 μ L，注入液相色譜儀，完成克利貝特與有關物質的分 離測定。其中：
[0019] 高效液相色譜儀的型號，無特別要求，本發明采用的色譜儀為島津高效液相
[0020] 色譜儀：LC_2〇AT，CBM_2〇A，SIL_2〇AC，SPD-M 2〇A，CTO-lOASvp
[0021] 色譜柱：C8(Alltima，250X4. 6mm，5 μπι)
[0022] 流動相：A相：0· 03mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液（pH 2. 2) ;B相：乙腈
[0023] 流速：1. OmT,/mi η
[0024] 檢測波長：23Inm
[0025] 柱溫：25°C
[0026] 進樣體積：10 μ L
[0027] 洗脫梯度：
[0029] 本發明采用C8(Alltima，250X4.6mm，5ym)，能夠有效的分離克利貝特及其有關 物質。本發明解決了克利貝特及其有關物質的分離測定問題，從而確保了克利貝特原料藥 的質量可控。
【附圖說明】
[0030] 圖1為實施例1時的系統適用性HPLC圖；
[0031 ] 圖2為實施例1時的克利貝特HPLC圖；
[0032] 圖3為實施例2時的系統適用性HPLC圖；
[0033] 圖4為實施例2時的克利貝特HPLC圖；
[0034] 圖5為實施例3時的系統適用性HPLC圖；
[0035] 圖6為實施例3時的克利貝特HPLC圖；
[0036] 圖7為實施例3的溶劑HPLC圖；
【具體實施方式】：
[0037] 以下通過實例形式，對本發明涉及的克利貝特及其有關物質檢測方法作進一步的 詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上 述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
[0038] 實施例1
[0039] 儀器與條件
[0040] 島津高效液相色譜儀：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CT0-10ASvp ;
[0041] 色譜柱：C8(Alltima，250X4. 6mm，5 μπι)
[0042] 流動相：A相：0. 03mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液（pH 2. 2) ;B相：乙腈
[0043] 洗脫梯度：
[0045] 流速：1. OmT,/mi η
[0046] 檢測波長：23Inm
[0047] 柱溫：25°C
[0048] 進樣體積：10 μ L
[0049] 實驗步驟
[0050] 取克利貝特適量，用流動相溶解樣品，配制成含克利貝特約lmg/mL的克利貝特溶 液；分別取克利貝特的已知雜質適量，用流動相溶解，配制成含各雜質濃度約為〇.5mg/ml 的雜質混合溶液；取雜質混合溶液及克利貝特溶液適量，配制成系統