Hplc測定原料苯磺順阿曲庫銨含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物分析領域，具體設及一種HPLC測定原料苯橫順阿曲庫錠含量的 方法。
【背景技術】
[0002] 2010版藥典測定苯橫順阿曲庫錠含量的高效液相色譜法的色譜條件為：用十八 烷基鍵合硅膠為填充劑；W1. 02 %憐酸二氨鐘緩沖溶液（用憐酸調節抑至3. 1)-甲醇-乙 臘（75:5:20)為流動相A，W1. 02 %憐酸二氨鐘緩沖溶液（用憐酸調節抑至3. 1)-甲醇-乙 臘巧0:30:20)為流動相B，按梯度進行洗脫；檢測波長為280nm。
[0003]
[0004] 該方法采用的是梯度洗脫，要求儀器脫氣效果好，色譜柱耐高壓。并且該方法用時 較長，單針進樣需用時60min，由此流動相用量也會相應加大，可謂費時耗財。

【發明內容】

[0005] 發明目的：為了解決現有技術的不足，本發明提供了一種HPLC測定原料苯橫順阿 曲庫錠含量的方法，解決苯橫順阿曲庫錠含量檢測耗時過長的問題，同時兼顧簡化配制流 動相工序，節約流動相消耗，降低檢驗成本。同時提高了高效液相色譜儀和色譜柱的使用壽 命等問題。
[0006] 技術方案：一種HPLC測定原料苯橫順阿曲庫錠含量的方法，包括如下步驟：
[0007] (1)進樣重復性
[0008] 精密稱取苯橫順阿曲庫錠對照品lOmg，置25ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖 勻，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液20μ1，注入液相色譜儀，重復進樣5次，記錄色 譜圖；
[000引 似系統適應性
[0010] 精密稱取苯橫酸阿曲庫錠對照品lOmg，置100ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖 勻，作為系統適應性溶液，同法配制六份，精密量取系統適應性溶液各20μ1，注入液相色譜 儀，記錄色譜圖；
[0011] 做溶液穩定性
[001引精密稱取苯橫順阿曲庫錠對照品lOmg，置25ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖 勻，作為供試品溶液，將供試品溶液在進樣盤-4°C條件下放置，分別于化、2h、4h、6h、^、 lOh、12h，精密量供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖；
[001引（4)檢測限定量限
[0014] 精密稱取苯橫順阿曲庫錠對照品lOmg，置25ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖 勻，作為供試品溶液，逐級稀釋，直至信號與噪音的比值約為3:1，即為檢測限濃度；
[001引精密稱取苯橫順阿曲庫錠對照品lOmg，置25ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖 勻，作為供試品溶液，逐級稀釋，直至信號與噪音的比值約為10:1，即為定量限濃度，同法配 制六份；
[0016] 精密量各供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖；
[0017] (5)回收率
[001引對照品溶液：取苯橫順阿曲庫錠對照品lOmg，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動相 定容至刻度，搖勻，即得；同法配制兩份；
[0019] 苯橫順阿曲庫錠膽備液：取取苯橫順阿曲庫錠對照品約20mg，精密稱定，置25ml 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；
[0020] 供試品溶液：取膽備液4ml、5ml、6ml各Ξ份，置10ml量瓶中，加流動相溶解并定容 至刻度，搖勻，即得；
[0021] 精密量取對照品溶液、供試品溶液各20μ1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按 外標法W峰面積計算回收率；
[002引做線性
[002引苯橫順阿曲庫錠膽備液：取苯橫順阿曲庫錠對照品約20mg，精密稱定，置25ml量 瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；
[0024] 供試品溶液：精密量取該膽備液4ml、4. 5ml、5ml、5. 5ml、6ml分別置10ml量瓶中， 加乙臘稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為320μg/ml、360μg/ml、400μg/ml、440μg/ml、 480μg/ml系列濃度的溶液；
[00巧]精密量取供試品溶液各20μ1注入液相色譜儀，每個濃度點平行進兩針，記錄色 譜圖；
[002引（7)重復性
[0027] 對照品溶液：取苯橫順阿曲庫錠對照品lOmg兩份，精密稱定，分別置于25ml量瓶 中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；
[0028] 供試品溶液：取苯橫順阿曲庫錠樣品lOmg六份，精密稱定，分別置于25ml量瓶中， 加流動相稀釋至刻度，搖勻；
[0029] 精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μ1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖， 按外標法W峰面積計算苯橫順阿曲庫錠的含量；
[0030] (8)中間精密度
[0031] 同重復性試驗項下的供試品溶液配制，兩名分析人員于不同時間、不同儀器進行 重復性試驗；
[0032] 精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μ1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖， 按外標法W峰面積計算苯橫順阿曲庫錠的含量；
[003引（9)專屬性
[0034]酸堿空白：取0.Imol/L鹽酸溶液1ml，置10ml具塞試管中，加0.Imol/L氨氧化鋼 溶液調抑值至中性，加流動相定容至刻度，搖勻，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容， 搖勻，即得；
[003引氧化空白：取30%雙氧水1ml，置10ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，再取 500μL上述溶液至5血量瓶，定容，搖勻，即得；
[0036] 未破壞樣品：取苯橫順阿曲庫錠樣品lOmg，置25ml量瓶中，加流動相定容至刻度， 搖勻，即得；
[0037] 酸破壞樣品：取苯橫順阿曲庫錠樣品lOmg，置10ml具塞試管中，加0.Imol/L鹽酸 溶液1ml，搖勻，于室溫放置30min后，加0.Imol/L氨氧化鋼溶液調抑至中性，加流動相定 容至刻度，搖勻，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，搖勻，即得；
[003引堿破壞樣品：取苯橫順阿曲庫錠樣品lOmg，置10ml具塞試管中，加0.Imol/L氨氧 化鋼溶液1ml，搖勻，于室溫放置30min后，加0.Imol/L鹽酸溶液調抑至中性，加流動相定 容至刻度，搖勻，再取500μL上述溶液至5血量瓶，定容，搖勻，即得；
[0039] 氧化破壞樣品：取苯橫順阿曲庫錠樣品lOmg，置10ml具塞試管中，加30%過氧化 氨溶液1ml，搖勻，于室溫放置30min后，加流動相定容至刻度，搖勻，再取500μL上述溶液 至5血量瓶，定容，搖勻，即得；
[0040] 精密量取溶劑、未破壞、氧化空白、酸堿空白及上述破壞樣品溶液各20μ以分別注 入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0041] 作為優化：所述（2)系統適用性中，系統適用性溶液中順阿曲庫錠及各雜質分離 良好，主峰峰面積的相對標準差小于2. 0%，保留時間的相對標準差均小于1. 0%;各物質分 離度大于1. 5,拖尾因子、理論塔板數均符合規定，系統適用性良好。
[0042] 作為優化：所述（3)溶液穩定性中，供試品溶液在12h內不同時間取樣，主峰峰面 積RSD值均小于2. 0%，說明溶液在-4°C下放置12h內穩定。
[0043] 作為優化：所述（4)檢測限定量限中，6份最低定量限濃度的溶液各雜質峰保留時 間的RSD值均小于2. 0 %，峰面積的RSD值均小于5. 0 %。
[0044] 作為優化：所述巧）回收率中，在高、中、低濃度下，本品回收率平均為100.8%， RSD為0. 98%(η= 9)，說明本方法回收率良好。
[0045] 作為優化：所述（6)線性中，濃度在332. 5μg/ml~498. 7μg/ml范圍內，濃度狂） 與主峰面積燈）呈良好的線性關系，其線性方程為：y= 10575X+47886,R= 0. 9994。
[0046] 作為優化：所述（7)重復性中，按外標法W峰面積計算得到的六份樣品含量的RSD 值為0. 53 %，小于2. 0 %，重復性良好。
[0047] 作為優化：所述（8)中間精密度中，按外標法W峰面積計算得到的六份樣品含量 的RSD值為0. 64%，小于2. 0%，與重復性試驗項下共十二份樣品含量的RSD值為0. 56%， 小于2.0%，中間精密度良好。
[0048] 作為優化：所述（9)專屬性中，破壞產生的雜質峰與主峰完全分離，已知雜質峰與 其它峰分離良好，此方法專屬性良好。
[004引有益效果：本發明建立了HPLC測定苯橫順阿曲庫錠含量的新色譜條件，采用等度 洗脫的方式，使得流動相的配制由配制兩份變為一份，顯得更加方便、省時，同時等度洗脫 更利于延長儀器W及色譜柱的壽命。本方法單針進樣耗時25min，提高了檢驗效率，而且減 少了流動相的消耗，從而降低檢驗成本。
[0050] 本發明建立了HPLC測定苯橫順阿曲庫錠含量的新色譜條件，即：用十八烷基鍵 合硅膠為填充劑，W1. 02%憐酸二氨鐘緩沖溶液（用憐酸調節抑至3. 1)-甲醇-乙臘 (21:11:8)為流動相，流速1.Oml/mi