一種檢測紅參中非揮發脂溶性成分含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種中藥材中藥物成分的檢測方法，特別涉及一種檢測紅參中非揮發 脂溶性成分含量的方法。
【背景技術】
[0002] 紅參為五加科植物人參（Panax ginseng C. A. Mey.)經蒸制后的干燥根和根莖， 其味甘，微苦，性溫，歸脾、肺、心經，具大補元氣，復脈固脫，益氣攝血功效（國家藥典委員 會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010:8, 143)。紅參的成分較 為復雜，其主要成分均為皂苷類、氨基酸類、揮發油類、無機元素類和脂肪酸類等(文獻：郭 秀麗.人參化學成分和藥理研究進展[J].中醫臨床研究，2012, 04(14):26-27;楊秀偉.紅 參化學、藥理和臨床研究進展[J].中成藥研究，1984(05) :30-33)。
[0003]目前，關于紅參藥材的鑒別以及分析紅參中化學成分的研究比較多。（文獻：王鋼 力，聶黎行，張繼，梁錫猛，徐紀民，林瑞超.應用近紅外光譜技術鑒別紅參藥材[J]. 中草藥，2008, 39(3) :438-439;楊海雷，劉雪松，瞿海斌，程翼宇.一種基于近紅外的紅 參藥材質量快速評價方法[J].中草藥，2005, 36(6) :912-915 ;劉丹，濮社班，錢士輝，張靜 巖.中國紅參化學成分的研究[J].中國中藥雜志，2011，36 (4):462-464)關于人參脂溶性 成分的研究也有很多報道，主要包括脂肪酸和酯、揮發油(文獻：魏建華，徐濤，曹立軍，趙 花，趙銳.超臨界C02萃取人參脂溶性成分的GC-MS分析[J].人參研究，2012, 04:19-22)。 張宏桂、楊艷輝等用甲醇和乙醚提取人參中脂肪酸成分主要亞油酸和油酸等不飽和脂肪酸 (文獻：楊艷輝，楊興斌，王燕，等.人參脂肪酸和揮發油成分的GC-MS分析[J].陜西師 范大學學報（自然科學版），2007(01):77-81;張宏桂，閻吉昌，吳廣宣，等.長白人參中 脂肪酸成分的研究[J].白求恩醫科大學學報，1994, 20 (4) : 365 )，閻吉昌等采用GC-MS聯用 技術鑒定了人參中的揮發油發現萜烯類成分較多（文獻：閻吉昌.人參揮發油的提取和分 析[J].分析測試學報，1994(03) :46-50)。魯歧發現人參加工品種經加熱處理，亞油酸含量 呈上升趨勢(文獻：魯歧，富力，李向高，等.人參屬植物及人參不同加工品種中脂肪酸成 分的研究[J].吉林農業大學學報，1993(04):52-53+107)。
[0004] 紅參中非揮發脂溶性成分通常不易除去，通過提取、干燥后進入加工產品及其相 關制劑中。采用紅參藥材加工非注射用制劑，無論是對于紅參藥材的篩選還是在加工過 程中的質量控制，非揮發脂溶性成分對非注射用制劑的質量和臨床應用的安全性影響并不 大。如果紅參藥材作為注射用制劑的原料，在紅參藥材的采購和加工過程中就必須考慮到 非揮發脂溶性成分的影響，而關于紅參中非揮發脂溶性物質總體含量測定的研究未見報 道，因此本發明通過一系列的摸索實驗，找到了一種對紅參中非揮發脂溶性成分進行含量 檢測的簡單有效的方法。該方法可作為藥材質量檢測指標，采購紅參藥材時，檢測紅參藥材 中非揮發脂溶性物質含量，根據實際需要，確定相應標準，確保后續加工產品質量穩定及提 高臨床使用安全性；該方法也可作為紅參加工時質量控制指標，根據需要，優化紅參加工方 法，減少非揮發脂溶性物質含量。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一種用于加工注射用制劑的紅參中非揮發脂溶性成分含量 測定的方法，用于紅參藥材的采購和加工時的質量檢測。
[0006] 本發明所述含量測定方法，步驟如下：
[0007] 將紅參藥材粉碎，過篩，加有機溶劑，回流提取，提取液減壓濃縮至干，干燥至恒重 (得紅參中脂溶性成分的重量)，以干品計算紅參中脂溶性成分的含量。
[0008] 其中過篩優選過2-4號篩，優選4號篩；
[0009] 有機溶劑添加量優選8-16倍量，更優選10-14倍量，最優選12倍量；
[0010] 回流提取優選：3-5次，每次1-3小時，更優選回流提取4次，每次2小時。
[0011] 優選的測定方法為：將紅參藥材粉碎，過2-4號篩，加8-16倍量的有機溶劑，回流 提取3-5次，每次1-3小時，提取液減壓濃縮至干，干燥至恒重，以干品計算紅參中脂溶性成 分的含量。
[0012] 較優選的測定方法為：將紅參藥材粉碎，過4號篩，加10-14倍量的有機溶劑，回流 提取3-5次，每次2小時，提取液減壓濃縮至干，干燥至恒重，以干品計算紅參中脂溶性成分 的含量。
[0013] 更優選的測定方法為：將紅參藥材粉碎，過4號篩，加10-14倍量的有機溶劑，回流 提取4次，每次2小時，提取液減壓濃縮至干，干燥至恒重，以干品計算紅參中脂溶性成分的 含量。
[0014] 最優選的測定方法為：將紅參藥材粉碎，過4號篩，加12倍量的有機溶劑，回流提 取4次，每次2小時，提取液減壓濃縮至干，干燥至恒重，以干品計算紅參中脂溶性成分的含 量。
[0015] 以上所述有機溶劑選自：石油醚，乙醚，二氯甲烷或氯仿；優選氯仿。
[0016] 測定方法的詳細步驟為：將紅參藥材粉碎，過4號篩，稱取5g，加11-13倍量的氯 仿，回流提取3-5次，每次2小時。提取液減壓濃縮至干，放入烘箱干燥至恒重，以干品計算 紅參中脂溶性成分的含量。
[0017] 優選：將紅參藥材粉碎，過4號篩，稱取5g，加12倍量的氯仿，回流提取4次，每次 2小時。提取液減壓濃縮至干，放入烘箱干燥至恒重，以干品計算紅參中脂溶性成分的含量。
[0018] 上述紅參中脂溶性成分的含量=紅參中脂溶性成分的重量/紅參藥材重 量 X100%。
[0019] 本發明的方法是經過篩選獲得的，篩選實驗如下：
[0020] 1、材料
[0021] 1. 1 材料
[0022] 紅參，購于吉林省長白縣，為6年生鮮參加工而成。
[0023] 1. 2儀器及試劑
[0024] BUCHI R-215型旋轉蒸發儀；電熱恒溫水浴鍋(上海森信實驗儀器有限公司）；電熱 恒溫干燥箱(天津市天宇實驗儀器有限公司制造）；METTLER TOLEDO AL-204萬分之一電子 天平。石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿均為分析純。
[0025] 2、方法與結果
[0026] 2.1藥材粗細的選擇
[0027] 將同一批號的紅參藥材粉碎，分別過1號篩（10目）、2號篩（24目）、3號篩（50目）、 4號篩（65目）。稱取過篩后的藥材粉末各5g，加入氯仿lOmL，沒過藥材表面，密閉，室溫靜 置48h，溶液過濾，水浴揮干，放入烘箱內干燥至恒重，稱重。平行兩次實驗，實驗結果見表 1 ：
[0028] 表1藥材粗細對非揮發脂溶性成分溶出度的影響
[0031] 由以上實驗結果明顯看出，過4號篩紅參藥材非揮發性脂溶性成分溶出率最高， 所以本實驗選用過4號篩粉末。
[0032] 2. 2提取溶劑的選擇
[0033] 將紅參藥材粉碎，過4號篩。稱取藥材粉末4份，每份5g，分別加入石油醚、乙醚、 二氯甲烷、氯仿各10mL，使其沒過藥材表面，密閉，室溫靜置24h，溶液過濾，水浴揮干，放入 烘箱內干燥至恒重，稱重。按上述方法做兩次平行實驗，實驗結果見表2 :
[0034] 表2溶劑對非揮發脂溶性成分溶出度的影響
[0036] 由以上結果明顯看出：氯仿提取效果最好，可選為紅參非揮發脂溶性成分提取的 最佳提取溶劑。
[0037] 2. 3提取方法的選擇
[0038] 將紅參藥材粉碎，過4號篩。稱取藥材粉末3份，每份5g，加入100ml氯仿，分別采 用超聲、回流、索氏提取lh，過濾，濾液水浴揮干，放入烘箱中干燥至恒重，稱重。每種提取方 法做兩次平行實驗，實驗結果見表3 :
[0039] 表3不同提取方法的比較
[0041] 由以上結果明顯看出：通過實驗結果可得出采用回流提取紅參，所得脂溶性成分 含量最多，超聲提取紅參所得脂溶性成分含量最少。故本試驗選用回流提取方法。
[0042] 2. 4、正交試驗建立最佳提取方法
[0043] 為進一步優化紅參中脂溶性物質提取方法，采用正交試驗，以提取溶劑用量(倍)、 提取時間（h)、提取次數為因素進行考察，設計L 9 (3) 4正交表，見表4 :
[0044] 表4因素水平表
[0046] 通過正交實驗得出的結果，如表5所不，極差分析表見表6,方差分析表見表7
[0047] 表5正交實驗結果
[0049] 表6直觀分析表
[0052]表7方差分析表
[0054] 經直觀分析和方差分析得出，影響提取效率的主次因素是：提取次數〉溶劑用量〉 提取時間；其中提取次數有顯著性影響，提取溶媒用量和提取時間無顯著性影響。優選的最 佳提取方案是A3B2C3,即12倍量溶劑，提取4次，每次2小時。
[0055] 2. 5驗證實驗
[0056] 正交實驗結果顯示，影響提取效率的主次因素是：提取次數〉溶劑用量〉提取時 間。最佳提取方案是A3B2C3,即12倍量溶劑，提取4次，每次2小時。取同一批紅參藥材粉 末，按上述優化條件做3組平行驗證實驗。實驗結果見表8 :
[0057] 表8驗證實驗結果
[0059] 驗證實驗結果均高于正交試驗中最大值即第7組實驗結果，且結果穩定。
[0060] 2. 6紅參藥材中非揮發脂溶性含量測定
[0061] 為驗證不同批次的紅參藥材和紅參藥材的不同部位中非揮發脂溶性成分含量的 差異性，選用不同批次的紅參藥材20批：其中十批為紅參飲片（去蘆、去須的紅參主根)，六 批為全參，后四批為蘆頭，參須，參表皮，參芯(參表皮和參芯是從主根部分機械分離得到)。 根據前述最佳提取方案A3B2C3,將紅參藥材粉碎，過4號篩，分別稱取5g，加12倍量氯仿 (實際應用中也可以使用8-16倍量的石油醚或乙醚或二氯甲烷或氯仿，12倍量氯仿為最優 方案)，回流提取4次，每次2小時。提取液減壓濃縮至干，放入烘箱干燥至恒重，以干品計 算紅參中脂溶性成分的含量。依上述實驗方法平行2次。
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