確定母體健康風險的方法
【專利說明】
[OOOU 本申請為國際申請日2010年4月23日、國際申請號PCT/FI2010/050336于2011 年10月18日進入中國國家階段、申請號201080017050.0、發明名稱"確定母體健康風險的 方法"的分案申請。
技術領域
[0002] 本發明設及可W在體外執行的、根據生物樣品的分析來確定母體健康風險的方 法。更具體而言，本發明設及用于確定孕婦發生高血壓疾病、更具體為妊娠高血壓或晚發型 先兆子痛的風險的方法。
【背景技術】
[0003] 在全世界，高血壓疾病例如妊娠高血壓佑H)和先兆子痛（P巧影響所有妊娠中的 10% W上。先兆子痛影響約2-8%的妊娠，是孕產期死亡和發病的重要原因。最近，對與該 些疾病相關的生物物理變化進行了研究并發表了理論。根據該理論，認為PE是導致胎盤缺 氧的母體子宮螺旋動脈的滋養層細胞侵襲受損，W及引起血小板和內皮細胞活化和損傷的 炎性因子的釋放的結果。此外，據信細胞因子參與胎兒胎盤的發育，并已提出它們是能夠損 傷內皮細胞并造成許多與PE相關的病理生理變化的胎盤因子。
[0004] 盡管研究表明不同的生物物理和生物化學指標與高血壓疾病相關，但目前還沒有 采取常規篩查方法使用母體血樣對先兆子痛進行早期檢測。如果GH和PE的發生可W更早 檢測到，在許多情況下，能獲得更好的結果，包括嚴重性降低W及甚至復原。在妊娠期間，在 早期和晚期階段，需要可靠的發生PE的風險評估方法W降低孕婦、嬰兒或兩者的不利健康 結果的可能性。
[0005] 目前通用的風險評估是基于產科病史（例如W前的陽）和母體特征（例如種族和 母體體重），它只能W 5-10%的假陽性率鑒定約30的早發型陽病例燈u，C.等，Am J化stet Gynecol. 2005 ; 193:429-36)。化等提出了使用超聲波和母體因素的組合來增加隨后發生 先兆子痛的女性的鑒定。然而，執行超聲波檢查依賴于參與的衛生護理人員的技術，并需要 孕婦在醫療檢查期間到場。
[0006] 目前認識到，母體樣品中存在的許多生物標志物與先兆子痛相關。已經建議 使用胎盤生長因子（P1GF)來評估孕婦發生陽的風險扣Itrasound化stet Gynecol 32:732-739)。盡管PIGF作為先兆子痛的可靠標志物已經得到一定程度的接受，但希望能 夠建立特異性和預測能力更高的可選和其他標志物。
[0007] 盡管已經研究了某些單一標志物預測妊娠相關并發癥的能力，但對于為妊娠個體 在妊娠晚期階段發生高血壓疾病提供早期風險評估的方法，仍存在著需求。
[000引此外，對于可W在體外執行的、根據生物樣品的分析來確定風險的方法，存在著需 求。
[0009] 此外，對于可W在妊娠前=個月中執行的、根據生物樣品的分析來確定風險的方 法，存在著需求。
[0010] 此外，對于在妊娠個體中確定高血壓疾病、更具體為妊娠高血壓或晚發型先兆子 痛的風險的方法，也存在著需求，所述方法在單一篩查中具有改進的檢出率。
[0011] 此外，對于從群體中鑒定W篩選在妊娠晚期發生高血壓疾病的風險增加的妊娠個 體，W進一步監測并進行可能的治療的篩查方法，存在著需求。
[0012] 此外，對于根據單一篩查確定風險評估的方法存在著需求，所述單一篩查能夠提 供高血壓疾病例如妊娠高血壓、晚發型先兆子痛和早發型先兆子痛之間的差異。

【發明內容】

[0013] 本發明提供了可用于確定妊娠個體發生妊娠性高血壓疾病或病癥例如妊娠高血 壓、早期先兆子痛、晚期先兆子痛和相關疾病的風險的方法。在本文中描述了生物化學標志 物與相關臨床群體研究的幾種有用組合。此外，在本文中提出了某些生物化學標志物組可 用于在單一篩查中確定多種高血壓疾病的風險。如實施例1中所述，P1GF、活化素A和P-選 擇素的組合可用于確定晚期先兆子痛的風險，而該些標志物的子集P1GF和活化素A可用于 確定妊娠高血壓的風險，并且單一標志物P1GF與生物物理標志物的組合可用于確定早期 先兆子痛的風險。
[0014] 本文提供了用于在妊娠個體中確定晚發型先兆子痛風險的方法，所述方法包含測 定來自個體的一個或多個血樣中生物化學標志物包括P1GF、活化素A和P-選擇素的水平； W及使用測定的生物化學標志物水平確定晚發型先兆子痛的風險。
[0015] 還提供了用于在妊娠個體中確定妊娠高血壓風險的方法，所述方法包含測定來自 個體的一個或多個血樣中生物化學標志物包括P1GF和活化素A的水平；W及使用測定的生 物化學標志物水平確定妊娠高血壓的風險。
[0016] 如果需要，該些方法還可W包括測定選自個體的子宮動脈博動指數（PI)和個體 的平均動脈壓（MAP)的至少一種生物物理標志物；W及使用生物化學標志物和至少一種生 物物理標志物的水平確定風險。
[0017] 本文提供了用于在妊娠個體中確定高血壓疾病風險的方法，所述方法包含測定來 自個體的一個或多個血樣中生物化學標志物包括P1GF、活化素A和P-選擇素的水平；使用 P1GF、活化素A和P-選擇素的水平確定晚發型先兆子痛的風險；W及使用活化素A和P1GF 的水平確定妊娠高血壓的風險。
[0018] 本文還提供了用于在妊娠個體中確定高血壓疾病風險的方法，所述方法包含測定 來自個體的一個或多個血樣中生物化學標志物包括P1GF、活化素A和P-選擇素的水平；^1 定個體的至少一種生物物理標志物包括子宮動脈博動指數（PI)和平均動脈壓（MAP);使用 P1GF、活化素A和P-選擇素的水平確定晚發型先兆子痛的風險；使用活化素A和P1GF的水 平確定妊娠高血壓的風險；W及使用P1GF、PI和MAP的水平確定早發型先兆子痛的風險。
[0019] 本文提供的另一種方法用于確定妊娠個體中高血壓疾病的風險，所述方法包含測 定來自個體的一個或多個血樣中生物化學標志物包括P1GF、活化素A和P-選擇素的水平； 測定個體的至少一種生物物理標志物包括子宮動脈博動指數（PI)和平均動脈壓（MAP);使 用P1GF、活化素A和P-選擇素的水平確定晚發型先兆子痛的風險；使用活化素A和P1GF的 水平確定妊娠高血壓的風險；W及使用P1GF和PAPP-A中的一種或兩種W及PI和MAP的水 平確定早發型先兆子痛的風險。
[0020] 在下文中，將在詳細描述的幫助下并參考實施例對本文提供的方法進行進一步描 述。
【附圖說明】
[0021] 圖1提供了表1，其概述了來自實施例1的母體結果。每個高血壓疾病組與對 照組之間的比較通過用于分類變量的卡方或Fisher精確檢驗W及用于連續變量的Mann Whitney-U檢驗呈遞在所述表中，兩種檢驗都使用了事后Bonferroni校正（臨界統計學顯 著性p<0. 0167)郝<0. 0167,十p<0.001，:;:p<〇.〇〇〇l。
[0022] 圖2作為表2列出了四個結果組中每種標志物的測量結果。所述表中每個高血壓 疾病組與對照組之間的比較通過MannWhitney-U檢驗進行，使用了事后Bonferroni校正 (臨界統計學顯著性P<〇.0167) ;*p<0. 0167,-;-p<〇.001，:i:p<〇.000。
【具體實施方式】[002引樣品
[0024] 用于在妊娠個體中確定高血壓病癥風險的方法包括使用來自于妊娠個體的生物 樣品。生物樣品可W是含有所選生物化學標志物的任何體液或組織樣品。生物樣品的選擇 通常取決于具體臨床實驗室中可用的用于檢測標志物水平的測定格式。例如，一些測定格 式缺少測定全血所需的靈敏性，因此臨床實驗室選擇測試血液級份例如血清或使用干血。 此外，已經通過例如冷凍或干燥進行保存的樣品（例如采用血卡格式），適合使用在本文描 述的方法中。實施例1描述了使用血清形式的母體血液。可用于本文描述的方法的示例性 生物樣品包括血液、純化的血液制品（例如血清、血漿等）、尿液、羊水、絨毛膜絨毛活檢樣 品、胎盤活檢樣品和宮頸陰道液。優選的樣品包括血樣。該意味著方法在孕婦（在本文中 也稱為母親、個體、患者或對象）的身體之外體外進行。
[0025] 用于測定樣品中多膚和其他生物標志物的水平的典型測定格式，設及使用對照多 膚，特別是在對該些多膚進行定量時。可商購的蛋白和其他生物標志物可W在測量生物化 學標志物水平的測定法中用作標準品。可選地，用于在例如原核和真核系統中表達蛋白和 用于合成多膚的方法是公知的。全長蛋白及其片段可作為標準品用于定量測定從孕婦獲得 的樣品中生物標志物的水平。
[0026] 在本文中，"對照樣品"是指從處于相同的妊娠時期或胎齡的對象獲得的樣品，并 且其中已證實妊娠具有特定的先兆子痛結果。典型情況下，"對照樣品"已被證實沒有發生 先兆子痛（參見本文實施例），盡管也可W使用被證實已發生先兆子痛的對照樣品。該術語 在本文中被定義為涵蓋一個或多個樣品，因此對照樣品可W是從群體獲得的一組樣品。所 選的妊娠對照可W通過生物物理參數例如母體年齡、體重指數、種族和胎齡與先兆子痛病 例相匹配。
[0027] 生物化學標志物水平
[002引"測定來自個體的至少一個血樣中生物化學標志物包括P1GF和活化素A的水平"， 是指通過特異性評估從孕婦獲得的樣品和對照樣品中提到的標志物水平的方法來測定所 選生物化學標志物。樣品中存在的生物化學標志物的水平，可W使用適合于測量生物樣品 中的蛋白的任何測定格式來測定。常用于此目的的測定格式是免疫測定法，包括例如酶免 疫測定法巧lA)，例如酶多重免疫測定技術（EMIT)、酶聯免疫吸附測定法巧LISA)、IgM抗體 捕獲化ISA(MACELISA)和微粒酶免疫測定法（MEIA);毛細管電泳免疫測定法（CEIA);放射 免疫測定法巧IA);免疫放射測定法（IRMA);巧光偏振免疫測定法（FPIA);解離-增強銅系 巧光免疫測定法值ELFIA)和化學發光測定法（CL)。
[0029] 樣品與對照樣品相比生物化學標志物水平的差異指示了孕婦中高血壓疾病的風 險。取決于所測試的具體生物標志物，差異可W是生物化學標志物水平的升高或降低。
[0030] 在某些情況下，生物樣品可W在一種W上的場合從孕婦收集，例如，當由于前設風 險、癥狀表現和/或其他因素使她的高血壓和/或胎盤病癥需要監測妊娠高血壓或先兆子 痛的發展時。本文所述用于確定妊娠高血壓或先兆子痛風險的方法也可用于監測正經歷高 血壓和/或胎盤病癥的療法或治療的妊娠個體。如果需要，可W在家庭環境中進行生物化 學和/或生物物理標志物的測試，例如通過使用試紙生物化學測試格式和供家庭使用的自 動血壓計。
[0031] "發生高血壓疾病的風險增加"、"發生妊娠高血壓的風險增加"和"發生晚發型先 兆子痛的風險增加"分別是指對象（孕婦）發生高血壓疾病、妊娠高血壓和先兆子痛的概率 與不發生所述疾病的孕婦對照組相比處于更高水平上。
[0032] 生物化學標志物
[0033] 在確定妊娠個體中高血壓疾病風險的情形中，最重要的生物化學標志物是P1GF、 活化素A和P-選擇素。
[0034] W前報道的研究已經顯示，P1GF水平的降低指示了先兆子痛的發生。
[0035] 縮寫"P1GF"是指胎盤生長因子。P1GF最初于1991