庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法與流程

文檔序號：11214475閱讀：733來源：國知局

本發明屬于生物制品領域，具體涉及庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法。

背景技術：

庫爾勒香梨屬新疆梨種(pyrussinkiangensisyu)，維吾爾語名乃西米提或乃西普提，原產于新疆南疆巴音郭楞蒙古自治州，阿克蘇等地，至今已有1300年的栽培歷史。庫爾勒香梨皮薄肉脆,清甜爽口,細嫩多汁,維生素c含量豐富且耐貯藏，曾多次在國內獲獎,在國際市場上被譽為“中華蜜梨”、“梨中珍品”、“果中王子”等稱號。庫爾勒香梨營養價值高，含糖、氨基酸、維生素、各種碳水化合物達14％，水汁為86％。其中含糖量10％，酸0.03％，灰分0.12％，每100克香梨含維生素c約4.3毫克，含有葡萄糖、果酸及多種微量元素，可食部分達83.6％。庫爾勒香梨不僅可以生食，而且可以做梨酒、梨膏等相關食品，并有"潤肺、涼心、消痰、消炎、止咳、解瘡毒酒毒"等醫療作用，維吾爾醫、蒙醫中常把它作為食療佳品。

庫爾勒香梨在新疆大面積種植，在巴州庫爾勒市種植面積最多，從2007年起，香梨成為庫爾勒市農民增收的第一產業，并且庫爾勒香梨的種植面積以每年5萬畝的速度快速遞增。現在，庫爾勒香梨已遠銷美國、加拿大、澳大利亞、歐盟、東南亞等十多個國家和地區。

但近幾年香梨腐爛病發生嚴重，病情難以控制。腐爛病亦稱腐朽病(decay)，果樹腐爛病又稱爛皮病、臭皮病等，世界各地均有發生。梨樹腐爛病是梨樹最重要的枝干病害，以侵染和為害主枝和較大的側生枝組為主，在主干上也有發生。當病斑環繞整個主枝時，主枝即死亡，嚴重發生時可造成死樹和毀園，對果農造成巨大的經濟損失。

腐爛病菌毒素對庫爾勒香梨具有毒害作用，但對腐爛病菌毒素的研究，可以促進香梨腐爛病的病理性研究，并且可以進一步的奠定研究香梨腐爛病治病機制及防治的基礎，對研究香梨腐爛病治病機制及防治有重要理論意義。因此在研究過程中，需要病菌毒素，但是現在前人的研究只確定了引起庫爾勒香梨樹腐爛病菌為梨幹腐爛殼蕉孢菌(c.carphospermafr.)。目前關于庫爾勒香梨腐爛病的研究主要在庫爾勒香梨腐爛病病原鑒定和庫爾勒香梨腐爛病菌生物學特性與致病性方面，只知庫爾勒香梨樹腐爛病菌的最適溫區為20-30℃，最適ph值為5-7，在全光照的條件下產孢最多且菌絲最密，但是毒素含量非常低；有關庫爾勒香梨腐爛病菌產毒條件研究未見報道，無法確定最適產毒培養方法。因為不同病原菌最適產毒培養條件也有所不同，例如：番茄葉霉病菌產毒最適培養條件：ph為6、溫度為26-30℃、培養時間21天、黑暗條件下振蕩培養；雷公藤角斑病菌產毒最適培養條件：ph為7的查氏培養液中，培養溫度為29℃，黑暗條件下振蕩培養25天產生的毒素致病力最強。從而香梨腐爛病菌的毒素很難快速有效的制備出來，限制了香梨腐爛病的研究。

有鑒于此，本發明提出一種庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，該制備方法簡單，并且可以有效的制備出庫爾勒香梨腐爛病菌毒素。

為了實現上述目的，所采用的的技術方案為：

庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，包括以下步驟：

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到培養液中，在20-30℃下振蕩培養3天以上，得培養后的菌液；

所述培養液為馬鈴薯葡萄糖培養液、馬鈴薯蔗糖培養液、查氏培養液和葉片煎汁蔗糖培養液中的一種；

(2)將培養后的菌液濾去菌絲，再過濾，得濾液；將濾液離心15-21分鐘，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

進一步的，所述馬鈴薯葡萄糖培養液的制備：將去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸15-30分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入葡萄糖，并且加水定容，再滅菌，得馬鈴薯葡萄糖培養液；其中，馬鈴薯的質量、葡萄糖的質量與定容后的體積比為20g：2g：95-105ml；

所述馬鈴薯蔗糖培養液的制備：將去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸15-30分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入蔗糖，并且加水定容，再滅菌，得馬鈴薯蔗糖培養液；其中，馬鈴薯的質量、蔗糖的質量與定容后的體積比為20g：2g：95-105ml；

所述查氏培養液中的含氮化合物、磷酸氫二鉀、氯化鉀、硫酸鎂、硫酸亞鐵、蔗糖和水的質量比為2:1:0.5:0.5:0.01:30:950-1050；

所述香梨葉片煎汁蔗糖培養液的制備：將香梨葉片加水煮沸15-30分鐘，過濾，得濾液；向濾液中加入蔗糖，并且加水定容，再滅菌，得香梨葉片煎汁蔗糖培養液；其中，香梨葉片的質量、蔗糖的質量與定容后的體積比為6g：2g：95-105ml。

再進一步的，所述查氏培養液中的含氮化合物為硝酸鈉或酵母膏。

進一步的，所述步驟(1)中，所述培養液的ph值為6.0-8.0；

所述庫爾勒香梨腐爛病菌接種后進行暗培養。

再進一步的，所述步驟(1)中，所述培養液的ph值為7.0；

所述振蕩培養為連續振蕩培養；

所述培養溫度為25℃。

再進一步的，所述步驟(1)中，振蕩的轉速為100-140r/min。

再進一步的，所述步驟(1)中，振蕩的轉速為120r/min。

進一步的，所述步驟(2)中，離心的轉速為4500-5500r/min。

再進一步的，所述步驟(2)中，離心的轉速為5000r/min。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：

本發明所述的庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，該制備方法簡單，并且在最適產毒條件下培養庫爾勒香梨腐爛病菌，可以快速有效的制備出庫爾勒香梨腐爛病菌毒素，促進對香梨腐爛病的研究，從而促進香梨腐爛病的病理性研究，還可以促進對香梨腐爛病的防治。

附圖說明

圖1為離體葉片針刺法培養5天后葉片的示意圖；

圖2為葉圓片浸漬法培養5天后濾紙的示意圖；

圖3為不同培養溫度下庫爾勒香梨腐爛病菌壞死斑直徑的折線圖；

圖4為不同ph值下庫爾勒香梨腐爛病菌壞死斑直徑的折線圖；

圖5為不同通氣量下庫爾勒香梨腐爛病菌壞死斑直徑的柱形圖。

具體實施方式

為了進一步闡述本發明庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，達到預期發明目的，以下結合較佳實施例，對依據本發明提出的庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，其具體實施方式、結構、特征及其功效，詳細說明如后。在下述說明中，不同的“一實施例”或“實施例”指的不一定是同一實施例。此外，一或多個實施例中的特定特征、結構或特點可由任何合適形式組合。

本發明實施例中未注明具體技術或條件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件書進行。

下面將結合具體的實施例，對本發明庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法做進一步的詳細介紹：

一實施例

實施例1.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為6.0的馬鈴薯葡萄糖培養液中，置于溫度為20℃，轉速為140r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養5天，得培養后的菌液；馬鈴薯葡萄糖培養液的制備：將200g去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸15分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入20g葡萄糖，并且加水定容至950ml，再滅菌，得馬鈴薯葡萄糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為4500r/min，時間為21min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

本發明實施例所述的庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，該制備方法簡單，并且在最適產毒條件下培養庫爾勒香梨腐爛病菌，可以快速有效的制備出庫爾勒香梨腐爛病菌毒素，促進對香梨腐爛病的研究，從而促進香梨腐爛病的病理性研究，還可以促進對香梨腐爛病的防治。

實施例2.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為8.0的馬鈴薯葡萄糖培養液中，置于溫度為30℃，轉速為100r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養3天，得培養后的菌液；馬鈴薯葡萄糖培養液的制備：將200g去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸30分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入20g葡萄糖，并且加水定容至1050ml，再滅菌，得馬鈴薯葡萄糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5500r/min，時間為15min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例3.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為7.0的馬鈴薯葡萄糖培養液中，置于溫度為25℃，轉速為120r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養4天，得培養后的菌液；馬鈴薯葡萄糖培養液的制備：將200g去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸25分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入20g葡萄糖，并且加水定容至1000ml，再滅菌，得馬鈴薯葡萄糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5000r/min，時間為18min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例4.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為6.0的馬鈴薯蔗糖培養液中，置于溫度為23℃，轉速為110r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養3天，得培養后的菌液；馬鈴薯蔗糖培養液的制備：將200g去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸20分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入20g蔗糖，并且加水定容至950ml，再滅菌，得馬鈴薯蔗糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為4800r/min，時間為19min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例5.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為7.0的馬鈴薯蔗糖培養液中，置于溫度為28℃，轉速為130r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養6天，得培養后的菌液；馬鈴薯蔗糖培養液的制備：將200g去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸22分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入20g蔗糖，并且加水定容至1000ml，再滅菌，得馬鈴薯蔗糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5100r/min，時間為18min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例6.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為8.0的馬鈴薯蔗糖培養液中，置于溫度為26℃，轉速為125r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養4天，得培養后的菌液；馬鈴薯蔗糖培養液的制備：將200g去皮馬鈴薯切塊，加水煮沸28分鐘，過濾，得馬鈴薯濾液；向馬鈴薯濾液中加入20g蔗糖，并且加水定容至1050ml，再滅菌，得馬鈴薯蔗糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5000r/min，時間為20min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例7.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為7.0的查氏培養液中，置于溫度為25℃，轉速為120r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養4天，得培養后的菌液；查氏培養液中含有硝酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g和水950g。

實施例8.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為7.0的查氏培養液中，置于溫度為23℃，轉速為130r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養5天，得培養后的菌液；查氏培養液中含有酵母膏2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g和水1050g。

實施例9.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為7.2的查氏培養液中，置于溫度為30℃，轉速為110r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養3天，得培養后的菌液；查氏培養液中含有硝酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g和水1000g。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5200r/min，時間為17min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

本發明實施例所述的庫爾勒香梨腐爛病菌毒素的制備方法，該制備方法簡單，并且在最適產毒條件下培養庫爾勒香梨腐爛病菌，可以快速有效的制備出庫爾勒香梨腐爛病菌毒素，促進對腐爛病菌毒素的研究，從而促進香梨腐爛病的病理性研究，還可以促進對香梨腐爛病的防治。

實施例10.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為6.8的香梨葉片煎汁蔗糖培養液中，置于溫度為29℃，轉速為115r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養3天，得培養后的菌液；香梨葉片煎汁蔗糖培養液的制備：將60g的香梨葉片加水煮沸15分鐘，過濾，得香梨葉片濾液；向香梨葉片濾液中加入20g蔗糖，并且加水定容至950ml，再滅菌，得香梨葉片煎汁蔗糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為4700r/min，時間為20min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例11.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為7.5的香梨葉片煎汁蔗糖培養液中，置于溫度為26℃，轉速為120r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養5天，得培養后的菌液；香梨葉片煎汁蔗糖培養液：將60g的香梨葉片加水煮沸30分鐘，過濾，得香梨葉片濾液；向香梨葉片濾液中加入20g蔗糖，并且加水定容至1050ml，再滅菌，得香梨葉片煎汁蔗糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5200r/min，時間為16min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

實施例12.

(1)將活化后的庫爾勒香梨腐爛病菌接種到ph值為6.5的香梨葉片煎汁蔗糖培養液中，置于溫度為25℃，轉速為120r/min的搖床中，在全黑暗條件下連續振蕩培養4天，得培養后的菌液；香梨葉片煎汁蔗糖培養液：將60g的香梨葉片加水煮沸25分鐘，過濾，得香梨葉片濾液；向香梨葉片濾液中加入20g蔗糖，并且加水定容至1000ml，再滅菌，得香梨葉片煎汁蔗糖培養液。

(2)將培養后的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，得濾液；濾液用離心機離心，轉速為5000r/min，時間為19min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液，收集上清液；將上清液萃取，濃縮，得到香梨腐爛病菌毒素。

二實驗測試

1材料與方法

1.1供試菌株

在阿拉爾3個不同梨園中采集帶有香梨腐爛病菌的樹皮，經柯赫氏法則驗證后獲得純培養備用。對所選菌株進行編號，分別為菌種xl-1、菌種xl-2和菌種xl-3，供試菌株形態特征如表1所示。

表1供試菌株形態特征

1.2病菌粗毒素濾液的提取與制備

(1)腐爛病菌的活化：將腐爛病菌接到pda培養基上，25℃下培養5天。

(2)病菌粗毒素濾液的提取與制備：用直徑6mm的圓形打孔器在長勢均勻的菌落邊緣打取菌餅，接種到盛有150ml培養液的三角瓶中，每瓶接5個菌餅。置于溫度為25℃，轉速為120r/min的搖床中暗培養5天。將培養的菌液先用雙層紗布濾去菌絲，再用含有雙層濾紙的漏斗過濾，濾液于離心機5000r/min，18min，上清液即為無菌絲的粗毒素濾液。

1.3生物活性測定

1.3.1離體葉片針刺法：取相同部位的成熟葉片，用清水洗凈，經70％的酒精中浸泡3秒,再用無菌水漂洗3次，用滅菌的濾紙吸干葉面水分；在葉面上針刺造成輕微傷口(避開葉脈)，每次吸取20ul粗毒素濾液于針刺部位，設3次重復，以滅菌純水對照。處理后葉片置于25℃培養箱中培養，5天后測量菌斑大小并記錄，如圖1所示。

1.3.2葉圓片浸漬法：分別吸取2ml不同條件的毒素溶液于培養皿中(含濾紙)。取香梨一定部位的葉片，用清水清洗凈然，經70％的酒精中浸泡3秒,再用無菌水漂洗3次，用滅菌的濾紙吸干葉面水分；用圓形打孔器(ф＝8cm)打取圓片，腹面向下平放在加有2ml粗毒素濾液的培養皿中的濾紙上，每皿6片。設3次重復，以滅菌純水對照。處理后葉片置于25℃培養箱中培養，連續觀察5天并記錄，如圖2所示。

2.1不同培養條件的試驗設計

2.1.1不同培養液產毒能力的測定

試驗選用5中培養液，分別為：

(1)馬鈴薯葡萄糖培養液(簡稱pd培養液)：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml。(即實施例3制備的培養液)

(2)馬鈴薯蔗糖培養液(簡稱ps培養液)：馬鈴薯200g，蔗糖20g，蒸餾水1000ml。(即實施例5制備的培養液)

(3)czapek培養液(又名查氏培養液)：nan032g,k2hp041g，kc10.5g，0.5g的mgso4·7h20，0.01g的feso4，蔗糖30g，蒸餾水1000g。(即實施例9制備的培養液)

(4)香梨葉片煎汁蔗糖培養液：香梨葉片60g,蔗糖20g，蒸餾水1000ml。(即實施例12制備的培養液)

(5)香梨葉片煎汁馬鈴薯培養液：香梨葉片60g，馬鈴薯200g，蒸餾水1000ml。

將三種香梨腐爛病菌菌餅分別接入上述5種培養液，各培養液ph值為7。在25℃、光照、轉速為120r/min的振蕩條件下培養5天。所有處理均按照1.3的方法提取含毒濾液，1.4的方法進行生物活性測定。測定菌斑直徑，觀察褪綠斑面積大小。

2.1.2不同培養時間對產毒能力的影響

將菌餅接入pd培養液中，在25℃、光照、轉速為120r/min的振蕩條件下分別培養1、3、5、7、9天后，測定其產毒量。所有處理均按照1.3的方法提取含毒濾液，1.4的方法進行生物活性測定。測定菌斑直徑，觀察褪綠斑面積大小。

2.1.3不同培養溫度對產毒能力的影響

將菌餅接入pd培養液中，在光照、轉速為120r/min的振蕩條件下，分別在10、15、20、25、30℃條件下培養5天后，測定其產毒量。所有處理均按照1.3的方法提取含毒濾液，1.4的方法進行生物活性測定。測定菌斑直徑，觀察褪綠斑面積大小。

2.1.4不同ph值對產毒能力的影響

用稀釋后的hcl和naoh溶液調節pd培養液的ph值，分別將ph值調至1、2、3、4、5、6、7、8、9。將菌餅接入pd培養液中，在25℃、光照、轉速為120r/min的振蕩條件下培養5天后，測定其產毒量。所有處理均按照1.3的方法提取含毒濾液，1.4的方法進行生物活性測定。測定菌斑直徑，觀察褪綠斑面積大小。

2.1.5通氣量對產毒能力的影響

將菌餅接入pd培養液中，在25℃、光照條件下，分別靜置培養(不振蕩)、間歇振蕩培養(每天振蕩12h，轉速為120r/min)、連續振蕩培養(全天振蕩，轉速為120r/min)，培養5天后，測定其產毒量。所有處理均按照1.3的方法提取含毒濾液，1.4的方法進行生物活性測定。測定菌斑直徑，觀察褪綠斑面積大小。

2.1.6不同光照對產毒能力的影響

將菌餅接入pd培養液中，在25℃、轉速為120r/min的振蕩條件下，分別置于全光照、晝夜自然交替、全黑暗條件下培養5天后，測定其產毒量。所有處理均按照1.3的方法提取含毒濾液，1.4的方法進行生物活性測定。測定菌斑直徑，觀察褪綠斑面積大小。

2.3數據處理

試驗數據采用dps和excel軟件進行分析。

3結果與分析

3.1不同培養液對產毒的影響

由表2可知，供試五種培養液均能使庫爾勒香梨腐爛病菌產毒。菌株xl-1在pd培養液中產毒能力最強,壞死斑直徑2.9mm。xl-2在czapek培養液中產毒能力最強，壞死斑直徑2.8mm.菌株xl-3在ps培養液中產毒能力最強，壞死斑直徑3.9mm。菌株xl-1和xl-2在五種培養液中無顯著差異。菌株xl-3只有葉片煎汁馬鈴薯培養液與其他四種培養液差異顯著，壞死斑直徑1.4mm。菌株xl-1和xl-2在葉片煎汁馬鈴薯培養液中形成壞死斑直徑也較小。說明葉片煎汁馬鈴薯培養液與其它培養液相比不利于香梨腐爛病菌產毒。pd培養液、ps培養液、czapek培養液和葉片煎汁蔗糖培養液均能作為香梨腐爛病菌產毒培養液。

表2不同培養液對庫爾勒香梨腐爛病產毒的影響