一種高效的maldi板上的糖基化抑制劑篩選方法
【專利摘要】本發明是一種MALDI板上反應的糖基化抑制劑的高效篩選方法。它是選取任意多肽與還原糖以一定比例的混合體系為作用底物，加入不同的待測物后直接點樣在MALDI板上，干熱條件下，烘箱60℃，反應4h，然后加入基質（α-Cyano-4-hydroxycinnamicacid）直接采用MALDI-TOF-MS進行分析評價。通過計算DSP，評價指標可為DSP，抑制率以及IC50。從而確定待測物的糖基化抑制性。采用本發明可以定性、定量的對待測物的抑制特性及抑制程度進行測定。此方法具有快速、高效、靈敏、分辨率高以及樣品量需求小的優點。
【專利說明】—種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法。尤其是應用在功能性食品、生物醫藥行業等。
【背景技術】
[0002]美拉德反應在食品領域里起著非常重要的作用。然而，它能夠改善食品色、香、味及功能性質，但是也會帶來一些不利影響，如降低食品的消化性和營養性；也會產生具有危害作用的物質(丙烯酰胺、AGEs等)導致衰老、糖尿病、癌癥等。因此，對美拉德反應的抑制劑的研究越來越引起重視。尤其是對新型的天然的具有美拉德反應抑制效果的物質的篩選更為關注。因而，急需一種高效、快速、簡單、可信的美拉德反應抑制劑的篩選方法。目前，現有的有效的糖基化抑制劑篩選方法主要有免疫分析法(ELISA)和熒光光譜分析法等。但是這些方法低效、耗時、耗能、費用高。

【發明內容】

[0003]為了克服現有的分析方法的耗時、耗能等不足，本發明提供一種新型的篩選糖基化抑制劑的分析方法，該方法能夠給快速的篩選出是否具有糖基化抑制效果，而且能夠定量的比較不同抑制劑的抑制性。
[0004]本發明解決其 技術問題所采用的技術方案是:采用MALDI板上反應，高效篩選鑒定糖基化抑制劑。本方法選取具有任意(具有較多游離氨基的更好)多肽與還原糖(葡萄糖、半乳糖等)的一定比例的Tris-HCl混合體系為作用底物，加入不同的抑制劑后直接在MALDI板上，干熱條件下，烘箱5(T65 °C，反應1~4 h，然后加入基質(a -Cyano-4-hydroxycinnamic acid 等)直接米用 MALD1-TOF-MS 進行檢測分析評價。通過計算DSP，評價指標可為DSP，抑制率以及IC5(I。從而確定待測物的糖基化抑制性。
[0005]每分子肽的平均取代度(DSP)按以下公式計算:
【權利要求】
1.一種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法，其特征是:采用任何肽與還原糖一定的比例混合的物質為反應底物，并以Tris-HCl緩沖液緩沖；將反應底物與一定濃度或一系列濃度的待測物混勻，點在MALDI板上，直接對MALDI板進行加熱，在MALDI板上進行Maillard反應，然后通過MALD1-TOF-MS進行檢測；采用MALD1-TOF質譜法，通過對肽的DSP計算，可以得到抑制率及IC5tl，篩選出具有糖基化抑制性的待測物。
2.根據權利要求1所述的一種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法，其特征是所述加熱方式為:空氣揮發干后，采用烘箱50-60 1:直接加熱MALDI板h，進行糖基化反應孵育過程。
3.根據權利要求1所述的一種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法，其特征是Tris-HCl緩沖液的pH為8.0。
4.根據權利要求1所述的一種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法，其特征是反應底物為多肽。
5.根據權利要求1、2或3所述的一種高效的MALDI板上的糖基化抑制劑篩選方法，其特征是采用D SP，抑制率以及IC5tl多指標評價、篩選待測物的糖基化抑制性。
【文檔編號】G01N27/62GK103983684SQ201410147152
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年4月14日 優先權日:2014年4月14日
【發明者】張秋婷, 涂宗財, 肖輝, 黃小琴, 王輝, 樊亮亮, 包中宇 申請人:南昌大學