專利名稱：一種苦參總黃酮提取物及其制備方法、質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物及其制備方法、質量檢測方法，具體涉及一種苦參總黃酮提取物及其制備方法、質量檢測方法。
背景技術：
中藥苦參為豆科植物苦參Sophora flvescens Ait.的干燥根。始載于漢代神農本草經，列為中品，在2000多年來的臨床實踐中發揮了諸多功效。具有清熱燥濕，殺蟲，利尿的功能。臨床用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風；外治滴蟲性陰道炎。文獻報道[1.鄭順亮.清絡方活性部位物質基礎研究[D]北京協和醫學院-中國醫學科學院碩士研究生學位論文.2009 ;2.趙平、張穎君、山本浩文等.苦參異戊稀基黃酮類化合物的化學、活性及其生物合成研究進展[J]天然產物研究與開發，2004，16 (2)；172-178]苦參主要有下列藥理活性:抗腫瘤作用、抗炎抑菌作用、抗病毒作用、免疫調節作用、抗肝損傷、抗過敏和平喘、降血糖、對酶的抑制作用、對中樞神經的抑制作用；此外苦參中的苦參堿和黃烷酮類化合物對胃粘膜損傷均有明顯的保護作用，其異戊烯基二氫黃酮類化合物具有抗雄性激素樣作用；苦參尚具有抗寄生蟲、體外殺精、利尿、利膽、止瀉等藥效作用。苦參中主要含有生物堿和黃酮體兩大類成分。生物堿為苦參的主要活性成分，至今已從中分離得到34種生物堿(包括喹諾里西啶類、金雀花堿型、臭豆堿型、鷹爪豆堿型、羽扇豆堿型和雙呱啶類)，其中含量較高、活性較強的為氧化苦參堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐定堿及槐果堿。苦參中另一大類成分為黃酮類化合物，至今已得到85個，具有八種結構類型，包括二氫黃酮類33個、二氫黃酮醇類22個、黃酮醇類(3-0H取代)4個、異黃酮類8個、二氫異黃酮類9個、查爾酮類6個、雙黃酮類2個以及其他類型的黃酮I個；其中的60個化合物均具有異戊烯基 側鏈。這些化合物中的異戊烯基側鏈包括A E五種類型以及兩種與苯環成吡喃環形式的共七種類型，側鏈均存在于A環上；大多數化合物則多以Iavandulyl的分枝異戍烯基側鏈及其輕基化形式存在于A環的C_8位上。這是苦參的這類黃酮化合物區別于同屬其他植物最明顯的化學結構特征。

發明內容
本發明目的在于公開一種苦參總黃酮提取物及其制備方法、質量檢測方法。本發明目的是通過如下技術方案實現的:所述苦參總黃酮提取物中黃酮類成分的含量以重量計為60 95%，其中黃酮類成分包括三葉豆紫檀苷、苦參酮、降苦參酮、苦參醇、苦參醇1、苦參醇A、苦參醇E等多種化合物。三葉豆紫檀苷、苦參酮和降苦參酮三種含量較高、活性較強的黃酮化合物占全部黃酮類成分含量以重量計為30 45%，其中三葉豆紫檀苷占總黃酮類成分含量以重量計為9 12%、苦參酮占總黃酮類成分含量以重量計為15 25%、降苦參酮占總黃酮類成分含量以重量計占6 8%。所述苦參總黃酮提取物是從野生或栽培的豆科槐屬植物苦參的干燥根中提取獲得。本發明的苦參總黃酮提取物經HPLC-MS-MS (負離子)分析表明，主要含有下列化合物:三葉豆紫檀苷、苦參醇、(2S)-8-異戊烯基-5-甲氧基-7，2’，4’ -三羥基-5-甲氧基二氫黃酮、苦參醇Q、苦參醇1、苦參醇N、5-甲氧基苦參醇C、苦參酮、苦參醇C、苦參醇X、降苦參酮、苦參醇L、苦參醇E、苦參啶、苦參醇A等。結構式如下:
權利要求
1.一種苦參總黃酮提取物，其特征在于該提取物中黃酮類成分的含量以重量計為60 95%，;三葉豆紫檀苷、苦參酮和降苦參酮占全部黃酮類成分含量以重量計為30 45% ；其中三葉豆紫檀苷占總黃酮類成分含量以重量計為9 12%、苦參酮占總黃酮類成分含量以重量計為15 25%、降苦參酮占總黃酮類成分含量以重量計占6 8%。
2.如權利要求1所述的苦參總黃酮提取物，其特征在于所述苦參總黃酮提取物是從野生或栽培的豆科槐屬植物苦參的干燥根中提取獲得。
3.如權利要求1所述的苦參總黃酮提取物，其特征在于該提取物主要含有下列化合物:三葉豆紫檀苷、苦參醇、2S-8-異戊烯基-5-甲氧基-7，2’，4’ -三羥基-5-甲氧基二氫黃酮、苦參醇Q、苦參醇1、苦參醇N、5-甲氧基苦參醇C、苦參酮、苦參醇C、苦參醇X、降苦參酮、苦參醇L、苦參醇E、苦參啶、苦參醇A。
4.如權利要求1、2或3所述的苦參總黃酮提取物的制備方法，其特征在于該方法為: 取苦參干燥根，粉碎成粗粉，以95%乙醇6 8倍回流提取三次，每次提取1-2小時，減壓回收溶劑得到乙醇濃縮物；乙醇濃縮物以聚酰胺分散后置聚酰胺層析柱上干法上樣，先以水充分洗脫，直至用糖類顯色試劑、生物堿的鑒別試劑檢測除盡單糖、寡糖、及無機鹽；再以濃度為5 8%的乙醇洗脫，以除盡生物堿，并和上述水洗脫濃縮物一并另器保存；提高洗脫液乙醇的濃度至10 20%，經減壓回收溶劑，以黃酮類化合物的鑒別試劑檢測濃縮的洗脫液，收集含黃酮體的濃縮液段A ;再提高洗脫液乙醇濃度至50 60%，得到濃縮液段B ;最后用95%乙醇或無水乙醇把黃酮類洗脫凈，得到濃縮液段C，將濃縮液段A、B、C合并，得到本發明苦參總黃酮提取物。
5.如權利要求4所述的苦參總黃酮提取物的制備方法，其特征在于所述糖類顯色試劑包括但不限于Fehling試劑、Molish試劑；所述黃酮類化合物的鑒別試劑包括但不限于三氯化鋁乙醇試劑、鹽酸-鎂粉試劑、濃氨水溶液；所述生物堿的鑒別試劑包括但不限于Dragendorff 試劑、Mayer 試劑。
6.如權利要求4所述的苦參總黃酮提取物的制備方法，其特征在于所述乙醇濃縮物提取方法為:以95%乙醇回流提取三次，第一次用8倍量提取2小時，第二、三次用6倍量提取1.5小時。
7.如權利要求1或3所述的三葉豆紫檀苷的提取純化方法，其特征在于該方法為: 苦參干燥根，粉碎成粗粉，以95%乙醇6 8倍回流提取三次，每次提取1-2小時，減壓回收溶劑得到乙醇濃縮物；乙醇濃縮物以聚酰胺分散后置聚酰胺層析柱上干法上樣，先以水充分洗脫，直至用糖類顯色試劑檢測除盡單糖、寡糖及無機鹽；再以濃度為5 8%的乙醇洗脫，以除盡生物堿，洗脫濃縮物和上述水洗脫濃縮物一并另器保存；提高洗脫液乙醇的濃度至10 20%，經減壓回收溶劑，以黃酮類化合物的鑒別試劑檢測濃縮的洗脫液，收集含有三葉豆紫檀苷粗品的析出物，得到的粗品經重結晶法得純品，純度大于98%。
8.如權利要求7所述的三葉豆紫檀苷的提取純化方法，其特征在于所述乙醇濃縮物提取方法為:以95%乙醇回流提取三次，第一次用8倍量提取2小時，第二、三次用6倍量提取1.5小時。
9.如權利要求1、2或3 所述的苦參總黃酮提取物的質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下含量測定方法中的一種或幾種:A.紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量 對照品溶液的制備:取純度> 98%的苦參酮適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含25ug的溶液，即得； 供試品溶液制備:取總黃酮提取物適量，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成每Iml含0.2 mg的溶液，搖勻，即得； 標準曲線的制備:精密吸取對照品溶液0.5ml、I ml、l.5 ml,2 ml,2.5 ml,3 ml,3.5 ml和4 ml分別置5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法，在288nm的波長處分別測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；回歸方程為:Y=41.601x + 0.0126，r=0.999 8 ； 測定法:精密吸取供試品溶液0.4,0.5,0.6 ml，分別置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；照標準曲線的制備項下的方法，自“以甲醇為空白”起，依法測定吸光度，代入回歸方程計算，即得； B.HPLC法測定三葉豆紫檀苷含量 色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以20 30: 80 70的乙腈-水流動相；檢測波長為310nm ;柱溫30°C ;流速lmL/min ;三葉豆紫檀苷峰與相鄰峰分離度不低于1.5，理論板數以三葉豆紫檀苷峰計算應不低于4000 ； 對照品溶液的制備:取經減壓干燥至恒重的三葉豆紫檀苷5mg，精密稱定，加甲醇制成每ImL含0.05mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取苦參總黃酮提取物10mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇超聲溶解，放置室溫，加甲醇至刻度，搖勻，制成每ImL含0.4mg的溶液，即得； 測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 15 ul，注入液相色譜儀，測定，即得； C.HPLC法測定苦參酮、降苦參酮含量 色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以的乙腈一 1%甲酸溶液為流動相；檢測波長:290nm，流速:0.8mL 1.Ο/min ;柱溫:30 35°C ;理論塔板數按苦參酮峰計算應不低于5000 ； 對照品溶液的制備:取苦參酮、降苦參酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含·0.1264mg的苦參酮和0.0286mg的降苦參酮溶液； 供試品溶液制備:取苦參總黃酮提取物10mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇超聲溶解，放置室溫，加甲醇至刻度，搖勻即得； 測定:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液5 15 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
10.如權利要求1、2或 3所述的苦參總黃酮提取物在制備具有鎮痛、抑制腫瘤、降血糖或增強免疫力的藥物中的應用。三葉豆紫檀苷在抑菌、抗炎、抑制腫瘤的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種苦參總黃酮提取物及其制備方法、質量檢測方法。所述苦參總黃酮提取物中黃酮類成分的含量以重量計為60～95%，三葉豆紫檀苷、苦參酮和降苦參酮三種含量較高、活性較強的黃酮化合物占全部黃酮類成分含量以重量計為30～45%，其中三葉豆紫檀苷占總黃酮類成分含量以重量計為9～12％、苦參酮占總黃酮類成分含量以重量計為15～25%、降苦參酮占總黃酮類成分含量以重量計占6～8%。以中藥苦參(Sophora flavescens Ait.)為原料，經溶劑提取、聚酰胺吸附柱層析法分離，分部洗脫，收集含黃酮部位的洗脫液經減壓回收溶劑得到苦參總黃酮提取物。
文檔編號G01N30/88GK103070912SQ201210469050
公開日2013年5月1日 申請日期2012年11月19日 優先權日2012年11月19日
發明者張思巨, 姚梅芬, 王金華, 白水朋, 李琳, 張志偉, 厲博文, 雷娜 申請人:北京振東光明藥物研究院有限公司