專利名稱：一種同時檢測奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法
技術領域：
本發明涉及了一種同時檢測奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，具體涉及一種高效液相色譜法測定奶粉中香蘭素、乙基香蘭素含量的檢測方法。
背景技術：
香蘭素(3-甲氧基-4-羥基苯甲醛)、乙基香蘭素(3-乙氧基-4-羥基苯甲醛)均為合成香精，兩者均為白色或微黃色結晶性粉末，微溶于水，溶于乙醇、甘油、乙醚、氯仿及香料中。香蘭素具有香莢蘭香氣及濃郁的奶香，乙基香蘭素香氣是香蘭素的3-4倍，廣泛用于食品、巧克力、冰淇淋、飲料以及日用化妝品中起增香和定香作用。據歐盟專家委員會2000年報道，大劑量可導致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難，甚至損傷肝、腎。
GB2760-2011《食品添加劑使用標準》中規定較大嬰兒和幼兒配方食品中可以使用香蘭素、乙基香蘭素和香莢蘭豆浸膏，最大使用量分別為5mg/100mL、5mg/100mL和按照生產需要適量使用，其中IOOmL以即食食品計，生產企業應按照沖調比例折算成配方食品中的使用量。我國禁止在0-6月的I階段嬰兒配方奶粉中添加。目前，香蘭素的檢測方法較多，主要包括高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法、液相色譜-質譜法、離子色譜法等，但提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的前處理方法不盡相同。李小運、史海良等采用50°C熱水溶解奶粉，超聲提取，經酸沉淀蛋白后，過濾，濾液分別采用高效液相色譜儀、液相色譜-串聯質譜儀分析。(李小運等，液相色譜-質譜聯用技術同時測定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素，農業機械，2012(9) =126-127 ；史海良等，HPLC法測定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素，糧油加工，2012 (12) : 175-176)歐菊芳等將奶粉樣品加水，振蕩混勻后，轉移至分液漏斗，加稀硫酸溶液、乙醇、乙醚萃取，合并乙醚層于另一分液漏斗。用稀NaOH溶液分兩次洗滌乙醚液，棄乙醚層，合并水層，用稀硫酸調PH至酸性。再用乙醚分兩次萃取，收集乙醚層，旋轉蒸干，無水乙醇復溶，氣相色譜儀測定。(歐菊芳等，氣相色譜法測定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素和乙基香蘭素，江西科學，2011，29 (I) 23-26)經實驗得知，乙基香蘭素在熱水中的溶解性不好，在甲醇、乙醇中的溶解度較高，為實現兩種香精的同時檢測，迫切需要尋找一種簡便快速、準確度高的前處理方法，以滿足奶粉中兩種物質檢測工作的需要。

發明內容
本發明要解決的技術問題在于尋找一種簡便、快速、有效的前處理方法，提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，從而提聞檢測效率。本發明所述的的技術問題可通過以下技術方案得以解決(I)準確稱取l-2g奶粉樣品于50mL離心管中，加入10_20mL無水乙醇，超聲提取20_30min ；
(2)提取液在8000-9000r/min條件下離心3-5min,取上清液過O. 22 μ m微孔濾
月吳，濾液待測；(3)濾液經高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，定量分析。采用如下的高效液相色譜條件儀器=Agilent 1200液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器；色譜柱碳十八燒基鍵合娃膠為填充劑的色譜柱4. 6 X 150mm, 5 μ m ;
流動相乙腈O. 02mo 1/L磷酸二氫鈉溶液=25 75，v/v ；流速0.8-1. 2mL/min ;進樣量10-50yL;柱溫25-40O;檢測波長278nm。本發明的有益效果在于，所建立的奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時檢測方法，具有前處理簡單、基質干擾小、準確度高等特點，能夠滿足日常檢測工作的需要。說明書附I香蘭素、乙基香蘭素標準品的HPLC圖譜
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細說明，但本發明并不局限于具體實施例。實施例I某品牌幼兒配方奶粉(3段)中香蘭素、乙基香蘭素含量的測定I、分析步驟稱取奶粉樣品l.OOg，精確到O. OOOlg，于50mL離心管中，加入IOmL無水乙醇，混勻后超聲提取20min，8000r/min冷凍離心5min，上清液過0. 22 μ m微孔濾膜，待HPLC測定。2、高效液相色譜條件流動相乙腈:0. 02mol/L磷酸二氫鈉溶液=25 : 75, v/v ;流速:1. OmL/min ;進樣量=IOyL ;柱溫30°C ;檢測波長278nm。3、標準工作曲線將1000 μ g/mL 的標準儲備液逐級稀釋得 I. 00，2. 00，5. 00，10. O, 25. O μ g/mL 的標準工作液。按照上述儀器條件測定，香蘭素標準曲線方程為Y = 28. 3Χ+6. 8，相關系數R2 =
O.9996 ;乙基香蘭素標準曲線方程為=Y = 15. 5Χ+4. 2，相關系數R2 = O. 9995。4、試樣測定及加標回收結果經3次平行實驗測定，該品牌幼兒奶粉中未檢出香蘭素和乙基香蘭素。采用該樣品進行加標實驗，加標回收率在77. 6-92. 4%之間，相對標準偏差在0. 6-4. 4%之間。實施例2某品牌幼兒配方奶粉(4段)中香蘭素、乙基香蘭素含量的測定該品牌幼兒配方奶粉(4段)食品標簽配料中有乙基香蘭素，采用同實施例I相同的方法，測定其香蘭素、乙基香蘭素的含量，實驗結果表明，該樣品中香蘭素未檢出，乙基香蘭素含量為129. 3mg/kg。上述實施例僅供說明本發明之用，而并非是對本發明專利的限制；應當指出的是，對于本領域的普通技術人員，在不脫離本發明構思范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，這些都屬于本發明的保護范圍 ；因此，凡跟本發明權利要求范圍所做的均等變化與修飾，均應屬于本發明權利要求的覆蓋范圍。
權利要求
1.一種同時檢測奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，其特征包括如下步驟 (1)樣品加入有機溶劑，提取樣品中的香蘭素、乙基香蘭素，同時沉淀樣品中蛋白質； (2)提取液經離心處理后，取上清液過微孔濾膜； (3)濾液經高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量，計算奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的含量。
2.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，所用的提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的有機溶劑為無水乙醇。
3.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，所述的提取方式為超聲提取。
全文摘要
本方法公開了一種同時檢測奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，包括以下步驟利用無水乙醇超聲提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，同時沉淀蛋白，提取液經離心過膜后，用碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。本方法具有前處理簡單、定性準確、定量快速等特點，適合于奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時檢測。
文檔編號G01N30/06GK102944616SQ201210388809
公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月15日 優先權日2012年10月15日
發明者宋薇 申請人:青島譜尼測試有限公司