專利名稱：一種測定抗性淀粉含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種測定抗性淀粉含量的方法，更具體涉及一種能夠準確測定食品、飼料原料中抗性淀粉含量的方法。
背景技術：
抗性淀粉(Resistant starch，簡稱RS)，這一概念由Englyst提出，也有的將其稱為抗消化淀粉，抗性淀粉有防治腸道疾病，降低血糖、血脂，降低體重以及促進礦物質吸收等作用。因此，開展對抗性淀粉的測定方法的研究有著重要的現實意義。
最早建立的抗性淀粉測定方法是Englyst法(1983)用胰α-淀粉酶將試樣水解，然后測定殘留的淀粉量。之后又出現了Berry法、Bjorck法、Tovar法、Champ法、EURESTA等不同的抗性淀粉測定方法，這些方法的靈敏度、穩定性和重現性都不高，而且測定步驟繁瑣。不滿足對抗性淀粉作進一步研究的需要。因此，選擇一種方便、快捷、靈敏度高定量測定方法就十分必要了。
雙酶水解法是一種靈敏度和重現性都非常好的檢測抗性淀粉含量的理想方法，其工作原理為先用胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)將非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性質，用淀粉葡萄糖苷酶(Amyloglucosidase，AMG)使其水解成葡萄糖，然后測定糖的含量，從而推算出抗性淀粉的含量。

發明內容
本發明的目的在于提供一種測定抗性淀粉含量的方法，該方法能夠較準確地定量測定食品和飼料原料中抗性淀粉的含量。
為了實現上述目的，本發明采用以下技術措施其特征為分兩步水解樣品中的淀粉(先將非抗性淀粉水解掉，然后再水解抗性淀粉)，這樣可以消除非抗性淀粉對抗性淀粉的測定所產生的影響，從而獲得更加準確的測定結果。
其步驟如下1.取樣準確稱取95-105mg食品或飼料原料樣品于離心試管中。(食品原料有土豆粉、小麥、玉米、綠豆、芋頭、米、蠶豆等，飼料原料有玉米、蕎麥、紅薯等)2.第一次酶解反應加胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反應液3.8-4.5ml，放入30-40℃的水浴恒溫振蕩器中水解，15-17小時后取出。加入3.8-4.2ml乙醇(95％)旋渦混勻，以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘，棄上清液，再加入7-13ml乙醇(95％)，旋渦混勻，仍然以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘，棄上清液。
胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反應液的配制為稱取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用適量0.1-0.3mol/L的馬來酸緩沖液(調PH為6.0-7.5)溶解，轉入于100ml容量瓶，加入0.9-1.3ml淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)工作液，振搖4-7分鐘，搖勻，用0.1-0.3mol/L的馬來酸緩沖液定容。溶液于12000rpm離心8-12分鐘，取出上清液，備用。
3.溶解抗性淀粉向離心管中加入1.8-2.5ml氫氧化鉀溶液(1.5-2.2mol/L)，冰浴振蕩16-21分鐘，再加7.8-9.0ml醋酸鈉緩沖溶液(1.1-1.5mol/L，pH＝3.5-4.0)，搖勻。
4.第二次酶解反應加入淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)，放入48-55℃水浴恒溫振蕩器中，26-31分鐘后取出。
5.測定離心后，吸取100μl上清液于生化分析儀中測定葡萄糖(GLU)，計算出抗性淀粉含量。
6.計算公式抗性淀粉含量＝G×(10.3/W)×0.9×100％其中G為水解樣中葡萄糖含量，W為樣品干物質重量(mg)，0.9為淀粉與葡萄糖的轉換系數，10.3為一經驗值。
應用實例根據上述方法，對不同食品(飼料)原料中抗性淀粉的含量進行了各20次測定。結果如下

測定結果的變異系數均小于2.00，說明本方法的穩定性和重復性都是令人滿意的。
本發明與現有技術相比，其靈敏度和重現性都比較高，而且方便、快捷。
具體實施例方式
一種測定抗性淀粉含量的方法，其具體步驟如下1.取樣準確稱取100mg食品或飼料原料樣品于離心試管中。(食品原料有土豆粉、小麥、玉米、綠豆、芋頭、米、蠶豆等，飼料原料有玉米、蕎麥、紅薯等)2.第一次酶解反應加胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反應液4.0ml，放入35℃或37℃或40℃的水浴恒溫振蕩器中水解，15或16或17小時后取出。加入4.0ml乙醇(95％)旋渦混勻，以2800或3000rpm的速度離心12分鐘，棄上清液，再加入8ml乙醇(95％)，旋渦混勻，仍然以2800或3000rpm的速度離心12分鐘，棄上清液。(胰α-淀粉酶反應液的配制為稱取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用0.1-0.3mol/L馬來酸緩沖液(調PH值為6.0-7.5)溶解，轉入于100ml容量瓶，加入1.0ml淀粉葡萄糖苷酶液(297-305U/ml)，振搖4-7分鐘，搖勻，用馬來酸緩沖液定容，溶液于12000rpm離心10分鐘，取出上清液，備用。)3.溶解抗性淀粉向離心管中加入2.0或2.4ml氫氧化鉀溶液(1.5-2.2mol/L)，冰浴振蕩20分鐘，再加8.0ml醋酸鈉緩沖溶液(1.2mol/L，pH＝3.8)，搖勻。
4.第二次酶解反應加入淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)，放入48或50或52或55℃水浴恒溫振蕩器中，30分鐘后取出。
5.測定離心后，吸取100μl上清液于生化分析儀中測定葡萄糖(GLU)，計算出抗性淀粉含量。
6.計算公式抗性淀粉含量＝G×(10.3/W)×0.9×100％。
權利要求
1.一種測定抗性淀粉含量的方法，其步驟如下①.取樣稱取95-105mg樣品于離心試管中；②.第一次酶解反應加胰α-淀粉酶反應液3.8-4.5ml，放入35-40℃的水浴恒溫振蕩器中水解，15-17小時后取出，加入3.8-4.2ml乙醇旋渦混勻，以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘，棄上清液，再加入7-13ml乙醇，旋渦混勻，仍然以2800-3100rpm的速度離心10-13分鐘，棄上清液；③.溶解抗性淀粉向離心管中加入1.8-2.5ml氫氧化鉀溶液，冰浴振蕩16-21分鐘，再加7.8-9ml醋酸鈉緩沖溶液，搖勻；④.第二次酶解反應加入淀粉葡萄糖苷酶液200-350U/ml，放入48-55℃水浴恒溫振蕩器中，26-31分鐘后取出；⑤.測定離心后，吸取100μl上清液于生化分析儀中測定葡萄糖，計算出抗性淀粉含量。
2.根據權利要求1所述的一種測定抗性淀粉含量的方法，其特征在于所述的胰α-淀粉酶反應液的配制為稱取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用0.1-0.3mol/L馬來酸緩沖液溶解，PH值為6.0-7.5，轉入于100ml容量瓶，加入0.9-1.3ml淀粉葡萄糖苷酶液297-305U/ml，振搖4-7分鐘，搖勻，用馬來酸緩沖液定容，溶液于12000rpm離心8-12分鐘，取出上清液，備用。
全文摘要
本發明公開了一種測定抗性淀粉含量的方法，其步驟是①取樣；②第一步酶解反應；③溶解抗性淀粉；④第二步酶解反應；⑤測定。本發明可以定量檢測出食品原料、飼料原料中抗性淀粉的含量；方便、快捷、靈敏度高、穩定性和重復性好，實用性強。
文檔編號G01N31/00GK1719221SQ200510018859
公開日2006年1月11日 申請日期2005年6月7日 優先權日2005年6月7日
發明者印遇龍, 張平, 黃瑞林, 李鐵軍, 李麗立, 侯振平 申請人:中國科學院亞熱帶農業生態研究所