專利名稱：滅活病毒的方法和裝置的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于滅活病毒的方法和裝置。
尤其是，本發明涉及一種通過使用失活病毒的過濾器滅活病毒的裝置，以及涉及一種用于在許多應用中使用所述過濾器的方法，所述應用包括過濾給血庫的捐獻血液和過濾感染HIV的婦女的乳汁以照顧嬰兒免受HIV傳染和在防毒面具中的應用。
更具體的是，根據本發明，其提供一種于滅活包括HIV的病毒的裝置，所述包括限定了一個流體通道的殼套結構(housing)，所述通道提供有具有其中摻入了選自Cu+和Cu++離子及其組合的離子銅的過濾材料。
下文即將描述的內容中，所使用術語“流體”是指液體和尤其是待過濾的體液和空氣。
本發明也提供一種滅活體液中的細胞內發現的病毒的方法，包括使所述體液流經用于病毒滅活的包含過濾材料的裝置，所述裝置具有選自Cu+和Cu++銅離子及其組合的離子銅摻入其中。
在WO 98/06508和WO 98/06509中，教導了一種具有直接電鍍且牢固結合其纖維的全部或部分金屬或金屬氧化物的織物的不同方面，其中所述金屬或金屬氧化物(包括銅)結合至所述纖維。
更具體的是，在WO 98/06509中提供了一種方法包括步驟(a)提供一種金屬化織物，該金屬化織物包括(i)一種織物，包括選自天然纖維、合成纖維素纖維、再生纖維、丙烯酸纖維、聚烯烴纖維、聚氨酯纖維、乙烯基纖維及其組合的纖維和(ii)包括選自金屬和金屬氧化物的材料的鍍層，所述金屬化織物的特征在于鍍層直接結合在纖維上；和(b)整合該金屬織物至加工產品中。
在本發明的內容中，“織物”包括纖維，無論是紡自這些纖維的天然(例如棉花、絲綢、羊毛和亞麻)或合成紗，和由這些紗制成的編織(woven)、結合(knit)和非編織織物。本發明的范圍包括所有的天然纖維；用于紡織品應用的所有合成纖維，包括但不限于合成纖維素纖維(例如，再生纖維素例如人造纖維和纖維素衍生纖維例如醋酸纖維)、再生蛋白質纖維、丙烯酸纖維、聚烯烴纖維、聚氨酯纖維、乙烯基纖維(但不包括尼龍和聚酯纖維)以及它們的混合。
所述發明包括塑料電解電鍍中使用的技術的適應的產品的應用，尤其是用金屬由塑料制成的印刷電路板。參見，例如，Encyclopedia ofPolymer Science and Engineering(Jacqueline I.Kroschwitz，editor)，Wiley and Sons，1987，vol.IX，pp580-598。由于被應用于織物，這個方法包括兩個步驟。第一步是通過沉淀織物的催化性貴金屬成核位點來激活織物。這是通過首先將織物浸在低氧化態還原劑陽離子溶液中，然后將織物浸在酸性貴金屬陽離子溶液中來進行的，優選Pd++陽離子溶液，最優選酸性PdCl2溶液。該低氧化態陽離子還原貴金屬陽離子至貴金屬本身，而自身被氧化至更高的氧化態。優選的是所述還原劑陽離子在起始低氧化態和最終高氧化態均為可溶，例如Sn++，其被氧化至Sn++++，或Ti+++，其被氧化至Ti++++。
第二步是在非常接近被活化的織物處還原一種金屬陽離子，其還原是由一種貴金屬催化的。該被用于還原陽離子的還原劑通常是分子類，例如，對于Cu++來說是甲醛。由于還原劑被氧化，金屬陽離子這里是稱為“氧化劑陽離子”。因此，所產生的金屬化織物的特征在于它們的金屬鍍層直接結合在纖維上。
WO 98/06508中描述了并要求保護一種含有下列物質的組合物(a)一種包括選自天然纖維、合成纖維素纖維、再生蛋白質纖維、丙烯酸纖維、聚烯烴纖維、聚氨酯纖維、乙烯基纖維及其組合的纖維的織物；和(b)包括選自金屬和金屬氧化物的物質的鍍層；所述物質的組合物的特征在于所述鍍層直接結合于所述纖維。
所述公開物也要求保護含有下列物質的組合物(a)一種包括選自天然纖維、合成纖維素纖維、再生蛋白質纖維、丙烯酸纖維、聚烯烴纖維、聚氨酯纖維、乙烯基纖維及其組合的纖維的織物；和(b)多個成核位置，所述成核位置的每一個包括至少一種貴金屬；所述物質組合物特征在于催化至少一種金屬陽離子還原至還原金屬，因此在所述纖維上鍍上所述還原的金屬。
此外，所述公開物教導并要求保護生產所述產品的方法。
一種優選的用于制備根據所述公開物的金屬化織物的方法包括步驟a)選擇選自紗線和紡織品的織物，所述織物包括選自天然纖維、合成纖維素纖維、形成再生蛋白質纖維、丙烯酸纖維、聚烯烴纖維、聚氨酯纖維、乙烯基纖維及其組合的纖維；b)將所述織物浸在含有至少一種具有至少二種正電性氧化態的還原劑陽離子的溶液中，所述至少一種陽離子處于所述至少二種正電性氧化態的低氧化態c)將所述織物浸在含有至少一種貴金屬陽離子的溶液中，因此產生活化的織物；和d)在一種與所述活化的織物接觸的介質中還原至少一種氧化劑陽離子，由此產生金屬化織物。
雖然根據所述公開物生產的金屬化織物是有效的殺螨劑，但發現它們對于防止和/或治療引起人體不同部位痛苦的細菌、真菌和酵母感染有效，因此在布制品中插入至少一塊(panel)金屬化織物材料能具有非常好的效果。
因此，美國專利6,124,221中描述并要求保護一種具有抗細菌、抗真菌和抗酵母菌性能的布制品，包括至少一塊金屬化織物，所述織物包括選自天然纖維、合成纖維素纖維、再生蛋白質纖維、丙烯酸纖維、聚烯烴纖維、聚氨酯纖維、乙烯基纖維及其組合的纖維并具有包括抗細菌、抗真菌和抗酵母菌有效量的至少一種銅氧化劑陽離子的鍍層。
該說明書中描述所述布制品有效抗Tinea Pedis、抗白色假絲酵母(Candida Albican)、抗Thrush和抗引起腳臭的選自brevubacterium，不動桿菌屬(acinetobacter)；微球菌屬(micrococcus)及其組合的細菌。
因此，所述發明尤其適于例如內衣和襪類制品的制備。
WO 01/81671中描述了含有包被銅的陽離子形式的纖維的織物對滅活細菌的抗菌素抵抗菌株也有效，所述銅陽離子形式優選包括Cu++離子。
在1991年7月Anders R.Karlstrom等人已經在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.88，pp.5552-5556中公開了銅抑止HIV1病毒中的蛋白酶的發現。
同樣，在1993年A.R Karlstrom等人在Arch.BiochemBiophys.304163-169中進一步公開與使用銅以滅活HIV1蛋白酶相關的發現。
此外，在1996年Jose-Luis Sagripanti等人在Aids Research andHuman Retroviruses，Vol.12，Number 4，1996中公開了二價銅離子和三價鐵離子滅活HIV的發現。
盡管所述公開物，其中第一個是在十年之前，迄今為止，非顯而易見且沒有人建議在至少兩種主要困擾全世界的HIV問題的解決方案中使用二價銅離子。
這些問題中的第一個問題是在第三世界國家尤其是在非洲國家，由于HIV經由母乳從感染母親傳染給她們的新生兒，全部人民都正面臨被HIV大屠殺。
由于這些國家的普遍貧困，新生兒無法獲得乳替代品和哺育嬰兒，感染母親乳汁被發現是HIV傳染給兒童的主要原因。如果乳替代品可獲得，仍然存在水中寄生蟲的問題，使得這些替代品難以生產。
同樣存在于西方世界的一個更尖銳的問題是被污染的血液中的HIV和其它病原病毒的通過輸血轉移的危險。
盡管血庫現在篩選捐獻血液中的HIV抗體，但眾所周知的是抗體的檢測僅在60-90天的潛伏期后有效果，因此篩選過程無法檢測出僅接觸HIV2或3個月內的個體的捐獻血液的危險一直存在。此外，存在于沒有系統能檢測出的輸血血液中的致病病毒存在。在寫這篇文章的時候，一個恰當的例子是西尼羅熱病毒(West Nile Fever virus)。眾所周知的是病毒攜帶者并不一定生病。該病毒被傳染到血液和器官受體中，這有時會導致病人死亡。
WO 01/74166中描述并要求保護釋放Cu++的顆粒用以制備一種具有能釋放包被著暴露于和突出于其表面的所述顆粒的一部分的Cu++的微顆粒的聚合材料的用途，所述聚合材料對抑止HIV-1增殖有效，然而，所述公開物限于教導使用所述顆粒以制備保險套和手套，其作者當時沒有意識到且該公開物沒有教導或暗示本發明概念的提供一種用于滅活HIV的含有一種過濾材料的裝置和方法，所述裝置具有選自由Cu+和Cu++離子及其組合物的銅離子。
因此，上述公開物中沒有一個教導或暗示本發明的主題。
應將意識到的是本發明的裝置和方法并不局限于上述優選用途，該裝置也能被使用于無法從血庫獲取血液而需直接采血的醫院或野戰醫院的裝置中。
此外，本發明的裝置可以如下方式被有效地使用，其中血液從感染HIV病毒的人身上抽出以與滲透機使用類似的方式流經裝置，然后返回病人體內。
在本發明進一步的實施方案中，本發明的裝置也能被用于滅活體液中發現的其它病毒，包括滅活現在被發現存在于未呈現其癥狀的所述疾病的攜帶者血液中的西尼羅熱病毒，所述攜帶者其血液卻能夠通過所述病毒傳輸感染血庫。
因此現在發現本發明的裝置具有普遍的抗病毒性能如下文即將證實的其滅活HIV病毒，一種雙鏈DNA病毒腺病毒和滅活西尼羅熱病毒的能力。
腺病毒感染出現于世界各地的人類和多種動物身上。腺病毒通常能夠在呼吸道、眼和胃腸道的多種位點感染和復制。有幾種疾病能夠由腺病毒引起，例如急性發熱咽炎，急性呼吸道疾病，肺炎，流行性角膜結膜炎，百日咳樣綜合征，胃腸炎(gasroenteritis)，肝炎和心肌炎。
在本發明的裝置和方法中，銅陽離子一定要暴露于所過濾的液體基質中以允許原子分散到該基質中。為實現這點，暴露可以以許多方式完成a)粉末或纖維形式的銅能夠被置于由兩層過濾層構成的封套中并被密封以阻止擴散到基質中；b)粉末或纖維形式的銅能夠被加入到一個膜上而仍然處于漿狀；c)可將鍍銅纖維寬松地置于過濾器的兩層之間；d)膜基質能被鍍上陽離子銅；或e)可以使用多孔纖維作為過濾器的基質，銅以漿狀的粉塵被加入并被包裹在所述多孔聚合物中。
將意識到的是腺病毒包括那些擔心被使用于“細菌戰”的病毒中的病毒。
因此，本發明進一步的實施方案中提供了一種用于滅活空氣傳播流行性病毒的裝置，所述裝置具有選自Cu+和Cu++離子及其組合的銅離子摻入其中，其中所述銅離子連結至結合在所述裝置中的一層中的纖維上，所述裝置是防毒面具。
抵抗化學戰和細菌戰的防毒面具的制造本身是公知的，不必描述。
為了能在防毒面具中結合一種本發明的過濾器，應當選取具有選自Cu+和Cu++離子的銅離子的纖維并將它們包含于一種基質中。在一種編織物基質中，所述纖維與其它纖維混合并被編織或結合到一種基質中。在一種非編織結構中，纖維被混合以形成薄層。在兩個種情形中，許多層以一層在另一層的上方的形式被放置以形成被加入到防毒面具的呼吸過濾器中的墊。由于該墊具有良好滲透性，呼吸不會受阻礙。戴面具的人的呼吸的濕度足以激活離子釋放以及發揮病毒的滅活作用。
包被在纖維上的銅的量必須根據面具中的墊的厚度改變。基本上，應該有足夠的纖維以覆蓋能夠被制成任意層的墊的100％區域。
下面將要描述的實驗中的實施方案中，含有并適于釋放銅離子的材料是按以下方法制備的本發明的裝置中所使用的銅離子是以與前面引用的以前的說明書中所描述的方式類似的方式并具有下面描述的略加改動制備的，其通過在一種基質上或單獨在一種液體中進行的氧化還原反應獲得。其生產方法是塑料，尤其是由應用金屬的塑料印刷電路板的非電鍍中所使用的技術的改良。參見，例如，Encyclopedia of Polymer Science andEngineering(Jacqueline I.Kroschwitz，editor)，Wiley和Sons，1987，vol.IX，pp580-598。由于被應用于纖維或織物或膜上，該過程包括兩步。第一步是通過沉淀基質表面的催化性貴金屬成核位點實現基質的活化。這是通過首先將所述基質浸在一種低氧化態的還原劑陽離子的溶液中，然后將所述基質浸在一種貴金屬陽離子的溶液中，優選是一種Pd++陽離子溶液，最優選是一種酸性PdCl2溶液。該低氧化態還原劑陽離子還原貴金屬陽離子至貴金屬本身，而自身被氧化至更高的氧化態。優選的是，該還原劑陽離子在原始低氧化態和最終高氧化態均為可溶，例如Sn++，其被氧化至Sn++++，或Ti+++，其被氧化至Ti++++。
第二步是在非常接近活化基質處還原一種金屬陽離子，其還原是由一種貴金屬催化的。該被用于還原陽離子的還原劑通常是分子類，例如，對于Cu++來說是甲醛。由于還原劑被氧化，金屬陽離子這里是稱為“氧化劑陽離子”。因此，所產生的金屬化基質的特征在于它們的金屬鍍層直接結合在基質上。
基于上述方法，對于熟知本領域技術的人員來說也可以通過其顏色識別氧化態。當基質被允許飄浮于一種上述用于還原的銅溶液時，基質的兩面呈現出不同的顏色。基質的上面是銅元素-Cu的特征色亮銅(紅/黃)色。織物的下面是黑色，這是CuO的特征色。任何位于頂層基質下的基質在其上面一側也顯示黑色調。
在所述方法中所述方法發生變化以使得纖維素纖維或基質鍍層具有不同于銅元素或氧化銅(CuO-黑色)的銅陽離子。
這種無電鍍(electro-less)過程包括將銅溶液例如硫酸銅或硝酸銅中的陽離子形式的銅還原到纖維或基質的處理過的表面上。待電鍍的纖維或基質必須先浸在含有至少一種具有至少二種正電性氧化態的還原劑陽離子的溶液中，然后浸在處于所述至少兩種正電性氧化態中的較低態的至少一種陽離子的溶液中。該纖維或基質然后被浸在一種含有至少一種貴金屬陽離子的溶液中，從而產生活化的表面。
該纖維然后被暴露于與活化表面接觸的介質中的至少一種氧化劑陽離子。一種還原劑然后被加入，銅從溶液中還原到纖維的表面上。要是沒有下面的改變，使用這種方式所產生的纖維或基質證明銅元素包被在位于纖維或基質部分頂部和下面的黑色纖維以及整個纖維或基質部分的纖維上。
如上所述，為了獲得對滅活HIV有效的表面，必須獲得一種陽離子銅。這種有效的銅化合物必須含有Cu(I)或Cu(II)的其中一種或二者。為確保在纖維素上獲得這些物質，必須施加Pd++以使得所有的纖維在同一時間具有相等的飽和度。如果一個大塊纖維被滴加到Pd++溶液中，先碰到溶液的纖維會比該材料的其它部分吸收更多Pd++溶液，這會擾亂陽離子銅的沉積。此外，纖維必須在含有Sn++的第一步和含有Pd++的第二步之間被水清洗。遺留在纖維之間的殘留的Sn++溶液會導致Pd++直接還原到纖維之間的溶液中，并會使得位于纖維上Pd++的隨機還原，這會再次影響銅沉淀。雖然這兩點可能看起來微不足道，但它們直接影響鍍層。
此外，在銅溶液在該過程的應用系統中，變化是必需的。還原對于纖維的還原過程的副作用是產生氫氣。氫氣以氣泡的形式出現在纖維表面上。銅溶液與纖維表面的Pd++相互作用的結果產生氫氣。如果氫氣在它們形成后不立即從纖維表面上被移走，暴露于空氣的纖維將被包被上銅元素。在銅元素層正下方的纖維將會是黑色的氧化銅。然而，如果氫氣在形成氣泡后立即被移走，整個纖維部分就會獲得所需陽離子。所需顏色是暗褐色，其與銅金屬色或黑色氧化銅都不同。該陽離子的進一步表征是纖維不會導電。
該過程產生作為氧化銅分子一部分的Cu(I)和Cu(II)。分析表明表面形成的在Cu2O中是70％Cu(I)，30％Cu(II)。這些化合物經證明對滅活HIV具有高效性。這種抗病毒活性利用陽離子與水的氧化還原反應并使得在其與水接觸時Cu(I)和Cu(II)之間的轉換成為可能。Cu(I)在抗HIV方面比Cu(II)更有效，而Cu(II)比Cu(I)更穩定。Cu(II)化合物氧化比Cu(I)化合物慢得多，并增加產品的貨架期。
雖然本發明將連同在下面實施例中的某些實施方案和


被描述，使得其各方面可以被更全面地理解，但這并不是要把本發明限制到這些具體的實施方案中。相反，本發明意欲涵蓋所有如所附的權利要求所定義的可能包含在本發明范圍內的的所有替換、修飾和等價物。因此，下列包括優選實施方案的實施例是為了證明本發明的實施，應當理解通過實施例所列詳細說明是為了說明性討論本發明優選實施方案，并且為了提供被認為是處理過程以及本發明的原則和概念的最有用和最易理解的描述。
在附圖中圖1是根據本發明的裝置的示意圖；圖2表示利用Cu++滅活血清和培養基中的HIV-1；圖3表示利用Cu++滅活HIV-1的劑量反應；圖4表示用不同濃度Cu++處理HIV-1細胞相關傳染和培養基的細胞毒性滅活；圖5表示西尼羅熱病毒滅活；圖6表示腺病毒的中和的曲線圖；及圖7表示腺病毒中和的的臺形圖。
關于圖1，是根據本發明的裝置2的圖示，其具有用于接收可能是血液或母乳的未過濾液體介質6的容器4，4引導至一個位于其出口10的過濾器單元8，所述單元在所述單元8的入口處有第一多孔介質12，其下是含有并適于釋放選自Cu+和Cu++離子及其組合的銅離子的材料14，其中所述銅離子以上述方式在制備后被引入到所述材料中。
所述材料層14任選接著另一層是用以從流經流體中濾除白細胞的可達0.6微米的過濾層16。
接著層14或可選的層16是用于移除流經該過濾層的流體的銅離子的活化碳層18，接著這層是用于移除殘留碳顆粒的另一過濾層20，過濾層20優選阻止大于0.4微米的顆粒通過。
雖未表示在圖中，該裝置可以進一步配有泵裝置以助于液體在過濾裝置2中的轉移。
應當認識的是，上述涉及的圖1僅僅是對于在血庫中使用和類似用途的一種可能的裝置的示意圖，用于感染的哺乳母親的裝置可能是一種被設計用來從母親乳房吸取乳汁然后將其泵過如本發明所述裝置的吸乳器(breast pump)。
本發明的中和無細胞HIV-1感染能力的效率現在將通過圖2，3和4說明，圖2，3和4是下列實驗的圖示，所述實驗由Ruth Ben-Ari Instituteof Clinical Immunology和AIDS Center at Kaplan Medical Center，Rechovot，Israel的高級科學家Dr.Gadi Borkow獨立進行。
實施例1人血漿或含有106×TCID50(導致50％感染的Tissue Culture InDose)的下列來自分支A，B或C的合胞體誘導型(T細胞噬性)野生型實驗室或原代臨床HIV-1的分離物，或核苷、非核苷或蛋白酶抗性分支B HIV-1的分離物，或非合胞體誘導型(巨噬細胞噬性)分支B的HIV-1分離物中任一個的RPMI 1640培養液(GibcoBRL，Life Technologies，Paisley，UK)被加入到含有不同濃度的銅粉末的Shafts中(表示為每體積培養基中的銅重量的百分比)。培養五分鐘后，所述培養液被流經0.2μm注射器過濾器(Sartorius，Gottingen，Germany)，并穿過另一個含有100mg碳(活性碳)的Shaft。然后所得濾液的等份(10，20和50μl)被加入到105靶細胞中，cMAGI(一種細胞以單細胞層形式附著生長于孔底部的T-細胞系)或MT-2細胞(以懸浮形式生長的T-細胞系)，其在5％CO2潮濕培養箱中37℃被培養3天。作為對照，所述病毒在同樣條件下流經沒有銅的過濾器。
通過測量HIV-1p24抗原水平(p24抗原捕獲試劑盒，SAICFrederick，Frederick，MD，USA，根據生產商的說明)，和/或通過對HIV-1感染cMAGI指示細胞(穩定轉染了含有融合β-半乳糖苷酶基因的HIV-1 LTR的質粒的細胞當感染HIV-1時被染藍)計數確定病毒的感染性。MT2細胞的HIV-1感染的致細胞病變效應也通過合胞體形成的顯微鏡鑒定進行分析。后者的數據通過兩個獨立的觀察者對兩份樣品的分析獲得。
如圖2中兩個代表性例子所示，在被50％銅過濾器過濾之后，血清或培養液中的HIV-1IIIB或HIV-1 SF162的感染性被消除了，如通過藍色的cMAGI細胞數所確定(即感染了HIV-1的細胞被染成藍色)，與導致高感染性的同樣量的流經相同的沒有銅的過濾器(0％)的病毒相反。
所有其它上述HIV-1分離物獲得了相似的結果，其顯示銅過濾器消除廣泛的(包括原代臨床分離物和抗現在臨床所使用的抗病毒劑的分離物)HIV-1分離物的感染性的能力。此外，甚至當病毒暴露于僅10％(重量/體積)的銅過濾器5分鐘時，HIV-1的感染性被消除。
如圖3所示，如果病毒暴露于銅很長一段時間，那么只需非常少量的銅。該試驗依以下步驟進行1ml RPMI培養液或含有0.1％，0.2％、0.5％或1％(重量/體積)銅的RPMI培養液被加入到cMAGI細胞中。然后立刻在每個孔中加入106TC1D50HIV-1IIIB。在潮濕培養箱中37℃被培養2小時后，混合物和病毒被徹底地移出，新鮮的含有10％胎牛血清和抗生素的RPMI培養液被加入到孔中。所述細胞在潮濕培養箱中37℃被培養3天，然后確定被HIV-1感染的細胞的數量(藍色細胞)。
實施例2本發明中和細胞相關HIV-1感染性的效率將根據圖4被證明。
圖4中所示的測試使用H9+細胞系。該細胞系之所以被選用是由于其細胞長期被HIV-1IIIB感染并持續產生和分泌HIV-1病毒體到所在RPMI培養液中。
100,000 H9+經清洗細胞被重懸于培養液中，這之前其被暴露于不同濃度的銅粉末中。在潮濕的培養箱中37℃培養3小時，細胞通過離心沉淀。含有在暴露于銅期間芽生的HIV病毒體的上清液的10μl等份被加入到未感染靶cMAGI細胞中。培養3天后，確定被感染的靶cMAGI數量，其結果被表示為上每種清液的感染性與沒有暴露于銅的H9+細胞的上清液的感染性相比的百分比(圖4三角形點)。
此外，沉淀的H9+細胞被重懸于新鮮的培養液中，這些預先處理的H9+細胞與附著的cMAGI細胞一起共培養(每孔10,000個H9+細胞)，這使得細胞相關HIV-1傳染得以發生。在培養2小時后，懸浮的H9+細胞從cMAGI單細胞層上移出并被丟棄。cMAGI靶細胞被培養3天，然后確定被HIV-1感染的細胞數(圖4，方形點)。這部分實驗分析了長期感染H9+細胞暴露于銅對子代病毒的效果(隨后新芽生的病毒體)。
相似的，暴露于不同濃度銅的H9+細胞的活力(表示為對照未處理細胞的面分比)也顯示于圖4(原點)。所述細胞的活力通過使用細胞繁殖試劑盒(CellTiter 96 AqueousOne solution Cell ProliferationAssay，Promega，Wisconsin，USA)的基于四唑的比色測定(MTT測定)和臺盼藍排斥法測定確定。
實施例3-西尼羅熱制備上文中所述的根據本發明的的六種過濾器。
1.105.83TC1D50/50μl西尼羅熱病毒(WNV)野生株經6個過濾器被過濾。
2.經過濾病毒被稀釋10倍(10-1-10-6)并且50μl的等份被加入到Vero單層細胞中。每一試樣被加入到六個不同的孔中。
3.在37℃下培養6-7天后，每一過濾液的致細胞病變(細胞死亡)效應被確定。
4.作為陽性對照，未過濾病毒在平行稀釋液中被滴定。
所得結果在附圖5中被描述。基本上，經過濾病毒的致細胞病變效應的抑止至少有4個數量級。
實施例4一種稱為Ad-HIVluc的逆轉錄病毒(這種重組的腺病毒含有HIV-1依賴的螢光素酶基因，因此作為HIV-1感染的報告載體；Axeirod andHonigman，AIDS Research and Human Retroviruses，1999，15759-767)在兩個獨立的實驗中測試其經過本發明的過濾器后的致細胞病變效應。使用了沒有經過所述過濾器的同樣的病毒作為對照。
兩個實驗的結果如下
實施例4a腺病毒原種在細胞培養液中被稀釋10倍并通過根據本發明的過濾器。
10，20，50和100μl過濾液被加入到293細胞中(人腎細胞)，每天通過顯微鏡檢驗細胞。在培養5天后，兩個獨立的觀察者判斷致細胞病變效應。下面的表格表示測定的％致細胞病變性。
實施例4b在細胞培養液中的病毒儲液通過根據本發明的過濾器，并被加入到預先被HIV-1感染的cMAGI細胞(腺病毒的最終稀釋度為1∶10)中。過夜培養后，細胞被溶解，HIV-1螢光素酶活性的量被測量。被流經所述過濾器的腺病毒超感染的HIV-1細胞釋放的光的量是75±34相對光單位，而被對照未過濾腺病毒超感染的HIV-1感染細胞釋放的光的量是4085±758相對光單位，抑制了約98％腺病毒的復制。
這些實驗的結果以圖表形式表示在附圖6和7中。
對本領域技術人員來說，顯而易見的是本發明并不限于前述說明性的實施例和附圖的細節中，并且本發明可以其它特異方式體現而不背離其主旨，并希望本實施方案和實施例應被認為是說明性的但不是局限性的對權利要求的說明；除了前述描述，具有與權利要求相當的含義和范圍的變化也包含在內。
權利要求
1.一種滅活病毒的裝置，該裝置含有限定流體通道的殼套結構，所述通道提供有具有選自Cu+和Cu++離子及其組合的銅離子摻入其中的過濾材料。
2.一種根據權利要求1的裝置，其包含一種多層過濾器，該過濾器在其入口處具有第一多孔基質，接著是含有用于滅活與之接觸的流體中所含HIV的所述銅離子的材料，接著是用于除去銅離子的活性碳層，接著是用于除去殘留碳顆粒的過濾器。
3.一種根據權利要求2的裝置，進一步包括泵裝置。
4.一種根據權利要求2的裝置，其包括用于除去流經的流體中的白細胞的不超過0.6微米的過濾器。
5.一種根據權利要求2的裝置，其中所述用于除去所述碳顆粒的過濾器阻止大于0.4微米的顆粒通過。
6.一種根據權利要求1的裝置，其中所述裝置是一種防毒面具。
7.一種根據權利要求6的裝置，其中所述病毒是一種空氣傳播的病毒，并且所述選自Cu+和Cu++離子及其組合的銅離子連接在摻入非編織織物的纖維上。
8.一種用于滅活體液中細胞內病毒的方法，包括使所述體液流經一種含有用于滅活所述病毒的過濾材料的裝置，所述裝置具有選自Cu+和Cu++及其組合的銅離子摻入其中。
9.一種根據權利要求8的方法，其中所述病毒是HIV。
10.一種根據權利要求8的方法，其中所述體液是血液。
11.一種根據權利要求8的方法，其中所述體液是乳汁。
12.一種根據權利要求8的方法，其中所述體液是血液，該血液然后返回從中抽取該血液的身體內。
全文摘要
本發明提供一種用于滅活病毒的裝置(2)，所述裝置包括限定流體通道的殼套結構(4)，所述通道提供有含有選自Cu
文檔編號B01DGK1649629SQ03810109
公開日2005年8月3日 申請日期2003年3月17日 優先權日2002年4月18日
發明者J·伽拜 申請人:卡普羅恩公司