一種膽烷酸的合成方法
【專利摘要】本發明涉及以3α?羥基?7?氧代?5β?膽烷酸為起始原料，以N，N?二甲基甲酰胺作溶劑，用碳酸鉀做堿，與芐氯發生反應，得到3α?芐氧基?7?氧代?5β?膽烷酸芐酯；以四氫呋喃作溶劑，以堿二異丙基氨基鋰作用下與溴乙烷發生反應，得到3α?芐氧基?6α?乙基?7?氧代?5β?膽烷酸芐酯，先與氫溴酸反應，再加入氫氧化鈉水溶液，使體系pH≥9，保溫反應，得到3α?羥基?6α?乙基?7?氧代?5β?膽烷酸，以氫氧化鈉水溶液作溶劑，以NaBH4做還原劑，發生反應，得到最終化合物3α，7α?二羥基?6α?乙基?5β?膽烷酸。此制備方法簡便易行、收率高，質量好，便于工業化生產。
【專利說明】
一種膽烷酸的合成方法
技術領域：
[0001 ]本發明涉及藥物合成領域，具體涉及一種膽烷酸的合成方法。
【背景技術】：
[0002] 非酒精性脂肪性肝病是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細胞內脂肪過 度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關的獲得性代謝 應激性肝損傷.包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相關肝硬化。在世界范圍內， 有15~32%的人口患有非酒精性脂肪肝病，已成為一種流行疾病。
[0003] 奧貝膽酸，又稱6-乙基鵝去氧膽酸，是人初級膽汁酸中鵝去氧膽酸的一種新型衍 生物。體外研究發現，奧貝膽酸使人類胰島細胞胰島素分泌增加，同時增加脂肪細胞中脂肪 的儲存，并促進脂聯素和瘦素的分泌。在動物模型中，還發現奧貝膽酸可使明確的纖維化/ 硬化病變發生逆轉。
[0004] 化合物專利W0 2013/192097報道了一種3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸的合 成方法，其合成路線如下：
[000
[0006] 該路線步驟較長，收率較低。
[0007] 化合物專利W0 02/072598專利報道了一種3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸的 合成方法，其合成路線如下：
[0008]
Λ
[0009] R=乙基，丙基，烯丙基 [0010]該路線收率極低。
[0011]技術方案
[0012 ]針對上述文獻不足之處，本發明對其合成路線進行了重新設計，
[0013] 本發明以3α-羥基-7-氧代-5β-膽烷酸(2)為起始原料，以N，N-二甲基甲酰胺作溶 劑，在碳酸鉀堿性體系中，與芐氯發生反應，得到3α_芐氧基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯（3); (3)以四氫呋喃作溶劑，以堿LDA作用下與溴乙烷發生反應，得到3α-芐氧基-6α-乙基-7-氧 代-5β_膽烷酸芐酯(4)，（4)先于氫溴酸反應，再加入氫氧化鈉水溶液，使體系pH多9,保溫反 應，得到3α-羥基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸(5)，（5)以氫氧化鈉水溶液作溶劑，以NaBH4 做還原劑，發生反應，得到最終化合物3α，7α_二羥基-6α_乙基-5β_膽烷酸（1)。
[0014] 此制備方法簡便易行、收率高，質量好，便于工業化生產，合成路線如下：
[0015]
[0016] 實驗例1、堿種類的加入方式對3α-芐氧基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(4)的 影響
[0017] 將體系降溫至-78°C，攪拌下加入四氫呋喃（500.0 mL)，向體系中加入一定量的堿 性試劑(正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、鈉氫、或乙醇鈉），保溫攪拌〇.5h，向體系中滴加3α_芐 氧基-7-氧代-5β-膽烷酸芐酯(3)的四氫呋喃溶液（100.0g3a-芐氧基-7-氧代-5β-膽烷酸芐 酯（3)溶于300 . OmL四氫呋喃中），保溫攪拌0.5h，向體系中滴加溴乙烷的四氫呋喃溶液 (190.0g溴乙燒溶于200.0 mL四氫呋喃中），保溫攪拌5h。反應結束后，向體系中加入氯化銨 溶液（200mL)，攪拌0.5h，向體系中加入1000 . OmL乙酸乙酯，攪拌0.5h，分液，有機相水洗 (500mL X 2)，飽和NaCl溶液(500mL)洗滌一次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，剩余物用乙 酸乙酯和正己烷精制，得到化合物3α-芐氧基-6α_乙基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(4)
[0018] 第二步反應的堿種類的選擇分別為正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、鈉氫、乙醇鈉，進 行比較，結果如表1所示。
[0019] 表1第二步反應的堿種類的選擇
[0020]
[0021]由表1可以看出，正丁基鋰作堿時，反應轉化率最高，但產物純度較差，產物需要柱 層析純化，收率也是較低;二異丙基氨基鋰作堿時，反應轉化率較高，產物收率較高;鈉氫作 堿時，反應轉化率較低，產物需要柱層析純化，收率也是較低；乙醇鈉作堿時，反應轉化率最 低，收率也是最低。
[0022]實驗例2、催化劑的加入方式對3α-芐氧基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(4)的 影響
[0023]將體系降溫至-78°C，攪拌下加入四氫呋喃（500.0 mL)，向體系中加入一定量的二 異丙基氨基鋰，保溫攪拌〇. 5h，向體系中滴加3α_芐氧基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(3)的四氫 呋喃溶液（100.0g3a-芐氧基-7-氧代-5β-膽烷酸芐酯(3)溶于300.0 mL四氫呋喃中），保溫攪 拌0.5h，向體系中滴加溴乙烷的四氫呋喃溶液（190.0g溴乙烷溶于200.0 mL四氫呋喃中），保 溫攪拌5h。反應結束后，向體系中加入氯化銨溶液（200mL)，攪拌0.5h，向體系中加入 1000.0 mL乙酸乙酯，攪拌0.5h，分液，有機相水洗(500mL X 2)，飽和NaCl溶液(500mL)洗滌一 次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，剩余物用乙酸乙酯和正己烷精制，得到化合物3α_芐氧 基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(4)
[0024]第二步催化劑使用量的考察
[0025] 表2二異丙基氨基鋰作堿的反應條件比較
[0026]
[0027]由表2可以看出，分別采用l.Oeq二異丙基氨基鋰、1.5eq二異丙基氨基鋰、2.0eq二 異丙基氨基鋰、2.5eq二異丙基氨基鋰作堿時，轉化率依次遞增，但是以2.Oeq二異丙基氨基 鋰作堿時收率最高。
[0028] 本發明制備得到3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸純度高、雜質少，穩定性強，是 制劑的優良原料，將本發明的結晶的劑型制成藥品，將結晶與適當的輔料添加劑混合，制成 制劑。
[0029]本發明的優選制劑是:片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑、含片劑、吸入劑等口服 制劑;栓劑、軟膏劑、眼膏劑、透皮劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、巴布劑、洗劑等外用制劑或注 射劑。
[0030]優選的輔料是:賦形劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、矯味矯嗅劑、乳化劑、表 面活性劑、助溶劑、混懸化劑、等滲劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、吸收促進劑等。 [0031 ]優選的賦形劑是:乳糖、白糖、葡萄糖、玉米淀粉、甘露醇、山梨糖醇、淀粉、α淀粉、 糊精、結晶纖維素、輕質硅酸酐、硅酸鋁、硅酸鈣、硅酸鋁酸鎂、磷酸氫鈣等。
[0032]優選的粘合劑是:聚乙烯醇、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯膠、黃耆膠、明膠、蟲 膠、羥丙甲基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇等。 [0033]優選的潤滑劑是：硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、富馬酸十八酯鈉、滑石、聚乙二醇、膠態二 氧化硅等。
[0034]優選的崩解劑是:結晶纖維素、瓊脂、明膠、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸檬酸鈣、糊精、果 膠、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀 粉、羧甲基淀粉鈉等。
[0035]優選的著色劑是：三氧化二鐵、黃色三氧化二鐵、胭脂紅、焦糖、β_胡蘿卜素、氧化 鈦、滑石、磷酸核黃素鈉等。
[0036]優選的矯味劑是:可可粉、薄荷醇、薄荷油、冰片、桂皮粉等。
[0037]優選的乳化劑或表面活性劑是:十八烷基三乙醇胺、十二烷基硫酸鈉、十二烷基氨 基丙酸、卵磷脂、甘油單硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯等。
[0038]優選的助溶劑是:聚乙二醇、丙二醇、安息香酸芐酯、乙醇、膽固醇、三乙醇胺、碳酸 鈉、檸檬酸鈉、吐溫80、煙酰胺等。
[0039]優選的混懸劑是:聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙 基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分子。
[0040]優選的等滲劑是:葡萄糖、氯化鈉、甘露醇、山梨糖醇等。
[0041 ]優選的緩沖劑是:磷酸鹽、醋酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖液。
[0042]優選的防腐劑是：對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯丁醇、芐醇、苯乙醇、 脫氫乙酸、山梨酸等。
[0043]優選的抗氧化劑是:亞硫酸鹽、抗壞血酸、α-生育酚等。
【具體實施方式】
[0044]實施例1:3α-芐氧基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(3)的合成
[0045] 在室溫下，攪拌下依次向Ν，Ν-二甲基甲酰胺(800.0 mL)中加入3α-羥基-7-氧代-5 β-膽烷酸（2)(100.0g)和無水碳酸鉀（150.0g)，然后滴加芐氯的ΝΝ-二甲基甲酰胺溶液 (100.0 g芐氯溶于200.0 mLN，N-二甲基甲酰胺中），室溫攪拌7h。反應結束后，把反應體系轉 移至2000 . OmL水和1000 . OmL乙酸乙酯中，攪拌0.5h，分液，有機相水洗（500mL X 2)，飽和 NaCl溶液(500mL)洗滌一次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，剩余物用乙酸乙酯和正己烷 精制，得到化合物3α-芐氧基-7-氧代-5β-膽烷酸芐酯(3) 132.4g(收率為91 % )。
[0046] LC-MS 571·5(Μ+1)。
[0047] 4-^^(50011^,0)(:13):7.23-7.24(101111),5.43(218),4.72(2^8),2.82(111, m)，2.01~2.31(5H，m)，0.97~1.82(30H，m)。
[0048] 實施例2:3α-芐氧基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(4)的合成
[0049] 將體系降溫至-78°C，攪拌下加入四氫呋喃（500.OmL)，向體系中加入二異丙基氨 基鋰(2M，175mL)，保溫攪拌0.5h，向體系中滴加3α-芐氧基-7-氧代-5β-膽烷酸芐酯(3)的四 氫呋喃溶液（100.0g3a-芐氧基-7-氧代-5β_膽烷酸芐酯(3)溶于300.OmL四氫呋喃中），保溫 攪拌0.5h，向體系中滴加溴乙烷的四氫呋喃溶液（190.0g溴乙烷溶于200.0 mL四氫呋喃中）， 保溫攪拌5h。反應結束后，向體系中加入氯化銨溶液（200mL)，攪拌0.5h，向體系中加入 1000.0 mL乙酸乙酯，攪拌0.5h，分液，有機相水洗(500mL X 2)，飽和NaCl溶液(500mL)洗滌一 次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，剩余物用乙酸乙酯和正己烷精制，得到化合物3α_芐氧 基-6α-乙基-7-氧代-5β-膽烷酸芐酯(4)81.9g(收率為78% )。
[0050] LC-MS 599.7(M+1)。
[0051] 4-^^(50011^,0)(:13):7.22-7.25(101111),5.40(218),4.74(2^8),2.84(111, m)，2.00~2.26(4H，m)，0.82~1.80(35H，m)。
[0052] 實施例3:3α-羥基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸(5)的合成
[0053] 在室溫下，攪拌下依次向氫溴酸（800.OmL)中加入3α-芐氧基-6α-乙基-7-氧代-5 β-膽烷酸芐酯(4)(80.0g)，體系升溫至50°C，保溫攪拌6h。反應結束后，向體系中加入氫氧 化鈉水溶液，使體系pH彡9,體系升溫至回流，保溫反應10h，反應結束，用稀鹽酸調pH，使體 系pH彡3，向體系中加入1000.0 mL乙酸乙酯，攪拌0.5h，分液，有機相水洗(500mL X 2)，飽和 NaCl溶液(500mL)洗滌一次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，剩余物用乙酸乙酯和正己烷 精制，得到化合物3α-羥基-6α-乙基-7-氧代-5β_膽烷酸(5)46.8g(收率為84% )。
[0054] LC-MS 419·4(Μ+1)。
[0055] 4-^^(5001^,01^0):3.07(111,111),2.00-2.27(411,111),0.81-1.75(351111)0
[0056] 實施例4: 3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸（1)的合成
[0057] 在室溫下，攪拌下依次向50 %氫氧化鈉水溶液（300 . OmL)中加入3α-羥基-6α-乙 基-7-氧代-5β-膽烷酸(5)(40.(^)和似8財（11.(^)，體系升溫至回流，保溫攪拌911。反應結 束后，用稀鹽酸調pH，使體系pH彡4，向體系中加入500.0 mL乙酸乙酯，攪拌0.5h，分液，有機 相水洗(500mL X 2)，飽和NaCl溶液(500mL)洗滌一次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，剩余 物用乙酸乙酯精制，得到化合物3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β_膽烷酸（1)36.4g(收率為 91%)〇
[0058] LC-MS 421·5(Μ+1)。
[0059] 4-^^(5001^^,01^0):3.54(111,111),3.38-3.34(111,111),2.21-2.51(211,111),1.67 ~1.47(12H，m)，1.45~1.00(12H，m)，0.97~0.72(13H，m)。
[0060] 實施例5:樣品純度的HPLC的條件是：
[0061 ]高效液相色譜儀配備蒸發光檢測器 [0062] 色譜柱:普通C18柱
[0063] DC：80°C
[0064] SC：70°C
[0065] N2 壓力：35Bar
[0066] 柱溫：35 Γ
[0067] 進樣量:20μ1
[0068] 流動相：以0.05mol/L三氟乙酸水溶液為流動相Α，乙腈為流動相Β，按下表進行洗 脫。流速為每分鐘1. 〇ml
[0069]
[0070] 本發明實施例4產品、標準品用流動相溶解，取供試品溶液，取20μ1注入液相色譜 儀，記錄色譜圖，依匹哌唑峰保留時間為16.8分鐘，理論板數按依匹哌唑峰計算不低于 3000，含化合物3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸（1)應為標示量的99.7%~101.0%。
[0071] L0072J 買施例6
[0073] 3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸片由以下組份配制而成，按1000片用量： 3α,7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸（1) 10.0 g 聚維酮 30. 0 g 微晶纖維素 52. 0 g
[0074] 羧甲基淀粉鈉 5.0g 硬脂酸鎂 〇. 5g 二氧化硅 0. 5g 歐巴代（包衣） 3.0g
[0075] 其制備方法包括如下步驟：
[0076] 1)將3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸（1)和藥用輔料分別粉碎過篩，備用，
[0077] 2)取處方量重量份數的原料及藥用輔料物理混合均勻，
[0078] 3)濕法制粒，
[0079] 4)干燥，整粒，
[0080] 5)折算外加輔料，混合均勻，壓制成片劑
[0081] 6)將歐巴代采用一定的溶劑進行溶解，作為包衣液進行包衣。
[0082] 試驗結果
[0083]藥物含量:合格 [0084]崩解時限:符合規定
[0085] 實施例7
[0086] 3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸片由以下組份配制而成，按1000片用量： 3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸（1) 10.0 g 聚維酮 30. 0 g 微晶纖維素 50.0 g
[0087] 羧甲基淀粉鈉 7.0g 硬脂酸鎂 0. 5g 二氧化硅 0· 5g 歐巴代（包衣） 3.0g
[0088] 其制備方法包括如下步驟：
[0089] 1)將3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷酸(1)和藥用輔料分別粉碎過篩，備用，
[0090] 2)取處方量重量份數的原料及藥用輔料物理混合均勻，
[0091] 3)濕法制粒，
[0092] 4)干燥，整粒，
[0093] 5)折算外加輔料，混合均勻，壓制成片劑
[0094] 6)將歐巴代采用一定的溶劑進行溶解，作為包衣液進行包衣。
[0095]試驗結果 [0096]藥物含量:合格 [0097]崩解時限:符合規定
[0098]以上對本發明的實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例， 不能被認為用于限定本發明的實施范圍。凡依本發明申請范圍所作的均等變化與改進等， 均應仍歸屬于本發明的專利涵蓋范圍之內。
【主權項】
1. 一種膽燒酸的合成方法，其特征在于： W3a-徑基-7-氧代-5β-膽燒酸（2)為起始原料，WN，N-二甲基甲酯胺作溶劑，在碳酸鐘 堿性體系中，與節氯發生反應，得到3α-節氧基-7-氧代-5β-膽燒酸節醋(3);(3) W四氨巧喃 作溶劑，W堿二異丙基氨基裡作用下與漠乙燒發生反應，得到3α-節氧基-6α-乙基-7-氧代- 5β-膽燒酸節醋(4)，（4)先于氨漠酸反應，再加入氨氧化鋼水溶液，使體系抑>9,保溫反應， 得到3α-徑基-6α-乙基-7-氧代-5β-膽燒酸(5)，（5) W氨氧化鋼水溶液作溶劑，W化ΒΗ4做還 原劑，發生反應，得到最終化合物3α，7α-二徑基-6α-乙基-5β-膽燒酸（1);
【文檔編號】C07J9/00GK106083970SQ201610370148
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月31日
【發明人】程剛
【申請人】北京康立生醫藥技術開發有限公司