一種綠原酸及其類似化合物的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，包括以下步驟：S1：利用提取劑進行回流提取；S2：將提取液濃縮至浸膏狀；S3：將浸膏溶解后利用乙酸乙酯萃取；S4：調節萃取后的濃縮液的pH值為中性，過濾過大孔樹脂柱；S5：利用薄層制備板，選用展開劑展開，經刮帶、研磨，裝柱，洗滌，濃縮干燥得到高純綠原酸及其類似化合物。本發明所述的方法流程清晰、方法簡單、成本低，純化得到的產品顏色好、得率和純度高，并且可同時得到多個綠原酸類似化合物，為綠原酸及其類似化合物能夠得到更加廣泛及有效的應用提供了依據。
【專利說明】
一種綠原酸及其類似化合物的制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，屬于醫藥化工技術領域。
【背景技術】
[0002] 綠原酸（Chlorogenic acid )
是由咖啡酸（Caffeic acid)中的咖啡酰基與奎尼酸（Quinic acid)中的奎寧酸根 組成的縮酚酸，又名咖啡單寧酸。
[0003] 其中，咖啡酰基的結構是為：
上述的奎寧酸根結構式中的R1-R4代表的基團不同，則形成不同的綠原酸類似物，如以 下幾種情況= (I)Ri=R3=咖啡酰基，R2=R4=H; (2)?=!?=咖啡酰基，R3= R4=H5(S)R1=R3= R4=H, 尺2=咖啡酰基；（4)1?1=1?2=1?4=11，1?3=咖啡酰基 ；（5)1?3=1?2=11，1?1=咖啡酰基，1?4=16。
[0004] 綠原酸及其類似化合物廣泛存在于高等雙子葉植物和蕨類植物中，主要存在于忍 冬科忍冬屬（Lonicera )、菊科蒿屬(A rtem isia )植物中，其中含量較高的植物主要 為杜仲、金銀花、向日葵、繼木、咖啡、可可樹等。綠原酸具有廣泛的生物活性，它的生物活性 主要表現在抗菌、抗病毒、保肝利膽、清除體內自由基、抑制突變和抗腫瘤以及其它方面，現 代科學對綠原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、醫藥和日用化工等多 個領域。隨著研究的進展，更多綠原酸類似物被發現，由于它們具有相同的母體，從而具有 相似的生物活性，而它們的區別與綠原酸的獨特結構，使其具有新的生物活性。
[0005] 目前對綠原酸及其類似物的提取有石硫醇法、水提醇沉法、超聲波法、聚酰胺柱層 析法等，之后利用不同的的柱層析法進行進一步提純，但是所得化合物純度一般在70%左 右，若要較高純度的化合物（295%)，一般需要制備液相，但是其所要求的設備和材料昂貴， 成本將會提高很多。

【發明內容】

[0006] 為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種制備方法簡單、成本低、最終產物 純度高的綠原酸及其類似化合物的制備方法。
[0007] 本發明的技術方案為： 一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： SI:提取:將干燥后的金銀花加入到5~15倍金銀花重量的提取劑中，在60-90°C的溫度 條件下回流提取1~4小時，得到提取液； S2:濃縮:將Sl步驟得到的提取液在60-75 °C的溫度條件下濃縮至浸膏狀； S3:萃取:將S2步驟中得到的浸膏用2~8倍浸膏重量的水溶解，然后用乙酸乙酯萃取，得 乙酸乙酯萃取液，并將萃取液在60-75Γ的溫度條件下濃縮至原萃取液的0.1-0.3倍； S4:層析:利用濃度為0.1mol · !/1NaOH將S3步驟中得到的濃縮液的pH值調整為中性， 過濾后過大孔樹脂柱，再用濃度為50-70%的乙醇洗滌大孔樹脂柱，合并流出液和水洗液， 在50-70°C的溫度條件下濃縮至膏狀； S5:制備高純綠原酸及其類似化合物:將S4步驟中的l-2g濃縮液用甲醇溶解，然后利用 薄層制備板，選用展開劑展開，在紫外燈下觀察，并分別將不同帶刮下，研磨，裝柱，利用洗 滌溶劑洗滌，洗滌液在50_70°C的溫度條件下濃縮干燥，得到高純綠原酸及其類似化合物。
[0008] 進一步，還包括同樣提取條件重復提取的步驟，重復次數為1-2次。
[0009] 且在提取過程中，優選，干燥后的金銀花加入到8倍重量的提取劑中，在70°C的溫 度條件下回流提取2小時，重復次數為1次。
[0010] 更進一步，上述的提取劑為濃度為60-95%的乙醇。
[0011] 優選，提取劑為濃度為70-80%的乙醇。
[0012] 且上述的大孔樹脂型號為NKA-9、D-101、XAD-16和NKA-Il中的任一種。
[0013] 優選，大孔樹脂型號為NKA-9或D-101。
[0014] 而上述的薄層制備板上的硅膠為硅膠H。
[0015]且上述的展開劑為石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、丙酮中的任意一種或至少兩種 任意比例的混合溶媒。
[0016] 上述的洗滌溶劑為氯仿、乙酸乙酯、丙酮中的任意一種或至少兩種任意比例的混 合溶媒。
[0017] 本發明的有益效果為:本發明所述的方法流程清晰、方法簡單、成本低，純化得到 的產品顏色好、得率和純度高，并且可同時得到多個綠原酸類似化合物，為綠原酸及其類似 化合物能夠得到更加廣泛及有效的應用提供了依據。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合具體實施例對本發明進行詳細的說明。
[0019] 實施例1: 將干燥后的金銀花IOkg加入到6倍金銀花重量濃度為85%的乙醇中，在85°C的溫度條件 下回流提取3小時，過濾后濾渣重復提取1次，合并提取液155L;將提取液在75°C下濃縮至浸 膏狀;然后將浸膏用3倍浸膏重量的水溶解，溶解后用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取液，并 將萃取液濃縮至原萃取液的0.3倍，得到濃縮液;再用0.1mol · IZ1NaOH將濃縮液的pH值調整 為中性，過濾后過D-101型大孔樹脂柱，再用濃度為70%的乙醇洗滌大孔樹脂柱，合并流出 液和水洗液，70°C溫度下濃縮至膏狀，60°C干燥，得淡綠色粉末325g，綠原酸及其類似化合 物的含量為90.1%;取Ig濃縮液用甲醇溶解，利用薄層制備板，選用展開劑石油醚-丙酮的混 合溶媒展開，本實施例中，薄層制備板上的硅膠為硅膠H，在紫外燈下觀察，并分別將不同帶 刮下，研磨，裝柱，利用洗滌溶劑乙酸乙酯洗滌，洗滌液50°C溫度下濃縮至膏狀，60°C干燥， 利用核磁進行結構鑒定，得綠原酸含量為97.5%，3，5-二咖啡酰基奎寧酸酯含量為96.3%，3， 4- 二咖啡酰基奎寧酸酯含量為96.8%。
[0020] 實施例2: 將干燥后的金銀花IOkg加入到8倍金銀花重量濃度為70%的乙醇中，在(TC的溫度條件 下回流提取2小時，過濾后濾渣重復提取為1次，合并提取液158L;將提取液70°C下濃縮至浸 膏狀;然后將浸膏用5倍浸膏重量的水溶解，溶解后用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取液，并 將萃取液濃縮至原萃取液的0.15倍，得到濃縮液;再用0.1mol · !/1NaOH將濃縮液的pH值調 整為中性，過濾后過NKA-9型大孔樹脂柱，再用濃度為65%的乙醇洗滌大孔樹脂柱，合并流 出液和水洗液，70°C溫度下濃縮至膏狀，60°C干燥，得淡綠色粉末355g，綠原酸及其類似化 合物的含量為85.4%;取1.5g濃縮液甲醇溶解，利用薄層制備板，選用展開劑石油醚-乙酸乙 酯的混合溶媒展開，本實施例中，薄層制備板上的硅膠為硅膠H，在紫外燈下觀察，并分別將 不同帶刮下，研磨，裝柱，利用洗滌溶劑丙酮洗滌，洗滌液60°C溫度下濃縮至膏狀，60°C干 燥，利用核磁進行結構鑒定，得綠原酸含量為98.5%，3，5-二咖啡酰基-7-甲基奎寧酸酯含量 為97.3%，3，4-二咖啡酰基奎寧酸酯含量為97.2%，3，5-二咖啡酰基-7-正丁基奎寧酸酯含量 為96.4%。
[0021] 實施例3: 將干燥后的金銀花IOkg加入到14倍金銀花重量濃度為65%的乙醇中，在65°C的溫度條 件下回流提取4小時，過濾后濾渣重復提取為2次，合并提取液156L;將提取液70°C下濃縮至 浸膏狀;然后將浸膏用8倍浸膏重量的水溶解，溶解后用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取液， 并將萃取液濃縮至原萃取液的0.1倍，得到濃縮液;再用0.1mol · IZ1NaOH將濃縮液的pH值調 整為中性，過濾后過NKA-Il型大孔樹脂柱，再用濃度為60%的乙醇洗滌大孔樹脂柱，合并 流出液和水洗液，70°C溫度下濃縮至膏狀，60°C干燥，得淡綠色粉末325g，綠原酸及其類似 化合物的含量為89.6%;取2g濃縮液甲醇溶解，利用薄層制備板，選用展開劑氯仿-甲醇的混 合溶媒展開，本實施例中，薄層制備板上的硅膠為硅膠H，在紫外燈下觀察，并分別將不同帶 刮下，研磨，裝柱，利用洗滌溶劑丙酮洗滌，洗滌液50°C溫度下濃縮至膏狀，60°C干燥，利用 核磁進行結構鑒定，得綠原酸含量為98.8%，5-咖啡酰基-7-甲基奎寧酸酯含量為98.9%，3， 5- 二咖啡酰基奎寧酸酯含量為98.1%，3，5-二咖啡酰基-7-正丁基奎寧酸酯含量為97.6%。
[0022] 以上【具體實施方式】不以任何形式限制本發明，凡是以等同替換或等效變換的方式 所獲得的技術方案，均落在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： S1:提取:將干燥后的金銀花加入到5~15倍金銀花重量的提取劑中，在60-90°C的溫度 條件下回流提取1~4小時，得到提取液； S2:濃縮:將S1步驟得到的提取液在60-75 °C的溫度條件下濃縮至浸膏狀； S3:萃取:將S2步驟中得到的浸膏用2~8倍浸膏重量的水溶解，然后用乙酸乙酯萃取，得 乙酸乙酯萃取液，并將萃取液在60-75Γ的溫度條件下濃縮至原萃取液的0.1-0.3倍； S4:層析:利用濃度為0. lmol · I^NaOH將S3步驟中得到的濃縮液的pH值調整為中性，過 濾后過大孔樹脂柱，再用濃度為50-70%的乙醇洗滌大孔樹脂柱，合并流出液和水洗液， 在50-70°C的溫度條件下濃縮至膏狀； S5:制備高純綠原酸及其類似化合物:將S4步驟中的l-2g濃縮液用甲醇溶解，然后利用 薄層制備板，選用展開劑展開，在紫外燈下觀察，并分別將不同帶刮下，研磨，裝柱，利用洗 滌溶劑洗滌，洗滌液在50_70°C的溫度條件下濃縮干燥，得到高純綠原酸及其類似化合物。2. 根據權利要求1所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，還包括 同樣提取條件下重復提取的步驟，重復次數為1-2次。3. 根據權利要求2所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，在提取 過程中，干燥后的金銀花加入到8倍重量的提取劑中，在70°C的溫度條件下回流提取2小時， 重復次數1次。4. 根據權利要求1所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所述的 提取劑為濃度為60-95%的乙醇。5. 根據權利要求1或4所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所 述的提取劑為濃度為70-80%的乙醇。6. 根據權利要求1所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所述的 大孔樹脂型號為疆六-9、0-101、乂40-16和疆4-11中的任一種。7. 根據權利要求1或6所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所 述的大孔樹脂型號為NKA-9或D-101。8. 根據權利要求1所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所述的 薄層制備板上的硅膠為硅膠H。9. 根據權利要求1所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所述的 展開劑為石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、丙酮中的任意一種或至少兩種任意比例的混合溶 媒。10. 根據權利要求1所述的一種綠原酸及其類似化合物的制備方法，其特征在于，所述 的洗滌溶劑為氯仿、乙酸乙酯、丙酮中的任意一種或至少兩種任意比例的混合溶媒。
【文檔編號】C07C67/58GK106008212SQ201610413715
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月14日
【發明人】季浩, 胡亞京, 于燕燕, 闞建偉, 孔繁博
【申請人】江蘇天晟藥業股份有限公司