一種氨基糖苷類化合物及其提取分離方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物化學領域，特別涉及一種新的氨基糖苷類化合物及其提取分離方 法。
【背景技術】
[0002]氨基糖苷類化合物(Aminoglycosides)是由氨基糖與氨基環醇通過氧橋連接而成 的苷類。有來自鏈霉菌的鏈霉素等、來自小單孢菌的慶大霉素等天然氨基糖苷類，還有依替 米星等半合成氨基糖苷類，均屬廣譜抗生素。
[0003] 氨基糖苷類抗生素對于細菌的作用主要是抑制細菌蛋白質的合成，作用點在細胞 30S核糖體亞單位的16SrRNA解碼區的A部位。研究表明，此類藥物可影響細菌蛋白質合成的 全過程，妨礙初始復合物的合成，誘導細菌合成錯誤蛋白以及阻抑已合成蛋白的釋放，從而 導致細菌死亡。
[0004] 氨基糖苷類抗生素主要用于敏感需氧革蘭陰性桿菌所致的全身感染。雖然近年來 有多種cephalosporins和quinolones藥物在臨床廣泛應用，但由于氨基糖苷類抗生素對銅 綠假單胞菌、肺炎桿菌、大腸桿菌等常見革蘭陰性桿菌的PAE較長，所以，仍然被用于治療需 氧革蘭陰性桿菌所致的嚴重感染，如腦膜炎、呼吸道、泌尿道、皮膚軟組織、胃腸道、燒傷、創 傷及骨關節感染等。
[0005] 硫酸依替米星(Etimicin sulfate)是我國科研人員自行研制的，擁有自主知識產 權的高效、低毒、抗耐藥菌的新一代半合成氨基糖苷類抗生素，是唯一獲得國家一類新藥證 書的抗感染藥物。
[0006] 硫酸依替米星注射液適用于對其敏感的大腸桿菌、克雷伯氏肺炎桿菌、沙雷氏桿 菌屬、枸櫞酸桿菌、腸桿菌屬、不動桿菌屬、變形桿菌屬、嗜血流感桿菌、綠膿桿菌和葡萄球 菌等引起的各種感染。臨床研究顯示本品對以下感染有較好的療效:呼吸道感染:如急性支 氣管炎、慢性支氣管炎急性發作、社區肺部感染等。腎臟和泌尿生殖系統感染:如急性腎盂 腎炎、膀胱炎、慢性腎盂腎炎或慢性膀胱炎急性發作等。皮膚軟組織和其它感染:如皮膚及 軟組織感染，外傷、創傷和手術產后的感染及其他敏感菌感染。
[0007] 硫酸依替米星的制備方法描述在中國專利93112412.3中，其主要步驟為:通過發 酵制備慶大霉素 Cla，進一步制備3，2，6，-三-N-乙酰基慶大霉素 Cla(Pl)，和3，2，，6，-三-N-乙酰基-I-N乙基慶大霉素 Cla(P2)，最終獲得I-N-乙基慶大霉素 Cla(依替米星），由于該方 法通過發酵獲得的慶大霉素 Cla含有雜質，進一步制備得到的硫酸依替米星中也含有多種 雜質，目前對這些雜質研究的不多，本發明對有關雜質進行了研究，意外的發現一種活性和 毒性都優于依替米星的一種新的化合物，經體外抗菌試驗發現，該化合物在常規濃度下即 可有效殺滅大腸埃希菌、克雷伯氏肺炎桿菌、沙雷氏桿菌屬、枸橡酸桿菌、腸桿菌屬、不動桿 菌屬、變形桿菌屬、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌等革蘭氏陰性菌和葡萄球菌等。

【發明內容】

[0008] 本發明之目的在于對氨基糖苷類化合物進行深入研究，以其尋找MRSA對其敏感， 耳腎毒性低的新氨基糖苷類抗生素。
[0009] 本發明提供一種6〃-N-乙基慶大霉素 Cla化合物或其藥學上可接受的鹽。
[0010] 其中，6〃-N-乙基慶大霉素 Cla化合物結構式如下：
[0012]本發明所述藥學上可接受的鹽，是6〃-N-乙基慶大霉素 Cla化合物和酸形成的鹽， 包括與無機酸鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、苯甲酸、富馬酸、抗壞血酸、甲磺酸、對甲 苯磺酸等形成的鹽，可按常規轉化方法制備這些酸加成鹽。
[0013 ]本發明的式（I)化合物可以采用如下的制備方法制備：
[0014] 取用中國專利93112412.3實施例1-3的方法制備的依替米星粗品，加水溶解，上樣 YPR-II型大孔樹脂柱，用濃度為8%，12%，16%，20%乙醇水溶液梯度洗脫，TLC檢識(展開 劑:氯仿-甲醇-氨水，1:1:1，取用下層液），合并流份，得到雜質富集流份。分別將雜質富集 流份濃縮，凍干，得到10克固體混合物，取100-200目硅膠300克，用硅膠柱層析分離(氯仿： 甲醇:氨水(3:1:1，取用下層液)和制備液相純化，得到本發明的式(I)化合物。
[0015] 經核磁共振波譜解析，本發明的式(I)化合物的1H，13C_NMR數據如下表。
[0016] 表1化合物（！）的1H，13C NMR數據
[0019]在1H-NMR譜中，δΗ 5.05(lH，d，3.6HZ)，5.76(lH，d，3.6HZ)分別為糖的端基氫，提示 該化合物中含有兩個糖。Sh 2.88(3H，s)為氨基上的取代甲基質子信號，δΗ 1.31(3H，s)則為 一個連在季碳上的甲基質子信號。
[0020] 在13C-NMR譜中，顯示δ。lOl.MC-f )，95.4((：-1〃）為糖的端基碳信號，提示化合物 結構中含有兩個糖;與文獻[1]中小諾霉素(6-N-甲基慶大霉素）的碳譜數據比較，S c 101.4 (C-V ),66.3(02' ),63.5(03' ),69.9(04' ),68.0(05' ),34.55(06' ),21.0(07')可歸 屬為C環古洛糖胺片段碳信號，δ。95 · 4(C-l〃），49 · 7(C-2〃），25 · 7(C-3〃），20 · 5(C-4〃），74 · 4 (〇5〃），50.2((：-6〃）可歸屬為4環絳紅糖胺片段碳信號，6。48.5((：-1)，27.9((：-1)，48.8((：-1)，77.2((：-1)，65.8((：-1)，83.8((：-1)則為8環碳信號。進一步比較發現多出一組心43.9 (C-7〃），10.4(C-8〃），少了S c 36.1，提示小諾霉素中原來C-6氨基上的甲基變成了乙基，其 余數據可能受到三氟乙酸的影響，與文獻比均向高場位移約-2.5ppm。
[0021] 再分析氫譜數據發現，δΗ 4.20(lH，dd，11.0,3.8Hz) ,3.43( lH，d，10·7Ηζ)，3.96 (lH，d，12.8Hz，H-5'a)，3.58(lH，d，12.8Hz，H-5'b)分別為加洛糖胺的H-2'，3'和5'位質子 信號，進一步分析其偶合常數，C環3'位氫的偶合常數為10.7Hz，故2'和3'位的氫都在豎鍵， V和2M立的偶合常數為3.6、3.8Hz，故IM立氫在橫鍵。B環上4，5，6位氫的偶合常數為8.8、 10、8.8Hz，說明1，3，4，5，6位的氫都在豎鍵上，與慶大霉素 Cla的相對構型一致[1]。并且慶大 霉素 Cla為合成依替米星的初始原料，在反應中結構異變，雜質來源明確。
[0022]質譜解析(ESI-MS):
[0023] ESI_MS19測定數據及解析結果：
[0024] ESI-MS：m/z 478.4[M+H]+；
[0025] ESI-MS2(478.4):m/z 461，350,322，163。
[0027]化合物（I)的質譜裂解途徑
[0028]結論:離子源為電噴霧質譜，正離子模式主要給出樣品的分子離子加氫峰。正離子 模式給出的二級質譜的裂解途徑見上圖。以上ESI-MS2信息，證明樣品與推斷結構相符。 [0029]綜合以上匪R和ESI-MS n解析，有關化合物鑒定為6〃-N-乙基慶大霉素 Cla，為一新 化合物，化合物（I) NMR和ES I -MSn譜圖見附圖。
[0030] 因此，本發明的化合物(I)命名為:6〃-N-乙基慶大霉素 Cla。
[0031] 英文名：6〃-N-Ethylgentamicin Cla [0032]分子式：C21H43N5O7
[0033] 分子量:477
[0034] 本發明還提供含有本發明的化合物或其藥效學上可接受的鹽作為活性成分的藥 物組合物。藥物組合物含有的本發明化合物在組合物中的重量比為0.01-99.9%，藥物可接 受的載體在組合物中的重量比為0.01-99.9%。藥物組合物以適合藥用的制劑形式存在。藥 用的制劑為片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、緩釋片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊 劑、緩釋膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液 劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、氣霧劑、滴劑、貼劑。
[0035] 本發明的藥物組合物，作為制劑形式，每劑中含有的發明化合物的有效量為 0.1 mg-1000 mg，所述每劑指的是，每一制劑單位，如片劑的每片，膠囊的每粒，也可指每次服 用劑量，如每次服用l〇〇mg。
[0036] 本發明的藥物組合物在制備成粉劑