化合物acaromycin A及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】：
[0001 ]本發明屬于生物和醫藥領域，具體涉及化合物acaromycin A及其制備方法和在制 備抗腫瘤藥物中的應用。
【背景技術】：
[0002] 海洋擁有特殊的環境，尤其是深海海洋環境，棲息于海洋環境的海洋微生物為了 適應這些高鹽、弱堿性、低營養、缺氧等特殊環境，因此海洋微生物的次級代謝產物具有獨 特的結構類型和豐富多樣的生物活性。這些新化學實體不僅能揭示新的生物合成途徑，而 且還能啟發人們對這些化學實體進行仿生合成和生物活性研究。因此，海洋微生物次生代 謝產物具有重要的科研和應用價值，是藥物開發的重要資源(Sun L，et al.2012)。
[0003] 深海真菌厶〇&1'〇1115^68；[叫01(1;^?3121于2011年9月從南海（18°44.606/1^，119° 44.263'E)水深3415米處海底表層沉積物中分離得到。文獻查閱顯示，到目前為止沒有對于 Acaromyces屬真菌的次生代謝產物的研究，因此有必要對其次級代謝產物進行深入研究。

【發明內容】
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[0004] 本發明的第一個目的是提供對腫瘤細胞具有抑制活性的化合物acaromycin A。
[0005] 本發明通過深海真菌Acaromyces ingoldii FS121的發酵培養、發酵產物的分離 純化和結構鑒定，獲得了 1個具有抗腫瘤活性的3,4-dihydro-2H-naphtho-[2,3-b]pyran-5 ， 10-dione類新化合物， 命名為acaromycin AJ ，4-dihydr〇-2H-naphth〇-[2 ， 3-b]pyran-5，10-dione類化合物具有廣泛的生物活性，對革蘭氏陽性菌都有一定的抑制活性(Gupta R.B.et al.1989)，能夠抑制脂多糖(LPS)刺激下小鼠 RAW264.7的巨噬細胞產生一氧化氮 (NO)(Byeong M P.et al.2010)，對惡性癥原蟲Plasmodium falciparum 3D7和人胚肺成纖 維細胞(MRC-5)有一定的抑制活性(Paula F.C. et al · 2016)。因此，從深海真菌Acaromyces ingoldii FS121中發現的新化合物acaromycin A可為抗腫瘤藥物研發提供候選化合物，為 開發利用海洋真菌資源提供科學依據。
[0006] 本發明的化合物acaromycin A，其特征在于，結構如式(I)所示：
[0007]
[0008] 本發明的第二個目的是提供化合物acaromycin A的制備方法，其特征在于，所述 的化合物acaromycin A是從深海真菌Acaromyces ingoldii FS121的發酵培養物中制備得 到。
[0009]優選，具體步驟如下：
[00?0]制備Acaromyces ingoldii FS121的發酵培養物，將該發酵培養物的發酵液和菌 絲體分離，發酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液經蒸餾濃縮后得到浸膏；
[0011] 將浸膏過正相硅膠柱，先用石油醚-乙酸乙酯從30:1，20:1，10:1，7:1，9:2,3 :1，2: l，l:l，l:2v/v梯度洗脫，再用乙酸乙酯洗脫，最后用二氯甲烷：甲醇= 5:lv/v洗脫;收集浸 膏被石油醚：乙酸乙酯體積比1:2洗脫的餾分，該餾分再經TLC以石油醚：乙酸乙酯=1:4v/v 展開得Rf = 2.7/3.7的餾分E22，該餾分E22經Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷：甲醇=1:1 v/ v作為洗脫劑，收集TLC以石油醚：乙酸乙酯=1: 2v/v展開得Rf = 1.5/3.5的組分，然后過反 相硅膠柱層析，以體積比甲醇:水=2:8等度洗脫，收集洗脫下來的餾分，上樣正相硅膠薄層 層析板，以二氯甲烷：甲醇= 10:1為展開劑展開，割板純化Rf=l.4/3.3的組分，得到化合物 acaromycin A〇
[0012] 所述的制備Acaromyces ingoldii FS121的發酵培養物優選是將活化的 Acaromyces ingoldii FS121菌種接入含質量分數1.5%海鹽的馬鈴薯葡萄糖液體培養基 中，28°C，120rpm，培養5d制得種子液，將種子液以體積比10 %的接種量接入到含質量分數 1.5%海鹽的馬鈴薯葡萄糖液體培養基中，相同條件下培養7d，制得發酵培養物。
[0013] 本發明的第三個目的是提供Acaromyces ingoldii FS121在制備化合物 acaromycin A中的應用。
[0014]本發明通過腫瘤細胞生長抑制活性測試發現，化合物acaromycin A對腫瘤細胞株 SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2均具有良好的抑制活性，對上述4種腫瘤細胞的IC5Q值分 別為7.8±0.5，6.7 ± 1.6，10.0±0.1和7.3 ± 1.8μΜ，陽性對照藥物順鉑對上述四種腫瘤細 胞株的IC5Q值分別為4.1±0.2,2.9±0.5,2.9±0.2和2.5±0.2以1。結果表明：本發明的化合 物acaromycin A對腫瘤細胞具有顯著的抑制活性，能用于在制備抗腫瘤藥物。
[0015] 本發明的第四個目的是提供化合物acaromycin A在制備抗腫瘤藥物中的應用。
[0016] 所述的抗腫瘤藥物優選為抗神經膠質瘤、乳腺癌、非小細胞肺癌或肝癌的藥物。
[0017] 本發明的第五個目的是提供一種抗腫瘤藥物，其特征在于，含有化合物 acaromycin A作為有效成分。
[0018] 所述的抗腫瘤藥物優選為抗神經膠質瘤、乳腺癌、非小細胞肺癌或肝癌的藥物。 [0019]本發明從深海真菌Acaromyces ingoldii FS121的發酵培養物中分離得到新化合 物acaromycin A，該化合物對腫瘤細胞具有良好的抑制活性，可為抗腫瘤新藥研發提供候 選化合物，為開發利用海洋真菌資源提供科學依據。
[0020] 本發明的Acaromyces ingoldii FS121公開于文獻:23株海洋真菌的分子鑒定及 其抗植物病原真菌和細胞毒活性研究，楊小嵐，陳玉嬋，李浩華，章衛民2014，0(8):132_ 137。該菌株本申請人也持有，并保證自申請日起20年內向公眾提供。
【附圖說明】：
[0021] 圖1是化合物1的1H-NMR譜；
[0022] 圖2是化合物1的13C_NMR譜；
[0023] 圖3是化合物1的DEPT 135譜；
[0024]圖4是化合物1的HSQC譜；
[0025] 圖5是化合物1的HMBC譜；
[0026] 圖6是化合物1的1H-1!! COSY譜；
[0027] 圖7是化合物1的N0ESY譜；
[0028] 圖8是化合物1的HRESB1S譜；
[0029] 圖9是化合物1的⑶譜。
【具體實施方式】：
[0030]以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。
[0031] 實施例1:
[0032] 將活化的深海真菌Acaromyces ingoldii FS121接入含質量分數1.5%海鹽的馬 鈴薯葡萄糖液體培養基(每升含有15g海鹽、200g馬鈴薯、葡萄糖20g，余量為水，其配制方法 是:將馬鈴薯洗凈去皮，切成大小約為lcm3的小塊，稱量200g，放入1L水中煮沸20-30分鐘， 用雙層紗布過濾，取濾液，在濾液中加入海鹽15g、葡萄糖20g，加水補足1L，滅菌備用。）中， 28°C，120rpm，培養5d制得種子液，將種子液以體積比10%的接種量接入到新的含質量分數 1.5%海鹽的馬鈴薯葡萄糖液體培養基中，28°C，120rpm下振蕩培養7d，制得發酵培養物。 [0033]將該發酵培養物的發酵液和菌絲體分離，發酵液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取 液經蒸餾濃縮后得到浸膏。將浸膏過正相硅膠柱，先用石油醚-乙酸乙酯從30:1，20:1，10: 1，7 :1，9:2,3:1，2:1，1:1，1 :2&八)梯度洗脫，再用乙酸乙酯洗脫，最后用二氯甲烷：甲醇= 5:l(v/v)洗脫;收集浸膏被石油醚：乙酸乙酯= l:2(v/v)洗脫的餾分，該餾分再經TLC薄層 層析，以石油醚:乙酸乙酯=1:4(v/v)展開得Rf = 2.7/3.7的餾分E22。
[0034] 餾分E22以二氯甲烷：甲醇=1:1 (v/v)洗脫過Sephadex LH-20，收集TLC以石油醚： 乙酸乙酯= l:2v/v展開得Rf = 1.5/3.5的組分，然后過反相硅膠柱層析，以體積比甲醇：水 = 2:8等度洗脫，收集洗脫下來的餾分，上樣正相硅膠薄層層析，以二氯甲