一種高效降低水體cod沼澤紅假單胞菌的培養基的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于微生物技術領域，具體地，設及一種高效降低水體COD沼澤紅假單胞菌 的培養基。
【背景技術】
[0002] 當前我國水產業迅猛發展，但由于長期養殖方式不當，導致池塘老化，水質惡化， 有機物嚴重污染，COD(化學需氧量)大幅度升高，致病微生物大量繁殖，形成大量的魚郵病 害。因此尋求一種新型水質改良劑已是當務之急。
[0003] 沼澤紅假單胞菌是廣泛存在于自然界的微生物，是一類W光為能源，利用自然界 中的有機物、硫化物等為營養體，并能進行光合作用的生物。它不僅能凈化水質，而且含有 豐富的營養，可作為魚郵的巧料添加劑，同時能促進水產品的繁殖，提高解化率。沼澤紅假 單胞菌的多種良好性能已引起國內外廣大學者的關注。但由于沼澤紅假單胞菌在培養過程 中易老化，需要不斷更新發酵菌種，而從郵塘的污泥分離菌種是主要的方法。目前，分離培 養用常規的培養基平板分離法，由于存在氧壓力且普通培養基不易分離到COD降解能力強 的高效沼澤紅假單胞菌，往往得到的菌株對養殖池塘的有機物降解能力不強，導致沼澤紅 假單胞菌在養殖池塘的使用量要加倍，增加養殖成本，成為制約沼澤紅假單胞菌生產的一 個瓶頸。

【發明內容】

[0004] 針對現有技術的不足，本發明提供了一種新型高效降低水體COD沼澤紅假單胞菌 的培養基，利用特殊的微量元素促生物母液，獲得高效降低水體COD(化學需氧量)的沼澤紅 假單胞菌，從而達到降低養殖池塘的使用量，進而改善養殖環境，降低養殖成本的目的。
[000引本發明的上述目的是通過W下技術方案予W實現的。
[0006] -種高效降低水體COD沼澤紅假單胞菌的培養基，所述培養基中添加了按如下組 分配制而成的微量元素促生物母液：Na2EDTA 500~503mg，FeS〇4.7H2〇 200~203mg， ZnS〇4.7H2〇 10~13mg，MnS〇4.4也0 2~2.3mg，出B03 50~53mg，CoCl2.2H2〇 20~23mg， NiCl2.6H2〇 7~7.3mg，CuCl2.6H2〇 0.5~0.8mg，化2M0O4.2H2O 4~4.3mg，CaCl2 200~ 203mg，水lL，pH4.4~4.7。
[0007] 該微量元素促生物母液添加 Ni和化元素，能有效激活沼澤紅假單胞菌內降解有機 污染物的酶，從而提高沼澤紅假單胞菌的降低水體COD的能力。
[000引優選地，所述培養基為富集培養基，所述富集培養基的配方為:N也S04 1~1.5g， MgCh 0.2~0.5g，Na肥O35~5.3g，K2HP04 0.5~0.8g，化Cl 2~2.3g，酵母膏0.8~l.lg，微 量元素促生物母液40~43ml，水lL，pH 7.1~7.3。
[0009]優選地，所述培養基為分離培養基，所述分離培養基的配方為:N也S〇4 1~1.3g， MgCh 0.2~0.5g，乙酸鋼 3~3.3g，化肥O32.8~3g，K2HP〇4 0.5~0.8g，化Cl 1.9~2.2g， 酵母膏0.4~0.7g，微量元素促生物母液19~22ml，瓊脂19~22g，水lL，pH7.1~7.3。
[0010] -種利用上述培養基分離沼澤紅假單胞菌的方法，包括如下步驟： 51. 富集培養:將郵塘黑色底泥或/和郵塘水與所述富集培養基混合，于27~30°C、40W 白識燈光照培養，培養物與光源距離15~18cm，^天后觀察到光照的一側呈現微紅培養物， 吸取該微紅培養物與新鮮的富集培養基混合，培養70~7化； 52. 分離培養:將所述的分離培養基制成平板，干燥條件下在平板底部添加焦性沒食 子酸和碳酸鋼，排空充氮氣，取S1得到的呈棟紅色的菌液于所述平板上穿刺培養，27~30°C、 40W白識燈光照培養96~lOOh，培養物與光源距離15~18cm，得到菌落呈圓形，棟紅色，直徑為 ^4mm，作為純菌種。
[0011] 與現有技術相比，本發明有益效果在于:本發明提供了一種沼澤紅假單胞菌的培 養基，利用特殊的微量元素促生物母液，獲得高效降低水體COD(化學需氧量)的沼澤紅假單 胞菌，從而達到降低養殖池塘的使用量，進而改善養殖環境，降低養殖成本的目的。經本發 明培養基分離的菌種作用，水體COD的降低率可達到70.41%。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明，但實施例并不對本發明做任何 形式的限定。除非特別說明，本發明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規試劑、方法 和設備。
[0013] 實施例1 富集培養基：NH4SO4 lg，MgCl2 0.2g，化HC〇3 5g，K2HP〇4 0.5g，化C1 2g，酵母膏 0.8邑， 微量元素促生物母液40ml，水1升，pH 7.1。
[0014] 分離培養基：NH4SO4 lg，MgCl2 0.2g，乙酸鋼 3g，化肥〇3 2.8g，K2HP〇4 0.5g，NaCl 1.9g，酵母膏0.4g，微量元素促生物母液19ml，水1升，pH 7.1;分離培養基的配方中加 入19克瓊脂。
[0015] 其中，微量元素促生物母液:化2邸TA 500mg，FeS〇4.7出0 200mg，ZnS〇4.7出0 lOmg， MnS〇4.4出0 2mg，H3B〇3 50mg，CoCl2.2出0 20mg，NiCl2.6出0 7mg，CuCl2.6出0 0.5mg， Na2Mo04.2出0 4mg，CaCl2 200mg，將所有成份溶解在1000ml水中，pH4.4，過濾除菌。
[0016] 利用上述培養基分離沼澤紅假單胞菌： S1.沼澤紅假單胞菌的富集培養:將郵塘黑色底泥20g和郵塘水30ml放入50ml的磨口玻 璃瓶中，黑色底泥放底層，加入富集培養基，于27°C，40W白識燈，培養物與燈距15CM光照培 養，在Ξ天內可見到液體培養基里和渺泥曝光的一側呈現微紅生長物，吸取1 ml微紅培養 物接種于第二瓶富集培養基中，培養70h。
[0017] S2.沼澤紅假單胞菌的分離培養:用平板傾注法厭氧分離;將所述的分離培養基制 成平板放入干燥器中，在平板底部添加焦性沒食子酸和碳酸鋼混合物250克，用真空累排除 空氣，再充入氮氣，取S1得到的呈棟紅色的菌液于所述平板上穿刺培養，27°C、40W白識燈光 照培養96h，培養物與光源距離15cm，得到菌落呈圓形，棟紅色，直徑約為1mm，作為純菌種。 [001引 實施例2 富集培養基:NH4SO4 l.lg，MgCl2 0.3g，Na肥03 5.1g，K2HP04 0.6g，化C1 2.1g，酵母膏 0.9g，微量元素促生物母液41ml，水1升，pH 7.2。
[0019]分離培養基：NH4SO4 l.lg，MgCl2 0.3g，乙酸鋼 3.1g，化肥〇3 2.9g，K2HPO4 0.6g， 化Cl 2.Og，酵母膏0.5g，微量元素促生物母液20ml，水1升，pH 7.23;分離培養基的配 方中加入20克瓊脂。
[0020] 其中，微量元素促生物母液:化2邸TA 501mg，FeS〇4.7出0 201mg，ZnS〇4.7出0 llmg， MnS〇4.4此0 2.1mg，曲B03 51mg，CoCl2.2出0 21mg，NiCl2.6出0 7.13mg，CuCl2.6出0 0.68mg， 船2]?〇04.2出0 4.13111邑，〔曰(：12 201111邑，將所有成份溶解在10001111水中，口!14.5，過濾除菌。
[0021 ]利用上述培養基分離沼澤紅假單胞菌： S1.沼澤紅假單胞菌的富集培養:將郵塘黑色底泥21g和郵塘水31ml放入50ml的磨口玻 璃瓶中，黑色底泥放底層，加入富集培養基，于28°C，40W白識燈，培養物與燈距16 cm光照培 養，在Ξ天內可見到液體培養基里和渺泥曝光的一側呈現微紅生長物，吸取1.1 ml微紅培 養物接種于第二瓶富集培養基中，培養7化。
[0022] S2.沼澤紅假單胞菌的分離培養:用平板傾注法厭氧分離;將所述的分離培養基制 成平板放入干燥器中，在平板底部添加焦性沒食子酸和碳酸鋼混合物251.3克，用真空累排 除空氣，再充入氮氣，取S1得到的呈棟紅色的菌液于所述平板上穿刺培養，28°C、40W白識燈 光照培養97h，培養物與光源距離16cm，得到菌落呈圓形，棟紅色，直徑約為2mm，作為純菌 種。
[0023] 實施例3 富集培養基:畑45〇4 1.45邑，]\%(：12〇.35邑，化肥〇 3 5.25邑，1(2冊〇4〇.7邑，船(：12.2邑，酵 母膏l.Og，微量元素促生物母液42ml，水1升，pH 7.21。
[0024] 分離培養基：NH4SO4 1.2g，MgCl2 0.4g，乙酸鋼 3.2g，化HC03 2.9g，K2HP〇4 0.7g， 化Cl 2.Ig，酵母膏0.6g，微量元素促生物母液21ml，水1升，pH 7.25;分離培養基的配 方中加入21