一種胸腺肽α1脫鹽的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及胸腺膚α1脫鹽的方法，尤其是設及一種批量化產業化胸腺膚α1脫 鹽的方法。
【背景技術】
[0002] 胸腺膚是胸腺分泌的具有生物活性的多膚的混和物，是一種免疫增強劑。在機體 的免疫系統、神經內分泌系統、生殖系統中起到重要的調節作用。它能夠改善機體的免疫狀 態，協調內分泌，提高機體對細菌病毒感染的抵抗力。胸腺膚已經用于多種疾病的輔助治 療，療效顯著，在飼料中添加亦能起到促生長作用。胸腺膚含有的多種多膚均具有一定的藥 效，其中一些已經用于疾病的治療。
[0003] 胸腺膚α1是一種治療慢性乙型肝炎和增強免疫系統反應性的多膚類藥物。多項 體外試驗顯示，該膚通過刺激外周血液淋己細胞絲裂原來促進Τ淋己細胞的成熟，增加抗 原或絲裂原激活后Τ細胞分泌的干擾素α、干擾素丫W及白介素2、白介素3等淋己因子 水平，同時增加Τ細胞表面淋己因子受體水平。該膚還可通過對CD4細胞的激活，增強異體 和自體的人類混合淋己細胞反應。該膚可能增加前ΝΚ細胞的聚集，而干擾素可使其細胞毒 性增強。體內試驗顯示，該膚可W提高經刀豆蛋白A激活后小鼠淋己細胞白介素2受體的 表達水平，同時提高白介素2的分泌水平。
[0004] 多膚在合成、裂解及純化的過程中，會使用大量的TFA(Ξ氣乙酸）、醋酸、等，從而 引入了大量對人體有害的酸根離子，特別是TFA酸根，在純化后干燥前必須去除運些有害 的酸根離子。目前使用Se地adexG25(葡聚糖凝膠G25)柱或者使用離子交換樹脂（專利 號200910304817. 7)進行脫鹽的方法，不但耗時長，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量 小，工作效率低，重現性比較差，不適合于大規模工業生產。

【發明內容】
陽0化]本發明的目的在于提供一條適于大規模工業化胸腺膚α1脫鹽的方法，主要解決 使用離子交換樹脂進行脫鹽存在的耗時長，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作 效率低，重現性比較差，不適合于大規模工業生產的技術問題。
[0006] 為實現上述目的，本發明的技術方案如下：一種純化胸腺膚α1的方法，包括如下 步驟： 1)將胸腺膚α1溶液W0. 45μm濾膜過濾，調節抑為6-8 ; 2 )固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采 用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的膚溶液； 3)將最終收集的膚溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品膚。
[0007] 優選的方案是：所述B相的甲醇溶液為色譜純。所述色譜甲醇溶液的濃度為 20-60%，檢測波長為220皿。
[0008] 優選的方案是：所述的A相為純水。
[0009] 本發明的有益技術效果：本發明提供了一種胸腺膚α 1脫鹽的工藝，采用HPLC法 去除胸腺膚α1中的有害酸根離子。利用色譜原理對酸根離子不能吸附而能吸附膚類物質 的特點進行離子交換，從而達到有效去除酸根離子的目的。使用HPLC法脫鹽，生產成本低， 工藝簡單，環境污染低，便于工業化實施。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1 1.樣品處理：稱取5g胸腺膚α1溶解后，溶液調節抑值為7,用孔徑為0.45um濾膜過 濾后收集濾液。
[0011] 2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為： 5cmX25cm.流動相：A相：，水溶液巧相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。檢測波長：220皿。 濃度梯度：B% :20-60%，30-50min。
[0012] 過程：將色譜柱用質量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的 峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[0013]3.將轉鹽后所得的所有膚溶液，進行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率88. 2%，含鹽0. 44%。
[0014] 實施例2 1.樣品處理：稱取40g胸腺膚α1溶解后，溶液調節抑值為8,用孔徑為0. 45um濾膜 過濾后收集濾液。 陽0巧]2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為： 10cmX25cm.流動相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：180-200ml/min。檢測波長： 220nm。濃度梯度：B%:20-60%，30-50min。
[0016] 過程：將色譜柱用質量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的 峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[0017] 3.將轉鹽后所得的所有膚溶液，進行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率90. 4%，含鹽0. 36%。 陽〇1引 實施例3 1.樣品處理：定量胸腺膚α1純化后溶液含量為5. 5g，溶液調節抑值為6. 5,用孔徑 為0. 45um濾膜過濾后收集濾液。
[0019] 2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為： 5cmX25cm.流動相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。檢測波長：220皿。 濃度梯度：B% :20-60%，30-50min。
[0020] 過程：將色譜柱用質量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，。線性梯度洗脫，收集目 的峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[0021] 3.將轉鹽后所得的所有膚溶液，進行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率89. 3%，含鹽0. 26%。 陽0巧 實施例4 1.樣品處理：定量胸腺膚α1純化后溶液含量為42g，溶液調節抑值為7. 5,用孔徑為 0. 45um濾膜過濾后收集濾液。 陽02引 2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為： 10cmX25cm.流動相：A相：純水；B相：色譜純甲醇溶液。流速：180-200ml/min。檢測波長： 220nm。濃度梯度：B%:20-60%，30-50min。
[0024]過程：將色譜柱用質量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的 峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[00巧]3.將轉鹽后所得的所有膚溶液，進行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率91. 2%，含鹽0. 23%。
【主權項】
1. 一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是包括如下步驟： 1) 將胸腺肽α1溶液以0. 45μm濾膜過濾，調節pH為6-8 ; 2) 固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采 用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的肽溶液； 3) 將最終收集的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。2. 根據權利要求1所述一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是：A相為純水，B相為色 譜純甲醇溶液。3. 根據權利要求1所述一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是：所述HPLC法脫鹽，B相 的濃度梯度為20-60%，檢測波長為220nm。
【專利摘要】本發明公開了一種胸腺肽α1利用反相高效液相色譜脫鹽的方法，主要解決使用離子交換樹脂進行脫鹽存在的耗時長，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作效率低，重現性比較差，不適合于大規模工業生產的技術問題。本發明技術方案包括如下步驟：1）將胸腺肽α1純化后的溶液調節pH為6-8，以0.45μm濾膜過濾后待用，以固定相為十八烷基鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，進行梯度洗脫純化，收集目的峰值的肽溶液；將最終的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。本發明用于批量化產業化胸腺肽α1脫鹽。
【IPC分類】C07K1/04, C07K14/575, C07K1/34
【公開號】CN105254746
【申請號】CN201510675097
【發明人】徐紅巖, 秦敬國
【申請人】吉爾生化（上海）有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年10月19日