微生物快速檢測多環測試片、無菌培養基及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種微生物快速檢測多環測試片、測試片中包含的無菌培養基，并設 及無菌培養基的制備方法，屬于微生物檢驗技術領域。
【背景技術】
[0002] 快速測試片是近年來發展起來的一種微生物快速檢測方法，W濾紙為載體和W Petrifilm為載體的測試片己經得到眾多檢驗部口的認可。W濾紙為載體的測試片由于培 養基與載體溶為一體，生長于濾紙和底板之間的微生物不方便挑取菌落進行進一步的分離 鑒定。W化trifilm為載體的測試片其圓形培養區邊緣及邊緣W外的菌落由于存在空氣中 的菌在一定培養條件下帶入的可能，在計數時造成菌落計數上的不準確。而化trifilm其 培養基與載體測試片的結合靠膠粘劑，對微生物的生長會有一定影響。鑒于W上缺陷，對快 速測試片改進的研究也日益受到本領域的重視。 陽00引公開號CN101497914A的發明《一種快速檢測微生物的測試片及其制備方法和應 用》公開了一種快速測定微生物的測試片及其制備方法和應用，該測試片包括底板、中間縷 空的膠片和塑料膜，中間縷空的膠片的底面與底板粘合，膠片中間縷空部分形成凹槽培養 區，所述凹槽培養區內置有顯色培養基；所述塑料膜的底面粘合有冷水可凝的凝膠劑，所述 塑料膜的底面與膠片的上表面在一側邊緣粘合。本發明測試片上下層粘合后福照滅菌包裝 備用。本發明所述測試片能應用于菌落總數、大腸桿菌、大腸菌群、沙口氏菌、金黃色葡萄球 菌、副溶血性弧菌、銅綠假單胞菌等食源性致病微生物檢測，操作簡單，攜帶方便，測試時間 短、結果準確、可雙面數菌。
[0004] 授權公告號CN203728842U的實用新型《微生物檢測盒》公開的微生物檢測盒， 其包括上模板W及下模板，所述下模板設置有一凸臺，所述凸臺內設置有安置槽，所述安置 槽內為含有吸水凝膠的選擇性顯色培養基層或者從下往上依次為含有吸水凝膠的選擇性 顯色培養基層和吸水濾紙。該實用新型通過在下模板設置安置槽，將含有吸水凝膠的選擇 性顯色培養基層或者含有吸水凝膠的選擇性顯色培養基層和吸水濾紙放置在安置槽，經脫 水、滅菌處理后，往安置槽內滴加ImL水樣，水樣迅速被安置槽內含有吸水凝膠的選擇性顯 色培養基層或者含有吸水凝膠的選擇性顯色培養基層和吸水濾紙吸收，培養后即可顯現出 特有的菌落特征如顏色、暈環等，方便直接計數或自動計數儀計數，開展微生物學檢驗工 作。 陽0化]上述發明創造解決了一定的問題，但也存在一定缺陷，或者不利于培養基水分的 保持，或者上蓋下蓋結合過于嚴密，未考慮到微生物對氧氣的需求，或者雖然考慮了微生 物對氧氣需求的問題，但沒有消除空氣中浮游菌對檢測結果的影響，或者含有膠粘劑的成 分，一定程度影響微生物生長，或者培養基與測試片的結合不夠牢固，或者有濾紙或無紡布 等結構，不利于計數W及后續挑取菌落進行進一步鑒定。
[0006]同時，傳統的微生物培養基多為粉末或顆粒狀，也有即時可用的培養基。粉末狀在 使用過程中有粉塵，吸入會危害使用人員的身體健康。粉末及顆粒培養基在使用時都需要 提前配制，消毒滅菌等準備工作。而即時可用的培養基分為即時可用的液體增菌液和即時 可用的瓊脂平板，瓊脂斜面等，存在運輸不便，使用成本高的問題。且現有的培養基多含有 瓊脂類物質，而目前測試片中多使用吸水凝膠或冷水可凝膠，也有配合吸水濾紙使用的，在 使用時，如上述公開的專利所述，滴加水樣，使被凝膠或吸水濾紙吸收，即用于培養，易造成 培養基成分與水混合不夠充分，營養不勻，因此研制一種對檢測片來說更適用的培養基是 本領域丞待解決的問題。

【發明內容】

[0007] 針對上述問題，本發明提供一種無濾紙或無紡布、有供氣通道、能夠有效沉降空氣 中浮游菌，結構簡單，使用簡便，適用于多種微生物檢測，可完全替代傳統平板，用于微生物 快速檢測的一次性多環測試片。
[0008] 為實現上述目的，本發明采用了W下技術方案：
[0009] 一種微生物快速檢測測試片，包括底板，上蓋及無菌培養基；所述底板及上蓋為形 狀相適應，可上下咬合的多環齒狀結構，所述多環齒狀結構為上下起伏的連續結構；底板的 多環齒狀結構中部凹陷形成培養室，為方便敘述，將培養室分作底面和側面；相應地，上蓋 的多環齒狀結構中部凸起形成培養室蓋；培養室底面與側面的角度為30-80°，側面最高 點垂直于底面的高度不小于0. 3cm ;所述培養室用于放置無菌培養基；所述無菌培養基有 兩種形式，一種為凝膠分離式無菌培養基，一種為靠靜電吸附于培養室底面內表面的靜電 吸附式無菌培養基；所述凝膠分離式無菌培養基包括無菌高濃度液體培養基和冷水可凝 膠，無菌高濃度液體培養基獨立包裝，與冷水可凝膠使用前隔絕，使用時混合；所述凝膠分 離式無菌培養基的兩個組成部分，可W放置在培養室內也可W不放置在培養室內，而單獨 無菌包裝；使用時，將無菌高濃度液體培養基和冷水可凝膠在培養室中混合。所述靜電吸附 式無菌培養基為含有冷水可凝膠的培養基干粉或顆粒，靠靜電吸附于培養室底面，使用時 加無菌水溶解混合。
[0010] 優選的，所述底板及上蓋橫截面為同屯、的圓形或矩形；
[0011] 所述多環齒狀結構的橫截面形狀為圓形或矩形；
[0012] 所述多環齒狀結構的高度為0. 4cm到Icm ;
[0013] 所述培養室面積為25-180cm2;容納培養基的量優選0. 04-0. 25mL/cm2;
[0014] 所述多環齒狀結構不少于1環；
[0015] 所述多環齒狀結構優選為2環；
[0016] 底板底面與側面的角度可W保證無菌培養基與底板緊密結合，不會在打開該多環 測試片時從底板上脫落； 陽017]冷水可凝膠均勻涂抹于培養室的中央，或制成薄膜或其他形式置于培養室中，也 可置于培養室外，單獨包裝；
[0018] 冷水可凝膠原料包括結冷膠，卡拉膠，瓜爾膠，黃原膠，刺槐豆膠，鼠李聚糖膠中至 少一種.
[0019] 無菌高濃度液體培養基為無凝膠及瓊脂成分的無菌高濃度液體培養基或無菌高 濃度液體顯色培養基；
[0020]所述微生物快速檢測測試片的材質要求：透明，防水材料；
[0021] 培養室底面內表面優選為靜電吸附膜，靜電吸附膜優選為S層共擠PE靜電吸附 胺；
[0022] 所述底板與上蓋的結合方式可為一體、分體或黏合結構，例如底板及上蓋的一條 邊可通過壓敏膠粘合，形成可開合的結構；
[0023] 所述多環齒狀結構的縱截面可為相互配合的多個=角形，楠圓形，梯形或矩形的 整體或部分，也可為W上形狀整體或部分的任意組合；
[0024] 所述底板及上蓋厚度分別為0.1 mm-O. 6mm;微生物快速檢測測試片長度5-15畑1， 寬度 5-14cm。
[00巧]所述凝膠分離式無菌培養基中，冷水可凝膠與復原后無菌高濃度液體培養基的質 量體積比為：〇.〇〇5-15g : 1L;
[00%] 培養基為凝膠分離式培養基的微生物快速檢測多環測試片的使用方法，包括如下 步驟：
[0027] 取無菌高濃度液體培養基，按照濃縮倍數復原備用；取含有冷水可凝膠的測試片， 或將獨立包裝的冷水可凝膠先加入測試片，再加入復原后的無菌液體培養基Iml至20ml， 震蕩IOs使之與冷水可凝膠充分接觸溶解，放置3分鐘待液體培養基凝固后使用。
[0028] 培養基為靜電吸附式培養基的微生物快速檢測多環測試片的使用方法，包括如下 步驟：
[0029] 取含有培養基的測試片，培養基依靠靜電吸附于測試片培養室底面內表面，加入 無菌水Iml至20ml，震蕩IOs使培養基充分溶解，放置3分鐘待液體培養基凝固后使用。
[0030] 本發明同時提供一種凝膠分離式無菌培養基，所述凝膠分離式無菌培養基包括使 用前隔絕的無菌高濃度液體培養基和冷水可凝膠，冷水可凝膠與復原后無菌高濃度液體培 養基的質量體積比為：0.005-15g : 1L;凝膠分離式無菌培養基可用于微生物檢測片，也可 用于快速配制平板或增菌液；
[0031] 冷水可凝膠均勻涂抹于培養室的中央，或制成冷水可凝膠膜或其他形式置于培養 室中，使用之前與無菌高濃度液體培養基隔絕；
[0032] 優選的，冷水可凝膠由如下質量份數的原料組成：結冷膠：瓜爾膠：黃原膠為 1:4:5;
[0033] 所述冷水可凝膠還可W包括冷水可凝膠助溶劑：為加快冷水可凝膠的溶解及防止 在與無菌高濃度液體培養基混勻過程中結塊，在冷水可凝膠中可加入一定量不影響微生物 生長的助溶劑；助溶劑為二氧化鐵表面活性劑、二氧化娃表面活性劑、Bola表面活性劑中 至少一種，加入比例W冷水可凝膠計：〇. 〇〇〇5wt% -0. 5wt% ;
[0034] 冷水可凝膠可由本領域公知的方法制備，優選的，冷水可凝膠由W下方法制備：
[0035] 多環測試片培養室底面培養室底面內表面采用靜電吸附膜制作或覆蓋有靜電吸 附膜，W培養室面積為SOcm2為例，稱取0. 2g冷水可凝膠粉，冷水可凝膠粉的成分為瓜爾膠 0.〇8g，黃原膠0.1 g,刺槐