一種以曼地亞紅豆杉枝葉為原料制備高純度10-脫乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種以曼地亞紅豆杉枝葉為原料制備高純度10-脫乙酰基巴卡亭III 的方法。
【背景技術】
[0002] 10-脫乙酰基巴卡亭III是從紅豆杉中分離出的一種天然化合物，用于人工半合成 紫杉醇、多西紫杉醇及卡巴他賽等抗癌藥物的前體產品。該化合物主要存在于歐洲等國外 紅豆杉品種中，其枝葉中10-脫乙酰基巴卡亭III的含量高達0. 1~0. 18%，而國內原產紅豆 杉品種中10-脫乙酰基巴卡亭III的含量均低于國外紅豆杉中的含量，造成我國需大量依賴 進口國外紅豆杉枝葉用于制備高純度的10-脫乙酰基巴卡亭III的不利現狀。
[0003] 1996年我國引進了曼地亞紅豆杉（Taxus media)，該紅豆杉為一種天然雜交品種， 其父本為歐洲紅豆杉（Taxus baccata)、母本為東北紅豆杉（Taxus cuspidata)。經十余年 的試種測定、馴化、選擇和培育，現已經篩選出了 10-脫乙酰基巴卡亭III等有效成分與國外 紅豆杉含量相當的曼地亞紅豆杉品系，填補了國內制備高純度10-脫乙酰基巴卡亭III需要 進口國外紅豆杉作為原材料的空白。
[0004] CN102827106A公開了一種10-脫乙酰基巴卡亭III的提取純化方法，該方法以紅豆 杉枝葉為原料，使用有機溶劑提取，并經二氯甲烷或乙酸乙脂萃取，活性炭脫色、減壓濃縮 得到粗品，該粗品經兩次結晶與硅膠色譜層析，再經重結晶獲得10-脫乙酰基巴卡亭III純 品。該方法工藝步驟雖然能有效提取制備高純度的10-脫乙酰基巴卡亭III，但活性炭脫色 會吸附一定的10-脫乙酰基巴卡亭III，造成產品的丟失，硅膠層析時需要大量的有機溶劑 進行洗滌與洗脫，在洗滌與洗脫過程中不僅會使部分產品流失或未徹底洗脫，同時會造成 有機溶劑蒸發損耗。此外，工藝繁鎖，工人不易準確掌握，工藝時間長，生產成本較高。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種改進的以曼地亞紅豆杉枝葉為 原材料制備高純度10-脫乙酰基巴卡亭III的方法，以降低生產成本、簡化工藝、易于操控， 并減少環境污染。
[0006] 本發明所述10-脫乙酰基巴卡亭III的結構式如下：
[0007]
[0008] 本發明所述以曼地亞紅豆杉枝葉為原料制備高純度10-脫乙酰基巴卡亭III的方 法，工藝步驟如下：
[0009] (1)粗提
[0010] 將曼地亞紅豆杉枝葉粉碎物裝入提取罐中，用質量濃度40~60%的醇溶液浸泡 8~12小時得浸泡混合料，然后將該浸泡混合料滲漉提取10~20小時并收集浸出液，滲 漉提取過程中，應向提取罐中添加質量濃度40~60%的醇溶液，保證提取罐中的曼地亞紅 豆杉枝葉粉碎物被醇溶液淹沒；浸泡時，所述曼地亞紅豆杉枝葉粉碎物的重量與醇溶液的 體積之比為1: (3~4)，曼地亞紅豆杉枝葉粉碎物的重量單位為公斤，醇溶液的體積單位為 升；
[0011] 滲漉提取完成后，用自來水對浸泡混合料再次滲漉置換出殘存在渣中的醇溶液， 該醇溶液可用于配制浸泡和滲漉提取所用的乙醇溶液，再次滲漉時，自來水的體積與曼地 亞紅豆杉枝葉粉碎物的重量之比為（3~4) : 1 ;
[0012] (2)沉降
[0013] 將步驟（1)收集到的浸出液在真空度為-0? 06Mpa~-0? 08Mpa、溫度為60°C~ 70°C下減壓濃縮回收盡醇后靜置12~20小時，然后取出上清液并將沉淀用溫度為70°C~ 80°C的自來水攪拌洗滌2~3次，將每次洗滌所得洗液與所述上清液合并得藥液；
[0014] ⑶吸附
[0015] 將步驟（2)得到的藥液上樣到大孔樹脂柱上，上樣過程中，包括10-脫乙酰基 巴卡亭III在內的物質被大孔樹脂吸附，不被吸附的物質隨水從大孔樹脂柱流出，當所述 藥液上樣完畢后，用自來水洗滌大孔樹脂柱上的雜質，洗滌至大孔樹脂柱的流出液呈 清亮透明態即可，然后用質量濃度40~70 %的醇溶液進行洗脫并收集洗脫液，再將洗 脫液在真空度為-〇. 〇6Mpa~-0. 08Mpa、溫度為60 °C~70 °C下減壓濃縮回收盡醇后， 于-0. 06Mpa~-0.0 SMpa真空度、溫度為60°C~70°C下濃縮至干得粗品I ;該步驟中的廢 水用于曼地亞紅豆杉基地的施水與施肥；
[0016] ⑷溶解
[0017] 將步驟⑶得到的粗品I加入到丙酮中攪拌溶解，然后過濾得丙酮液和濾渣，將 濾渣再用丙酮攪拌溶解1~3次并過濾，合并所有丙酮液，并將丙酮液在70°C~80°C下濃 縮回收丙酮后得干品；
[0018] 將所述干品加入到二氯甲烷中攪拌溶解，然后過濾得二氯甲烷液和濾渣，將濾渣 再用二氯甲烷攪拌溶解1~3次并過濾，合并所有二氯甲烷液，并將二氯甲烷液在70°C~ 80°C下濃縮回收二氯甲烷后得粗品II ;
[0019] (5)結晶
[0020] 將步驟（4)得到的粗品II加入乙腈中，在攪拌下加熱至50°C~60°C并保持該溫 度，當粗品II基本溶解后停止加熱和攪拌，自然冷卻12~24小時，再通過離心、真空干燥得 初次結晶品；
[0021] (6)重結晶
[0022] 將步驟（5)所得初次結晶品用乙醇結晶一次、再用丙酮結晶一次，或用丙酮結晶 一次、再用乙醇結晶一次，然后用液相色譜法對經上述兩次結晶后所得晶體進行檢測，根據 檢測結果用乙醇或丙酮再重復結晶2~3次，即得純度高于98%的10-脫乙酰基巴卡亭III。
[0023] 用乙醇重結晶的作用主要是去除液相色譜圖中10-脫乙酰基巴卡亭III峰左側的 雜質，用丙酮重結晶的作用主要是去除液相色譜圖中10-脫乙酰基巴卡亭III峰右側的雜 質。
[0024] 上述方法，步驟（1)和步驟（3)中所述醇溶液為甲醇溶液或乙醇溶液。
[0025] 上述方法，步驟（1)中滲漉提取時浸出液的流速控制在60~1000L/h。
[0026] 上述方法，步驟（3)中所述大孔樹脂為非極性樹脂或弱極性樹脂，非極性樹脂為 HP-20型樹脂、HPD-100型樹脂、HPD-300型樹脂或D-101型樹脂，弱極性樹脂為AB-8型樹 月旨、DA-201型樹脂或HPD-400型樹脂，它們均為市售商品；大孔樹脂用量為曼地亞紅豆杉枝 葉粉碎物重量的〇. 5~1倍，醇溶液用量為大孔樹脂柱體積的5~10倍，藥液通過大孔樹 脂柱的流速為lBV/h~2BV/h。
[0027]上述方法，步驟（4)中粗品I的重量與丙酮的體積之比為1: (6~10)，各次濾渣的 重量與丙酮的體積之比為1: (6~10)，粗品I的重量單位為公斤，濾渣的重量單位為公斤， 丙酮的體積單位為升；干品的重量與二氯甲烷的體積之比為1: (6~10)，各次濾渣的重量 與二氯甲烷的體積之比為1: (6~10)，干品的重量單位為公斤，濾渣的重量單位為公斤，二 氯甲烷的體積單位為升。
[0028] 上述方法，步驟（5)中粗品II的重量與乙腈的體積之比為1: (2~3)，粗品II的重 量單位為公斤，乙腈的體積單位為升。
[0029] 上述方法，步驟（6)中重結晶的操作是：將晶體加入丙酮或乙醇中，在攪拌下加熱 到40°C~70°C并保持該溫度，當丙酮或乙醇中的晶體完全溶解后停止加熱和攪拌，靜置到 室溫后過濾，將濾液在真空度-0. 〇6Mpa~-0. 08Mpa、溫度60°C~70°C下減壓或常壓濃縮回 收丙酮或乙醇至有晶體析出為止，然后在室溫、常壓下自然結晶6~12小時，繼后過濾并將 所得晶體真空干燥。
[0030] 與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
[0031] 1、由于本發明所述方法中采用了中藥提取方法中的醇溶液滲漉提取，提取時溶劑 由于重力作用而向下流動，上層流下的浸出液置換下層的溶劑，不斷造成濃度差，滲漉法相 當于無數次浸漬，是一個動態過程，可連續操作，加之醇溶液對10-脫乙酰基巴卡亭III的溶 解性好，浸出效率高；此外，因室溫提取，無需加熱，因而保證了提取液成分的穩定，同時降 低了能耗。
[0032] 2、本發明采用大孔樹脂吸附層析代替萃取，可操作性強，克服了萃取時不分層、收 率低，有機溶劑損耗大等不足；同時將所產生的廢水用于曼地亞紅豆杉基地的施水與施肥， 既有利于環境保護，又變廢為寶。
[0033] 3、本發明采用不同單一溶劑對粗品進行溶解，除掉了大量的不溶雜質，再經多次 結晶最終得到高純度的10-脫乙酰基巴卡亭III，該方法代替了現有技術中硅膠色譜層析、 再次大孔樹脂吸附層析以及反相樹脂層析的工藝步驟，工藝簡單，成本低，操作易于掌握。
[0034] 4、乙腈結晶時總有一部分產品會進入乙腈溶液中，且產品雜質多，進入乙腈中的 產品亦多，因此應在保證粗品能被乙腈全部溶解的前題下應盡量少加乙腈，本發明采用溶 解法先去掉粗品中大量的雜質，提高產品的含量，再用乙腈結晶即達到了此目的，提高了產 品收率。而這步工藝是現有技術中所沒有的。
【附圖說明】
[0035] 圖1為實施例3制得的純度為99. 4%的10-脫乙酰基巴卡亭III液相色譜圖。
[0036] 圖2為實施例1制得的純度為98. 2%的10-脫乙酰基巴卡亭III液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0037] 以下通過實施例對本發明所述以曼地亞紅豆杉枝葉為原材料制備高純度10-脫 乙酰基巴卡亭III的方法作進一步說明。
[0038] 下述實施例中，所使用的D-101型、AB-8型、HP-20型大孔樹脂，西安藍曉科技有限 公司公司生產，凈品級。所使用的甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙腈等化學試劑均為分析純。 所使用的高效液相色譜儀型號為LC-10AT，日本島津公司生產。
[0039] 實施例1
[0040] 本實施例工藝步驟如下：
[0041] ⑴粗提