沙門氏菌的高專一性檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及沙門氏菌的高專一性檢測方法。
【背景技術】
[0002] 沙門氏菌由于其很強的致病性而被關注，沙門氏菌能引起腹瀉，腹痛，發燒，嘔吐， 甚至死亡。而預防食品中生物性污染的關鍵在于對食源性致病菌的監測能力和水平。近十 年來，研發了一種實時檢測沙門氏菌的磁致伸縮生物傳感器。其檢測機理是當沙門氏菌吸 附在磁致伸縮生物傳感器上時，生物傳感器重量增加，導致其共振頻率發生改變，從而根據 檢測的共振頻率改變量確認待測物質中沙門氏菌的濃度。
[0003] 然而，當其他細菌或雜質吸附到生物傳感器上時，也會同樣引起生物傳感器重量 增加，使其共振頻率發生改變，由此產生檢測誤差，導致生物傳感器檢測精確度降低。因此， 有效降低磁致伸縮生物傳感器非專一性吸附沙門氏菌是十分必要的。

【發明內容】

[0004] 本發明要解決的技術問題是：基于上述問題，本發明提供沙門氏菌的高專一性檢 測方法。
[0005] 本發明解決其技術問題所采用的一個技術方案是：沙門氏菌的高專一性檢測方 法，包括以下步驟：
[0006] (1)制備生物傳感器：合金切割，清洗，真空退火，合金表面依次涂覆防腐蝕層和 生物活性層，制得磁彈性共振生物傳感器；
[0007] (2)生物傳感器表面沉積E2噬菌體：把生物傳感器浸入E2噬菌體菌懸液中lh，使 噬菌體均勻地吸附在生物傳感器表面；
[0008] (3)生物傳感器表面沉積阻滯劑：把附有噬菌體的生物傳感器浸入糖蛋白緩沖液 中2h，獲得測試生物傳感器；
[0009] (4)檢測待測樣品中沙門氏菌的濃度：把測試生物傳感器浸泡在含有沙門氏菌的 待測樣品溶液中30min，取出后用去離子水清洗測試生物傳感器2次，檢測測試生物傳感器 表面沙門氏菌吸附情況。
[0010] 進一步地，步驟（2)中E2噬菌體菌懸液的E2噬菌體濃度為1X103~1X10 9vir/ mL〇
[0011] 進一步地，步驟（3)中糖蛋白緩沖液的溶劑為TBS。
[0012] 本發明的有益效果是：使用糖蛋白緩沖液作為阻滯劑來有效降低生物傳感器非專 一性吸附沙門氏菌；采用的技術方法是將由蛋白質大分子構成的阻滯劑覆蓋在傳感器表面 中沒有固定噬菌體的局部，從而阻止其他細菌產生的非專一性吸附，由此避免因非專一性 結合導致的檢測誤差，保障生物傳感器的檢測精度。
【附圖說明】
[0013] 下面結合附圖對本發明進一步說明。
[0014] 圖1是在濃度1.OX106CFU/mL的沙門氏菌溶液中浸泡30分鐘后，沒有使用糖蛋 白阻滯劑的測試生物傳感器表面吸附細菌情況；
[0015] 圖2是在濃度1. 0X106CFU/mL的沙門氏菌溶液中浸泡30分鐘后，使用糖蛋白阻 滯劑的測試生物傳感器表面吸附細菌情況；
[0016] 圖3是在濃度1.OX106CFU/mL的沙門氏菌溶液中浸泡30分鐘后，沒有使用糖蛋 白阻滯劑的控制生物傳感器表面吸附細菌情況；
[0017] 圖4是在濃度1.OX106CFU/mL的沙門氏菌溶液中浸泡30分鐘后，使用糖蛋白阻 滯劑的控制生物傳感器表面吸附細菌情況。
【具體實施方式】
[0018] 現在結合具體實施例對本發明作進一步說明，以下實施例旨在說明本發明而不是 對本發明的進一步限定。
[0019] 實施例
[0020] (1)使用METGLAS? 2826MB合金作為磁致伸縮生物傳感器平臺，使用微切割鋸把 合金制成ImmXO. 2mmX0. 028mm大小，使用丙酮進行超聲清洗，風干。在220°C下真空退火 2h，以消除拋光和切割過程中的殘余應力及缺陷。在合金表面依次濺射涂覆厚度90nm的Cr 層和厚度150nm的Au層，以得到防腐蝕層和生物活性層。
[0021] (2)把磁彈性共振傳感器浸入5X10nvir/mLE2噬菌體菌懸液中lh，菌懸液溶劑 為TBS，噬菌體均勻地物理吸附在生物傳感器表面。
[0022] (3)把附有噬菌體的生物傳感器浸入作為阻滯劑的糖蛋白緩沖液中2h，獲得測試 生物傳感器。
[0023] (4)配制濃度為1X106CFU/mL沙門氏菌溶液lmL，把測試生物傳感器浸泡在沙門 氏菌溶液中30min，取出后用去離子水清洗測試生物傳感器2次。
[0024] 測試結果如圖1、2示，圖1是光學顯微鏡下沒有使用阻滯劑的測試生物傳感器表 面吸附沙門氏菌的情況，圖2是光學顯微鏡下使用阻滯劑的測試生物傳感器表面吸附沙門 氏菌的情況。由此可知，使用糖蛋白的測試生物傳感器上的細菌明顯比不使用糖蛋白的測 試生物傳感器上的少，說明使用糖蛋白阻滯劑可有效得降低生物傳感器的非專一性細菌吸 附。
[0025] 對比例
[0026] (1)使用METGLAS? 2826MB合金作為磁致伸縮生物傳感器平臺，使用微切割鋸把 合金制成ImmXO. 2mmX0. 028mm大小，使用丙酮進行超聲清洗，風干。在220°C下真空退火 2h，以消除拋光和切割過程中的殘余應力及缺陷。在合金表面依次濺射涂覆厚度90nm的Cr 層和厚度150nm的Au層，以得到防腐蝕層和生物活性層。
[0027] (2)把生物傳感器浸入作為阻滯劑的糖蛋白緩沖液中2h，獲得控制生物傳感器。
[0028] (3)配制濃度為1X106CFU/mL沙門氏菌溶液lmL，把控制生物傳感器浸泡在沙門 氏菌溶液中30min，取出后用去離子水清洗控制生物傳感器2次。
[0029] 測試結果如圖3、4示，圖3是光學顯微鏡下沒有使用阻滯劑的控制生物傳感器表 面吸附沙門氏菌的情況，圖4是光學顯微鏡下使用阻滯劑的控制生物傳感器表面吸附沙門 氏菌的情況。由此可知，使用糖蛋白的控制生物傳感器上的細菌明顯比不使用糖蛋白的控 制生物傳感器上的少，說明使用糖蛋白阻滯劑可有效地降低生物傳感器的非專一性細菌吸 附。
[0030] 以上述依據本發明的理想實施例為啟示，通過上述的說明內容，相關工作人員完 全可以在不偏離本項發明技術思想的范圍內，進行多樣的變更以及修改。本項發明的技術 性范圍并不局限于說明書上的內容，必須要根據權利要求范圍來確定其技術性范圍。
【主權項】
1. 沙門氏菌的高專一性檢測方法，其特征是：包括以下步驟： (1) 制備生物傳感器：合金切割，清洗，真空退火，合金表面依次涂覆防腐蝕層和生物 活性層，制得磁彈性共振生物傳感器； (2) 生物傳感器表面沉積E2噬菌體：把生物傳感器浸入E2噬菌體菌懸液中lh，使噬菌 體均勻地吸附在生物傳感器表面； (3) 生物傳感器表面沉積阻滯劑：把附有噬菌體的生物傳感器浸入糖蛋白緩沖液中 2h，獲得測試生物傳感器； (4) 檢測待測樣品中沙門氏菌的濃度：把測試生物傳感器浸泡在含有沙門氏菌的待測 樣品溶液中30min，取出后用去離子水清洗測試生物傳感器2次，檢測測試生物傳感器表面 沙門氏菌吸附情況。
2. 根據權利要求1所述的沙門氏菌的高專一性檢測方法，其特征是：所述的步驟（2) 中E2噬菌體菌懸液的E2噬菌體濃度為IXIO3~IX10 9vir/mL。
3. 根據權利要求1所述的沙門氏菌的高專一性檢測方法，其特征是：所述的步驟（3) 中糖蛋白緩沖液的溶劑為TBS。
【專利摘要】本發明涉及沙門氏菌的高專一性檢測方法，包括以下步驟：制備生物傳感器、生物傳感器表面沉積E2噬菌體、生物傳感器表面沉積阻滯劑、檢測待測樣品中沙門氏菌的濃度。本發明的有益效果是：使用糖蛋白緩沖液作為阻滯劑來有效降低生物傳感器非專一性吸附沙門氏菌；采用的技術方法是將由蛋白質大分子構成的阻滯劑覆蓋在傳感器表面中沒有固定噬菌體的局部，從而阻止其他細菌產生的非專一性吸附，由此避免因非專一性結合導致的檢測誤差，保障生物傳感器的檢測精度。
【IPC分類】C12R1-92, C12Q1-10, C12R1-42, C12Q1-70
【公開號】CN104818343
【申請號】CN201510230811
【發明人】胡靜, 胡佳佳
【申請人】常州大學
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月7日