一種糞腸球菌瓊脂培養基及其應用
【專利說明】
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技術領域
本發明為微生物領域，特別涉及一種糞腸球菌瓊脂培養基及其應用。
[0002]
【背景技術】
微生物培養(microculture)是生物培養的中的一種。所培養的微生物主要有病毒、細菌、放線菌、真菌等。微生物培養需要用到培養基，根據微生物的不同種類和生活習性來配制特定的培養基。微生物培養成功的關鍵在于無菌操作，如果培養器具和培養基不能徹底滅菌、培養的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003]腸球菌(Enterococcus)屬腸球菌屬，是人類和動物腸道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發現，既往認為腸球菌是對人類無害的共棲菌，但近年研究已證實了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的重要院內感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內膜炎和腦膜炎等。
[0004]溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營養要求較高，普通培養基上生長不良，需補充血清、血液、腹水，大多數菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為37°C，在20-42°C能生長，最適pH為7.4-7.6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005]糞腸球菌，根據最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應用C多糖抗原，根據蘭氏(Lancefield)血清學分類,可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌(S.faecal is)、屎鏈球菌(S.faecium)和堅忍鏈球菌(S.durans)，后者有牛鏈球菌(S.bovis)和馬腸鏈球菌(S.equinus)。
[0006]其營養要求低，在普通營養瓊脂上也可生長。能在10°C或45°C pH 9.6或含6.5%NaCl肉湯培養基中生長，并能耐65°C 30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發酵山梨醇，不發酵阿拉伯糖。在簡單的培養基上生長不需葉酸。DNA-DNA雜交結果顯示，腸球菌與鏈球菌屬同源程度低，故有學者建議另立腸球菌屬，與人類有關者為糞腸球菌(E.faecalis)和屎腸球菌(E.faecium)。
[0007]培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養和鑒定。培養基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基)，較長時間的貯存，必須放在3?6°C的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管，現在均改制成粉末。
[0008]培養基根據化學分類為天然培養基、組合培養基和半組合培養基；根據物理分類為液體培養基、固定培養基和脫水培養基；根據微生物分類為選擇性培養基、鑒別培養基。

【發明內容】

[0009]本發明克服現有技術中的不足，提供一種糞腸球菌瓊脂培養基及其應用。
[0010]本發明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養組分的組合進行篩選，對培養基的PH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環境等物化因子進行了比較，研究出了本發明的培養基。
[0011]本發明所采用的技術方案為:
一種糞腸球菌瓊脂培養基，所述培養基的組分包括23.6g/L肉浸液肉湯、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麥芽糖、0.45g/L檸檬酸鐵銨、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L疊氮化鈉、0.2g/LTTC ,13.0 g/L 瓊脂，pH 值為 7.0-7.4。
[0012]在以上方案的基礎上，所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、月示胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。
[0013]本發明還公開了一種糞腸球菌瓊脂培養基的應用，用于糞腸球菌的選擇性分離。
[0014]月示胨和酵母浸粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；乳糖是大腸菌群可發酵的糖類；疊氮化鈉可抑制革蘭氏陰性菌；溴甲酚紫和TTC作為指示劑；瓊脂是培養基的凝固劑。
[0015]取本品70.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸5分鐘，冷至50°C左右，傾入無菌平皿，備用。
[0016]本發明的有益效果:
1、培養基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；
2、菌生長迅速，變異率低；
3、便于觀察，分析。
[0017]【具體實施方式】實施例1:
一種糞腸球菌瓊脂培養基，所述培養基的組分包括23.6g/L肉浸液肉湯、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麥芽糖、0.45g/L檸檬酸鐵銨、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L疊氮化鈉、0.2g/LTTC ,13.0 g/L 瓊脂，pH 值為 7.0-7.4。
[0018]所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、月示胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。
[0019]月示胨和酵母浸粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；乳糖是大腸菌群可發酵的糖類；疊氮化鈉可抑制革蘭氏陰性菌；溴甲酚紫和TTC作為指示劑；瓊脂是培養基的凝固劑。
[0020]取本品70.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸5分鐘，冷至50°C左右，傾入無菌平皿，備用。
【主權項】
1.一種糞腸球菌瓊脂培養基，其特征在于所述培養基的組分包括23.6g/L肉浸液肉湯、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麥芽糖、0.45g/L檸檬酸鐵銨、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L 疊氮化鈉、0.2g/LTTC ,13.0 g/L 瓊脂，pH 值為 7.0-7.4。
2.根據權利要求1所述的種糞腸球菌瓊脂培養基，其特征在于所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、月示胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。
3.一種根據權利要求1所述的糞腸球菌瓊脂培養基的應用，其特征在于用于糞腸球菌的選擇性分離。
【專利摘要】本發明為微生物領域，特別涉及一種糞腸球菌瓊脂培養基，所述培養基的組分包括23.6g/L肉浸液肉湯、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麥芽糖、0.45g/L檸檬酸鐵銨、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L疊氮化鈉、0.2g/LTTC、13.0g/L瓊脂，pH值為7.0-7.4。所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、月示胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發明培養基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【IPC分類】C12R1-01, C12N1-20
【公開號】CN104651254
【申請號】CN201310599778
【發明人】劉漢斌
【申請人】劉漢斌
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月25日