專利名稱：枸櫞酸鹽瓊脂培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種枸櫞酸鹽瓊脂培養基，其主要成分是枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、溴麝香草酚藍、小牛血清、瓊脂，經一定的工藝制成。用以鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽。利用生化反應試驗鑒別細菌的種類，其關鍵在于準確、快速、簡便。由于不同細菌具有其各自的獨特酶系統，因而在代謝過程中所產生的分解和合成的代謝產物也不同，這些分解或合成的代謝產物又各具有不同的生化特點，再利用其不同生化特點在相應的培養條件下所產生的生化反應，來進行細菌種類的鑒別，這是目前微生物實驗室最常用的手段。由于目前培養條件及指示劑的應用范圍所限，生化反應試驗中觀察細菌對有機酸鹽及銨鹽利用的鑒別培養基存在所需接種量大、培養時間長、指示劑變色不明顯、易出現假陽性或假陰性等問題。枸櫞酸鹽瓊脂培養基是觀察細菌對有機酸鹽及銨鹽利用的一綜合性培養基，用以鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽，從而進一步判斷細菌的種類及生化特點。隨著生物研究的進展，國內外對細菌鑒別的研究也在不斷的發展中。生物工作者一直希望能有一種能克服上述不足的鑒別培養基----枸櫞酸鹽瓊脂培養基。
背景技術：
本發明的目的在于提供一種能克服已有鑒別培養基不足的枸櫞酸鹽瓊脂培養基。與其它同類培養基相比具備下列特點所需接種量小，少量細菌即可出現產堿變色；指示劑變色快速明顯，24小時即可觀察結果；不易出現假陽性，僅限能利用枸櫞酸鈉的細菌能生長、變色；不易出現假陰性，能破壞標本中存在的抑菌物質，使細菌生長不受抑制；試驗陽性對照菌在該固體培養基中增菌繁殖迅速，并且產堿使培養基變色。

發明內容
本發明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種枸櫞酸鹽瓊脂培養基。
本發明選擇的配方如下(組分及其重量百分比％)枸櫞酸鈉(0.3-0.7)、氯化鈉(0.3-0.7)、硫酸鎂(0.01-0.03)、磷酸二氫鉀(0.08-0.12)、磷酸二氫銨(0.08-0.12)、溴麝香草酚藍(0.8-1.2)、小牛血清(2.5-3.0)、瓊脂(1.5-2.5)、蒸餾水加至100。
枸櫞酸鈉是培養基中碳的唯一來源，而磷酸二氫銨是培養基中氮的唯一來源。能利用枸櫞酸鈉為碳源的細菌在培養基上能生長，并且分解枸櫞酸鹽最后產生碳酸鹽，使培養基變為堿性，此時培養基中的溴麝香草酚藍指示劑由綠色變為深藍色。硫酸鎂能破壞標本中存在的四環素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；氯化鈉用于調整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調節pH。小牛血清、瓊脂是培養基中的營養和支持成分；試驗陽性對照菌在該固體培養基中增菌繁殖，并且產堿使培養基變色。
本發明產品的制備方法是1)、將枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、瓊脂按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至6.8，以絨布過濾；2)、再加入溴麝香草酚藍混勻，壓力蒸汽滅菌1.05kg15分鐘；3)、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝試管，每管約2ml，趁熱將含有培養基的滅菌試管傾斜一定角度，冷凝后制成斜面，待用。
本發明具有以下優點(1)所需接種量小，少量細菌即可出現產堿變色；(2)指示劑變色快速明顯，24小時即可觀察結果；(3)不易出現假陽性，僅限能利用枸櫞酸鈉的細菌能生長、變色；(4)不易出現假陰性，硫酸鎂能破壞標本中存在的四環素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；(5)試驗陽性對照菌在該固體培養基中增菌繁殖迅速，并且產堿使培養基變色。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明按照下表所列數據(重量百分比％)及其所述步驟進行配置配方一枸櫞酸鈉 0.3-0.7氯化鈉 0.3-0.7硫酸鎂 0.01-0.031％溴麝香草酚藍酒精溶液0.8-1.2磷酸二氫鉀 0.08-0.12磷酸二氫銨 0.08-0.12小牛血清 2.5-3.0瓊脂 1.5-2.5蒸餾水 加至100
配方二枸櫞酸鈉 0.3-0.6氯化鈉 0.3-0.6硫酸鎂 0.01-0.021％溴麝香草酚藍酒精溶液0.8-1.1磷酸二氫鉀 0.08-0.11磷酸二氫銨 0.08-0.11瓊脂 1.5-2.2小牛血清 2.5-2.8蒸餾水 加至100
配方三枸櫞酸鈉 0.4-0.7氯化鈉 0.4-0.7硫酸鎂 0.02-0.031％溴麝香草酚藍酒精溶液0.9-1.2磷酸二氫鉀 0.09-0.12磷酸二氫銨 0.09-0.12小牛血清 2.7-3.0
瓊脂 1.8-2.5蒸餾水 加至100
配方四枸櫞酸鈉 0.4-0.6氯化鈉 0.4-0.6硫酸鎂 0.01-0.031％溴麝香草酚藍酒精溶液0.9-1.1磷酸二氫鉀 0.09-0.11磷酸二氫銨 0.09-0.11瓊脂 1.8-2.2小牛血清 2.6-2.8蒸餾水 加至100
權利要求
1.一種枸櫞酸鹽瓊脂培養基，是以枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、溴麝香草酚藍、瓊脂為主要組分，其特征在于具有如下配方(組分及其重量百分比％)枸櫞酸鈉(0.3-0.7)、氯化鈉(0.3-0.7)、硫酸鎂(0.01-0.03)、磷酸二氫鉀(0.08-0.12)、磷酸二氫銨(0.08-0.12)、溴麝香草酚藍(0.8-1.2)、小牛血清(2.5-3.0)、瓊脂(1.5-2.5)、蒸餾水加至100。
2.一種權利要求1所述枸櫞酸鹽瓊脂培養基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1)、將枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、瓊脂按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至6.8，以絨布過濾；2)、再加入溴麝香草酚藍混勻，壓力蒸汽滅菌1.05kg15分鐘；3)、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝試管，每管約2ml，趁熱將含有培養基的滅菌試管傾斜一定角度，冷凝后制成斜面，待用。
全文摘要
本發明涉及一種枸櫞酸鹽瓊脂培養基，是以枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、溴麝香草酚藍、小牛血清、瓊脂為主要成分，用以鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽。枸櫞酸鈉是培養基中碳的唯一來源，而磷酸二氫銨是培養基中氮的唯一來源；能利用枸櫞酸鈉為碳源的細菌在培養基上能生長，并且分解枸櫞酸鹽最后產生碳酸鹽，使培養基變為堿性，此時培養基中的溴麝香草酚藍指示劑由綠色變為深藍色；硫酸鎂能破壞標本中存在的四環素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；氯化鈉用于調整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調節pH；試驗陽性對照菌在該固體培養基中增菌繁殖迅速，并且產堿使培養基變色。本發明具有以下優點(1)所需接種量小，少量細菌即可出現產堿變色；(2)指示劑變色快速明顯，24小時即可觀察結果；(3)不易出現假陽性，僅限能利用枸櫞酸鈉的細菌能生長、變色；(4)不易出現假陰性，硫酸鎂能破壞標本中存在的四環素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；(5)試驗陽性對照菌在該固體培養基中增菌繁殖迅速，并且產堿使培養基變色。
文檔編號C12Q1/04GK101089192SQ20061004487
公開日2007年12月19日 申請日期2006年6月16日 優先權日2006年6月16日
發明者曲奕, 馬樂好 申請人:曲奕, 馬樂好