本發明涉及發酵工程領域，具體涉及一種生產pf1022a的發酵培養基及發酵方法。
背景技術：
：pf1022a是半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022產生的n-甲基-codp(環狀縮肽)類化合物。pf1022a是一種對動物低毒、防治譜廣、效果好的驅蟲藥物，其是繼大環內酯類驅蟲藥后，最有潛力的用于牲畜和寵物的一類驅蟲藥。美國專利文獻us09901393a1(公開日2002年4月18日)公開了一種轉化pf1022a生產其衍生物emodepside的化學法。目前emodepside與吡喹酮的組合物profender已上市，用于控制貓或狗胃腸道內的線蟲和絳蟲。隨后emodepside與妥曲珠利的組合物procox也已上市。目前pf1022a合成有固相合成法和生物合成方法。但固相合成法步驟繁瑣、工藝復雜，不適于大規模生產。而生物合成方法以及產生該物質的該培養基存在成分復雜、不穩定、不能顯著提高pf1022a產量的缺陷。因此有必要研究新的培養基，以提高pf102a的產量及其可重復性，以期滿足實際應用的需求。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題是針對目前的發酵培養基培養半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022產生pf1022a的產量低的現狀，提供一種生產pf1022a的發酵培養基及發酵方法。所述的發酵培養基大大提高了pf1022a的發酵單位，適用于pf1022a的工業化大規模生產。所述的發酵方法簡便易行，極大地提高了pf1022a的發酵單位，適用于pf1022a的工業化大規 模生產。本發明通過對發酵培養基中有機碳源和有機氮源的改良，采用葡萄糖、可溶性淀粉和山梨醇與乳糖中的一種或兩種的組合有機碳源，同時采用花生餅粉和/或酵母提取物作為有機碳源，能夠大大提高pf1022a的產量，與現有技術中發酵培養基相比，將產量最高提高至180.7％。發明人還發現，當發酵培養基中的有機碳源為葡萄糖、可溶性淀粉和山梨醇時，或為葡萄糖、可溶性淀粉和乳糖時，能夠更有效地提高pf1022a的產量。本發明改良的發酵培養基含有足夠的營養成分，能夠滿足搖瓶實驗的需要，也能將搖瓶發酵的結果放大到發酵罐中。同時本發明的發酵培養基的組分的價格很低，能夠大幅度地降低生產成本。本發明提供的技術方案之一是：一種生產pf1022a的發酵培養基，其包括，(i)7～13.5％有機碳源，所述有機碳源為選自山梨醇與乳糖中的一種或兩種、葡萄糖和可溶性淀粉，(ii)0.5～0.7％無機鹽，所述無機鹽包括nacl和caco3，和(iii)有機氮源，所述有機氮源為以下(1)～(3)中的一種：(1)1～6％的花生餅粉；或者，(2)0.3～2％的酵母提取物；或者，(3)3～4％有機氮源，所述有機氮源包括花生餅粉和酵母提取物，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。本發明所述的發酵培養基中，所述有機碳源的含量為7～13.5％，所述有機碳源為選自山梨醇與乳糖中的一種或兩種、葡萄糖和可溶性淀粉。其中，較佳地，所述有機碳源的含量為8.5～11.5％，更佳地為10～10.5％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述葡萄糖的含量為1～2％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述淀粉的含量為3～3.5％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述山梨醇的含量為2～7％，更佳地為4～5％， 所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述乳糖的含量為3～8％，更佳地為6～8％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述有機碳源還包括本領域中用于生產pf1022a的發酵培養基中常規使用的，除山梨醇、乳糖、葡萄糖和可溶性淀粉以外的、與所述發酵培養基中的各組分之間不存在相互拮抗的作用的有機碳源，如麥芽糖和甘油。較佳地，所述有機碳源一次性地加入所述發酵培養基。本發明所述的發酵培養基中，所述有機氮源為以下(1)～(3)中一種：(1)所述有機氮源為1～6％的花生餅粉；或者，(2)所述有機氮源為0.3～2％的酵母提取物；或者，(3)所述有機氮源包括花生餅粉和酵母提取物，所述有機氮源的含量為3～4％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。其中，較佳地，所述有機氮源為2～5％的花生餅粉，更佳地為3～3.5％的花生餅粉，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述有機氮源為0.5～1.5％的酵母提取物，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述有機氮源為花生餅粉和酵母提取物，所述有機氮源的含量為3～4％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述有機氮源還包括本領域中用于生產pf1022a的發酵培養基中常規使用的，除花生餅粉和酵母提取物以外的、與所述發酵培養基中的各組分之間不存在相互拮抗的作用的有機氮源，如酵母粉和黃豆餅粉。本發明所述的發酵培養基中，所述無機鹽的含量為0.5～0.7％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。其中，較佳地，所述nacl的含量為0.2～0.3％，更佳地為0.2％；較佳地，所述caco3的含量為0.2～0.4％，更佳地為0.3％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。較佳地，所述無機鹽還包括硫酸鎂。所述硫酸鎂的化學式為mgso4·7h2o或mgso4，較佳地為mgso4·7h2o。較佳地，所述硫酸鎂的含量為0.2％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。 較佳地，所述無機鹽還包括本領域中用于生產pf1022a的發酵培養基中常規使用的，除nacl、caco3和mgso4·7h2o以外的、與所述發酵培養基中的各組分之間不存在相互拮抗的作用的無機鹽，如硫酸亞鐵和氯化銅。較佳地，所述的發酵培養基還包括消泡劑。所述的消泡劑為本領域常規的消泡劑，較佳地為泡敵。所述消泡劑的含量為本領域常規的含量，較佳地為0.05～0.2％，更佳地為0.1％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。本發明所述的發酵培養基的ph為本領域常規的ph，較佳地為5.2～8，更佳地為5.7～6.6，最佳地為6.2～6.4。本發明的一最佳實例是，所述發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉6％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。本發明的另一最佳實例是，所述發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉3.5％、酵母抽提物0.5％、nacl0.2％和caco30.3％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。若無特別說明，本發明所述的質量體積百分比指每100ml培養基中，含有組分的克數。如，7～13.5％有機碳源表示每100ml所述發酵培養基中含有7～13.5g有機碳源。本發明所述的發酵培養基的制備方法是本領域常規的制備方法，較佳地為用水溶解所述有機碳源、所述有機氮源和所述無機鹽等組分，高溫滅菌。更佳地，所述的水為蒸餾水。本發明提供的技術方案之二是：一種發酵生產pf1022a的方法，其包括以下的步驟：將半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022接種于上述的發酵培養基中發酵，從發酵液中獲得pf1022a。較佳地，所述半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022為購自nitebiologicalresourcecenter(日本技術評價研究所生物資源中心)，編號為 nbrc-33096的菌株。本發明所述發酵的容器為本領域常規的容器，較佳地為發酵瓶或發酵罐，更佳地為發酵罐。較佳地，所述發酵在發酵罐中進行，其還包括如下的步驟：在所述發酵的時間為第3天時，加入麥芽糖。所述麥芽糖的濃度為本領域常規的濃度，較佳地為0～5％，更佳地為2～4％，最佳地為2～3％，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。本發明所述發酵的溫度為本領域常規的溫度，較佳地為25～28℃，更佳地為25～27℃，最佳地為26℃。本發明所述發酵的時間為本領域常規的時間，較佳地為6～12天，更佳地為7～10天，最佳地為8天。本發明所述發酵培養基的溶氧量為本領域常規的溶氧量，較佳地為1～30％，更佳地為10～30％，最佳地為20～30％，所述百分比為體積百分比。本發明所述發酵的種子液的接種量為本領域常規的接種量，較佳地為5～25％，更佳地為8～20％，最佳地為15％，所述百分比為體積百分比。較佳地，所述種子液由包括如下的步驟的方法獲得：將所述的半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022在種子培養基中培養。更佳地，所述種子液由包括如下的步驟的方法獲得：(1)將半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022接種于斜面培養基活化，得活化的pf1022；(2)將步驟(1)所得的活化的pf1022接種于一級種子培養基培養得到一級種子液；(3)將步驟(2)所得的一級種子液接種于二級種子培養基培養得到種子液。步驟(1)為：將半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022接種于斜面培養基活化，得活化的pf1022。其中，所述斜面培養基為本領域常規的斜面培養基，較佳地為葡萄糖馬鈴薯瓊脂培養基，更佳地為購自上海源聚生物科技 有限公司的葡萄糖馬鈴薯瓊脂培養基。所述活化的溫度為本領域常規的溫度，較佳地為25～27℃，更佳地為26℃。所述活化的時間為本領域常規的時間，較佳地為6天。步驟(2)為：將步驟(1)所得的活化的pf1022接種于一級種子培養基培養得到一級種子液。其中，所述的一級種子培養基為本領域常規的一級種子培養基，較佳地包括0.5～1.5％葡萄糖、1～3％可溶性淀粉、0.1～0.5％酵母抽提物、0.5～1％麥芽浸粉、0.1～0.5％豆餅粉和0.1～0.4％碳酸鈣，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。所述一級種子培養基的ph為本領域常規的ph，較佳地為6～6.4，更佳地為6.2。所述培養的方式為本領域常規的方式，較佳地為搖床培養。所述培養的溫度為本領域常規的溫度，較佳地為25～27℃，更佳地為26℃。所述培養的時間為本領域常規的時間，較佳地為2～4天，更佳地為2～3天。所述接種的接種量為本領域常規的接種量，較佳地為5～20％，更佳地為8～15％，最佳地為10％，所述百分比為體積百分比。步驟(3)為：將步驟(2)所得的一級種子液接種于二級種子培養基培養得到種子液。其中，所述的二級種子培養基為本領域常規的二級種子培養基，較佳地包括0.5～1.5％葡萄糖、1～3％可溶性淀粉、0.1～0.5％酵母抽提物、0.5～1％麥芽浸粉、0.1～0.5％豆餅粉和0.1～0.4％碳酸鈣，所述百分比為占所述發酵培養基的總體積的質量體積百分比。所述二級種子培養基的ph為本領域常規的ph，較佳地為6～6.4，更佳地為6.2。所述培養的方式為本領域常規的方式，較佳地為搖床培養。所述培養的溫度為本領域常規的溫度，較佳地為25～27℃，更佳地為26℃。所述培養的時間為本領域常規的時間，較佳地為2～4天，更佳地為2～3天。所述接種的接種量為本領域常規的接種量，較佳地為5～20％，更佳地為8～15％，最佳地為10％，所述百分比為體積百分比。在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。本發明所用試劑和原料均市售可得。本發明的積極進步效果在于：本發明所述的發酵培養基能夠高產pf1022a，在5l發酵罐上發酵單位最高達到1481mg/l；在搖瓶中發酵單位最高達到812mg/l，與現有技術中發酵培養基相比，將產量最高提高318.4％。并且所述的發酵培養基制備簡便、成本低廉。本發明所述的發酵培養基實現5l發酵罐上發酵單位1481mg/l的高產量，在產量上高于現有文獻報道，有利于pf1022a的產業化生產。附圖說明圖1為實施例1得到的pf1022a的hplc分析圖。具體實施方式下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。實施例中，若無特別說明，百分比的含義為相對于培養基總體積的質量體積百分比。所述質量體積百分比指每100ml所述發酵培養基中，含有組分的克數。如，葡萄糖2％指每100ml所述發酵培養基中含有2g葡萄糖。實施例中，半知菌無孢霉菌roselliniasp.pf1022為購自nitebiologicalresourcecenter(日本技術評價研究所生物資源中心)，編號為nbrc-33096的pf1022菌株。實施例1發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇2％、可溶性淀粉3％、花生餅粉3.5％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。種子培養基的組成為：葡萄糖1％、可溶性淀粉2％、酵母抽提物0.3％。麥芽浸粉0.8％、聚蛋白胨0.5％、黃豆餅粉0.2％和caco30.2％，所述的百分比為相對于培養基總體積的質量體積百分比，單位為g/l，調節ph至6.2。 所述種子培養基于121℃滅菌20分鐘后冷卻備用。(1)、將凍存的編號為nbrc-33096的pf1022菌株接種于斜面培養基上，在26℃培養箱中活化6天，選擇生長良好的菌落，得活化的菌株。所述的斜面培養基為pda培養基，所述pda培養基購自上海源聚生物科技有限公司。(2)、鏟取2cm2步驟(1)所得活化的菌株，接種于種子培養基，然后置于26℃、200rpm的搖床上培養3天得種子液。(3)、將步驟(2)所得的種子液按10％(v/v)的接種量接種于發酵培養基，然后置于26℃、200rpm的搖床上培養8天，得發酵液。(4)、發酵結束后向步驟(3)所得的發酵液中加入等體積的甲醇后超聲20min，得超聲的發酵液。所述超聲的溫度為20℃、頻率為90hz。將超聲的發酵液過濾取上清液，所得的上清液中即含pf1022a。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為413mg/l。hplc的結果參見圖1，圖1中顯示一個單一的高峰，說明所得的上清液中確實含有純度較高的pf1022a。其中，所述hplc的條件為：色譜柱為hypersilc18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相為乙腈：水，體積比80:20；流速為1ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為220nm；進樣量為20μl；出峰時間為7.47min。對比例1發酵培養基的組成為：淀粉漿3.0％、大豆油1.0％、麥芽0.8％、大豆餅1.0％、干酵母1.0％、碳酸鈣0.3％、0.2％硫酸鎂(七水化合物)和0.2％氯化鈉，滅菌前將該培養基ph調至7.0。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為354mg/l。可見，實施例1較對比例1相比，pf1022a的產量提高了16.7％。實施例2發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生 餅粉3.5％、酵母抽提物0.5％、nacl0.2％和caco30.3％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為772mg/l。可見，實施例2較對比例1相比，pf1022a的產量提高了118.1％。實施例3發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇7％、可溶性淀粉3.5％、酵母抽提物0.3％、花生餅粉3％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為659mg/l。可見，實施例3較對比例1相比，pf1022a的產量提高了86.1％。實施例4發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、乳糖3％、可溶性淀粉3.5％、酵母抽提物1％、花生餅粉3％、nacl0.2％、caco30.3％,和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為534mg/l。可見，實施例4較對比例1相比，pf1022a的產量提高了50.8％。實施例5發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、乳糖6％、可溶性淀粉3.5％、花生餅粉5％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為698mg/l。可見，實施例5較對比例1相比，pf1022a的產量提高了97.1％。實施例6發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、乳糖8％、可溶性淀粉3.5％、酵母抽提物1.5％、花生餅粉2％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％， 調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為651mg/l。可見，實施例6較對比例1相比，pf1022a的產量提高了83.9％。實施例7發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇4％、可溶性淀粉3.5％、酵母抽提物2％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為617mg/l。可見，實施例7較對比例1相比，pf1022a的產量提高了74.3％。實施例8發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉6％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為812mg/l。可見，實施例8較對比例1相比，pf1022a的產量提高了129.4％。實施例9發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、酵母抽提物2％、花生餅粉1％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為428mg/l。可見，實施例9較對比例1相比，pf1022a的產量提高了20.9％。實施例10發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉6％、nacl0.1％、caco30.2％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為765mg/l。可見，實施例10較對比例1相比，pf1022a的產量提高了169.7％。實施例11發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇2％、可溶性淀粉3％、花生餅粉6％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為812mg/l。可見，實施例11較對比例1相比，pf1022a的產量提高了129.4％。實施例12發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉3.5％、酵母抽提物0.5％、nacl0.2％和caco30.3％，分別調節ph至5.2、5.4、5.7、6.0、6.2、6.3、6.4、6.6、7.0和8.0。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果如表1所示。表1說明，發酵培養基的ph值在5.7～6.6之間時，pf1022a的產量較高。尤其是ph值在6.0～6.4之間時，pf1022a的產量最高。表1hplc測定不同ph條件下pf1022a的發酵單位ph5.25.45.76.06.26.36.46.67.08.0發酵單位(mg/l)353424557697836749737590481279實施例13發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇2％、可溶性淀粉3％、麥芽糖2％、花生餅粉3.5％、nacl0.2％、caco30.2％、feso40.1％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為785mg/l。可見，實施例13較對比例1相比，pf1022a的產量提高了121.7％。實施例14發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇2％、可溶性淀粉3％、麥芽糖1％、甘油1％、花生餅粉3.5％、nacl0.2％、caco30.3％、feso40.05％、cucl20.05％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為739mg/l。可見，實施例14較對比例1相比，pf1022a的產量提高了108％。實施例15發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇2％、可溶性淀粉2％、乳糖3％、花生餅粉3.5％、酵母抽提物0.4％、酵母粉0.05％、黃豆餅粉0.05％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為675mg/l。可見，實施例15較對比例1相比，pf1022a的產量提高了90.7％。實施例16發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、山梨醇2％、可溶性淀粉3％、花生餅粉2.5％、酵母抽提物0.4％、酵母粉0.1％、nacl0.3％和caco30.4％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為568mg/l。可見，實施例16較對比例1相比，pf1022a的產量提高了60.4％。實施例17發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉3.5％、酵母抽提物0.5％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。(4)、將步驟(3)所得的二級種子液15％(v/v)的接種量接種于發酵培養基，然后置于200rpm的搖床上培養8天，培養的溫度分別控制在23℃、 25℃、26℃、27℃、28℃、30℃和32℃，得發酵液。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果如表2所示。表2說明，發酵時的培養溫度在25～28℃之間時，pf1022a的產量較高。表2hplc測定不同培養溫度條件下pf1022a的發酵單位發酵溫度(℃)23252627283032發酵單位(mg/l)446808825758561201142實施例18發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、花生餅粉3.5％、酵母抽提物0.5％、泡敵0.1％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。一級種子培養基和二級種子培養的組成均為：葡萄糖1.5％、可溶性淀粉2％、酵母提取物0.5％、麥芽浸粉0.4％、聚蛋白胨0.6，黃豆餅粉0.2％、caco30.2％，ph6.2。(1)、將凍存的編號為nbrc-33096的pf1022菌株接種于斜面培養基上，在26℃培養箱中活化6天，選擇生長良好的菌落，得活化的菌株。所述的斜面培養基為pda培養基，所述pda培養基購自上海源聚生物科技有限公司。(2)、鏟取2cm2步驟(1)所得活化的菌株，接種于一級種子培養基，然后置于26℃、200rpm的搖床上培養3天得一級種子液。(3)、將步驟(2)所得一級種子液按10％(v/v)接種于二級種子培養基，然后置于26℃、200rpm的搖床上培養3天得二級種子液。(4)、在5l玻璃發酵罐中，將步驟(3)所得的二級種子液按15％(v/v)的接種量接種于發酵培養基中。培養溫度26℃，初始攪拌轉速200rpm，溶氧do控制在20％(v/v)以上，通氣量為1vvm。發酵至72小時一次性補入麥芽糖至終濃度為0、1％、2％、2.5％、3％、4％。發酵至192小時時終止 發酵。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果如表3所示。表3說明，補入麥芽糖后，pf1022a的發酵單位有了一定的提高，在2～4％之間pf1022a的產量提升較明顯。表3hplc測定不同麥芽糖濃度條件下pf1022a的發酵單位麥芽糖終濃度01％2％2.5％3％4％發酵單位(mg/l)948614811442對比例2發酵培養基的組成為：葡萄糖2％、可溶性淀粉3％、花生餅粉3.5％、酵母抽提物0.5％、nacl0.2％、caco30.3％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為372mg/l。對比例3發酵培養基的組成為：葡萄糖1％、山梨醇5％、可溶性淀粉3％、玉米漿干粉3.5％、nacl0.2％、caco30.3％和mgso4·7h2o0.2％，調節ph至6.2。其余所有條件均與實施例1完全一致。hplc測定所得的上清液中pf1022a的發酵單位，結果為289mg/l。應理解，在閱讀了本發明的上述內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。當前第1頁12