專利名稱：一種從茶多酚或兒茶素混合體系中分離制備多種兒茶素單體的方法
技術領域：
本發明屬于天然有機化學領域，涉及一種從茶多酚或兒茶素混合物體系中分離制備多 種兒茶素單體的方法。
技術背景兒茶素是綠茶中含有的一類具多酚類結構的重要藥理活性成分，由于其具有優異的抗 氧化、抗癌等藥物功效，在國際上已經被普遍認為是"繼紫杉醇之后從植物中提取的最為 理想的抗癌新藥"。茶多酚或兒茶素混合物中的兒茶素包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)，沒食子兒 茶素沒食食子酸酯(GCG)表兒茶素沒食子酸酯(ECG)，表沒食子兒茶素(EGC)及表兒茶素 (EC)等。茶多酚(綠茶初提物產品)和兒茶素混合物中各兒茶素單體的分離制備，目前已見 報道的方法有超臨界流體萃取(SCF)法和HPLC法。前者分離度較低，難于實現各兒茶素 單體的有效分離，且設備昂貴。后者已有授權發明專利(周春山、鐘世安等，表沒食子兒茶 素沒食子酸酯的分離制備工藝，ZL011068.9),該法雖然能滿足分離要求，但因使用高壓 (200 300bar有時甚至更高)，不僅縮短設備使用壽命，而且會增大色譜柱填充材料的破碎 損耗及溶劑消耗。 發明內容本發明的目的在于提供一種從茶多酚或兒茶素混合物體系中分離制備多種兒茶素單 體的方法。本方法采用中低壓液相制備色譜，不使用高壓泵，避免高壓輸液所致弊病，延長設備 使用壽命，降低柱填料和溶劑材料消耗，從而節省生產成本，同時又不失色譜高效分離的 特性。蒸發、濃縮，均采用閃式蒸發器進行，不僅可以顯著節省因長時間加熱蒸發濃縮的 能源消耗，而且可以大大避免因此造成的兒茶素氧化、縮聚合等不利作用的發生，因而可 以明顯提高產品的產率和質量。本發明的目的是通過以下方式實現的。一種從茶多酚或兒茶素混合體系中分離制備多種兒茶素單體的方法，將茶多酚或兒茶 素混合體系樣品預處理、液相色譜分離、餾分截取、閃式蒸發濃縮、干燥結晶，即制備出兒茶素單體。茶多酚或兒茶素混合體系樣品的預處理過程為將所述樣品的濾液在40 70
。C濃縮至質量濃度為0.4 1.2mg/ml，調pH值至3.5 5.5，然后傾入大孔吸附樹脂層析 柱除咖啡因；所述的液相色譜分離過程為將經過預處理的樣品溶液以不含卣素的非礦物 酸調節pH值至4 5.5，濃縮至(可閃式蒸發濃縮)質量濃度為1.2 1.8mg/ml注入液相 制備色譜系統，色譜系統固定相為C18柱內徑50 100mm，填料粒徑20 60um，流動相 為12% 18%低碳醇+0. 5 3%弱酸+水87.5-79.0% (v/v), 10 60pa柱壓下用所述流動相 淋洗色譜柱，根據柱后流出曲線，收集各兒茶素單體餾分液；所述的閃式蒸發濃縮過程為 將餾分液注入閃式蒸發器，在維持收集液溫度35-65'C的條件下進行蒸發濃縮。 所述的不含鹵素的非礦物酸為甲酸或乙酸。
所述的干燥結晶過程為取質量濃度不低于1.5mg /ml的單體兒茶素濃縮液注入內式 旋轉蒸發設備，使熱水浴的溫度恒定至50 6(TC進行蒸發、干燥脫水，直到獲得兒茶素單
體結晶粉末固體。
與現有方法相比，本方法具有以下優點
1、 本發明的前處理過程效果顯著，經過大孔吸附樹脂層析柱除雜，可以有效的除去咖啡 因等雜質，更有益于色譜分離效果。
2、 因為不使用高壓，可以延長儀器的使用壽命，減少或避免色譜柱填料的破碎損耗，減
少溶劑消耗。
3、 釆用閃式蒸發濃縮方法，不僅可以顯著節省因長時間加熱蒸發濃縮的能源消耗，而且 可以大大避免因此造成的兒茶素氧化、縮聚合等不利作用的發生，因而可以明顯提高產品 的產率和質量，采用本發明，產品的純度可達到95%，產率一般為85%。用以前方法生產 的產品純度達95%，但用本發明方法純度可達98%，在相同的得率下，成本降低20%。
具體實施例方式
以下結合實施例進一步說明本發明。 茶多酚系綠茶的初提物產品，其中含有多種兒茶素， 實施例l.茶多酚的預處理
茶多酚為綠茶粗提物，含多種兒茶素，包括EGCG(表沒食子兒茶素沒食子酸酯)，(沒 食子兒茶素沒食子酸酯)GCG沒食子兒茶素沒食子酸酯，(EGC表沒食子兒茶素)，EC(表兒 茶素)。茶多酚的提取物是本領域內眾所周知的，且現已有商品出售茶多酚中除含有不同 的兒茶素外，還含有較多的咖啡因等雜質，如不通過預處理將其除去，將給兒茶素單體的 后續分離制備帶來困難其預處理方法具體如下取適量茶多酚固體粉末料，以水溶解，過濾除去水不溶物。濾液在40 6(TC溫度下適 當濃縮至約0.5 lmg/ml，調pH值至4 5，然后將溶液傾入能與樣品溶液匹配，極性適 當的的大孔吸附樹脂層析柱中，經吸附截留除去大部分咖啡因；以甲醇水溶液淋洗層析柱， 收集含咖啡因成份的流出液回收咖啡因。所得到的含兒茶素的流出液為分離制備兒茶素單 體的貯備液。至咖啡因淋洗干凈，該層析柱便得到再生。
實施例2.兒茶素淡單體液相色譜分離制備
取適當體積的實施例1中含兒茶素的層析柱流出液(貯備液)，以不含鹵素的非礦物酸 (甲酸或乙酸等)調節溶液的pH4. 5 5. 2，濃縮(可閃式蒸發濃縮)至質量濃度為1. 5mg/ml， 然后將其注入液相制備色譜系統，該色譜系統固定相為C18柱內徑50 100mra填料粒徑 20 60yni，流動相為14% 15%—低碳醇+1 2%弱酸+水84.5%(v/v), 10 50巴柱壓下 用該流動相淋洗色譜柱，用UV檢測器，根據柱后流出曲線，收集各兒茶素單體餾份液。
實施例3.餾份蒸發、濃縮和產品的干燥、結晶
量取適當體積餾份液注入閃式蒸發器，在維持流出液(收集液)溫度40 6(TC的條件下 進行蒸發濃縮，流出液(濃縮液)的濃度用帶UV檢測器的HPLC儀進行測定。當流出液濃度 未達到預期值時，此蒸發一濃縮操作步驟可反復進行多次。取適量濃度大于1. 5mg AnL的 單體兒茶素濃縮注入內式旋轉蒸發設備，使加熱水浴的溫度恒定至約50 60'C的條件下進 行蒸發、干燥脫水，直到獲得兒茶素單體結晶粉末固體。此粉末固體即為本工藝的目標產 品。各兒茶素單體純度用UV-HPLC測定。
權利要求
1、一種從茶多酚或兒茶素混合體系中分離制備多種兒茶素單體的方法，將茶多酚或兒茶素混合體系樣品經預處理、液相色譜分離、餾分截取、閃式蒸發濃縮、干燥結晶，即制備出兒茶素單體，其特征在于，茶多酚或兒茶素混合體系樣品的預處理過程為將所述樣品的濾液在40～70℃濃縮至質量濃度為0.4～1.2mg/ml，調pH值至3.5～5.5，然后傾入大孔吸附樹脂層析柱除咖啡因；所述的液相色譜分離過程為將經過預處理的樣品溶液以不含鹵素的非礦物酸調節pH值至4～5.5，濃縮至質量濃度為1.2～1.8mg/ml后注入液相制備色譜系統，色譜系統固定相為C18柱內徑50～100mm，填料粒徑20～60μm，流動相為12％～18％低碳醇+0.5～3％弱酸+水87.5-79.0％(v/v)，10～60pa柱壓下用所述流動相淋洗色譜柱，根據柱后流出曲線，收集各兒茶素單體餾分液；所述的閃式蒸發濃縮過程為將餾分液注入閃式蒸發器，在維持收集液溫度35-65℃的條件下進行蒸發濃縮。
2、 根據權利要求1所述的從茶多酚或兒茶素混合體系中分離制備多種兒茶素單體的 方法，其特征在于，所述的不含鹵素的非礦物酸為甲酸或乙酸。
3、 根據權利要求1所述的從茶多酚或兒茶素混合體系中分離制備多種兒茶素單體的 方法，其特征在于，所述的干燥結晶過程為取質量濃度不低于1.5mg /ml的單體兒茶素 濃縮液注入內式旋轉蒸發設備，使熱水浴的溫度恒定至50 6(TC進行蒸發、干燥脫水，直 到獲得兒茶素單體結晶粉末固體。
全文摘要
本發明公開了一種從茶多酚或兒茶素混合體系中分離制備多種兒茶素單體的方法，包括樣品預處理、液相色譜分離、餾分截取、閃式蒸發濃縮、干燥結晶等過程。本方法中的蒸發、濃縮，大多采用閃式蒸發器進行，不僅可以顯著節省因長時間加熱蒸發濃縮的能源消耗，而且可以大大避免因此造成的兒茶素氧化、縮聚合等不利作用的發生，因而可以明顯提高產品的產率和質量。同時不使用高壓，可以延長儀器的使用壽命，減少或避免色譜柱填料的破碎損耗以及溶劑消耗。
文檔編號C07D311/00GK101503400SQ20091004283
公開日2009年8月12日 申請日期2009年3月11日 優先權日2009年3月11日
發明者周小芬, 周春山, 張勝華 申請人:周春山