專利名稱：一種提取荷葉黃酮的工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從天然植物具體是從荷葉中提取總黃酮的制備工藝，特別是用沉淀、 超濾、大孔吸附樹脂技術提取荷葉總黃酮，分步洗脫收集不同類型的荷葉黃酮的制備方 法，并適用于規模化生產用。
背景技術：
荷葉藥用基礎研究證實了荷葉具有一定的減肥降脂的作用，荷葉的浸劑和煎劑能直 接擴散血管，引起中度降壓，荷葉有降壓作用，可輔助性治療繼發性肥胖癥。荷葉中含 有黃酮化合物、生物堿、萜類化合物等生物活性成分。這些成分具有相當強的抗氧化作 用，能清除生物體內過剩的自由基、防止組織體內脂質過氧化、提高人體機體的免疫力 等，是首選的治療心腦血管疾病的天然藥物。據報道，黃酮類化合物對于改善心、腦血 液循環，調節血脂，降低血清膽固醇等有很好的療效。
目前，荷葉黃酮生產工藝主要有溶劑萃取法、堿提酸沉法、超臨界C02萃取法和樹 脂吸附法，其中溶劑萃取法成本高，堿提酸沉法只能提取部分荷葉黃酮，超臨界萃取法 設備投入大。目前荷葉黃酮還沒有投入工業化生產，其技術仍處于研究探索階段。現有 關于荷葉黃酮樹脂提取研究及專利技術的缺陷是，用大孔樹脂吸附前未進行萃取去除脂 溶性雜質，更未去除大分子雜質，上柱后，對樹脂污染大，吸附容量很低，使得樹脂吸 附不適宜工業化生產中應用，得到的產品純度也欠佳；其次，解吸并沒有考慮荷葉黃酮 是一類結構不同、極性不等的化合物，沒有對荷葉黃酮進行分步洗脫分離，分離去雜不 夠具體。

發明內容
本發明的目的在于提供一種利用沉淀一萃取一超濾一大孔吸附樹脂吸附聯用技術精 制荷葉黃酮的方法，濃縮脫醇后沉淀去除了水不溶性雜質，石油醚萃取脫除脂溶性雜質， 超濾膜去除水溶性大分子雜質，大孔吸附樹脂選擇性吸附荷葉黃酮，分步洗脫收集不同 類型的高純度黃酮的制備方法，為醫藥行業使用提供規模化生產的提取荷葉黃酮的工藝。
本發明的技術方案是按下列步驟順序進行
1) 將潔凈鮮荷葉干燥、粉碎，制得荷葉粉末；
2) 將荷葉粉末與50 70%乙醇，按重量比1: 25~30混合置入浸提釜中，升溫至70~80 °C，靜置40 60分鐘，制得荷葉黃酮浸提液；
3) 將浸提液置入真空濃縮釜，脫除浸提液中的乙醇，至釜內物料質量為荷葉質量的 9 11倍時，停止脫除乙醇，得濃縮浸提液，再過濾去除濃縮浸提液中的沉淀物；
4) 將過濾后的濃縮浸提液置入萃取釜，加入石油醚，攪拌、靜置30分鐘，萃取去 除脂溶性雜質，得萃余液；
5) 調節萃余液的pH值為8.0 10,過濾去除堿不溶性雜質，調節pH值至原有水 平，加入所用荷葉質量的30 50倍的水進行稀釋，再用MWCO在5 10萬超濾膜進行 超濾，去除水溶性大分子雜質，超濾時為常溫，壓力為0.10 0.20MPa，直至料液剩15 30%時，加水透析至少兩次，制得黃酮超濾處理液；
6) 采用吸附容量為196mg黃酮/mL大孔樹脂，將其濕法裝入樹脂柱，水洗滌平衡后， 將超濾處理液緩慢通入樹脂柱，上柱流速為4 6BV/h，檢測漏出液黃酮濃度達到初始濃 度的10 20%時停止上柱；
7) 對吸附飽和的樹脂柱，采用1.0 2.0倍樹脂體積的pH值為3~5、溫度為10 15 。C的水洗滌，有效去除雜質；然后用1.0 2.0倍樹脂體積的10%左右的乙醇水溶液洗脫 樹脂吸附的黃酮甙類化合物，得純度>50%的黃酮甙類化合物；接著用1.0 2.0倍樹脂體 積的20 40%乙醇水溶液洗脫樹脂吸附的中等極性的黃酮類黃酮化合物，得純度>85%的 中等極性的黃酮類黃酮化合物；再用1.0~2.0倍樹脂體積的45 50%的乙醇水溶液洗脫， 該洗液棄用；最后，用1.0 2.0倍樹脂體積的60%左右的乙醇水溶液洗脫樹脂中吸附的 極性弱的黃酮類化合物，得純度>50%的極性弱的黃酮類化合物；
8)將上步驟分離得到的三種荷葉黃酮類化合物解吸液，分別進行真空濃縮，回收乙 醇，得三種浸膏，再將三種浸膏分別進行真空干燥、粉碎，得三種荷葉黃酮精細粉。
鮮荷葉的采取原則為蓮藕生長成熟期、色澤鮮艷、無斑點的荷葉。
往步驟2)制得的濾渣中以重量比1: 15 10加入50~70%乙醇，按步驟2)的溫度、 時間再提取一次，并將該提取液加入步驟2)制得的提取液。
往步驟4)的濃縮浸提液中加入2/3 1倍體積的沸程為6(TC的石油醚，萃取兩次， 去除脂溶性雜質。
將萃余液調節pH8 9，微濾后調節pH至原有水平5.6 5.9，加水稀釋，至所用荷葉 質量的30 50倍停止加水，再進行超濾，當超濾進行至料液剩15 30%時，加水透析3 6 次，每次透析加水量為荷葉質量的2 4倍。
大孔吸附樹脂為YZ-006樹脂，樹脂材料為酚醛合成樹脂，比表面積400-500 m2/g， 孔容0.80 1.0ml/g，平均孔徑70 80婆，濕真密度1.02 U2。
對步驟7)中洗脫黃酮類化合物后的樹脂分別加入2.0 4.0倍樹脂體積，濃度為2 5 %的堿、酸、95%的乙醇進行洗滌，使樹脂恢復吸附性能。
本發明具有的優點本專利申請技術，對浸提液采用濃縮脫醇后沉淀去除了水不溶 性雜質，其次采用石油醚萃取脫除脂溶性雜質，接著又采用超濾膜去除水溶性大分子雜 質，經過這些預處理后，上柱液有效去除了雜質，減輕了對樹脂吸附的干擾，使樹脂對 黃酮的吸附能力大大增強，黃酮吸附容量從83mg/ml樹脂增加至200mg/ml樹脂，更能適 應規模化提取的需要。這樣的處理步驟更有效遵循分離純化技術串聯使用的基本規律， 即沉淀、萃取易實施，去雜效果顯著的優先使用，吸附、層析等精度分離的手段應在后 續工藝中使用。洗脫去雜除了用清水洗柱外，根據45 55%乙醇水溶液洗脫段組分雜質 多，黃酮含量少的特點，廢棄該段梯度洗脫組分，有效去除了雜質。梯度洗脫得到， 20%~40%乙醇水溶液洗脫組分荷葉黃酮純度>85%，高于現有專利技術50%~70%的純度， 10%乙醇水溶液洗脫組分得到極性強的黃酮甙類化合物，純度>50%， 60%乙醇水溶液洗 脫組分得到極性弱的黃酮類化合物，純度>50%,都滿足國家二類新藥原料的要求。本發 明的提取方法安全、簡便、合理經濟、適用于大規模生產。
具體實施例方式
實施例1
現場采收的鮮荷葉水洗、風干或烘干、粉碎，得到荷葉粉末；把5kg荷葉粉末用125L 60%的乙醇水溶液浸提，溫度75。C，浸提時間40min,收集濾液，濾渣用75L的60X乙 醇再提取一次，合并兩次濾液；減壓濃縮浸提液至50L左右，回收乙醇，過濾去除水不 溶性雜質；將濃縮過濾浸提液用33.3L石油醚(沸程6(TC)萃取兩為5萬超濾膜進行超濾， 超濾工藝條件為操作溫度常溫、超濾壓力0.15MPa，當超濾保留液次，將萃余液調節 pH9，過濾去除出現的少量沉淀；加100L水稀釋后，用MWCO減少至20L左右，分四 次各加入20L水透析，保證黃酮徹底透過膜，最終濾液體積為初始荷葉質量的50倍 (L/kg)，黃酮透過率>90%，制得黃酮超濾處理液。
在內徑<D為80mm樹脂柱內，濕法裝入高度1000mm的YZ-006樹脂(樹脂特征參 數材料為酚醛合成樹脂，比表面積400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g，平均孔徑70 80乾濕真密度1.02 1.12)，超濾處理液調節pH至5.8左右后，緩慢上柱，采用1.5 倍樹脂體積的酸性pH4低溫15'C以下的水洗滌有效去除雜質，然后用1.0 2.0倍樹脂體
積的10%的乙醇水溶液洗脫黃酮甙類化合物，真空濃縮烘干粉碎得干粉50.03g，純度 >50%;后用1.5倍樹脂體積的40%乙醇水溶液洗脫中等極性的黃酮類黃酮化合物，真空 濃縮烘干粉碎得干粉120.21§，純度>85%;再用1.5倍樹脂體積的50%乙醇水溶液洗脫， 棄去這部分洗脫液，最后用1.5倍樹脂體積的60%乙醇水溶液洗脫極性弱的黃酮類化合 物，真空濃縮烘干粉碎得干粉16.54g,純度>50°/。。 實施例2
現場采收的鮮荷葉水洗、風干或烘干、粉碎，得到荷葉粉末；把5kg荷葉粉末用150L 60%的乙醇水溶液浸提，溫度7(TC，浸提時間60min，收集濾液，濾渣用50L的60X乙 醇再提取一次，合并兩次濾液；減壓濃縮浸提液至50L左右，回收乙醇，過濾去除水不 溶性雜質；將濃縮過濾浸提液用35L石油醚(沸程6(TC)萃取兩為5萬超濾膜進行超濾， 超濾工藝條件為操作溫度常溫、超濾壓力0.15MPa，當超濾保留液次，將萃余液調節 pH8，過濾去除出現的少量沉淀；加100L水稀釋后，用MWCO減少至20L左右，分兩 次各加入80L水透析，保證黃酮徹底透過膜，最終濾液體積為初始荷葉質量的50倍 (L/kg)，黃酮透過率>卯％，制得黃酮超濾處理液。
在內徑①為80mm樹脂柱內，濕法裝入高度1100mm的YZ-006樹脂，超濾處理液 調節pH至5.8左右后，緩慢上柱，采用2.0倍樹脂體積的酸性pH4低溫15。C以下的水洗 滌有效去除雜質，然后用2.0倍樹脂體積的10%的乙醇水溶液洗脫黃酮甙類化合物，真 空濃縮烘干粉碎得干粉50.92g，純度>50%;后用2.0倍樹脂體積的40%乙醇水溶液洗脫 中等極性的黃酮類黃酮化合物，真空濃縮烘干粉碎得干粉120.86g，純度>85%;再用 1.0 2.0倍樹脂體積的50%乙醇水溶液洗脫，棄去這部分洗脫液，最后用1.0 2.0倍樹脂 體積的60%乙醇水溶液洗脫極性弱的黃酮類化合物，真空濃縮烘干粉碎得干粉16.32g， 純度>50%。 實施例3
現場采收的鮮荷葉水洗、風干或烘干、粉碎，得到荷葉粉末；把5kg荷葉粉末用125L 50%的乙醇水溶液浸提，溫度8(TC，浸提時間40min，收集濾液，濾渣用50L的50X乙 醇再提取一次，合并兩次濾液；減壓濃縮浸提液至40L左右，回收乙醇，過濾去除水不 溶性雜質；將濃縮過濾浸提液用40L石油醚(沸程60'C)萃取兩為5萬超濾膜進行超濾， 超濾工藝條件為操作溫度常溫、超濾壓力0.15MPa，當超濾保留液次，將萃余液調節 pH9，過濾去除出現的少量沉淀；加100L水稀釋后，用MWCO減少至20L左右，分四 次各加入20L水透析，保證黃酮徹底透過膜，最終濾液體積為初始荷葉質量的50倍 (L/kg)，黃酮透過率>卯％，制得黃酮超濾處理液。
在內徑0為80mm樹脂柱內，濕法裝入高度1000mm的YZ-006樹脂(樹脂特征參 數材料為酚醛合成樹脂，比表面積400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g,平均孔徑70 80禁，濕真密度1.02 1.12)，超濾處理液調節pH至5.8左右后，緩慢上柱，采用1.5 倍樹脂體積的酸性pH4低溫15'C以下的水洗滌有效去除雜質，然后用1.0 2.0倍樹脂體 積的10%的乙醇水溶液洗脫黃酮甙類化合物，真空濃縮烘干粉碎得干粉51.20g，純度 >50%;后用1.5倍樹脂體積的40%乙醇水溶液洗脫中等極性的黃酮類黃酮化合物，真空 濃縮烘干粉碎得干粉117.66g，純度>85%;再用1.5倍樹脂體積的45%乙醇水溶液洗脫， 棄去這部分洗脫液，最后用L5倍樹脂體積的60%乙醇水溶液洗脫極性弱的黃酮類化合 物，真空濃縮烘干粉碎得干粉13.75g,純度>50%。
實施例4
現場采收的鮮荷葉水洗、風干或烘干、粉碎，得到荷葉粉末；把5kg荷葉粉末用125L 70%的乙醇水溶液浸提，溫度75。C，浸提時間40min，收集濾液，濾渣用75L的70W乙 醇再提取一次，合并兩次濾液；減壓濃縮浸提液至50L左右，回收乙醇，過濾去除水不
溶性雜質；將濃縮過濾浸提液用30L石油醚(沸程6(TC)萃取兩為5萬超濾膜進行超濾， 超濾工藝條件為操作溫度常溫、超濾壓力0.15MPa，當超濾保留液次，將萃余液調節 pH9，過濾去除出現的少量沉淀；加100L水稀釋后，用MWCO減少至20L左右，分四 次各加入20L水透析，保證黃酮徹底透過膜，最終濾液體積為初始荷葉質量的50倍 (L/kg)，黃酮透過率>90%，制得黃酮超濾處理液。
在內徑0)為80mm樹脂柱內，濕法裝入高度1000mm的YZ-006樹脂(樹脂特征參 數材料為酚醛合成樹脂，比表面積400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g，平均孔徑70 80壤，濕真密度1.02 U2)，超濾處理液調節pH至5.8左右后，緩慢上柱，采用1.5 倍樹脂體積的酸性pH4低溫15。C以下的水洗滌有效去除雜質，然后用1.0-2.0倍樹脂體 積的10%的乙醇水溶液洗脫黃酮甙類化合物，真空濃縮烘干粉碎得干粉48.95g，純度 >50%;后用1.5倍樹脂體積的40%乙醇水溶液洗脫中等極性的黃酮類黃酮化合物，真空 濃縮烘干粉碎得干粉121.18g，純度>85%;再用1.5倍樹脂體積的50%乙醇水溶液洗脫， 棄去這部分洗脫液，最后用1.5倍樹脂體積的60%乙醇水溶液洗脫極性弱的黃酮類化合 物，真空濃縮烘干粉碎得干粉17.11g，純度>50%。
本發明的洗脫黃酮類化合物后的樹脂分別加入2.0~4.0倍樹脂體積，濃度為2 5%的堿、 酸、95%的乙醇進行洗滌，使樹脂恢復吸附性能。使樹脂再生。
權利要求
1、一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于，該方法按下列步驟順序進行1)將潔凈鮮荷葉干燥、粉碎，制得荷葉粉末；2)將荷葉粉末與50～70％乙醇，按重量比1∶25～30混合置入浸提釜中，升溫至70～80℃，靜置40～60分鐘，制得荷葉黃酮浸提液；3)將浸提液置入真空濃縮釜，脫除浸提液中的乙醇，至釜內物料質量為荷葉質量的9～11倍時，停止脫除乙醇，得濃縮浸提液，再過濾去除濃縮浸提液中的沉淀物；4)將過濾后的濃縮浸提液置入萃取釜，加入石油醚，攪拌、靜置30分鐘，萃取去除脂溶性雜質，得萃余液；5)調節萃余液的pH值為8.0～10，過濾去除堿不溶性雜質，調節pH值至原有水平，加入所用荷葉質量的30～50倍的水進行稀釋，再用MWCO在5～10萬超濾膜進行超濾，去除水溶性大分子雜質，超濾時為常溫，壓力為0.10～0.20MPa，直至料液剩15～30％時，加水透析至少兩次，制得黃酮超濾處理液；6)采用吸附容量為196mg黃酮/mL大孔樹脂，將其濕法裝入樹脂柱，水洗滌平衡后，將超濾處理液緩慢通入樹脂柱，上柱流速為4～6BV/h，檢測漏出液黃酮濃度達到初始濃度的10～20％時停止上柱；7)對吸附飽和的樹脂柱，采用1.0～2.0倍樹脂體積的pH值為3～5、溫度為10～15℃的水洗滌，有效去除雜質；然后用1.0～2.0倍樹脂體積的10％左右的乙醇水溶液洗脫樹脂吸附的黃酮甙類化合物，得純度＞50％的黃酮甙類化合物；接著用1.0～2.0倍樹脂體積的20～40％乙醇水溶液洗脫樹脂吸附的中等極性的黃酮類黃酮化合物，得純度＞85％的中等極性的黃酮類黃酮化合物；再用1.0～2.0倍樹脂體積的45～50％的乙醇水溶液洗脫，該洗液棄用；最后，用1.0～2.0倍樹脂體積的60％左右的乙醇水溶液洗脫樹脂中吸附的極性弱的黃酮類化合物，得純度＞50％的極性弱的黃酮類化合物；8)將上步驟分離得到的三種荷葉黃酮類化合物解吸液，分別進行真空濃縮，回收乙醇，得三種浸膏，再將三種浸膏分別進行真空干燥、粉碎，得三種荷葉黃酮精細粉。
2、 如權利要求1所述的一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于， 鮮荷葉的采取原則為蓮藕生長成熟期、色澤鮮艷、無斑點的荷葉。
3、 如權利要求1所述的一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于， 往步驟2)制得的濾渣中以重量比l: 15 10加入50 70%乙醇，按 步驟2)的溫度、時間再提取一次，并將該提取液加入步驟2)制得 的提取液。
4、 如權利要求1所述的一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于， 往步驟4)的濃縮浸提液中加入2/3 1倍體積的沸程為6(TC的石油 醚，萃取兩次，去除脂溶性雜質。
5、 如權利要求1所述的一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于， 將萃余液調節pH8 9，微濾后調節pH至原有水平5.6 5.9，加水稀 釋，至所用荷葉質量的30 50倍停止加水，再進行超濾，當超濾進行 至料液剩15 30%時，加水透析3 6次，每次透析加水量為荷葉質 量的2 4倍。
6、 如權利要求1所述的一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于， 大孔吸附樹脂為YZ-006樹脂，樹脂材料為酚醛合成樹脂，比表面積 400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g，平均孔徑70 80發，濕真密度 1.02 1.12。
7、 如權利要求1所述的一種提取荷葉黃酮的工藝，其特征在于， 對步驟7)中洗脫黃酮類化合物后的樹脂分別加入2.0~4.0倍樹脂體 積，濃度為2 5%的堿、酸、95%的乙醇進行洗滌，使樹脂恢復吸 附性能。
全文摘要
一種提取荷葉黃酮的工藝。涉及從荷葉中提取黃酮的制備工藝。采用沉淀—萃取—超濾—大孔吸附樹脂吸附聯用技術精制荷葉黃酮，濃縮脫醇后沉淀去除了水不溶性雜質，石油醚萃取脫除脂溶性雜質，超濾膜去除水溶性大分子雜質，大孔吸附樹脂選擇性吸附荷葉黃酮，分步洗脫收集不同類型的高純度黃酮，為醫藥行業使用提供規模化生產的提取荷葉黃酮的工藝。本發明對浸提液采用濃縮脫醇后沉淀去除了水不溶性雜質，其次采用石油醚萃取脫除脂溶性雜質，接著又采用超濾膜去除水溶性大分子雜質，經過這些預處理后，上柱液有效去除了雜質，減輕了對樹脂吸附的干擾，使樹脂對黃酮的吸附能力大大增強，黃酮吸附容量從83mg/ml樹脂增加至200mg/ml樹脂，能適應規模化生產。
文檔編號C07D311/00GK101095724SQ20061008562
公開日2008年1月2日 申請日期2006年6月28日 優先權日2006年6月28日
發明者劉國建, 董瑞建, 紅 韋, 黃阿根 申請人:揚州大學