專利名稱：紫杉醇納米微粒的制備方法
技術領域：
本發明屬于制藥領域，具體是將醇溶性的紫杉醇制成紫杉醇的納米微粒的方法。
紫杉醇(Paclitaxel)是從紅豆杉或短葉紫杉中提取分離的雙萜烯成分。紫杉醇是1994年7月由美國FDA批準進入市場的一種新型抗微管藥物，是一種廣譜抗癌藥物。現已作為卵巢癌和乳腺癌的一線藥物，對鉑類等已有抗藥性的頑固性卵巢癌亦有效，紫杉醇為具有重大突破的新一代腫瘤化療藥物。但是紫杉醇也具有顯著的毒副作用，主要為骨髓抑制和神經毒性，關節痛、肌肉痛常于用藥后2～3天出現，GPT升高占33％，脫發見于所有病人，常發生于治后第12～21天。另外，由于紫杉醇在紅豆杉樹皮中含量僅為萬分之二至五，在葉、莖中含量僅為十萬分之五左右，提取工藝復雜，不僅造成紫杉醇價格昂貴，而且將大量破壞現已不多的紅豆杉等植物資源。為此，研制具有更高生物利用度的紫杉醇納米微粒，大幅降低其毒副作用，減少紫杉醇使用劑量，不僅具有重大經濟價值還可以減少治療費用，對保護生態環境也有重大貢獻。
本發明的目的是制備紫杉醇納米顆粒，提高紫杉醇的生物利用度，大幅降低其毒副作用，減少紫杉醇的使用劑量，以達到降低治療費用，充分利用紅豆杉等植物資源。
本發明的目的是通過下述技術方案來實現的1.紫杉醇的醇溶液制備根據需要可制成濃度為1～10％的紫杉醇的醇溶液。將離子型和非離子型表面活性劑單獨或復合添加到紫杉醇的醇溶液中，制成滴加母液。表面活性劑的濃度為0.05～5％。如選用無水乙醇為醇溶劑，選用吐溫-80為表面活性劑。
2.在攪拌和超聲振動條件下，將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液緩慢滴加到純凈水中，經一定時間存放即形成納米紫杉醇懸浮液。純凈水的用量可為母液的5～500倍。
3.采用減壓蒸發法去除紫杉醇-水懸浮液中的溶劑醇。
4.為了進一步提高紫杉醇納米微粒的生物利用度和克服某種生物屏障，可對紫杉醇的納米顆粒進行表面修飾。
5.如需獲得納米紫杉醇粉末，可采用真空干燥或冷凍干燥等方法。
采用本發明方法所制備的納米紫杉醇懸浮液經激光粒度儀測定，其平均粒徑為202納米，經同濟醫科大學體外殺滅癌細胞試驗，結果表明在低濃度的條件下，納米紫杉醇懸浮液仍然呈現出顯著的殺滅癌細胞作用(附測試結果)。附測試結果紫杉醇及納米紫杉醇對三種腫瘤細胞的殺傷實驗一、采用方法乳酸脫氫酶法將三種處于對數生長細胞K562、A549、HL-60分別調成5×104/ml接種于96孔培養板，每孔100ul，分別加入不同濃度紫杉醇或納米紫杉醇，每種濃度平行3孔，并設立空白對照。給予10％牛血清1640培養液，每孔加100ul，最大釋放孔加100ul 1％NP40，培養48小時后。吸取上清部分，每孔100ul，加乳酸脫氫酶的底物，每孔100ul，室溫放置20分鐘后，加1M檸檬酸(30ul/孔)終止反應。二、計算公式殺傷活性＝OD(試驗孔-自然孔)/OD(最大釋放孔-自然孔)×100％三、結果見表1、表2、表3表1不同濃度紫杉醇對K562細胞的作用(殺傷％)
表2不同濃度紫杉醇對A549細胞的殺傷作用(殺傷％)
表3不同濃度紫杉醇對HL-60細胞的殺傷作用(殺傷％)
說明0#為紫杉醇水溶液；1#為納米紫杉醇懸浮液(粒度316nm)；2#為納米紫杉醇懸浮液(粒度202nm)乳酸脫氫酶底物配制硝基氯化四氮唑(NBT)3.2mg加氧化型輔酶I(NAD+)8mg、吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)0.8mg，再加雙蒸水至1.6ml，加乳酸鈉0.4ml，加0.1M PH7.4 PBS至10ml。
權利要求
1.紫杉醇納米微粒的制備方法，其特征在于將紫杉醇溶于醇中，形成紫杉醇的醇溶液；將離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑單獨或復合添加到紫杉醇的醇溶液中，制成滴加母液；然后在攪拌和超聲復合條件下，將母液滴加到純凈水中，經一定時間存放后即可得到納米紫杉醇懸浮液，若需獲得紫杉醇納米粉末，采用真空干燥或冷凍干燥等方法即可。
2.根據權利要求1所述的納米紫杉醇微粒的制備方法，其特征在于表面活性劑的濃度為0.05-5％；純凈水的用量為母液的5-500倍。
3.根據權利要求1或2所述的納米紫杉醇微粒的制備方法，其特征在于在攪拌的條件下，同時使用超聲振動分散措施，減小紫杉醇顆粒粒徑。
4.根據權利要求1、2、3所述的納米紫杉醇微粒的制備方法，其特征在于還可對制成的納米紫杉醇顆粒進行各種表面修飾，可進一步提高納米紫杉醇的生物利用度或賦予某種靶向性能。
全文摘要
本發明是一種紫杉醇納米微粒的制備方法，是在紫杉醇的醇溶液中添加0.05－5％的表面活性劑，在高速攪拌和超聲震動條件下，將母液滴加到5－500倍純凈水中，并經一定時間存放后即成為納米紫杉醇懸浮液，經冷凍干燥等方法，即可獲得紫杉醇納米微粒。本發明的方法可靠，操作簡便，所需能耗很低，不產生環境污染，所制得的納米紫杉醇具有更高的生物活性，可以充分發揮紫杉醇的治療效果。
文檔編號C07D305/14GK1463969SQ0213333
公開日2003年12月31日 申請日期2002年6月24日 優先權日2002年6月24日
發明者朱斌, 朱頡安, 章麗云 申請人:成都思摩納米技術有限公司