專利名稱：蛋白酶抑制劑的制作方法
本申請是申請日為1996年10月30日，申請號為96199284.0，發明名稱為“蛋白酶抑制劑”的發明專利申請的分案申請。
本發明的領域本發明一般涉及酰肼基、雙酰肼基和雙氨甲基羰基蛋白酶抑制劑，具體地說半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶抑制劑，更具體地說抑制半胱氨酸蛋白酶的化合物，更具體地說抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的化合物，更具體地說抑制組織蛋白酶家族的半胱氨酸蛋白酶的化合物，最具體地說為抑制組織蛋白酶K的化合物。此類化合物特別用于治療與半胱氨酸蛋白酶有關的疾病，特別是過量骨或軟骨損失，例如骨質疏松、牙周炎和關節炎。
本發明的背景組織蛋白酶家族為半胱氨酸蛋白酶的木瓜蛋白酶超家族的一部分。文獻中已描述組織蛋白酶B、H、L、N和S。最近，美國專利公開號5501969公開了組織蛋白酶K多肽和編碼此多肽的cDNA(稱作組織蛋白酶O)。最近表達、純化和鑒定了組織蛋白酶K[Bossard，M.J.等，(1996)J.Biol.Chem.271，12517-12524；Drake，F.H.等，(1996)J.Biol.Chem.271，12511-12516；Bromme，D.等，(1996)J，Biol.Chem.271，2126-2132.]。
在所述文獻中將組織蛋白酶K分別稱為組織蛋白酶O或組織蛋白酶O2。認為組織蛋白酶K是最合適的名稱。
組織蛋白酶在動物包括人的蛋白降解例如結締組織的降解的正常生理過程中起作用。然而，體內這些酶水平的提高能導致誘發疾病的病理狀態。因此，在各種疾病包括(但不限于)由卡氏肺囊蟲、克氏錐蟲(trypsanoma)、布氏錐蟲和短膜蟲屬fusiculata引起的感染；以及血吸蟲病、瘧疾、瘤轉移、異染性的腦白質營養不良、肌肉營養不良、肌萎縮(amytrophy)等疾病中作為病原體涉及到組織蛋白酶。見國際公開號WO94/04172(1994年3月3日公開)并在此引入作參考。亦見歐洲專利申請EP0603873A1并在此引入作參考。由P.gingivallis，也稱作gingipains得到的兩種細菌性半胱氨酸蛋白酶與齦炎的發病機理有關(Potempa，J.等，(1994)Perspectives in Drug Discovery andDesign，2，445-448)。
認為組織蛋白酶K為過量骨或軟骨損失的成因。骨是由蛋白基質組成的，其中混合了羥磷灰石的紡錘形或片形結晶。I型骨膠原代表含有約90％蛋白基質的骨的主要結構蛋白。其余10％的基質是由數種非骨膠原蛋白包括骨鈣蛋白、蛋白多糖、osteopontin、osteonectin、糖蛋白G、粘連蛋白和骨涎腺蛋白(bone sialoprotein)構成的。在整個生命過程中在分散的病灶部位骨架改型。這些病灶部位或者改型單位經歷一個骨吸收階段后骨替代階段的循環過程。
骨吸收是由破骨細胞進行的，破骨細胞是造血系的多核細胞。所述破骨細胞粘附于骨表面并形成一個緊密的密封區，隨后在它們頂部(即吸收)表面形成大量的膜皺縮。這在骨表面形成了一個包封的細胞外室，在皺縮的膜表面質子泵將其酸化并且所述破骨細胞將蛋白水解酶分泌于其中。所述室的低pH在骨表面溶解羥磷灰石結晶，同時蛋白水解酶消化蛋白基質。這樣，形成了一個吸收腔隙或凹窩。所述循環的這一階段結束，破骨細胞沉積于新的蛋白基質上，蛋白基質隨后被礦物化。在幾種疾病，如骨質疏松和Paget氏病中，骨吸收和形成之間的平衡被打破并且在每一循環中都有骨的凈損失。最終，它將導致所述骨變弱并因此導致伴有小創傷的骨折的危險性增加。
幾項公開的研究表明半胱氨酸蛋白酶抑制劑可有效抑制破骨細胞介導的骨吸收并在骨吸收中對半胱氨酸蛋白酶顯示必需的作用。例如，Delaisse等(Biochem.J.，1980，192，365)公開在小鼠骨器官培養系統中一系列的蛋白酶抑制劑并表明半胱氨酸蛋白酶抑制劑(如，亮肽素，Z-Phe-Ala-CHN2)阻止骨吸收，而絲氨酸蛋白酶抑制劑無效。Delaisse等(Biochem.Biophys.Res.Commun，1984，125，441)公開測定缺鈣飲食大鼠血鈣的急劇變化中發現E-64和亮肽素在體內阻止骨吸收時也有效。Lerner等(J.Bone Min.Res.，1992，7，433)公開cystatin(內源性的半胱氨酸蛋白酶抑制劑)可以在小鼠顱蓋抑制PTH刺激的骨吸收。其他研究，例如Delaisse等(Bone，1987，8305，Hill，et al.，J.Cell.Biochem.，1994，56，118，and Everts，et al.，J.Cell.Physiol.，1992，150，221)也報道抑制半胱氨酸蛋白酶活性和骨吸收之間的關系。Tezuka等(J.Biol.Chem.，1994，269，1106)、Inaoka等(Biochem.Biophys.Res.Commun.，1995，206，89)和Shi等(FEBS Lett.，1995，357，129)公開在正常條件下，組織蛋白酶K(半胱氨酸蛋白酶)在破骨細胞中大量表達并為在這些細胞中存在的主要半胱氨酸蛋白酶。
組織蛋白酶K在破骨細胞中的大量選擇性表達強烈的表明該酶為骨吸收所必需的。因此，組織蛋白酶K的選擇性的抑制可以為過量的骨損失，包括(但不限于)骨質疏松、齒齦疾病例如齦炎和牙周炎、Paget氏疾病、惡性腫瘤高血鈣癥和代謝性骨疾病提供有效的治療。也已證明在骨關節炎滑膜的破軟骨細胞中組織蛋白酶K水平升高。因此組織蛋白酶K的選擇性抑制也可以用于治療過量軟骨或基質的降解的疾病，包括(但不限于)骨關節炎和類風濕性關節炎。轉移瘤細胞一般也表達高水平的蛋白水解酶，它可以降解周圍基質。因此，組織蛋白酶K的選擇性抑制也可以用于治療特定的瘤疾病。
已知幾種半胱氨酸蛋白酶抑制劑。Palmer[(1995)J.Med.Chem.38，3193]公開某些乙烯基砜，它們可以不可逆地抑制半胱氨酸蛋白酶，例如組織蛋白酶B、L、S、O2和cruzain。也已報道其他類的化合物，例如醛、腈、α-酮基羰基化合物、鹵代甲基酮、重氮甲基酮、(酰氧基)甲基酮、酮基甲基硫鎓鹽和環氧琥珀酰基化合物可以抑制半胱氨酸蛋白酶(見Palmer，id并在此引入作參考)。
美國專利號4518528公開肽基氟代甲基酮為半胱氨酸蛋白酶的不可逆的抑制劑。公開國際專利申請號WO94/04172和歐洲專利申請號EP 0525420 A1、EP 0603873 A1和EP 0611756 A2描述抑制半胱氨酸蛋白酶組織蛋白酶B、H和L的烷氧基甲基和巰基甲基酮。國際專利申請號PCT/US94/08868和歐洲專利申請號EP 0623592A1描述抑制半胱氨酸蛋白酶IL-1β轉化酶的烷氧基甲基和巰基甲基酮。也將烷氧基甲基和巰基甲基酮描述為絲氨酸蛋白酶肌肽原酶的抑制劑(國際專利申請號PCT/GB91/01479)。
Elmore等(Biochem.J.，1968，107，103)、Garker等(Biochem.J.1974，139，555)、Gray等(Tetrahedron，1977，33，837)、Gupton等(J.Biol.Chem.1984，259，4279)、Powers等(J.Biol.Chem.1984，259，4288)公開設計用于輸送氮氨基酸(azaamino acid)至絲氨酸蛋白酶活性部位的氮肽(azapeptides)并已知這些氮肽抑制絲氨酸蛋白酶。此外，J.Med.Chem.1992，35，4279公開某些氮肽酯作為半胱氨酸蛋白酶抑制劑。
McConnell等(J.Med.Chem.33，86)描述抗痛素和亮肽素作為半胱氨酸蛋白酶的不可逆的抑制劑；Umezawa等(45 Meth.Enzymol.678)也公開抗痛素和亮肽素為絲氨酸蛋白酶的抑制劑，也已知E64和其合成類似物為半胱氨酸蛋白酶抑制劑(Barrett，Biochem.J.，201，189，and Grinde，Biochem.Biophys.Acta，701，328)。
美國專利號5142056描述1，3-二酰氨基-丙酮，它可以抑制HIV蛋白酶。也將1，3-二酰氨基-丙酮描述為止痛劑(美國專利號4749792和4638010)。
本領域公開氨基酸的某些雜環衍生物。例如，Hamada等[PEPTIDE CHEMISTRY，1983.Proceedings of the 21st Symposium onPeptide Chemistry(1984)]和Boden等[Tet.Lett.1994，35，8271(1994)]公開噻唑衍生物；和Borg等(1995，60，3112)公開噁二唑和三唑衍生物。
最近Han和Janda(J.Am.Chem.Soc.1996，118，2539)公開肽模擬物azatides(多酰基酰肼)的合成。
因此，鑒定了半胱氨酸蛋白酶抑制劑結構的多樣性。然而，由于它們有各種缺點，從而認為這些已知的抑制劑不適于用作動物，特別是人的治療劑。這些缺點包括缺乏選擇性、細胞毒性、差的溶解性和過快的血漿清除。因此需要治療由半胱氨酸蛋白酶包括組織蛋白酶，特別是組織蛋白酶K病理水平引起的疾病的方法和用于此方法的新的抑制劑化合物。
我們現已發現一類新的酰肼基、雙酰肼基和雙氨甲基羰基化合物，它們為蛋白酶，更具體地說組織蛋白酶K的抑制劑。
本發明的概述本發明的目的是提供酰肼基、雙酰肼基和雙氨甲基羰基蛋白酶抑制劑，具體地說半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶的抑制劑，更具體地說抑制半胱氨酸蛋白酶的化合物，更具體地說抑制木瓜蛋白酶超家族半胱氨酸蛋白酶的化合物，更具體地說抑制組織蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶的化合物，最具體地說抑制組織蛋白酶K的化合物，以及用于治療通過改變此類蛋白酶的活性可以有效改善的疾病。
因此，一方面，本發明提供根據式I的化合物。
另一方面，本發明提供藥用組合物，它包括根據式I的化合物和藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
另一方面，本發明提供治療疾病的方法，其中通過抑制蛋白酶，具體地說半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶，更具體地說半胱氨酸蛋白酶，更具體地說木瓜蛋白酶超家族半胱氨酸蛋白酶，更具體地說組織蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶，最具體地說組織蛋白酶K可以有效改善疾病病理狀態。
另一方面，本發明的化合物可以特別用于治療以骨損失，例如骨質疏松和齒齦疾病如齒齦炎和牙周炎，或者過量軟骨或基質降解如骨關節炎和類風濕性關節炎為特征的疾病。
本發明詳述本發明提供式I化合物及其藥學上可接受的鹽 其中D＝ L-G-Q＝ 其中A＝無， B＝
L＝C2-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、CH(R66)NR60R68、CH(R66)Ar、CH(R66)OAr’、NR66R67；M＝C(O)、SO2；G＝ J＝C(O)，SO2；T＝Ar，Het；V＝C3-7環烷基；W＝H、-CN、-CF3、-NO2、-COR7、-CO2R6、-CONHR6、-SO2NHR6、-NHSO2R6、-NHCOR7、-O-COR6、-SR6、NR’R6、NR’(C＝NH)NHR5、Cl、Br、I、F；X＝Y＝Z＝N、O、S或CR4，前提為X、Y和Z之中至少有兩個為雜原子且X、Y和Z之中至少一個為N，或者X、Y和Z之一為C＝N、C＝C或C＝N且其余兩個為CR4或N，前提為X、Y和Z一起包括至少兩個N；…在五元雜環中表示一個單鍵或雙鍵；m＝0、1、2；n＝1至6；φ＝0、1、2；Ar＝苯基、萘基，可任選被一個或多個Ph-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C1-6烷氧基、Ph-C0-6烷氧基、Het-C0-6烷氧基、OH、(CH2)1-6NR58R59、O(CH2)1-6NR58R59取代；Ar’＝苯基或萘基，可任選被一個或多個Ph-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C1-6烷氧基、Ph-C0-6烷氧基、Het-C0-6烷氧基、OH、(CH2)1-6NR58R59、O(CH2)1-6NR58R59或鹵素取代；R’＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；
R1＝H、C1-6烷基；R2＝C4-6鏈烷基、C4-6鏈烯基、芐基；R3＝C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、R5CO-、R5SO2-、R5OC(O)-、R5NHCO-；R4＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R5＝Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R6＝H、C1-6烷基、CH2CF3、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R7＝C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R8＝H；C2-6鏈烯基；C2-6炔基；Het；Ar；C1-6烷基；可任選被OR’、SR’、NR’2、CO2R’、CO2NR’2、N(C＝NH)NH2、Het或Ar取代；R9＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R10＝C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R11＝H、C1-6烷基、Ar-C1-6烷基、Het-C0-6烷基或 R12＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R13＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基； R15＝H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、Ar、Het或可任選被OR9、NR92、CONR92、N(C＝NH)NH-、Het或Ar取代的C1-6烷基；R16＝C2-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、Ar、Het或可任選被OR9、SR9、NR92、CO2R9、CONR92、N(C＝NH)NH-、Het或Ar取代的C2-6烷基；
R19＝H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、Ar、Het或可任選被OR9、SR9、NR92、CO2R9、CONR92、N(C＝NH)NH-、Het或Ar取代的C1-6烷基；R17＝R72＝H、C1-6烷基、R10、R10C(O)-、R10C(S)-、R10OC(O)-；R21＝R26＝C5-6烷基；C2-6鏈烯基；C3-11環烷基；T-C3-6烷基；V-C1-6烷基；T-C2-6鏈烯基；T-(CH2)nCH(T)(CH2)n；可任選被一個或兩個鹵素、SR20、OR20、NR20R27或C1-4烷基取代；R27＝R28CO、R28OCO；R28＝C1-6烷基；C3-11環烷基；Ar；Het、T-C1-6烷基；T-(CH2)nCH(T)(CH2)n；可任選被一個或兩個鹵素、SR20、OR20、NR20R73、C1-6烷基取代；R20＝R22＝R23＝R24＝R25＝R73＝H、C1-4烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；
R29＝ Cbz-亮氨酰基-；2-、3-或4-吡啶基甲氧基羰基亮氨酰基-；4-咪唑乙酰基-亮氨酰基-，苯基乙酰基-亮氨酰基，N，N-二甲基-甘氨酰基亮氨酰基，4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基，2-吡啶基磺酰基-亮氨酰基，4-吡啶基羰基-亮氨酰基，乙酰基-亮氨酰基，苯甲酰基-亮氨酰基，4-苯氧基-苯甲酰基-，2-或3-芐氧基苯甲酰基-，聯苯基乙酰基，α-異丁基-聯苯基乙酰基，Cbz-苯基丙氨酰基，Cbz-正亮氨酰基-，Cbz-正纈氨酰基-，Cbz-谷氨酰基-，Cbz-∈-(t-丁酯)-谷氨酰基-；乙酰基-亮氨酰基-，6-或8-喹啉羰基，聯苯基乙酰基，α-異丁基-聯苯基乙酰基，乙酰基，苯甲酰基，2-或3-芐氧基苯甲酰基，4-苯氧基苯甲酰基-，Cbz-氨基酸-；2-、3-或4-吡啶基甲氧基羰基-氨基酸-；芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，雜芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，雜芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，C1-6烷氧基羰基-氨基酸-；C1-6烷基羰基，芳基C0-C6烷基羰基，雜芳基C0-C6烷基羰基，芳基C0-C6烷基羰基，雜芳基C0-C6烷基羰基，C1-C6烷基磺酰基，芳基C0-C6烷基磺酰基，雜芳基C0-C6烷基磺酰基，芳基C0-C6烷基磺酰基，雜芳基C0-C6烷基磺酰基；R30＝-H，C1-6烷基；
R31＝ Cbz-亮氨酰基-；2-、3-或4-吡啶基甲氧基羰基-亮氨酰基-；4-咪唑乙酰基-亮氨酰基-，苯基乙酰基-亮氨酰基，N，N-二甲基-甘氨酰基亮氨酰基，4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基，2-吡啶基磺酰基-亮氨酰基，4-吡啶基羰基-亮氨酰基，乙酰基-亮氨酰基，苯甲酰基-亮氨酰基，4-苯氧基-苯甲酰基-，2-或3-芐氧基苯甲酰基-，聯苯基乙酰基，α-異丁基-聯苯基乙酰基，Cbz-苯基丙氨酰基，Cbz-正亮氨酰基-，Cbz-正纈氨酰基-，Cbz-谷氨酰基，Cbz-∈-(t-丁酯)-谷氨酰基-；乙酰基-亮氨酰基-，6-或8-喹啉羰基，聯苯基乙酰基，α-異丁基-聯苯基乙酰基，乙酰基，苯甲酰基，2-或3-芐氧基苯甲酰基，4-苯氧基苯甲酰基-，Cbz-氨基酸-；2-、3-或4-吡啶基甲氧基羰基-氨基酸-；芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，雜芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，雜芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，C1-C6烷氧基羰基-氨基酸-；C1-C6烷基羰基，芳基C0-C6烷基羰基，雜芳基C0-C6烷基羰基，芳基C0-C6烷基羰基，雜芳基C0-C6烷基羰基，C1-C6烷基磺酰基，芳基C0-C6烷基磺酰基，雜芳基C0-C6烷基磺酰基，芳基C0-C6烷基磺酰基，雜芳基C0-C6烷基磺酰基；R32＝OCH2Ar，OCH2C1-6烷基，芳基取代C0-C6烷基，雜芳基取代C0-C6烷基，4-咪唑基亞甲基；2-、3-或4-吡啶基亞甲氧基；4-吡啶基亞甲基，2-吡啶基磺酰基，4-吡啶基，芳基取代C0-C6烷氧基，雜芳基取代C0-C6烷氧基；R33＝C1-6烷基，-CH2Ph、-CH2CH2CO2R34；R34＝-H、C1-6烷基；R35＝Ar、HetAr；R36＝芳基、雜芳基、吡啶基、異喹啉基；R37＝C1-6烷基，-CH2Ph、-CH2CH2CO2R34；R38＝Cbz；C1-6烷基或芳基取代Cbz；C1-6烷基-CO；苯甲酰基；C1-6烷基或芳基取代苯甲酰基；
R39＝ Cbz-亮氨酰基-；2-、3-或4-吡啶基甲氧基羰基-亮氨酰基-；4-咪唑乙酰基-亮氨酰基-，苯基乙酰基-亮氨酰基-，N，N-二甲基-甘氨酰基亮氨酰基-，4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基，2-吡啶基磺酰基-亮氨酰基，4-吡啶基羰基-亮氨酰基，乙酰基-亮氨酰基，苯甲酰基-亮氨酰基，4-苯氧基-苯甲酰基-，2-或3-芐氧基苯甲酰基-，聯苯基乙酰基，α-異丁基-聯苯基乙酰基，Cbz-苯基丙氨酰基，Cbz-正亮氨酰基-，Cbz-正纈氨酰基-，Cbz-谷氨酰基-，Cbz-∈-(t-丁酯)-谷氨酰基-；乙酰基-亮氨酰基，6-或8-喹啉羰基，聯苯基乙酰基，α-異丁基-聯苯基乙酰基，乙酰基，苯甲酰基，2-或3-芐氧基苯甲酰基，4-苯氧基苯甲酰基-，Cbz-氨基酸-；2-、3-或4-吡啶基甲氧基羰基-氨基酸-；芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，雜芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，雜芳基C0-C6烷氧基羰基-氨基酸-，C1-C6烷氧基羰基-氨基酸-；C1-C6烷基羰基，芳基C0-C6烷基羰基，雜芳基C0-C6烷基羰基，芳基C0-C6烷基羰基，雜芳基C0-C6烷基羰基，C1-C6烷基磺酰基，芳基C0-C6烷基磺酰基，雜芳基C0-C6烷基磺酰基，芳基C0-C6烷基磺酰基，雜芳基C0-C6烷基磺酰基；R40＝H和C1-6烷基；R41＝H和C1-6烷基；R42＝C1-6烷基，芳基取代C1-C6烷基和雜芳基取代C1-C6烷基；H(當R43為C1-6烷基，芳基取代C1-C6烷基；和雜芳基取代C1-C6烷基時)；R43＝C1-6烷基，芳基取代C1-C6烷基和雜芳基取代C1-C6烷基；H(當R42為C1-6烷基，芳基取代C1-C6烷基；和雜芳基取代C1-C6烷基時)；R44＝CH(R53)NR45R54，CH(R55)Ar，C5-C6烷基；R45＝R46＝R47＝R48＝R49＝R50＝R51＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R52＝Ar、Het、CH(R56)Ar、CH(R56)OAr、N(R56)Ar、C1-6烷基、CH(R56)NR46R57；R53＝C2-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基，R53和R45可以連接形成吡咯烷或哌啶環；R54＝R57＝R47、R47C(O)、R47C(S)、R47OC(O)；R55＝R56＝R58＝R59＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R60＝R61＝R62＝R63＝R64＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或Het-C0-6烷基；R65＝C1-6烷基、Ar、Het、CH(R69)Ar、CH(R69)OAr、N(R69)Ar、CH(R69)NR61R70；R66＝R69＝R71＝H、C1-6烷基、(CH2)0-6-C3-6環烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R67＝C1-6烷基、(CH2)0-6-C3-6環烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基；R66和R67可以結合形成3-7元單環或者7-10元雙環碳環或雜環，可任選被1-4個C1-6烷基、Ph-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C1-6烷氧基、Ph-C0-6烷氧基、Het-C0-6烷氧基、OH、(CH2)1-6NR58R59、O(CH2)1-6NR58R59；R68＝R70＝R62、R62C(O)、R62C(S)、R62OC(O)、R62OC(O)NR59CH(R71)(CO)。
式I化合物為具有蛋白酶底物，最具體地說組織蛋白酶K底物需要的共同的主要結構特征的酰肼基、雙酰肼基和雙氨甲基羰基化合物。這些結構特征使本發明化合物具有適當的適合酶活性部位必需的分子形狀，從而結合至該活性部位上，并與該活性部位上的巰基反應，從而封閉該部位并抑制酶的生物活性。就式I來說，此結構特征包括中心親電的羰基、在所述中心羰基的任一側的肽基或擬肽(peptidomimetic)分子骨架、位于所述羰基一側或兩側所述骨架上的末端芐氧羰基部分(例如Cbz-亮氨酰基)或其模擬物，且可任選所述羰基一側或兩側骨架上延伸的異丁基側鏈。
其中D＝ 及Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式II化合物。
本發明更優選的實例包括式II化合物，其中X＝S、Y＝CH，且Z＝N；X＝CH，Y＝S，且Z＝N；X＝N，Y＝N，且Z＝S；X＝N，Y＝N，且Z＝O；和X＝N，Y＝N，且Z＝N。
優選R1為H、甲基或異丁基。優選R1為異丁基。
優選R2為異丁基或芐基。
優選R3為R5OC(O)-，特別是芐氧基羰基。
優選A為D-或L-氨基酸或者不存在，優選不存在A。
優選W為CN、NHR6、SR6、CONHR6或CO2R6。R6適合為H、C1-4烷基、苯基或芐基。一般而言，W為CO2H、CO2-C1-4烷基、CO2-Ph、CO2-CH2Ph、CONH2、NH2或SH。
特別優選式II的下列化合物(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-甲酰胺基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-氰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-[2-(N’-芐基甲酰胺基)噻唑-4-基]-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-[2-[N’-(3-甲基丙基)甲酰胺基]噻唑-4-基]-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-[2-[N’-(2-苯基乙基)甲酰胺基]噻唑-4-基]-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基-2，2，2-三氟代乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基-L-亮氨酰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-甲酰胺基噁二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-3-苯基丙酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基-L-亮氨酰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；
(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(5-巰基-1，2，4-噁二唑-3-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-巰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)甲基-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-芐氧基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基-N-[3’-甲基-1’-(2-苯氧基羰基噻唑-4-基)丁基]戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基-N-[3’-甲基-1’-[2-(2-甲基丙氧基羰基)噻唑-4-基]丁基]戊酰胺；(2R，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)乙基]-4-甲基戊酰胺；(2R，1’R)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)乙基]-4-甲基戊酰胺；和(2S，1’S)-N-[1’-(2-氨基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基戊酰胺。
最優選的式II化合物為(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺；和(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基-L-亮氨酰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺。
其中D＝ 和Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式III化合物。
就式III化合物而言優選B為 或 更優選B為 或 優選R11為 優選R12和R13為H。優選R14為 優選R15、R16、R18和R19為C1-6烷基。更優選R15和R18為C4-6烷基。優選Ar為可任選被一個或兩個選自鹵素、CF3、NO2、SR9、OR9、NR9或C1-4烷基的基團取代的苯基。優選R17和R72為R10OC(O)-；且更優選R10為Ar-C1-4烷基。優選R16和R19為C4-6烷基；更優選R16和R19為i-Bu。優選R17和R72為Cbz。
本發明式III化合物的一個特別的實例為式F化合物 其中X、Y、Z、R16、R17、R19和R72如式III所述。
最優選的式III化合物為(1S)-N-[4-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-N’-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基酰肼；和(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼。
其中D＝ 和Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式IV化合物。
本發明更優選的實例為式IV化合物，其中R21和R26選自N-Cbz-亮氨酰基、N-Cbz-甘氨酰基、N-乙酰基-亮氨酰基、N-Cbz-丙氨酰基、 和R22、R23、R24和R25為H。
特別優選的式IV化合物的實例為2，2’-(N，N’-雙芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼；2，2’-(N，N’-雙環己基乙酰基)碳酰肼；2，2’-(N，N’-雙-4-甲基戊酰基)碳酰肼；2，2’-(N，N’-雙環戊基乙酰基)碳酰肼；2，2’-(N，N’-雙芐氧基羰基甘氨酰基)碳酰肼；2，2’-(N，N’-雙乙酰基-L-亮氨酰基)碳酰肼；2，2’-(N，N’-雙芐氧基羰基-L-丙氨酰基)碳酰肼；和2-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-2’-[N’-(4-甲基戊酰基)碳酰肼。
2，2’-(N，N’-雙芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼是式IV最優選的實例。
其中D＝ 和Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式V化合物。
在更優選的式V化合物中，當R30＝C1-C6烷基時，R30優選為Me或-CH2CH2Me2。當R33＝C1-C6烷基時，R33優選為-Pr、-Bu或-CH2CH2Me2。當R34＝C1-C6烷基時，R34優選為-t-Bu。
式V化合物更優選的實例包括雙-(Cbz-亮氨酰基)-1，3-二氨基-丙-2-酮；雙-1，3-(4-苯氧基-苯甲酰基)-二氨基-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(乙酰基-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-谷氨酰基-t-丁酯)-氨基-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-谷氨酰基)-氨基-丙-2-酮；雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-(S)-丁酮-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-苯基丙氨酰基)-氨基-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-正亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-正纈氨酰基)-氨基-丙-2-酮；雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-5-甲基-(S)-己-2-酮；1-(乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-(4-苯氧基-苯甲酰基)-氨基-丙-2-酮；1-(Cbz-高-亮氨酰基)-氨基-(Cbz-亮氨酰基)-3-氨基-丙-2-酮。
1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(乙酰基-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮為本發明式V的最優選的實例。
其中D＝ 和Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式VI化合物。
更優選R35＝Ph、 或吡啶，更優選R35＝Ph、 Ph可任選被C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素和氰基基團取代。當R35＝吡啶時，R可以是2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基。
式VI最優選的實例包括雙-1，3-(4-(3-鹵代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰胺基)-丙-2-酮；雙-1，3-(4-苯氧基-苯基亞磺酰胺基)-丙-2-酮。 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式VII化合物。
更優選R36選自 且在所述更優選的式VII化合物中，R37＝Me。
式VII特別優選的實例包括1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(4-(3-鹵代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰胺基-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(對甲苯磺酰基-氨基)-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-((4-苯氧基-苯基)-亞磺酰胺基)-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰胺基)-丙-2-酮；1-(Cbz-高-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰胺基)-丙-2-酮；和1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰胺基)-(S)-丁-2-酮。
式VII最優選的實例為1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-((4-苯氧基-苯基)-亞磺酰胺基)-丙-2-酮、1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰胺基)-丙-2-酮和1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰胺基)-(S)-丁-2-酮。其中D＝ 及Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式VIII化合物。
式VIII的更優選的實例為R43是2-二苯并呋喃磺酰基。
特別優選的式VIII的實例是(S)-苯基甲基[1-[[[3-[芐氧基羰基-亮氨酰基-氨基]-2-氧代丙基]-1-(芐基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯。
(S)-苯基甲基[1-[[[3-[(2-二苯并呋喃磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(芐基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯(S)-苯基甲基[1-[[[3-[2-二苯并呋喃磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(4-吡啶基甲基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯1-[[[3-[(2-二苯并呋喃磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(4-吡啶基甲基)苯甲酰胺(S)-苯基甲基[1-[[[3-[(2-二苯并呋喃磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-1-(4-吡啶基甲基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯(S)-苯基甲基[1-[[[3-[(2-二苯并呋喃磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-1-(4-吡啶基甲基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯是式VIII最優選的實例。
其中D＝ 及Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式IX化合物。
式IX化合物，其中R44＝CH(R53)NHR54；R45、R46、R48、R49、R50和R51為H；R47獨立為CH3、芐基、2-吡啶基甲氧基、4-二甲基氨基芐基；J＝C(O)；R52＝Ar、CH(R10)Ar、CH(R10)OAr、N(R10)Ar、CH(R10)NR”R11；R53＝乙基、i-Bu；
R54＝R47、R47C(O)、R47OC(O)；R56＝H、CH3、i-Bu；R57＝R47、R47OC(O)；Ar＝苯基或萘基，可任選被一個或多個Ph-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C1-6烷氧基、Ph-C0-6烷氧基、Het-C0-6烷氧基、OH、(CH2)1-6NR58R59、O(CH2)1-6NR58R59；R58、R59＝H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基是本發明更優選的實例。
特別優選式IX的下列化合物2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯氧基苯基磺酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]-2’-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯基苯甲酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-甲氧基苯甲酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯氧基苯甲酰基)]碳酰肼；2-(N-乙酰基)-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)碳酰肼；2-[N-(N-乙酰基-L-丙氨酰基)-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-羥基-[3-(4-嗎啉代甲基)]]苯甲酰基]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-(N，N-二甲基氨基甲基)芐氧基]羰基-L-亮氨酰基]碳酰肼；2-(N-苯甲酰基)-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酰基]]碳酰肼；2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-[3-(N，N-二甲基氨基)-1-丙氧基]苯甲酰基]]碳酰肼；2-[N-(2-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]]碳酰肼；2-[N-(4-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-5-甲氧基)苯甲酰基]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-4，5-二甲氧基)苯甲酰基]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-5-乙氧基)苯甲酰基]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-脯氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯基苯基乙酰基)]碳酰肼；(2’S)-2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-2-氨基丁酰基)]碳酰肼；2，2’-[N，N’-[雙-(4-苯基苯基乙酰基)]]碳酰肼；(2’RS)-2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[2-(4-苯基苯氧基)丙酰基]碳酰肼；2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(4-甲基戊酰基)]碳酰肼；(2RS，2’RS)-2，2’-[N，N’-[雙-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]]碳酰肼；(2’RS)-2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-(甲基戊酰基)]]碳酰肼；(2’RS)-2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-(甲基戊酰基)]]碳酰肼；2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]]碳酰肼；2-[N-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]]碳酰肼；(2RS)-2-[N-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基丙基)氨基甲酰基]]碳酰肼；
2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼。其中D＝L-G-和Q＝ 的式I化合物為本發明優選的實例。為方便起見，此后將此類化合物稱為式X化合物。
就式X而言更優選G為 或 更優選R63和R64為H且R66和R69為i-丁基。
更優選R65為CH(R69)NR61R70，其中R69為i-丁基且R61為H。更優選R70為R62OC(O)，其中R62為 或 或者，R65為Ar或CH(R69)Ar，其中所述R65基團中的Ar為 或 或 更優選L為CH(R66)NR60R68、CH(R66)Ar、NR66R67、CH(R66)OAr’、Ar或Het，其中R66為i-丁基且所述L基團中的Ar為 或 或者所述L基團中的Het為 更優選L為NR66R67或CH(R66)R60R68。
一個特別優選的實例為式G化合物 另一特別優選的實例為式H化合物 最優選下列式X化合物(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(4-苯氧基苯基磺酰基)酰肼；(1S)-N-[4-[1-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼；(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(4-苯基苯基乙酰基)酰肼；(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]酰肼；N-[2-(2-氯代苯氧基甲基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；
N-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-[4-(1，2，3-噻二唑-4-基]苯基]噻唑-4-基羰基]酰肼；N-[2-[3-(4-氯代苯基磺酰基甲基)噻吩-2-基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S，2’RS)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[2’-(4-苯基苯基乙酰基)-4-甲基戊酰基]酰肼；N-[2-(3-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1RS)-N-[2-[1-(4-苯基苯基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-[N-甲基-N-(4-苯基苯基)氨基]噻唑4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(4-苯基芐基)噻唑-4-基羰基]酰肼；N-[2-(4-苯基苯基芐基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基)噻唑-4-基羰基]酰肼；N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]酰肼；N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；和N-[2-(2-甲氧基苯基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼。
定義本發明包括本發明化合物的所有水合物、溶劑化物、復合物和前體藥物。前體藥物是任何共價鍵相連的在體內可以釋放根據式I的活性母體藥物的化合物。如果在本發明的化合物中存在一個手性中心或者異構中心的另一種形式，那么在此包括此一個異構物或多個異構物的所有形式，包括對映體和非對映體。含有一個手性中心的本發明的化合物可以以外消旋混合物、對映體的混合物的形式使用，或者用熟知的技術可將外消旋混合物分離并單獨應用每個對映體。如在化合物中有碳-碳雙鍵，那么本發明包括順式(Z)和反式(E)異構物。如化合物中存在互變異構形式，例如酮-烯醇互變異構體，那么不論是否存在平衡還是一種形式占優勢，每一種互變異構形式都包括在本發明中。
式I或其任何亞式(subformula)的任一取代基在任何情況下都有其獨立的意義，否者除非特別說明在另一情形下與其它取代基的意義不同。
在此用肽和化學領域中常用的縮寫和符號來描述本發明的化合物。一般而言，氨基酸的縮寫遵循Eur.J.Biochem，158，9(1984)中所述IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature。此處所用術語“氨基酸”指丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。
此處所用“C1-6烷基”意指包括取代和未取代甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基、戊基、正戊基、異戊基、新戊基和己基和其簡單的脂肪族異構物。任一C1-6烷基可任選獨立被一個或兩個鹵素、SR’、OR’、N(R’)2、C(O)N(R’)2、氨基甲酰基或C1-4烷基(其中R’為C1-6烷基)取代。C0烷基的意思為所述部分不存在烷基。因此，Ar-C0烷基與Ar等同。
此處所用“C3-11環烷基”意指包括取代和未取代環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、環辛烷、環壬烷、環癸烷、環十一烷。
此處所用“C2-6鏈烯基”意指2至6個碳原子的烷基，其中一個碳-碳單鍵被一個碳-碳雙鍵代替。C2-6鏈烯基包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基和幾個戊烯基和己烯基的異構體。順式和反式異構體都包括在其中。
“C2-6炔基”意指2至6個碳原子的烷基，其中一個碳-碳單鍵被一個碳-碳三鍵代替。C2-6炔基包括乙炔、1-丙炔、2-丙炔、1-丁炔、2-丁炔、3-丁炔基和戊炔基以及己炔基的簡單的異構體。
“鹵素”指F、Cl、Br和I。
“Ar”或“aryl”意指苯基或萘基，可任選被一個或多個Ph-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C1-6烷氧基、Ph-C0-6烷氧基、Het-C0-6烷氧基、OH、(CH2)1-6NR58R59、O(CH2)1-6NR58R59；其中R58、R59＝H、C1- 6烷基；Het-C0-6烷基(C1-4烷基)、OR’、N(R’)2、SR’、CF3、NO2、CN、CO2R’、CON(R’)、F、Cl、Br和I取代。
此處所用“Het”或“雜環”代表穩定的5至7元單環雜環或穩定的7至10元雙環雜環，它可以是飽和的或不飽和的，且它含有碳原子和一個至三個選自N、O和S的雜原子，且其中氮原子和硫雜原子可任選被氧化，氮雜原子可任選四價化，且包括上述所定義的任一雜環與苯環稠合的雙環基團。所述雜環可以連接于任何產生穩定結構的雜原子或碳原子上，可以任選被一個或兩個選自C1-4烷基、OR’、N(R’)2、SR’、CF3、NO2、CN、CO2R’、CON(R’)、F、Cl、Br和I的部分取代，其中R’為C1-6烷基。此類雜環的實例包括哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮雜基、氮雜基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、噁唑烷基、噁唑啉基、噁唑基、異噁唑基、嗎啉基、噻唑烷基、噻唑啉基、噻唑基、喹寧環基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并噁唑基、呋喃基、吡喃基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、噻吩基、苯并噁唑基、噻嗎啉基亞砜基、噻嗎啉基砜基和噁二唑基。
“HetAr”或“雜芳基”意指包含上述Het定義的任何雜環部分，其特點為芳族的，例如吡啶。
可以認為當N＝ 時，所述雜環包括用常規化學合成可得到且是穩定的噻唑、噁唑、三唑、噻二唑、噁二唑、異噁唑、異噻唑、咪唑、吡嗪、噠嗪、嘧啶、三嗪和四嗪。這些雜環中的單鍵和雙鍵(即…)按照存在的雜原子排列以使所述雜環為芳環(如，其為雜芳基)。此處所用術語雜原子指氧、氮和硫。當所述雜芳基包括一個五元環時，優選W為吸電子基團，例如鹵素、-CN、-CF3、-NO2、-COR7、-CO2R6、-CONHR6、-SO2NHR6、-NHSO2R6、-NHCOR7、-O-COR6、-SR6或NR’R6或者本領域所知的類似的吸電子取代基。
在此將某些基團縮寫。t-Bu指叔丁基，Boc指叔丁氧基羰基，Fmoc指芴基甲氧基羰基，Ph指苯基，Cbz指芐氧基羰基。
在此將某些試劑縮寫。DCC指二環己基碳二亞胺，DMAP指2，6-二甲基氨基吡啶，EDC指N-乙基-N’(二甲基氨基丙基)-碳二亞胺。HOBT指1-羥基苯并三唑，DMF指二甲甲酰胺，BOP指苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)磷鎓六氟代磷酸鹽，DMAP為二甲基氨基吡啶，Lawesson’s試劑為2，4-雙(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫雜-2，4-diphosphetane-2，4-二硫化物，NMM為N-甲基嗎啉，TFA指三氟乙酸，TFAA指三氟乙酸酐，THF指四氫呋喃。Jones試劑為本領域所知的三氧化鉻、水和硫酸的溶液。
制備方法可以通過與流程1所述類似的方法方便地制備式II化合物，其中X＝CH，Y＝S且Z＝N，W＝CO2R7CN或CONR’R7。
流程1 a)i-BuOCOCl，NMM，CH2N2，EtOAc，Et2O；b)HBr，AcOH，EtOAc，Et2O；c)H2NCSCO2Et，EtOH；d)NaOH，H2O，THF；e)i-BuOCOCl，NMM，NH2，THF or BOP，Et3N，RNH2，CH2Cl2；f)TFAA，吡啶CH2Cl2；g)R4OH，Boc2O，吡啶or R4OH，EDCl，CH2Cl2；h)哌啶，DMF；i)BOP，Et3N，D-CO2H，CH2Cl2
用氯甲酸異丁酯和N-甲基嗎啉在乙酸乙酯中處理1-流程1得到酐的混合物，將其用重氮甲烷在乙醚中處理得到2-流程1。用30％HBr于乙酸在乙酸乙酯/乙醚的溶液中將所述重氮酮鹵化得到3-流程1。用硫代草酸乙酯在回流的乙醇中處理該物質得到4-流程1。通過用氫氧化物堿(例如氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鋰)處理使所述噻唑羧酸酯皂化得到羧酸5-流程1。用氯甲酸異丁酯和N-甲基嗎啉處理所述羧酸，接著用氣體氨處理得到一級酰胺6-流程1(R3＝H)。用TFAA和吡啶在二氯甲烷中處理所述一級酰胺得到7-流程1。或者，可以通過用烷基胺(例如芐基胺，2-苯基乙胺或異丁基胺)和肽偶合試劑(例如BOP、EDC.HCl/l-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷或DMF)中處理，將5-流程1轉化為取代酰胺6-流程1。通過用一級醇或二級醇(例如2，2，2-三氟代乙醇、異丁醇、芐基醇或苯酚)和脫水劑(例如DCC/DMAP，EDCI或Boc2O/吡啶)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷或乙醚)中處理，可以將所述羧酸5-流程1轉化為羧酸酯8-流程1。當R2＝9-芴基甲氧基時，用哌啶在DMF中處理4-流程1得到9-流程l。用羧酸(例如N-Cbz-L-苯丙氨酸或N-Cbz-L-亮氨酰基-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如BOP)在質子惰性試劑(例如二氯甲烷)中處理9-流程1得到10-流程1。
流程1A a)MeI，THF；b)R’NH2，i-PrOH；c)溴代甲基酮，EtOH用與流程1A所述類似的方法制備式II化合物，其中X＝CH，Y＝S和Z＝N。用碘甲烷在質子惰性溶劑(例如THF)中處理1-流程1A得到2-流程1A，將其在質子惰性溶劑(例如異丙醇)中用一級胺處理得到3-流程1A。然后在質子惰性溶劑(例如乙醇)中用溴代甲基酮處理該物質得到4-流程1A。
流程2 a)i-BuOCOCl，NMM，NH3，THF；b)Lawessons試劑，THF；c)BrCH2COCO2Et，TFAA，吡啶，CH2Cl2；d)TFA；e)DCO2H，EDC·HCl，HOBT，Et3N，DMF；f)NaOH，H2O，THF用與流程2所述類似的方法方便地制備式II化合物，其中X＝S，Y＝CH和Z＝N。用氯代甲酸異丁酯、N-甲基嗎啉和氨在THF中處理1-流程2得到2-流程2。通過在質子惰性溶劑(例如THF或甲苯)中用Lawesson’s試劑處理該物質可以將其轉化為硫代酰胺3-流程2。通過與具有合適的可以被硫親核試劑(Cl，Br，IOMs，O-p-Tos)代替的離去基團的α-酮基酯在二氯甲烷中縮合將3-流程2轉化為噻唑。用TFA處理4-流程2得到5-流程2。用羧酸(例如N-Cbz-L-亮氨酸、N-Cbz-D-亮氨酸或N-Cbz-L-亮氨酰基-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理該物質將其轉化為6-流程2。用氫氧化物堿(例如氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鋰)處理皂化該物質得到羧酸7-流程2。
流程2A a)Boc-氨基酸，EDC·HCl，1-HOBT，DMF；b)TFA；c)R5OCOCl，i-Pr2NEt用與流程2A所述類似的方法也可以制備式II化合物，其中X＝S，Y＝CH和Z＝N。用叔丁氧基羰基保護的氨基酸(例如N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理1-流程2A將其轉化為2-流程2A，然后用三氯乙酸處理得到3-流程2A。用氯代甲酸酯(例如氯代甲酸2-聯苯基甲酯、氯代甲酸2-芐基芐酯、氯代甲酸2-萘基甲酯或氯代甲酸2-苯氧基芐酯)和叔胺堿(例如二異丙基乙胺)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷)中處理該物質得到4-流程2A。
流程3 a)Boc2O，Et3N，THF；b)肼水合物，MeOH；c)EtO2CCOCl，吡啶CH2Cl2；d)Lawessons試劑，甲苯；e)TFA，CH2Cl2；f)DCO2H，EDC·HCl/HOBT，Et3N，DMF用與流程3所述類似的方法可以方便地制備式II化合物，其中X和Y＝N，且Z＝S。用碳酸氫二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)和三乙胺在THF中處理1-流程3得到2-流程3。用肼水合物在甲醇中處理該物質得到3-流程3。用乙基草酰氯和吡啶在二氯甲烷中處理使所述酰肼酰化得到4-流程3。用Lawesson’s試劑在質子惰性溶劑(例如THF或甲苯)中處理將該物質轉化為噻二唑，5-流程3。用TFA處理5-流程3得到6-流程3。用羧酸(例如N-Cbz-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理該物質得到7-流程3。
流程4 a)SOCl2，吡啶，Et2O，甲苯；b)TFA，CH2Cl2；c)DCO2H，EDC·HCl/HOBT，Et3N，DMF；d)NH3，EtOH用與流程4所述類似的方法可以方便地制備式II化合物，其中X和Y＝N，且Z＝O和W＝CO2Et或CONH2。用亞硫酰氯和吡啶在乙醚中處理1-流程4，隨后在甲苯中回流得到2-流程4。用TFA處理產生的噁二唑得到3-流程4。用羧酸(例如N-Cbz-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理該物質得到4-流程4。用氨在甲醇中處理羧酸酯得到5-流程4。
流程5 a)EDC·HCl/HOBT，Et3N，DMF；b)H2NNH2·H2O，MeOH；c)CSCl2，Et3N，CHCl3用與流程5所述類似的方法可以方便地制備式II化合物，其中X和Y＝N，Z＝O且W＝SH。用肽偶合試劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理1-流程5和2-流程5得到3-流程5。用肼水合物在甲醇中處理該物質得到4-流程5。用二氯硫化碳和三乙胺在氯仿中處理4-流程5得到5-流程5。
流程6 a)H2NCS2NF4+，EtOH；b)H2NCSNH2，EtOH用與流程6所述類似的方法可以方便地制備式II化合物，其中X＝CH，Y＝S，Z＝N且W＝SH或NH2。1-流程6在乙醇中與二硫代氨基甲酸銨縮合得到2-流程6。或者，可以使1-流程6在乙醇中與硫脲縮合產生3-流程6。
流程7 a)Et2NO；b)H2NCH2CH(NH2)CO2H
用與流程7所述類似的方法可以制備式II化合物，其中X＝CH，Y＝N，Z＝N且W＝C。用二乙胺N-氧化物處理1-流程7得到2-流程7。然后使2-流程7與2，3-二氨基羧酸縮合得到3-流程7，用前述其他流程中所述的方法可將其轉化為其他各種羧酸衍生物。
一般用有機化學領域用于將羧酸衍生物與肼偶合的普通方法制備式III化合物。流程8、9和10說明制備其中B或E為雜環的化合物的方法。用與流程8、9和19-23中所述類似的方法可以方便地制備式X化合物。
流程8 a)i.i-BuOCOCl，NMM，THF；ii.CH2N2，Et2O；b)HBr，AcOH，Et2O；c)H2NCSCO2Et，EtOH；d)R63NHNH2，EtOH；e)R65CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF.
用與流程22所述類似的方法制備其中X＝CH、Y＝S和Z＝N的化合物。用氯代甲酸異丁酯和N-甲基嗎啉在乙醚中處理1-流程8得到混合的酸酐，用重氮甲烷在乙醚中處理所述酸酐得到2-流程8。用30％HBr在乙酸中的乙醚溶液使所述重氮酮鹵化得到3-流程8。用硫代草酸乙酯在回流的乙醇中處理該物質得到4-流程8。用肼(例如肼一水合物或甲基肼)在乙醇中處理所述噻唑羧酸酯得到5-流程8。用羧酸(例如N-Cbz-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)在質子惰性溶劑(例如DMF)中處理該物質得到6-流程8。
用與流程9所述類似的方法制備其中X＝S、Y＝CH和Z＝N的化合物。
流程9 a)i-BuOCOCl，NMM，NH3，THF；b)Lawesson＇s試劑，THF；c)i.EtO2CCOCH2Br；ii.TFAA，Py，CH2Cl2；d)H2NNH2·H2O，EtOH；e)R65SO2Cl，Py，CH2Cl2；f)R65CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF.
通過用氯代甲酸異丁酯、N-甲基嗎啉和氨在THF中處理，將1-流程9轉化為2-流程9。用Lawesson’s試劑在THF中處理2-流程9得到硫代酰胺3-流程9。通過使該物質與α-酮基酯縮合將其轉化為噻唑并接著用三氟乙酸酐和吡啶在二氯甲烷中處理得到4-流程21，通過用肼一水合物處理將其轉化為5-流程9。用磺酰氯(例如4-苯氧基苯磺酰氯)和吡啶在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷)中處理該物質得到6-流程9。或者，通過用羧酸(例如N-芐氧基羰基-L-亮氨酸、N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸、N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸、N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸、N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸、4-聯苯基乙酸、3-(4-吡啶基甲氧基羰基)苯甲酸或4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸)和肽偶合試劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)在質子惰性溶劑(例如DMF)中處理可以制備6-流程9。
例如通過流程10說明的常規肽合成方法制備其中B＝ 的化合物。
流程10 a)EDC·HCl，HOBT，DMF；b)H2NNH2·H2O，EtOH；c)R14-B-CO2H，EDC·HCL，HOBT，DMF用肽偶合劑(例如BOP或EDC.HCl/1-HOBT)在質子惰性溶劑(例如DMF或二氯甲烷)中處理1-流程10和2-流程10的混合物得到3-流程10。用肼水合物在乙醇中處理該物質得到4-流程10，將其用羧酸(例如N-Cbz-L-亮氨酸)和肽偶合劑(例如BOP或EDC.HCl/1-HOBT)在質子惰性溶劑(例如DMF或二氯甲烷)中處理得到5-流程10。
用與流程11所述類似的方法制備式IV化合物，其中R22、R23、R24為H，且R21＝R26。
流程11 a)EDC.HCl，1-HOBT，DMF用與流程11所述類似的方法制備兩側具有RCO作為末端取代基的式IX的對稱化合物。用羧酸(例如4-聯苯乙酸或4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸)和肽偶合劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)在質子惰性溶劑(例如DMF)中處理1-流程11得到2-流程11。
用與流程12所述類似的方法制備式IX的非對稱的化合物和式IV化合物，其中R22、R23、R24和R25為H，且R21≠R26。
流程12 a)H2NNH2·H2O.MeOH；b)Cl2CO，PhMe；c)H2NNH2·H2O，MeOH；d)R49CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF；e)R52SO2Cl or R52COCl，吡啶，DMF；f)R52CO2COR52；g)R52CONR51NH2
用肼水合物在質子惰性溶劑(例如甲醇或乙醇)中處理1-流程12得到2-流程12，將其在甲苯中用碳酰氯處理得到3-流程12。用肼水合物在質子惰性溶劑(例如甲醇或乙醇)中處理該物質得到4-流程12。用磺酰氯(例如4-苯氧基苯磺酰氯)、酰氯(例如苯甲酰基氯)或氨基甲酰氯(例如N-(2-甲基丙基)-N-(4-苯基苯基)氨基甲酰氯)和吡啶在DMF中處理4-流程12得到5-流程12。或者，用羧酸(例如N-芐氧基羰基-L-丙氨酸、N-芐氧基羰基-L-脯氨酸、N-芐氧基羰基甘氨酸、(S)-N-芐氧基羰基-2-氨基丁酸、N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸、N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸、N-乙酰基-L-亮氨酸、N-乙酰基-L-丙氨酸、N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸、N-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)芐氧基羰基]-L-亮氨酸、4-苯基苯甲酸。4-甲氧基苯甲酸、4-苯氧基苯甲酸、4-(N，N-甲氨基甲基)苯甲酸、4-羥基-3-[N-(4-嗎啉代甲基)]苯甲酸、3-[N-(4-嗎啉代甲基)]苯甲酸、2-芐氧基苯甲酸、3-芐氧基苯甲酸、4-芐氧基苯甲酸、4-(3-二甲基氨基甲基丙氧基)苯甲酸、3-芐氧基-5-甲氧基苯甲酸、3-芐氧基-4，5-二甲氧基苯甲酸、3-芐氧基-5-乙氧基苯甲酸、3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酸、4-聯苯基乙酸、2-(4-苯基苯氧基)丙酸或4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸)和肽偶合劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理4-流程12可以制備5-流程12。也可以通過用酸酐(例如乙酸酐)處理4-流程12制備5-流程12。或者，可以用酰肼(例如4-甲基戊酰肼或N-甲基-N-芐氧基羰基-L-亮氨酰肼)直接將3-流程12轉化為5-流程1。
流程12A a)i.PhCHO，EtOH；ii.BH3·THF；b)Cl2CO，PhMe；c)H2NNH2·H2O，MeOH；d)R52CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF；e)R52SO2Cl or R52COCl，吡啶，DMF；f)R52CO2COR52用與流程12A所述類似的方法制備式IV的非對稱化合物，其中R23≠H。用醛(例如苯甲醛)在質子(protic)溶劑(例如乙醇)中處理1-流程12A并用甲硼烷-THF復合物處理所得的亞胺得到2-流程12A，隨后將其用碳酰氯在甲苯中處理得到3-流程12A。用肼水合物在質子溶劑(例如甲醇或乙醇)中處理該物質得到4-流程12A。用羧酸(例如N-芐氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合劑(例如BOP、EDC.HCl/1-HOBT或N-甲基嗎啉/氯代甲酸異丁酯)在質子惰性溶劑(例如二氯甲烷、DMF或THF)中處理4-流程12A得到5-流程12A。
用與流程13-16所述類似的方法可以方便地制備式V-VII化合物。
流程13 a)HBTU，NMM，DMF；b)Jones，丙酮可以通過用羧酸2-流程13或等摩爾量的兩種不同的羧酸(2和3)的混合物和偶合劑例如二烷基碳二亞胺如DCC或EDCI或HBTU/N-甲基嗎啉使1，3-二氨基-丙-2-醇1-流程13酰化，隨后用氧化劑例如Jones試劑使所述醇氧化為酮可以制備1，3-雙酰氨基丙-2-酮。
流程14 a)NMM，DMF；b)Jones，丙酮用2-流程14磺酰氯和堿例如N-甲基嗎啉使1，3-二氨基丙-2-醇1-流程14磺酰化，隨后用氧化劑例如Jones試劑將所述醇氧化為酮可以制備1，3-雙亞磺酰氨基丙酮。
流程15 a)EDCI，HOBT，DMF；b)NMM，DMF，3)Jones，丙酮用2-流程15羧酸和偶合劑例如碳二亞胺或HBTU/N-甲基嗎啉使1，3-二氨基丙-2-醇1-流程15酰化，隨后用適當的磺酰氯3-流程15和堿例如N-甲基嗎啉處理，接著用氧化劑例如Jones試劑將所述醇氧化為酮可以制備1-氨基-3-亞磺酰氨基丙酮。
流程16 可以通過重氮甲基酮2-流程16將N-保護的肽例如Cbz-leu-leu-OH 1-流程16轉化為其溴代甲基酮3-流程16制備比丙-2-酮大的1-氨基-3-亞磺酰氨基烷基-2-酮，例如丁-2-酮或5-甲基-己-2-酮。然后，用疊氮化鈉置換所述溴化物3-流程16得到相應的疊氮化物4-流程16。用還原劑例如硼氫化鈉還原羰基得到醇5-流程16。隨后用還原劑例如1，3-丙二硫醇還原所述疊氮化物得到游離的胺6-流程16。所述胺酰化或磺酰化得到酰胺或磺酰胺7-流程16。最后，用氧化劑例如Jones試劑氧化所述醇得到所需的化合物。
用與流程17和18類似的方法可以方便地制得式VIII化合物。
流程17 a)NaN3，MeOH，H2O；b)對甲苯磺酰氯，三乙胺，CH2Cl2；c)Ellman二氫吡喃樹脂(3)，PPTS，Cl(CH2)2Cl；d)PhCH2NH2，甲苯80℃；e)HATU，N-甲基嗎啉，NMP；f)HS(CH2)SH，MeOH，Et3N；g)Cbz-亮氨酸(6)，HBTU，N-甲基嗎啉，NMP；h)TFA，CH2Cl2，Me2S；i)Jones試劑，丙酮疊氮化物使縮水甘油1-流程17開環，隨后通過使一級醇對甲苯磺酰化得到對甲苯磺酸酯2-流程17，如J.Med.Chem.1995，38，1427-1430所述將其與Ellman聚合物3-流程17偶合產生聚合物4-流程17，使其在甲苯中與芐基胺反應，然后用大量各種溶劑洗滌。然后，用1，3-丙二硫醇在MeOH和三乙胺中還原所述疊氮化物，然后用大量各種溶劑洗滌。使Cbz-亮氨酸6-流程17與等摩爾量的二胺5-流程17及偶合試劑例如二烷基碳二亞胺如DCC或EDCI或HBTU/N-甲基嗎啉偶合。用三氯乙酸與各種清除劑完成醚鍵斷裂生成醇的過程。最后，用氧化劑例如Jones試劑將所述醇氧化為酮7-流程17得到所需的終產物。
流程18 a)4-吡啶基甲基胺，異丙醇，回流；b)Cbz-亮氨酸，HBTU，N-甲基嗎啉，DMF；c)肼，MeOH，回流；d)2-二苯并呋喃磺酰氯，N-甲基嗎啉，DMF；e)Jones試劑，丙酮N-(2，3-環氧丙基)鄰苯二甲酰亞胺1-流程18(Aldrich)與胺例如4-吡啶基甲基胺在異丙醇中回流。然后用酰化試劑例如Cbz亮氨酸或磺酰化試劑例如2-二苯并呋喃磺酰氯和堿例如N-甲基嗎啉于DMF中將二級胺2-流程18酰化。然后用肼于MeOH中去除鄰苯二甲酰亞胺并用酰化試劑例如Cbz亮氨酸或磺酰化試劑例如2-二苯并呋喃磺酰氯和堿例如N-甲基嗎啉于DMF中將所得游離胺酰化。
用與流程19和20相似的方法可以方便地制備式IX化合物。
用與流程21至27相似的方法可以方便地制備式X化合物。
流程19 a)KOH，MeOH/H2O；b)R66NHNH2，EtOH；c)EDC·HCl，1-HOBT，DMF用與流程19所述相似的方法可以制備其中X＝CH，Y＝S，Z＝N且R4≠H的化合物。用氫氧化物堿(例如氫氧化鋰，氫氧化鈉或氫氧化鉀)于甲醇/水中處理羧酸酯1-流程19得到2-流程19。用肼(例如甲基肼)在質子溶劑(例如乙醇)中處理3-流程19得到4-流程19。用肽偶合劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)在質子惰性溶劑(例如DMF)中處理使2-流程19和4-流程19偶合得到5-流程19。
流程20 a)硫脲，EtOH；b)i.NaNO2，16％含水HBr，ii.CuBr，16％含水HBr；iii.HBr(cat.)，EtOH；c)ArB(OH)2，Pd(PPh3)4，CsF，DME；d)ArSnMe3，Pd(PPh3)4，PhMe；e)H2NNH2·H2O，EtOH；e)R65CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF.
用與流程20所述相似的方法制備化合物，其中X＝S，Y＝CH，Z＝N且V＝2-甲氧基苯基或2-芐氧基苯基。用硫脲在回流的乙醇中處理溴代丙酮酸乙酯(1-流程20)得到2-流程20，將其連續用亞硝酸鈉和溴化銅(I)于16％HBr水溶液中處理，用催化量的HBr在乙醇中加熱所述產物得到3-流程20。用芳基硼酸(arylboronic acid)(例如2-芐氧基苯基硼酸)、四(三苯基膦)鈀(O)和氟化銫于回流的DMF中處理該物質得到4-流程20。或者，用芳基錫烷(例如2-三甲基甲錫烷基苯甲醚)和四(三苯基膦)鈀(O)于回流的甲苯中處理3-流程20可以制備4-流程20。用肼水合物于乙醇中處理4-流程20得到5-流程20，將其用羧酸(例如N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸，N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸或N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸)和肽偶合劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)于質子惰性溶劑(例如DMF)中處理得到6-流程20流程21 a)R67NH2，Py，CH2Cl2；b)LiAlH4，THF；c)i.Cl2CS，Py，CH2Cl2；ii.NH3，MeOH or I.PhCONCS，CHCl3；ii.K2CO3，MeOH，H2O；d)EtO2CCOCH2Br，EtOH；e)H2NNH2·H2O，EtOH；e)R65CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF.
用與流程21所述相似的方法制備化合物，其中X＝S，Y＝CH，Z＝N且V＝NR66R67。用一級胺(例如4-氨基聯苯或苯胺)和吡啶于質子惰性溶劑(例如二氯甲烷)中處理酰氯(1-流程21)得到2-流程21，將其用氫化鋰鋁于THF中處理得到3-流程25。用二氯硫化碳和吡啶于二氯甲烷中處理3-流程21，隨后用氨于甲醇中處理得到4-流程21。或者，用苯甲酰異硫氰酸鹽處理，接著用碳酸鉀于甲醇/水中處理中間體苯甲酰基硫脲可以制備4-流程21。用肼水合物于乙醇中處理4-流程21得到5-流程21。用羧酸(例如N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸，N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸或N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸)和肽偶合試劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)于質子惰性溶劑(例如DMF)中處理5-流程21得到6-流程21。
流程22 a)H2NNH2·H2O，EtOH；b)LCO2CO2i-Bu，200℃；c)H2NNH2·H2O，EtOH；d)R65CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF用與流程26所述相似的方法制備化合物，其中X和Y＝N且Z＝NH。用肼水合物于乙醇中處理1-流程22得到2-流程22，將其用混合的酸酐處理得到三唑3-流程22。用肼水合物處理該物質得到4-流程22，將其用羧酸(例如N-芐氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)于質子惰性溶劑(例如DMF)中處理得到5-流程22。
流程23 a)TFA；b)R62CO2H，EDC·HCl，1-HOBT，DMF；c)R62SO2Cl，i-Pr2NEt用與流程27所述相似的方法制備化合物，其中X＝S，Y＝CH，Z＝N，L＝CH(R66)NR60R68，其中R68≠Boc或Cbz，或R65＝CH(R69)NR61R70，其中R70≠Boc或Cbz。用三氯乙酸處理1-流程23得到2-流程23。用羧酸(例如吡嗪羧酸，異煙酸，4-咪唑基乙酸或2-哌啶酸)和肽偶合劑(例如EDC.HCl/1-HOBT)于質子惰性溶劑(例如DMF)中處理該物質得到3-流程23。也可以用磺酰氯(例如2-吡啶磺酰氯)和叔胺堿(例如二異丙基乙胺)于質子惰性溶劑(例如二氯甲烷)中處理2-流程23制備3-流程23。或者，用三氟乙酸處理4-流程23得到5-流程23。
流程24 a)EDCI，DMF；b)2-PhCH2OPhSO2Cl，NMM，DMF；c)TFA，DCM；d)4-吡啶基乙酸，HBTU，NMM，DMF；e)Jones使1，3-二氨基-丙-2-醇(或N-烷基取代二氨基-丙醇)與保護的亮氨酸類似物(Cbz-或Boc-)和另一種羧酸或磺酰氯偶合。去除保護基團后，進行酰化或磺酰化并使所述醇氧化得到所需的化合物。
流程25 a)HBTU，NMM，DMF，烯丙胺；b)mCPBA，DCM；c)MeNH2，異丙醇，70C；d)Cbz-亮氨酸，EDCI，DMF；e)Jones，丙酮使N-烯丙胺(或N-烷基-N-烯丙胺)與Cbz-氨基酸(或用芳基磺酰氯磺酰化的)偶合，然后用過酸(或二甲基diooxirane)使所述烯環氧化。用取代的胺使所述環氧化物開環，然后使所述胺酰化或磺酰化。最后氧化得到所需的酮。
在此所用的原料為商業上可以買到的氨基酸或可以用本領域普通技術熟知并在標準參考書，例如COMPENDIUM OF ORGANICSYNTHETIC METHODS，Vol.I-VI(由Wiley-Interscience出版)中可以發現的常規方法制備。
在此形成酰胺鍵的偶合方法一般是本領域所公知的。由Bodansky等[THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS，Springer-Verlag，Berlin，1984；E.Gross and J.Meienhofer，THE PEPTIDES，Vol.1，1-284(1979)；和J.M.Stewart and J.D.Young，SOLID PHASE PEPTIDESYNTHESIS，2d Ed.，Pierce Chemical Co.，Rockford，I11.，1984.]所提出的肽合成的一般方法用來說明所述技術并在此引入作參考。
制備本發明化合物的合成方法經常用保護性基團掩蓋反應官能性或者減少不需要的副反應。此類保護基團一般在Green，T.W.PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS[John Wiley&Sons，New York(1981)]中描述。術語“氨基保護基團”一般指Boc、乙酰基、苯甲酰基、Fmoc和Cbz基團以及本領域所知的其衍生物。保護和去保護以及用另一部分代替氨基保護基團的方法為眾所周知的。
用標準的方法于適當的溶劑中由母體化合物和過量的酸，例如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、琥珀酸或甲磺酸制備式I化合物的酸加成鹽。部分化合物形成可以接受的內鹽或兩性離子。通過用過量的含有適當的陽離子的堿試劑，例如氫氧化物、碳酸鹽或醇鹽或者用適當的有機胺處理母體化合物制備陽離子鹽。陽離子例如Li+、Na+、K+、Ca++、Mg++和NH4+為藥學可接受的鹽中存在的陽離子的特殊實例。鹵化物、硫酸鹽、磷酸鹽、鏈烷酸鹽(例如乙酸鹽和三氟乙酸鹽)、苯甲酸鹽和磺酸鹽(例如甲磺酸鹽)為藥學上可接受的鹽中存在的陰離子的實例。
本發明也提供藥用組合物，它包括根據式I的化合物和藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。因此，可以將式I化合物用于藥物的生產。如前所述制備的式I化合物的藥用組合物可以制成供非腸道給藥的溶液或冷凍干燥粉末。可以將粉末在使用前加入適當的稀釋劑或其他藥學上可接受的載體復制。所述液體制劑可以為緩沖、等滲、水溶液。適當的稀釋劑的實例有正常等滲生理鹽水、標準5％葡萄糖的水溶液或緩沖乙酸鈉或銨溶液。此制劑特別適于非腸道給藥，但也可以用于口服或含于用于吸入的計量劑量的吸入器或噴霧器中。可能需要加入賦形劑例如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露糖醇、氯化鈉或檸檬酸鈉。
或者，可以對這些化合物進行裝膠囊、制片或制備適于口服的乳液或糖漿。可以加入藥學上可接受的固體或液體載體以提高或穩定所述組合物，或者有助于制備所述組合物。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水和水。所述載體也可以包括緩釋物質例如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，單獨或與石蠟混合。固體載體所用的量是變化的但優選為每劑量單位約20mg至約1g。根據藥學常規技術包括制粉、混合、制粒和壓片(如需要，對片劑而言)或制粉、混合和裝填(對硬膠囊而言)制備所述藥用制劑。當應用液體載體時，所述制劑為糖漿、酏劑、乳劑或水或非水懸浮劑形式。此類液體制劑可以直接口服或裝填于軟明膠膠囊中。
直腸給藥時，本發明化合物也可以與賦形劑例如可可油、甘油、明膠或聚乙二醇混合并模制成栓劑。
本發明的實用性所述式I化合物用作蛋白酶抑制劑，具體地說為半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶的抑制劑，更具體地說為半胱氨酸蛋白酶的抑制劑，更具體地說為木瓜蛋白酶超家族半胱氨酸蛋白酶的抑制劑，更具體地說為組織蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶的抑制劑，最具體地說為組織蛋白酶K的抑制劑。本發明也提供所述化合物的有用的組合物和制劑，包括所述化合物的藥用組合物和制劑。
本發明化合物用于治療涉及半胱氨酸蛋白酶的疾病，包括由卡氏肺囊蟲、克氏錐蟲、布氏錐蟲和短膜蟲屬fusiculata引起的感染；以及血吸蟲病、瘧疾、瘤轉移、異染性的腦白質營養不良、肌肉營養不良、肌萎縮等疾病；特別是涉及組織蛋白酶K的疾病，尤其是過量骨或軟骨損失的疾病，包括骨質疏松和齒齦疾病包括齒齦炎和牙周炎，關節炎，特別是骨關節炎和類風濕性關節炎，Paget氏疾病；惡性高血鈣癥和代謝性骨疾病。
轉移瘤細胞一般也表達高水平降解周圍基質的蛋白水解酶，因此用本發明化合物可以有效地治療部分腫瘤和轉移瘤。
本發明也提供治療由蛋白酶，特別是半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶，更具體說提供半胱氨酸蛋白酶的病理水平所引起的疾病，更具體說提供作為木瓜蛋白酶超家族半胱氨酸蛋白酶，更具體說組織蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶的抑制劑，此方法包括給予需要的動物，特別是哺乳動物，尤其是人類本發明化合物。本發明特別提供治療組織蛋白酶K病理水平引起的疾病，該方法包括給予需要的動物，特別是哺乳動物，尤其是人類，包括本發明化合物的組織蛋白酶K抑制劑。本發明特別提供治療涉及半胱氨酸蛋白酶的疾病，包括卡氏肺囊蟲、克氏錐蟲、布氏錐蟲和短膜蟲屬fusiculata引起的感染；以及血吸蟲病、瘧疾、瘤轉移、異染性的腦白質營養不良、肌肉營養不良、肌萎縮等疾病；特別是涉及組織蛋白酶K的疾病，最具體說是過量骨或軟骨損失的疾病，包括骨質疏松和齒齦疾病如齒齦炎和牙周炎，關節炎，特別是骨關節炎和類風濕性關節炎，Paget氏疾病；惡性高血鈣癥和代謝性骨疾病的方法。
本發明進一步提供治療骨質疏松或抑制骨損失的方法，它包括內源性給予病人有效劑量的式I化合物，單獨或者與其他骨吸收抑制劑，例如二磷酸酯(即allendronate)、激素替代療法、抗雌激素或降鈣素一起使用。此外，用本發明化合物和合成代謝劑例如骨形態蛋白、異丙黃酮(iproflavone)可用于阻止骨損失或增加骨質量。
就急性治療而言，優選非腸道給予式I化合物。盡管肌內大量注射也有效，但是將所述化合物溶于5％葡萄糖水或生理鹽水中的靜脈輸液或者與適當賦形劑一起的相似的制劑最有效。一般而言，所述非腸道劑量為約0.01至約100mg/kg；優選0.1至20mg/kg，以維持血漿藥物濃度為抑制組織蛋白酶K有效的濃度。每天給藥一至四次的水平使每天總劑量為約0.4至約400mg/kg/天。治療有效的本發明化合物的精確劑量以及此化合物給藥的最佳途徑可以由本領域的普通技術人員通過比較所述藥物的血液水平和具有治療作用所需的濃度可以容易地確定。
也可以以使藥物濃度足以抑制骨吸收或獲得在此公開的其他治療適應癥的方式經口服給予病人本發明的化合物。一般而言，以與病人的疾病相吻合的方式，以約0.1至約50mg/kg的口服劑量給予含有所述化合物的藥用組合物。優選口服劑量為約0.5至約20mg/kg。
當按照本發明給予本發明化合物時預計沒有不可接受的毒性作用。
生物測定用幾種生物測定中的一種可以測定本發明化合物以確定產生所需的藥理作用所需的化合物的濃度。
組織蛋白酶K蛋白水解催化活性的測定用人重組酶進行組織蛋白酶K的所有的測定。測定動力學常數的標準測定條件用熒光肽底物，一般為Cbz-Phe-Arg-AMC并在含有20mM半胱氨酸和5mMEDTA的100mM乙酸鈉中于pH5.5時測定。制備濃度為10或20mM底物在DMSO中的儲備液，測定時底物終濃度為20uM。所有測定物中含有10％DMSO。獨立的試驗發現此水平的DMSO對酶活性或動力學常數無影響。所有測定在室溫下進行。用Perceptive Biosystems Cytofluor II熒光屏閱讀器檢測產物熒光(激發360nM；發射460nM)。在AMC產物形成后20-30分鐘產生產物進展曲線(proress curves)。
抑制研究用所述進展曲線方法評價潛在的抑制劑。在各種受試化合物濃度下進行測定。通過向抑制劑和底物的緩沖溶液中加入酶誘發反應。根據在抑制劑存在下進展曲線的外觀用兩種方法之一進行數據分析。對于進展曲線為線性的化合物，根據方程1(Brandt等，Biochemistry，1989，28，140)計算表觀抑制常數(Ki，app)ν＝νmA/[Ka(I+I/Ki，app)+A](1)其中V為所述反應的反應速率，最大反應速率為Vm，A為底物的濃度，Michaelis常數Ka，I為抑制劑的濃度。
對于顯示向下曲率特征的時間依賴抑制進展曲線，根據方程2對單獨設定所得的數據進行分析得出kobs[AMC]＝vsst+(νO-νss)[I-exp(-kobst)]/kobs(2)其中[AMC]為經過時間t形成的產物的濃度，V0為起始反應速率而Vss為終穩定狀態的速率。然后以抑制劑濃度的線性函數分析kobs值得出描述時間依賴抑制的表觀二級速率常數(kobs/抑制劑濃度或kobs/[I])。Morrison等，(Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol，1988，61，201)完整描述了此動力學處理的詳細討論。
人破骨細胞吸收測定從液氮儲存下取出各份得自破骨細胞瘤的細胞懸浮液，于37℃迅速溫熱并在RPMI-1640培養液中離心(于4℃1000rpm，5min)洗滌一次。將所述培養液吸出并用鼠抗-HLA-DR抗體代替，在RPMI-1640培養液中作1∶3稀釋并于冰上孵育30分鐘。通常混合所述細胞懸浮液。
將所述細胞用冷的RPMI-1640經離心(1000rpm，5min4℃)洗滌兩次并隨后轉移至15ml的無菌離心管中。在改良Neubauer計數室中對單核細胞進行計數。
從存儲瓶中取出山羊抗鼠IgG覆蓋的足量磁珠(5/單核細胞)并放入5ml新鮮的培養液中(此操作可以洗掉有毒的疊氮化物防腐劑)。通過將所述珠固定于磁體上去除所述培養液并用新鮮的培養液代替。
將所述磁珠與細胞混合并將所述懸浮液于冰上孵育30分鐘。通常混合所述懸浮液。將磁珠覆蓋的細胞固定于磁體上并將剩余的細胞(富含破骨細胞組分)傾出至無菌的50ml的離心管中。向所述磁珠覆蓋的細胞中加入新的培養液以逐出任何捕獲的破骨細胞。將此洗滌過程重復10次。棄去所述磁珠覆蓋的細胞。
用大口徑一次性塑料pasteur移液管使計數室充滿所述樣品在計數室中進行所述破骨細胞的計數。通過離心壓積所述細胞并將所述破骨細胞密度在EMEM培養液中調至1.5×104/ml，并補充10％小牛血清和1.7g/L碳酸氫鈉。將每份3ml的細胞懸浮液(每次處理)傾出至15ml離心管中。離心壓積這些細胞。向每一管中加入每份3ml的所述適當處理物(于EMEM培養液中稀釋至50uM)。同時包括適當的溶媒對照，陽性對照(87MEMl稀釋至100ug/ml)并有同形對照(IgG2a稀釋至100ug/ml)。將此管于37℃孵育30分鐘。
將每份0.5ml細胞接種于48-孔培養板內的無菌牙質切片(dentine slices)上并于37℃孵育2小時。每一處理做一式四分篩選。將所述切片用溫的PBS(在6-孔板上每孔10ml)六次換液洗滌并隨后置于新鮮的處理或對照中并于37℃孵育48小時。然后將所述切片于磷酸鹽緩沖液中洗滌并在2％戊二醛(在0.2M二甲基胂酸鈉中)中固化5分鐘，隨后在水中洗滌并于緩沖液中37℃孵育5分鐘。然后將所述切片在冷水中洗滌并于冷的乙酸鹽緩沖液/堅牢紫醬紅中4℃孵育5分鐘。吸出過量的緩沖液并于水中洗滌后將所述切片空氣干燥。
用亮場顯微鏡計數TPAP陽性破骨細胞并從牙質表面超聲去除。用Nikon/Lasertec ILM21W共焦顯微鏡測定凹陷的體積(pitvolumes)。
概述分別用Bruker AM 250或Bruker AC 400分光光度計于250或400MHz記錄核磁共振光譜。CDCl3為氚化氯仿，DMSO-d6為六氚化二甲基亞砜，CD3OD為四氚化甲醇。化學位移以指由內標四甲基硅烷向低場移動的百萬分之幾為單位。NMR數據縮寫如下s＝單峰，d＝雙峰，t＝三峰，q＝四峰，m＝多峰，dd＝雙雙峰，dt＝雙三峰，app＝明顯的，br＝寬的。J指在Hertz中測定的NMR偶合常數。用Perkin-Elmer683紅外光譜儀記錄連續波紅外(IR)光譜，并用Nicolet Impact 400D紅外光譜儀記錄傅里葉轉換紅外(FTIR)光譜。以傳遞方式記錄IR和FTIR譜并用波數倒數(cm-1)表示帶的位置。用快速原子轟擊(FAB)或電噴射(ES)離子化技術在VG70FE，PE SyxAPI III或VG ZAB HF儀器上測定質譜。用Perkin-Elmer240C元素分析儀進行元素分析。用Thomas-Hoover熔點裝置測定熔點并不經校正。
用Analtech硅膠GF和E.Merck硅膠60F-254薄層板進行薄層層析。用E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅膠進行快速和重力層析。
需要說明一些材料購自Aldrich Chemical Co(MilWaukee，Wisconsin)，Chemical Dynamics Corp.(South Plainfield，New Jersey)和Advanced Chemtech(Louisville，kentucky)。
實施例在下述合成實施例中，溫度為攝氏溫度(℃)。除特別指明外，所有原料由商業而得。不用進一步說明，相信本領域的技術人員通過前述介紹可以最大限度的應用本發明。給出這些實施例是用于說明本發明而不是限制其范圍。用權利要求作參考。
實施例1(2S，1S’)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基溴代甲酮將1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(5.9g，40.11mmol)在乙醚(200ml)中的溶液冷至0℃。緩慢加入40％的氫氧化鉀并于0℃將所述重氮甲烷收集于乙醚溶液中30分鐘。
于-40℃下將N-Cbz-L-亮氨酰基-L-亮氨酸(Bachem)(4.0g，10.58mmol)于四氫呋喃中攪拌。加入N-甲基嗎啉(1.07g，10.58mmol，1.16ml)和氯代甲酸異丁酯(1.45g，10.58mmol，1.38ml)。將所述混合物于-40℃攪拌15分鐘并隨后過濾至冷燒瓶中以去除沉淀的鹽。將過量預先制備的重氮甲烷溶液加至所述濾液中并將所述混合物于0℃放置16小時。于0℃加入過量的30％HBr的乙酸溶液并隨后連續用1.0N檸檬酸、飽和碳酸氫鈉水溶液(仔細)和鹽水洗滌所述溶液。將所述溶液用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發產生為白色固體的目標化合物(4.10g)。
1H NMR(400MHz，CDC13)δ7.34(m，5H),6.51(d，1H)，5.15(d，1H)，5.10(s，2H)，4.78(m，1H)，4.20(m，1H)，4.04(dd，2H)，1.63(m，6H)，0.93(m，12H).
b)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺將實施例1(a)化合物(2.0g，4.4mmol)和硫代草氨酸乙酯(ethylthiooxamate)(0.59g，4.4mmol)于乙醇中回流4小時。將溶劑蒸發并將所述殘留物經層析(硅膠，2.5％甲醇/二氯甲烷)產生為白色固體的目標化合物(1.46g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32(s，1H)，7.21(m，5H)，6.40(d，1H)，5.13(dd，1H)，5.02(s，2H)，4.41(q，2H)，4.06(m，1H)，1.71(m，2H)，1.47(m，4H)，1.33(t，3H)，0.73(m，12H).
實施例2(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備于0℃將實施例1(c)化合物(0.92g，1.88mmol)在四氫呋喃中和1.0N氫氧化鈉一起攪拌。攪拌1小時后，將1.0N檸檬酸加入所述溶液中并用二氯甲烷萃取三次。真空蒸發合并的有機萃取物產生為白色固體的目標化合物(0.844g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40(s，1H)，7.23(m，5H)，6.89(d，1H)，5.22(d，1H)，5.14(dd，1H)，5.02(s，2H)，4.15(m，1H)，1.67(m，2H)，1.44(m，4H)，0.81(m，12H).
實施例3(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-甲酰胺基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備將實施例2的化合物(0.408g，0.88mmol)在四氫呋喃中冷至-40℃并用N-甲基嗎啉(0.185g，1.85mmol，0.2ml))和氯代甲酸異丁酯(0.12g，0.88mmol，0.11ml)處理。于-40℃將所述混合物攪拌15分鐘并向所述溶液中通入氨氣幾分鐘。使所述混合物溫熱至室溫并用乙酸乙酯稀釋然后連續用1.0N檸檬酸、5％碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。用硫酸鎂干燥所述有機溶液，過濾并蒸發，將殘留物層析(硅膠，3％甲醇/二氯甲烷)產生為白色固體的目標化合物(0.245g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.22(m，5H)，7.04(s，1H)，6.40(br s，1H)，5.51(br s，1H)，5.09(m，1H)，5.02(dd，2H)，4.07(m，1H)，1.66-1.42(m，6H)，0.82(m，12H).
實施例4(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-氰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備將實施例3化合物(0.185g，0.4mmol)溶于二氯甲烷中，冷卻至0℃并用TFAA(0.093g，0.44mmol，0.06ml)和吡啶(0.07g，0.88mmol，0.07ml)處理。3小時后，將所述混合物倒至飽和碳酸氫鈉水溶液中并用二氯甲烷萃取。用5％鹽酸和鹽水洗滌所述有機萃取物，經硫酸鎂干燥，過濾并蒸發為油，經層析(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)產生為白色固體的目標化合物(0.095g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.44(s，1H)，7.29(s，5H)，6.51(br d，1H)，5.14(m,1H)，5.07(s，2H)，4.11(m，1H)，1.78-1.41(m，6H)，0.83(m，12H).
實施例5(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-[2-(N’-芐基甲酰胺基)]噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備于氬氣環境室溫下將芐胺(0.03g，0.29mmol，0.03ml)、BOP試劑(0.115g，0.26mmol)和三乙胺(0.026g，0.26mmol，0.04ml)加至實施例2化合物(0.12g，0.26mmol)的二氯甲烷溶液中并將其攪拌16小時。用水洗滌所述溶液并隨后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥所述有機層，過濾并蒸發得到殘留物，將其經層析(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)后得到為白色固體的目標化合物(0.065g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.56(br s，1H)，7.33(m，10H)，6.48(br d，1H)，5.15(dd，1H)，5.03(s，2H)，4.63(d，2H)，4.12(m，1H)，1.72-1.40(m，6H)，0.85(m，12H).
實施例6(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-[2-[N’-(3-甲基丙，基)甲酰胺基]噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例5的方法，以異丁基胺代替芐胺制備目標化合物(0.074g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(s，5H),7.19(s，1H),6.38(br d，1H)，5.09(m，1H)，5.01(s，2H)，4.07(m，1H)，3.20(dd，2H)，1.83(m，1H)，1.69-1.40(m，6H)，0.90(d，6H)，0.81(m，12H).
實施例7(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-[2-[N’-(2-苯基乙基)甲酰胺基]噻唑-4-基]-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例5的方法，以2-苯基乙胺取代芐胺制備目標化合物(0.070g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.30-7.11(m，11H)，6.35(br d，1H)，5.09(m，1H)，5.01(s，2H)，4.05(m，1H)，3.64(m，2H)，2.87(t，2H)，1.69-1.40(m，6H)，0.80(m，12H).
實施例8(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]4-甲基戊酰胺的制備a)N-叔丁氧基羰基-(L)-亮氨酰胺于-40℃將氯代甲酸異丁酯(2.7g，20.0mmol)和N-甲基嗎啉(4.2g，42mmol)加至N-叔丁氧基羰基-(L)-亮氨酸(Advanced Chemtech)(5.0g，20.0mmol)的無水THF(100ml)溶液中。攪拌15分鐘后，再向所述混合物中通入氨氣15分鐘，然后溫熱至室溫并攪拌2小時。將混合物過濾并將濾液真空濃縮得到為白色固體的目標化合物(4.9g，19.7mmol)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.38(br s，1H)，5.79(br s，1H)，5.04(br d，1H)，4.13(m，1H)，1.71-1.49(m，3H)，1.39(s，9H)，0.92(dd，6H).
b)N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸硫代酰胺將Lawessons試劑(2.51g，6.21mmol)加至實施例8(a)化合物(2.38g，10.35mmol)的無水THF的攪拌的溶液中并將所述混合物于氬氣環境中室溫下攪拌過夜。蒸發所述溶劑并將所述殘留物層析(硅膠，2.5％甲醇/二氯甲烷)后得到為白色固體的目標化合物(2.3g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.54(br s，1H)，7.97(br s，1H)，5.28(br d，1H)，4.52(m，1H)，1.72-1.58(m，3H)，1.40(s，9H)，0.92(d，6H).
c)(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷于氬氣環境中、-10℃下將實施例8(b)化合物(2.40g，9.76mmol)于無水丙酮(20ml)中攪拌。加入溴代丙酮酸乙酯(2.12g，10.73mmol，1.35ml)并于-10℃攪拌1小時。將所述溶液倒至充分攪拌的氯仿和水的混合物中并用碳酸氫鈉飽和。分離有機相并用氯仿萃取水相。用MgSO4干燥合并的有機提取物，過濾并蒸發為油。用TFAA(2.19g，10.73mmol，1.5ml)和吡啶(1.70g，21.47mmol，1.75ml)將所述油狀殘留物于二氯甲烷中在20℃處理1小時。真空去除過量的溶劑并將所述殘留物溶于二氯甲烷中。用飽和碳酸氫鈉水溶液和1.0N KHSO4洗滌所述溶液至pH7。將所述溶液經硫酸鈉干燥，過濾并蒸發為油狀物，經層析(4％甲醇/二氯甲烷)后得到為棕色固體的目標化合物(1.2g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，5.04(br d，1H)，4.95(m，1H)，4.31(q，2H)，1.88(m，1H)，1.63(m，2H)，1.40(s，9H)，1.32(t，3H)，0.85(dd，6H).
d)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺將實施例8(c)化合物(1.0g，2.92mmol)溶于無水TFA(1.0ml)中并攪拌15分鐘。用甲醇稀釋所述溶液并真空蒸發。將獲得的部分殘留物(0.36g，1.49mmol)溶于含N-Cbz-L-亮氨酸(0.394g，1.49mmol)、BOP試劑(0.66g，1.49mmol)和三乙胺(0.73g，7.2mmol，1.0ml)的二氯甲烷中并于室溫攪拌16小時。用水然后用鹽水洗滌所述溶液并經硫酸鎂干燥，過濾蒸發為殘留物，將其經層析(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)后得到為白色固體的目標化合物(0.396g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(s，1H)，7.25(s，5H)，6.61(br d，1H)，5.30(m，1H)，5.09(br d，1H)，5.01(s，2H)，4.33(q，2H)，4.10(m，1H)，1.90-1.58(m，6H)，1.29(t，3H)，0.81(dd，12H).
實施例9(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例2的方法，以(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺制備目標化合物(0.301g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.06(s，1H)，7.24(m，5H)，7.11(d，1H)，5.30(m，2H)，5.04(s，2H)，4.16(m，1H)，1.88-1.40(m，6H)，0.71(dd，12H).
實施例10(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備a)N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸甲酯將三乙胺(3.34g，33.0mmol，4.60ml)加至L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(Aldrich)(6.00g，33.0mmol)和碳酸氫二叔丁酯(7.21g，33.0mmol)的THF(35ml)攪拌懸浮液中。將所述混合物于室溫下攪拌3天。用乙酸乙酯稀釋所述混合物并用1N HCl(2次)、水和飽和鹽水洗滌，然后經硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到為元色油狀的目標化合物(8.02g，99％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.88(d，1H)，4.33-4.31(m，1H)，7.73(s，3H)，1.75-1.48(m，3H)，1.44(s，9H)，0.96(d，3H)，0.93(d，3H).
b)N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸酰肼將肼水合物(16.38g，327mmol，15.9ml)加至實施例10(a)化合物(8.02g，32.7mmol)在甲醇(250ml)中的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌22小時后，濃縮所述溶液并使殘留物與甲苯共沸得到白色泡沫狀目標化合物(8.02g，100％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(brs，1H)，4.99(d，2H)，4.12-4.10(m，1H)，3.94(br s，2H)，1.68-1.49(m，3H)，1.44(s，9H)，0.95(d，3H)，0.92(d，3H).
c)(2S)-N-[2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基戊酰基]-N’-羰基乙氧基碳酰肼將乙基草酰氯(4.91g，36.0mmol，4.02ml)加至實施例10(b)化合物(8.02g，32.7mmol)和吡啶(2.85g，36.0mmol，2.91ml)在二氯甲烷(200ml)的攪拌的溶液中。于室溫攪拌2小時后，用1N HCl、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌所述溶液，然后經硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到為白色泡沫狀的目標化合物(9.84g，87％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.32(br s，2H)，5.04(d，2H)，4.38(q，2H)，4.28(m，1H)，1.77-1.56(m，3H)，1.44(s，9H)，1.39(t，3H)，0.96(d，3H)，0.94(d，3H).
d)(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3-甲基丁烷將Lawesson’s試劑(1.46g，3.62mmol)加至實施例10(c)(2.50g，7.24mmol)在甲苯(70ml)的攪拌的溶液中。將所述混合物加熱回流3小時。用乙醚稀釋所述溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，然后經硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為淡黃色油。將粗品物質經75g 230-400目硅膠快速層析，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脫得到為淡黃色固體的目標化合物(1.75g，70％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.19(m，1H)，5.13(d，1H)，4.51(q，2H)，1.95(m，1H)，1.83-1.73(m，2H)，1.44(s，9H)，1.00(d，3H)，0.98(d，3H).
e)(1S)-1-氨基-1-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3-甲基丁烷二-三氟乙酸鹽將TFA(10ml)加至實施例10(d)化合物(1.75g，5.1mmol)在二氯甲烷(40ml)的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌5分鐘后，濃縮所述溶液得到為油狀淡黃色固體的目標化合物(2.40g，100％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(br s，4H)，5.20(m，1H)，4.51(q，2H)，2.07(m，2H)，1.70(m，1H)，1.44(t，3H)，1.00(t，3H).
f)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺將三乙胺(243.1mg，2.40mmol，O.335ml)加至實施例10(e)化合物(566.1mg，1.20mmol)、N-Cbz-L-亮氨酸(250.5mg，1.32mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(253.3mg，1.32mmol)和1-羥基苯并三唑(32.5mg，0.24mmol)在2.5ml DMF的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌3天后，用乙酸乙酯稀釋所述混合物并用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，然后經硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到黃色油。將粗品物質經20g 230-400目硅膠快速層析純化，用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脫得到為白色固體的目標化合物(271mg，46％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.35(s，5H)，6.77(d，1H)，5.49(m，1H)，5.12(dd，2H)，4.51(q，2H)，4.20(m，1H)，1.97(m，1H)，1.88(m，1H)，1.66(m，3H)，1.52(m，1H)，1.45(t，3H)，0.97-0.92(m，12H).
實施例11(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基-2，2，2-三氟乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備于室溫下將實施例2化合物(0.200g，0.433mmol)、1，1，1三氟乙醇(.052g，0.52mmol，.04ml)、吡啶(0.1ml)和碳酸氫二叔丁酯(0.104g，0.477mmol)于乙酸乙酯中攪拌16小時。用乙酸乙酯稀釋所述溶液并連續用5％鹽酸、10％碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。用硫酸鎂干燥有機層，過濾并蒸發得到殘留物，將其經層析(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)后得到為白色固體的目標化合物(.098g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.50(s，1H)，7.36(s，5H)，6.64(d，1H)，5.22(m，2H)，5.09(s，2H)，4.73(m，2H)，4.16(m，1H)，1.66-1.41(m，6H)，0.87(m，12H).
實施例12(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備a)(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3-甲基丁烷將亞硫酰氯(1.12g，9.41mmol，0.69ml)加至實施例10(c)化合物(2.50g，7.24mmol)和吡啶(1.49g，18.8mmol，1.52ml)在乙醚(5ml)的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌2小時后，過濾去除固體并濃縮濾液。將所述殘留物溶于甲苯中并加熱回流。12小時后，濃縮所述溶液得到棕色油。將所述殘留物經175g 230-400目硅膠快速層析，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脫得到為淡黃色油的目標化合物(0.84g，35％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.14(m，1H)，5.03(br d，1H)，4.52(q，2H)，1.78-1.70(m，3H)，1.44(s，9H)，0.99(d，6H).
b)(1S)-1-氨基-1-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3-甲基丁烷根據實施例10(e)的方法，用(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3-甲基丁烷代替(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3-甲基丁烷制備目標化合物(582mg，100％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.99(t，1H)，4.52(q，2H)，2.10-2.02(m，2H)，1.77-1.70(m，1H)，1.44(t，3H)，1.00(t，6H).
c)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺根據實施例10(f)的方法，用(1S)-1-氨基-1-(4-羰基乙氧基噁二唑-2-基)-3-甲基丁烷代替(1S)-1-氨基-1-(4-羰基乙氧基噻二唑-2-基)-3-甲基丁烷制備目標化合物(235mg，39％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.26(s，5H)，6.64(s，1H)，5.45-5.39(m，1H)，5.12(m，3H)，4.52(q，2H)，4.20(m，1H)，1.81(m，2H)，1.68-1.64(m，3H)，1.54-1.50(m，1H)，1.46(t，3H)，0.97-0.92(m，12H).
實施例13(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基-L-亮氨酰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備將實施例8(c)化合物(160.7mg，0.47mmol)溶于無水TFA(1.0ml)中并攪拌15分鐘。用甲醇稀釋所述溶液并蒸發至干。將殘留物溶于DMF(2ml)中并將N-Cbz-L-亮氨酰基-L-亮氨酸(194.0mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(99.0mg，0.52mmol)和1-羥基苯并三唑(13.0mg，0.094mmol)和三乙胺(94.7mg，0.936mmol，0.13ml)加至上述所得溶液中。于室溫下攪拌24小時后，用乙酸乙酯稀釋所述混合物并用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。所述殘留物經230-400目硅膠快速層析，用乙酸乙酯/己烷洗脫得到目標化合物(0.146g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(s，1H)，7.33(m，5H)，7.14(d，1H)，6.61(d，1H)，5.37(m，2H)，5.08(m，2H)，4.47(m，1H)，4.39(q，2H)，4.18(m，1H)，1.98-1.45(m，9H)，1.38(t，3H)，0.94-0.86(m，18H).
實施例14(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-甲酰胺基噁二唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備向實施例12化合物(96.8mg，0.2mmol)在乙醇(2ml)中的溶液中通入氨氣5分鐘。再攪拌5分鐘后，濃縮所述溶液得到為白色固體的目標化合物(91.2mg，98％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.29(s，5H)，5.90(d，1H)，5.30(t，1H)，5.04(s,2H)，4.15(m,1H)，1.76(m，2H)，1.59-1.43(m，4H)，0.92-0.85(m，12H).
實施例15(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-3-甲基戊酰胺的制備a)N-(9-芴基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基溴甲酮根據實施例1(a)的方法，用N-(9-芴基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸制備目標化合物(5.6g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(d，2H)，7.51(d，2H)，7.34(dd，2H)，7.22(dd，2H)，5.08(d，1H)，4.53(m，1H)，4.36(dd，2H)，4.13(dd，2H)，3.89(dd，2H)，1.62-1.41(m，3H)，0.88(m，6H).
b)(1S)-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-1-(9-芴基甲氧基羰基)氨基-3-甲基丁烷根據實施例1(b)的方法，用N-(9-芴基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基溴甲酮代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸溴甲酮制備目標化合物(4.13g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.72(d，2H)，7.49(d，2H)，7.32(dd，2H)，7.22(dd，2H)，7.19(s，1H)，5.31(d，1H)，4.88(m，1H)，4.40(q，2H)，4.28(d，2H)，4.08(t，H)，1.62-1.41(m，3H)，1.36(t，3H)，0.88(m，6H).
c)(1S)-1-氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷于室溫下將實施例15(b)化合物(0.5g，1.1mmol)在5％哌啶/DMF溶液中攪拌10分鐘。蒸發溶劑并真空干燥所得固體得到目標化合物(0.27g)。
d)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-3-苯基丙酰胺根據實施例5的方法，用(1S)-1-氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷代替芐胺，用N-Cbz-L-苯丙氨酸代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺制備目標化合物(0.162g，)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(m，5H)，7.11(s，1H)，7.04(m，5H)，6.12(d，1H)，5.24(d，1H),5.10(q，1H)，5.01(s，2H)，4.37(q，2H)，4.21(m，1H)，2.91(m，2H)，1.62(m，3H)，1.37(t，3H)，0.81(m，6H).
實施例16(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基-L-亮氨酰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例5的方法，用(1S)-1-氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷代替芐胺，用N-Cbz-L-亮氨酰基-L-亮氨酸代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺制備目標化合物(0.098g，)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39(s，1H)，7.25(m，5H).6.87(d，1H)，6.49(d，1H)，5.30(d，1H)，5.16(q，1H)，4.99(s，2H)，4.36(q，2H)，4.31(m，1H)，4.09(m，1H)，1.74-1.38(m，9H)，1.32(t，3H)，0.80(m，15H).
實施例17(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(5-巰基-1，2，4-噁二唑-3-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸甲酯將N-Cbz-L-亮氨酸(Chemical Dynamics)(1.32g，4.97mmol)、L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(Aldrich)(0.99g，5.47mmol)、1-羥基苯并三唑(0.14g，1.0mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.05g，5.47mmol)混合，溶于25mlDMF中并于室溫攪拌15小時。用乙酸乙酯(250ml)稀釋所述溶液并用水、0.1N HCl、飽和NaHCO3水溶液和飽和鹽水連續洗滌，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。經230-400目硅膠快速層析純化其殘留物，用1∶3乙酸乙酯己烷洗脫，得到為白色固體的目標化合物(1.28g，66％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.32(m，5H)，6.28(d，1H)，5.28(m，3H)，4.61-4.58(m，1H)，4.20(m，1H)，3.74(s，3H)，1.69-1.54(m，6H)，0.96-0.92(m，12H).
b)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基酰肼將水合肼(1.63g，32.6mmol，1.58ml)加至實施例17(a)化合物(1.28g，3.26mmol)在25ml甲醇的攪拌的溶液中并將所述溶液于室溫下攪拌15小時。將所述溶液蒸發至干得到為白色固體的目標化合物(1.28g，100％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(br s，1H)，7.35-7.32(m，5H)，6.67(d，1H)，5.50(d，1H)，5.11(s，2H)，4.46(m，1H)，4.21(m，1H)，3.88(br s，2H)，1.64-1.51(m，6H)，0.92-0.88(m，12H).
c)(2S，1S’)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(5-巰基-1，2，4-噁二唑-3-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺將三乙胺(0.155g，1.53mmol，0.213ml)和二氯硫化碳(0.088g，0.76mmol，0.058ml)加至實施例17(b)化合物(0.3g，0.76mmol)在1.5ml氯仿的攪拌的溶液中。將所述溶液加熱回流3小時，然后冷至室溫。用乙酸乙酯稀釋所述混合物，用水和飽和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所述殘留物經230-400目硅膠快速層析純化，用11％甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脫得到為白色固體的目標化合物(0.20g，61％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(m，6H)，6.85(d，1H)，5.37(d，1H)，5.14(m，3H)，4.24(m，1H)，1.65(m，6H)，0.95-0.87(m，12H).
實施例18(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-巰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備將實施例1(a)化合物(1.0g，2.2mmol)和二硫代氨基甲酸銨(0.25g，2.2mmol)溶于乙醇中并加熱至55℃13小時。蒸發溶劑將殘留物經層析(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.58g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(m，5H)，7.10(s，1H)，6.33(s，1H)，6.00(d，1H)，5.11(q，2H)，4.94(m，1H)，4.05(m，1H)，1.49(m，6H)，0.78(m，12H).
實施例19(2S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)甲基-4-甲基戊酰胺的制備
a)1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)甲烷根據實施例8(a)-8(c)的方法，在步驟(a)中用N-叔丁氧基羰基甘氨酸代替N-叔丁氧基羰基-(L)-亮氨酸制備目標化合物(1.9g，總收率58％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.11(s，1H)，5.31(s，1H)，4.56(d，2H)，4.43(q，2H)，1.45(s，9H)，1.42(t，3H).
b)(2S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)甲基-4-甲基戊酰胺根據實施例13的方法，用1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)甲烷代替(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷，用N-Cbz-L-亮氨酸代替N-Cbz-L-亮氨酰基-L-亮氨酸制備目標化合物(0.120g，32％)。MS(MH+)434.2。
實施例20(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-芐氧基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備將實施例2的化合物(0.105g，0.22mmol)溶于二氯甲烷中并用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺甲碘化物(0.062g，0.22mmol)和芐醇(0.03ml，0.22mmol)處理。使所述混合物于室溫下攪拌4小時并蒸發溶劑，將得到的殘留物經層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.04g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37(s，1H)，7.26(m，10H)，6.50(d，1H)，5.33(s，2H)，5.11(q，2H)，5.09(m，1H)，4.99(s，2H)，4.04(m，1H)，1.49(m，6H)，0.78(m，12H).
實施例21(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基-N-[3’-甲基-1’-(2-苯氧基羰基噻唑-4-基)丁基]戊酰胺的制備根據實施例20的方法，用苯酚代替芐醇制備目標化合物(0.075g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41(s，1H)，7.26(m，10H)，6.49(d，1H)，5.20(m，1H)，5.04(m，1H)，5.00(s，2H)，4.08(m，1H)，1.49(m，6H)，0.82(m，12H).
實施例22(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基-N-[3’-甲基-1’-[2-(2-甲基丙氧基羰基)噻唑-4-基]丁基]戊酰胺的制備根據實施例20的方法，用異丁醇代替芐醇制備目標化合物(0.075g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.25(m，6H)，6.50(d，1H)，5.11(q，2H)，5.09(m，1H)，4.99(s，2H)，4.11(d，2H)，3.91(m，1H)，2.02(m，1H)，1.70-1.39(m，6H)，0.82(d，6H)，0.78(m，12H).
實施例23(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)乙基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例19的方法，在步驟(a)中用N-叔丁氧基羰基-L-丙氨酸代替N-叔丁氧基羰基甘氨酸，在步驟(b)中用N-Cbz-D-亮氨酸代替N-Cbz-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.135g，36％)。MS(MH+)448.2。
實施例24(2R，1’R)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)乙基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例19的方法，在步驟(a)中用N-叔丁氧基羰基-D-丙氨酸代替N-叔丁氧基羰基甘氨酸，在步驟(b)中用N-Cbz-D-亮氨酸代替N-Cbz-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.110g，29％)。MS(MH+)448.2。
實施例25(2S，1’S)-N-[1’-(2-氨基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-2-(芐氧基羰基)氨基-4-甲基戊酰胺的制備將硫脲(0.142g，1.87mmol)加至實施例1(a)化合物(0.85g，1.87mmol)在4ml乙醇的攪拌的溶液中。將所述溶液于室溫攪拌90分鐘。將所述溶液濃縮，使殘留物溶于乙酸乙酯中并用飽和NaHCO3水溶液和飽和鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經230-400目硅膠快速層析純化，用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫得到為白色固體的目標化合物(0.64g，78％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(m，5H)，6.30(m，2H)，5.12(m，3H)，4.95-4.91(m，3H)，4.16(m，1H)，1.63(m，4H)，1.49(m，2H)，0.93-0.89(m，12H).
實施例26(1S)-N-[4-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基溴代甲酮將1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(6.65g，45.2mmol)在乙醚(225ml)中的溶液冷至0℃。緩慢加入40％氫氧化鈉并使重氮甲烷于0℃匯集于所述乙醚溶液中30分鐘。然后傾出所述乙醚溶液并置于0℃。
將N-Cbz-L-亮氨酸(2.10g，7.6mmol)溶于THF(10ml)中，冷至-40℃并加入4-甲基嗎啉(0.77g，7.6mmol，0.83ml)，隨后滴加氯代甲酸異丁酯(1.04g，7.6mmol，0.98ml)。15分鐘后，將所述溶液過濾至預先制備的醚制重氮甲烷的0℃的溶液中。將所得溶液于0℃放置23小時。加入HBr(30％的乙酸溶液)(45.2mmol，9ml)并將所得溶液于0℃攪拌5分鐘，然后用0.1N HCl、飽和NaHCO3水溶液和飽和鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到為無色油狀的目標化合物(2.43g，94％)。
b)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷將實施例26(a)化合物(1.57g，4.58mmol)和硫代草酸乙酯(0.61g，4.58mmol)在乙醇(10ml)中的溶液加熱回流4小時。然后冷卻所述溶液，濃縮并將殘留物經230-400目硅膠快速層析純化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脫得到為黃色油狀的目標化合物(1.0g，58％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41(s，1H)，7.34-7.31(m，5H)，5.40(d，1H)，5.10(d，1H)，5.05(d，1H)，4.98(q，1H)，4.48(q，2H)，1.80-1.76(m，2H)，1.57-1.53(m，1H)，1.44(t，3H)，0.95(d，3H)，0.93(d，3H).
c)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷將實施例26(b)化合物(0.30g，0.8mmol)和水合肼(0.40g，8.0mmol，0.39ml)在乙醇(8ml)中的溶液于室溫下攪拌2小時。然后濃縮所述溶液得到為白色泡沫狀的目標化合物(0.28g，98％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.29(s，1H)，7.37-7.35(m，5H)，5.18(d，1H)，5.09(dd，2H)，4.95(q，1H)，4.07(d，2H)，1.71(t，2H)，1.55(m，1H)，0.96(d，3H)，0.94(d，3H).
d)(1S)-N-[4-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼將實施例26(c)化合物(100mg，0.28mmol)、N-Cbz-L-亮氨酸(80.5mg，0.30mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(58.2mg，0.30mmol)和1-羥基苯并三唑(7.5mg，0.06mmol)在DMF(0.6mmol)中的溶液于室溫下攪拌18小時。用乙酸乙酯稀釋所述溶液并連續用0.1N HCl、飽和NaHCO3水溶液和飽和鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經230-400目硅膠快速層析純化，用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫得到為白色固體的目標化合物(111.4mg，66％)。mp110-112℃。
實施例27N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-N’-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸甲酯根據實施例26(d)的方法，用L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物(1.28g，66％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.32(m，5H)，6.28(d，1H)，5.28(m，3H)，4.61-4.58(m，1H)，4.20(m，1H)，3.74(s，3H)，1.69-1.54(m，6H)，0.96-0.92(m，12H).
b)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基酰肼根據實施例26(c)的方法，用N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸甲酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物(1.28g，100％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(br s，1H)，7.35-7.32(m，5H)，6.67(d，1H)，5.50(d，1H)，5.11(s，2H)，4.46(m，1H)，4.21(m，1H)，3.88(br s，2H)，1.64-1.51(m，6H)，0.92-0.88(m，12H).
c)N-芐基羰基-L-亮氨酰基-N’-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基酰肼根據實施例26(d)的方法，用N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基酰肼代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物(0.059g)。MS(M+Na+)662.1。
實施例28
(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼a)N-叔丁氧基羰基-(L)-亮氨酰胺于-40℃向N-叔丁氧基羰基-(L)-亮氨酸(7.0g，28.1mmol)的無水THF(100ml)溶液中加入氯代甲酸異丁酯(3.8g，28.1mmol)和N-甲基嗎啉(6.0，59mmol)。攪拌15分鐘后，再向混合物中通入氨氣15分鐘，然后溫熱至室溫并攪拌2小時。過濾混合物并將濾液真空濃縮得到為白色固體的目標化合物(6.5，28.0mmol)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.38(br s，1H)，5.79(br s，1H)，5.04(br d，1H)，4.13(m，1H)，1.71-1.49(m，3H)，1.39(s，9H)，0.92(dd，6H).
b)N-叔丁氧基羰基-(L)-亮氨酸硫代酰胺向實施例26(a)化合物(6.5，28.0mmol)的無水THF的攪拌的溶液中加入Lawesson’s試劑(6.8g，16.9mmol)并將所述混合物于室溫、氬氣下攪拌過夜。蒸發溶劑并將所述殘留物經層析(硅膠，12％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(5.4g，77％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.54(br s，1H)，7.97(br s，1H)，5.28(br d，1H)，4.52(m，1H)，1.72-1.58(m，3H)，1.40(s，9H)，0.92(m，6H).
c)(1S)-1-(叔丁氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷于-10℃在氬氣環境中攪拌實施例26(b)化合物(5.4g，21.7mmol)的無水丙酮(100ml)溶液。加入溴代丙酮酸乙酯(4.7g，23.9mmol)并于-10℃攪拌1小時。將所述溶液傾至充分攪拌的氯仿和水的混合物中，然后再傾至飽和的碳酸氫鈉溶液中。分離有機相并用氯仿萃取水層。用MgSO4干燥合并的有機相，過濾并濃縮為油狀物。并用TFAA(5.0g，23.9mmo1)和吡啶(3.8g，47.8mmol)在二氯甲烷中將所述油狀殘留物于-20℃處理1小時。減壓除去過量的溶劑并將其殘留物溶于二氯甲烷中。用飽和的碳酸氫鈉水溶液和1.0N KHSO4將所述溶液洗滌至pH7。將所述溶液經硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為油狀物，經層析(硅膠，7.5％乙酸乙酯/己烷)純化得到為棕色固體的目標化合物(4.5g，61％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，5.04(br d，1H)，4.95(m，1H)，4.3 1(q，2H)，1.88(m，1H)，1.63(m，2H)，1.40(s，9H)，1.32(t，3H)，0.85(dd，6H).
d)(1S)-1-(芐氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷將實施例26(c)化合物(0.250g，0.731mmol)溶于TFA(2ml)中并于室溫下攪拌15分鐘，用甲醇稀釋并真空濃縮。將所述殘留物溶于二氯甲烷中并用三乙胺(0.739g，7.31mmol)處理，隨后用氯代甲酸芐酯(1.2g，7.31mmol)處理。將所述溶液于室溫下攪拌2小時，分配于乙酸乙酯/水中。用鹽水洗滌有機層，合并，干燥(MgSO4)并濃縮為殘留物，將該殘留物經層析(硅膠，15％乙酸乙酯/己烷)純化得到為油狀的目標化合物(0.198g，72％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(s，1H)，7.32(m，5H)，5.51(br d，1H)，5.14(m，1H)，5.10(s，2H)，4.37(q，2H)，1.93(m，1H)，1.81-1.67(m，2H)，1.39(t，3H)，0.95(m，6H).
e)(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼根據實施例26(c)-1(d)的步驟，但在步驟(c)中用(1S)-1-(芐氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基]-3-甲基丁烷制備目標化合物。MS(MH+)610.0
實施例292，2’-(N，N’-雙-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼的制備向N-Cbz-亮氨酸(Chemical Dynamics Corp.)(2.94g，11.1mmol)在22ml DMF的攪拌的溶液中加入碳酰肼(0.5g，5.6mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2.13g，11.1mmol)和1-羥基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)。于室溫下攪拌22小時后，將所述溶液傾至500ml水中。真空過濾收集沉淀并用水(4×150ml)和二氯甲烷(4×150ml)洗滌，然后真空干燥得到為白色固體的目標化合物(1.49g，46％)。MS(ESI)607.1(M+Na)+。
實施例302，2’-(N，N’-雙環己基乙酰基)碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用環己基乙酸代替N-Cbz-L-亮氨酸制備目標化合物(0.410g，73％)。MS(ESI)339.3(M+H)+。
實施例312，2’-(N，N’-雙甲基戊酰基)碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用4-甲基戊酸代替N-Cbz-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.212g，44％)。MS(ESI)287.3(M+H)+。
實施例322，2’-(N，N’-雙-2-環戊基乙酰基)碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用環戊基乙酸代替N-Cbz-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.345g，67％)。MS(ESI)311.2(M+H)+。
實施例332，2’-(N，N’-雙-2-芐氧基羰基甘氨酰基)碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-Cbz-甘氨酸代替N-Cbz-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.719g，91％)。MS(ESI)473.1(M+H)+。
實施例342，2’-(N，N’-雙-乙酰基-L-亮氨酰基)碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-乙酰基-L-亮氨酸代替N-Cbz-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.153g，23％)。MS(ESI)401.3(M+H)+。
實施例352，2’-(N，N’-雙-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-Cbz-丙氨酸代替N-Cbz-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.762g，91％)。MS(ESI)501.1(M+H)+。
實施例362-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-2’-[N’-(4-甲基戊酰基)]碳酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯向亮氨酸甲酯鹽酸鹽(5.0g，27.5mmol)在1，4-二氧六環(50ml)的溶液中加入碳酸鈉(30.3ml，2M水中)，接著加入氯代甲酸芐酯(4.69g，27.5mmol)。將所述混合物于室溫下攪拌24小時，然后于乙酸乙酯和水中分配。收集有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到無色油狀的目標化合物(7.67g，100％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39(m，5H)，5.38(d，2H)，5.12(s，2H)，4.42(m，1H)，3.75(s，3H)，1.73-1.50(m，3H)，0.94(m，6H).
b)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基酰肼向實施例36(a)化合物(7.67g，27.5mmol)的甲醇(40ml)溶液中加入肼一水合物(13.5g，270mmol)。將所述溶液于室溫下攪拌24小時，同時分配于乙酸乙酯和水中。收集有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到灰白色固體狀的目標化合物(7.67g，100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(s，1H)，7.38(m，5H)，5.64(d，1H)，5.09(dd，2H)，4.20(m，1H)，3.81(s br，2H)，1.69-1.51(m，3H)，0.92(dd，6H).
c)1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1，3，4-噁二唑-2-酮基)丁烷于0℃將實施例36(b)化合物(1.0g，3.58mmol)的二氯甲烷(12ml)溶液滴加至氯代甲酸4-硝基苯酯(0.361g，1.79mmol)在二氯甲烷(8ml)的溶液中。將所述溶液溫熱至室溫并攪拌1小時，同時分配于乙酸乙酯和水中。用NaHCO3水溶液洗滌有機層并收集，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮為殘留物，經層析(20％乙酸乙酯/己烷)純化得到為淡黃色固體的目標化合物(0.322g，59％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.18(s，1H)，7.38(m，5H)，5.13(m，3H)，4.79(m，1H)，1.71(m，3H)，0.98(dd，6H).
d)4-甲基戊酰基酰肼根據實施例36(b)的方法，但用異己酸乙酯代替芐氧基羰基-L-亮氨酰基甲酯制備為白色固體的目標化合物(1.8g，100％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.48(s br，1H)，3.62(s br，2H)，2.13(t，2H)，1.51(m，3H)，0.85(d，6H).
e)2-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-2’[N’-(4-甲基戊酰基)]碳酰肼將實施例36(c)化合物(0.100g，0.325mmol)和實施例36(d)化合物(0.042g，0.325mmol)混合并溶于乙醇(1ml)中。將所述溶液回流24小時然后濃縮為黃色固體殘留物，將其用冷的二氯甲烷洗滌得到為白色固體的目標化合物(0.053g，37％)。MS(MH+)436.2。
實施例37雙-(Cbz-亮氨酰基)-1，3-二氨基-丙-2-酮的制備將Cbz-亮氨酸(500mg，1.88mol)和EDCI(558mg，1.88mmol)溶于含有1，3-二氨基-丙-2-醇(85mg，0.94mmol)和Hunig氏堿(0.3ml)，1.88mmol)的DMF(4.0ml)溶液中并于RT攪拌過夜。用EtOAc(20ml)稀釋所述反應物并用水(2×20ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾并真空濃縮。然后將所述中間體溶于丙酮(4.0ml)中并滴加Jones試劑(2.0ml，1.5M)并將所述反應物于RT攪拌過夜。然后用異丙醇(1.0ml)將過量的Jones試劑終止反應，然后用EtOAc(20ml)稀釋所述反應物并用水(2×20ml)萃取除去無機鹽。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮并層析(硅膠，2-5％MeOH/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(410mg，75％)。MS(ES)M+H+＝583，M+Na+＝605。
實施例38雙-1，3-(4-苯氧基-苯甲酰基)-二氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“4-苯氧基-苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝481，M+Na+＝503。
實施例391-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(乙酰基-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“N-Ac-亮氨酸和Cbz-亮氨酸的混合物”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝491，M+Na+＝513。
實施例401-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-谷氨酰基-叔丁酯)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“Cbz-谷氨酸γ-叔丁酯和Cbz-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝655。
實施例411-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-谷氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備將1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-谷氨酰叔丁酯)-氨基-丙-2-酮(5mg，0.007mmol)溶于三氟乙酸(0.5ml)和二氯甲烷(0.5ml)的溶液中，然后于RT攪拌2小時，用甲苯(10ml)稀釋所述反應物，真空濃縮得到目標化合物MS(ES)M+H+＝599。
實施例42雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-(S)-丁酮-2-酮-的制備a)Cbz-leu-ala-溴代甲酮于40℃將氯代甲酸異丁酯(1.46ml 11.3mmol)滴加至Cbz-leu-ala-OH(4.0g，11.3mmol)和N-甲基嗎啉(1.24ml，11.3mmol)在THF(40ml)的溶液中。將所述反應物攪拌15分鐘，然后過濾并用乙醚洗滌。加入重氮甲烷(40.1mmol，由150ml乙醚中的5.9g 1-甲基-3-硝基-亞硝基胍和18ml 40％KOH產生)在乙醚(200ml)中的溶液并將所述反應物置于冰箱中過夜。向粗反應混合物中滴加30％HBr/AcOH(7ml)并攪拌5分鐘。用檸檬酸水溶液(50ml×2)、飽和碳酸氫鈉水溶液(3×150ml)和鹽水(100ml)洗滌所述溶液。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾并真空濃縮得到固體，將其不經純化用于下一步驟，MS(ES)M+H+＝413和415，M+Na+＝437。
b)Cbz-leu-leu-疊氮基甲酮將Cbz-leu-ala-溴代甲酮(650mg，1.6mmol)溶于DMF(7ml)中，然后加入疊氮化鈉(122mg，1.9mmol)和氟化鉀(137mg，2.36mmol)并將所述反應物攪拌過夜。使所述反應物分配于EtOAc和水中，用硫酸鎂干燥合并的有機萃取物，過濾，真空濃縮，然后經層析(2-5％MeOH，二氯甲烷，硅膠)得到為白色固體的目標化合物(330mg，53％)。MS(ES)M+Na+＝398。
c)Cbz-leu-2-氨基-4-疊氮基-丙-3-醇將Cbz-leu-leu-疊氮基甲酮(330mg，0.9mmol)溶于EtOH(5ml)中并于RT下加入硼氫化鈉(100mg，2.65mmol)，將所述反應物攪拌15分鐘。用水(10ml)終止所述反應，用EtOAc(25ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機萃取物，過濾，濃縮得到目標化合物，不經進一步純化，MS(ES)M+H+＝378，M+Na+＝400。
d)Cbz-leu-2-氨基-4-氨基-丙-3-醇將Cbz-leu-2-氨基-4-疊氮基-丙-3-醇(300mg，0.8mmol)溶于MeOH(4ml)和三乙胺(0.33ml，2.4mmol)中，加入丙-1，3-二硫醇(0.35ml，3.82mmol)并將所述反應物攪拌過夜，真空濃縮，然后用己烷洗滌白色固體得到目標化合物，將其不經純化而用于下一步驟，MS(ES)M+H+＝352。
e)雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-(S)-丁酮-2-醇將Cbz-leu-2-氨基-4-氨基-丙-3-醇(140mg，0.4mmol)和Cbz-亮氨酸(106mg，0.4mmol)溶于DMF(2ml)和N-甲基嗎啉(0.08ml，0.8mmol)及HBTU(151mg，0.4mmol)中并攪拌過夜。使所述反應物分配于EtOAc和水之間，用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮得到目標化合物，MS(ES)M+H+＝599，M+Na+＝621。
f)雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-(S)-丁酮-2-酮將雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-(S)-丁酮-2-醇(240mg，0.4mmol)溶于丙酮(2ml)中。滴加Jones試劑(0.5ml，1.5M)并將該反應物于RT下攪拌過夜。然后用異丙醇(1.0ml)將過量的Jones試劑終止反應，然后用EtOAc(20ml)稀釋所述反應物并用水(2×20ml)萃取除去無機鹽。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮并經層析(硅膠，2-5％MeOH/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(80mg，33％)，MS(ES)M-H+＝595。
實施例431-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-苯丙氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“Cbz-苯丙氨酸和Cbz-亮氨酸的混合物”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物(70％)MS(ES)M+H+＝617，M+Na+＝639。
實施例441-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-正亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“Cbz-正亮氨酸和Cbz-亮氨酸的混合物”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝583，M+Na+＝605。
實施例451-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(Cbz-正纈氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“Cbz-正纈氨酸和Cbz-亮氨酸的混合物”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝569，M+N+＝591。
實施例46雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-5-甲基-(S)-己-2-酮的制備a)雙-1，3-(Cbz-亮氨酰基)-二氨基-5-甲基-(S)-己-2-酮根據實施例42(a)-(f)的方法，用“Cbz-leu-leu-OH”代替“Cbz-leu-ala-OH”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝639。
實施例471-(乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-(4-苯氧基-苯甲酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“N-Ac-亮氨酸和4-苯氧基-苯甲酸的混合物”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝440。
實施例481-(Cbz-高-亮氨酰基)-氨基-(Cbz-亮氨酰基)-3-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，用“Cbz-高-亮氨酸和Cbz-亮氨酸的混合物”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝597，M+Na+＝619。
實施例49雙-1，3-(4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰氨基)-丙-2-酮的制備將4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯(1.3g，4mmol，Maybridge)加至1，3-二氨基-丙-2-醇(0.18g，2mmol)在DMF(10ml)/N-甲基嗎啉(0.44ml，4mmol)中的溶液中，于RT攪拌3小時。將所述反應物分配于水和EtOAc之間并用硫酸鎂干燥合并的有機層，然后真空濃縮。將粗的雙-1，3-(4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰氨基)-丙-2-醇(0.28g，0.4mmol)溶于丙酮(1.0ml)中并滴加Jones試劑(0.44ml，1.5M)，將所述反應物于RT攪拌過夜。用異丙醇(1.0ml)使過量的Jones試劑終止反應，然后用EtOAc(20ml)稀釋所述反應物，用水(2×20ml)萃取除去無機鹽。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮并經層析(硅膠，2-5％MeOH/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(90mg，34％)。MS(ES)M+H+＝671，M+Na+＝693。
實施例50雙-1，3-(4-苯氧基-苯基亞磺酰氨基)-丙-2-酮的制備根據實施例49的方法，用4-苯氧基-苯磺酰氯代替4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯制備目標化合物MS(ES)M-H+＝551。
實施例511-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰氨基)-丙-2-酮的制備將Cbz-亮氨酸(660mg，2.5mmol)、EDCI(480mg，2.5mmol)、HOBT(340mg，2.5mmol)溶于DMF(10ml)和1，3-二氨基-丙-2-醇(225mg，2.5mmol)中并于RT攪拌過夜。加入N-甲基嗎啉(0.41ml，3.75mmol)，隨后加入4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯(820mg，2.5mmol，Maybridge)并將所述反應物于RT攪拌3小時。使所述反應物分配于水和EtOAc之間，用硫酸鎂干燥合并的有機層，然后真空濃縮。將粗的1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰氨基)-丙-2-醇溶于丙酮(5.0ml)中并滴加Jones試劑(3.0ml，1.5M)，將所述反應物于RT攪拌過夜。用異丙醇(1.0ml)將過量的Jones試劑驟冷，然后用EtOAc(20ml)稀釋所述反應物并用水(2×20ml)萃取除去無機鹽。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾并濃縮，經層析(硅膠，2-5％MeOH/二氯甲烷)純化，然后將所述產物在二氯甲烷中研磨得到為白色固體的目標化合物(26mg，2％)。MS(ES)M+H+＝627。
實施例521-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(甲苯磺酰基-氨基)-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，用甲苯磺酰氯代替4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯制備目標化合物MS(ES)M-H+＝488。
實施例531-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-((4-苯氧基-苯基)-亞磺酰氨基)-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，用4-苯氧基-苯基-磺酰氯代替4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯制備目標化合物MS(ES)M+H+＝568，M+Na+＝590。
實施例541-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，用2-二苯并呋喃磺酰氯代替4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯制備目標化合物MS(ES)M+H+＝566，M+Na+＝588。
實施例551-(Cbz-高-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，用2-二苯并呋喃磺酰氯代替4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯，及用Cbz-高-亮氨酸代替Cbz-亮氨酸制備目標化合物MS(ES)M+Na+＝602。
實施例561-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-(S)-丁-2-酮的制備a)1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-(S)-丁-2-醇如實施例56(a)-(d)所述，將Cbz-leu-2-氨基-4-氨基-丙-3-醇(150mg，0.42mmol)和2-二苯并呋喃磺酰氯溶于DMF(2ml)和N-甲基嗎啉(0.09ml，0.84mmol)中并攪拌過夜。使所述反應物于EtOAc和水之間分配，用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮得到目標化合物，MS(ES)M+H+＝582，M+Na+＝604。
b)1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-(S)-丁-2-酮將1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-(S)-丁-2-醇(240mg，0.4mmol)溶于丙酮(2ml)中。滴加Jones試劑(0.5ml，1.5M)并將所述反應物于RT下攪拌過夜。用異丙醇(1.0ml)使過量的Jones試劑終止反應，然后用EtOAc(20ml)稀釋所述反應物，用水(2×20ml)萃取除去無機鹽。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮并經層析(硅膠，2-5％MeOH/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(70mg，29％)。MS(ES)M-H+＝578。
實施例57(S)-苯甲基[1-[[[3-[-芐氧基羰基-亮氨酰基氨基]-2-氧代丙基]-1-(芐基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯的制備a)2-羥基-3-疊氮基-丙醇將疊氮化鈉(1.7g，26mmol)加至縮水甘油(Aldrich，1.3g，17.5mmol)的MeOH(45ml)和水(5ml)的溶液中并于65℃加熱4小時。用水(25ml)稀釋所述反應物，用EtOAc(2×50ml)萃取；用水(2×50ml)，然后用鹽水(50ml)萃取合并的有機層，然后用硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮，并經層析(硅膠，30％EtOAc/己烷)純化得到白色固體(1.37g，67％)。MS(ES)M+H+＝118.4。
b)甲苯磺酸2-羥基-3-疊氮基-丙酯將甲苯磺酰氯(2.3g，12mmol)加入2-羥基-3-疊氮基-丙醇(1.17g，10mmol)和三乙胺(3.6g，36mmol)的二氯甲烷(50ml)的溶液中并于RT攪拌4小時。用水(20ml)稀釋所述反應物，用EtOAc(2×50ml)萃取；用pH7的緩沖溶液(2×50ml)萃取合并的有機層，然后用硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮，經層析(硅膠，30％EtOAc/己烷)得到白色固體(1.2g，44％)；MS(ES)M+H+＝272.2。
c)甲苯磺酸2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-疊氮基-丙酯將甲苯磺酸2-羥基-3-疊氮基-丙酯(1.2g，4.4mmol)加入Ellman二氫吡喃聚合物(參照(3)，流程1)(150mg，0.3mmol)在ClCH2CH2Cl(25ml)的淤漿中，然后加入p-甲苯磺酸吡啶鎓(0.84g，4.4mmol)并于80℃小心通入氬氣攪拌。將所述聚合物過濾，用DMF(2×10ml)，然后用MeOH(20ml)，接著用二氯甲烷(4×20ml)洗滌；IR2105cm-1；幻角自旋(Magic Angle Spinning)1H NMRd8.0，7.4，5.0，3.4。
d)2-(Memfield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-疊氮基-丙-N-芐基-胺將芐胺(0.32g，3mmol)加至甲苯磺酸2-(Memfield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-疊氮基-丙酯(500mg，1mmol)在N-甲基吡咯烷酮(25ml)的淤漿中并于80℃小心通入氬氣攪拌。將所述聚合物過濾，用DMF(2×10ml)，然后用MeOH(20ml)，接著用二氯甲烷(4×20ml)洗滌；IR2105cm-1；幻角自旋1H NMRd7.1，4.7，4.0，3.8。
e)2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-疊氮基-丙-N-芐基-(Cbz-亮氨酰基)-胺將Cbz-亮氨酸(0.82g，3.0mmol)加至2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-疊氮基-丙-N-芐基-胺(120mg，0.22mmol)在DMF(10ml)、二異丙基乙胺(1.2ml，6mmol)和HATU(PerseptiveBiosystems，2.2g，6mmol)的淤漿中并于室溫振搖過夜。將所述樹脂過濾，用DMF(3×10ml)洗滌。重復上述步驟，用MeOH(2×20ml)接著用二氯甲烷(5×20ml)洗滌最終樹脂；IR2105，1735，1630cm-1；幻角自旋1H NMRd7.2，4.7，4.1。
f)2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-氨基-丙-N-芐基-(Cbz-亮氨酰基)-胺將丙二硫醇(0.5ml，xxmmol)加至2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-疊氮基-丙-N-芐基-(Cbz-亮氨酰基)-胺(150mg，0.27mmol)在MeOH(5ml)和三乙胺(0.5ml)的淤漿中并小心振搖過夜。將所述樹脂過濾，用MeOH(2×20ml)，然后用DMF(1×10ml)接著用二氯甲烷(5×20ml)洗滌，并在真空干燥箱中干燥過夜；IR1735，1640cm-1；g)2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-N-芐基-(Cbz-亮氨酰基)-胺將Cbz-亮氨酸(0.82g，3.0mmol)加至2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-氨基-丙-N-芐基-(Cbz-亮氨酰基)-胺(150mg，0.27mmol)在N-甲基吡咯烷酮(10ml)、二異丙基乙胺(1.2ml，6mmol)和HBTU(2.2g，6mmol)的淤漿中并于室溫振搖過夜。將所述樹脂過濾，用DMF(3×10ml)洗滌。重復上述步驟，用MeOH(2×10ml)，接著用二氯甲烷(5×20ml)洗滌最終樹脂；幻角自旋1H NMRd7.6，7.4，5.1，5.0，3.4，0.8。
h)1-N-芐基-1-Cbz-亮氨酰基-氨基-3-Cbz-亮氨酰基-氨基-丙-2-醇于RT將2-(Merrifield聚合物-6-(甲醛-四氫吡喃-縮醛)-3-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-N-芐基-(Cbz-亮氨酰基)-胺(150mg，0.27mmol)在85∶5∶10TFA/水/二氯甲烷(5ml)的淤漿中振搖4小時。過濾所述溶液并將濾液真空濃縮，然后經層析(硅膠，5％MeOH/二氯甲烷)得到黃色固體(65mg，35％)；MS(ES)M+H+＝675.1。
i)1-N-芐基-1-Cbz-亮氨酰基-氨基-3-Cbz-亮氨酰基-氨基-丙-2-酮將1-N-芐基-1-Cbz-亮氨酰基-氨基-3-Cbz-亮氨酰基-氨基-丙-2-醇(65mg，0.96mmol)溶于丙酮(5ml)中并于室溫下滴加Jones試劑(2ml，過量)并將所述反應物攪拌過夜。用異丙醇(5ml)使過量Jones試劑終止反應，用水(5ml)稀釋所述反應物并用EtOAc(2×20ml)萃取。用水(2×15ml)、然后用鹽水(10ml)萃取合并的有機層，隨后用硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮得到黃色固體，將其經層析(硅膠，5％乙酸乙酯/己烷)得到白色固體(16.8mg，29％)；MS(ES)M+H+＝673.1。
實施例58(S)-苯基甲基[1-[[[3-[2-二苯并呋喃基磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(芐基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯的制備
a)N-(2-羥基-3-N-芐基氨基-丙基)鄰苯二甲酰亞胺將N-(2，3-環氧丙基)鄰苯二甲酰亞胺(Aldrich，2.03g，10mmol)與芐胺(1.07g，10mmol)在異丙醇(15ml)中回流3小時。將所述反應物冷至RT，然后真空濃縮得到白色膠狀物，將其與MeOH研磨，然后過濾得到白色固體(0.48g，15％)；MS(ES)M+H+＝311。
b)N-(2-羥基-3-(N-芐基-2-二苯并呋喃磺酰胺)-丙基)鄰苯二甲酰亞胺將N-(2-羥基-3-N-芐基氨基-丙基)鄰苯二甲酰亞胺(0.31g，1mmol)與2-二苯并呋喃磺酰氯(O.27g，1mmol)在N-甲基嗎啉(0.8ml)和DMF(5ml)中攪拌過夜。用水(10ml)稀釋所述反應物，用EtOAc(2×20ml)萃取。用水(3×20ml)、然后用鹽水(20ml)萃取合并的有機層，隨后用硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮得到油狀物，將其經層析(硅膠，30％EtOAc/己烷)得到白色泡沫(0.37g，69％)；MS(ES)M+H+＝541，MS(ES)M+Na+＝563，MS(ES-負電荷)M+HCO2-＝585。
c)2-羥基-(N-芐基-2-二苯并呋喃磺酰胺)-丙基-3-胺將N-(2-羥基-3-(N-芐基-2-二苯并呋喃磺酰胺)-丙基)鄰苯二甲酰亞胺(0.37g，0.69mmol)與水合肼(0.34g，6.85mmol)在MeOH(7ml)中回流1.5小時。將所述反應物冷至RT，真空濃縮。將得到的白色固體與MeOH研磨，然后過濾得到為白色固體的所需的化合物(0.27g，96％)；MS(ES)M+H+＝411。
d)Cbz-亮氨酰基-(2-羥基-(N-芐基-2-二苯并呋喃磺酰胺))-丙基-3-胺將2-羥基-(N-芐基-2-二苯并呋喃磺酰胺)-丙基-3-胺(0.2g，0.5mmol)與Cbz-亮氨酸(0.13g，0.5mmol)在N-甲基嗎啉(0.6ml)和DMF(2ml)中一起攪拌，然后加入HBTU(0.19g，0.5mmol)并于RT下攪拌反應物過夜。用水(10ml)稀釋所述反應物，用EtOAc(2×20ml)萃取。過濾去除在兩層中都不溶解的固體。用水(2×20ml)然后用鹽水(20ml)萃取合并的有機層，然后經硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮得到白色固體，將其不經進一步純化而用于下一步驟；MS(ES)M+H+＝658，MS(ES)M+Na+＝680。
e)(S)-苯基甲基[1-[[[3-[(2-二苯并呋喃基磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(芐基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯將Cbz-亮氨酰基-(2-羥基-(N-芐基-2-二苯并呋喃磺酰胺)-丙基-3-胺(0.16g，0.244mmol)溶于丙酮(2ml)中。加入Jones試劑(0.5ml，1.5M)并將所述反應物攪拌過夜。用異丙醇(1ml)使過量的Jones試劑終止反應，用水(10ml)稀釋所述反應物，用EtOAc(2×20ml)萃取。用水(2×20ml)、然后用鹽水(20ml)萃取合并的有機層，然后經硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮得到白色固體，將其經層析(硅膠，1∶1EtOAc/己烷)得到白色固體(0.14g，88％)；MS(ES)M-H+＝654，MS(ES)M+Cl+＝690，MS(ES)M+HCO2-＝700.
實施例59(S)-苯基甲基[1-[[[3-[(2-二苯并呋喃基磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(4-吡啶基甲基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯的制備根據實施例58(a)-(e)的方法，但用“4-吡啶基甲胺”代替“芐胺”制備目標化合物；MS(ES)M+H+＝657。
實施例601-[[[3-[(2-二苯并呋喃基磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-3-(4-吡啶基甲基)苯甲酰胺的制備根據實施例58(a)-(e)的方法，但用“苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物；MS(ES)M-H+＝511，MS(ES)M+Cl-＝547。
實施例61(S)-苯基甲基[1-[[[3-[(2-二苯并呋喃磺酰基)氨基]-2-氧代丙基]-1-(4-吡啶基甲基)氨基]羰基]-3-甲基丁基]氨基甲酸酯的制備根據實施例58(a)-(e)的方法，但用“4-吡啶基甲胺”代替“芐胺”，用“Cbz-亮氨酸和HBTU”代替“2-二苯并呋喃磺酰氯”，及用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“Cbz-亮氨酸和HBTU”制備目標化合物；MS(ES)M+H+＝657。
實施例622-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯氧基苯基磺酰基)]碳酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯向L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(2.0g，11.0mmol)在1，4-二氧六環(20ml)的攪拌的溶液中加入Na2CO3(12.1ml，2M于水中)，隨后加入氯代甲酸芐酯(1.96g，11.5mmol)。于室溫下將所述混合物攪拌4小時，然后分配于乙酸乙酯和水之間。用鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到無色油狀的目標化合物(3.1g，100％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34(m，5H)，5.27(d，1H)，5.12(s，2H)，4.41(s，2H)，3.75(s，3H)，1.65(m，3H)，0.96(m，6H).
b)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基酰肼向實施例62(a)化合物(3.1g，11.0mmol)在15ml甲醇的攪拌的溶液中加入酰肼水合物(5.9g，118mmol)。將所述溶液于室溫下攪拌16小時然后濃縮得到灰白色固體的目標化合物(3.1g，100％)。MS(ESI)280.2(M+H)+。
c)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷向實施例62(b)化合物(3.0g，10.8mmol)在甲苯(50ml)的攪拌的溶液中加入碳酰氯(56ml，1.93M于甲苯中)。將所述溶液加熱并回流4小時，然后濃縮得到為淡黃色泡沫狀的目標化合物(3.15g，96％)。MS(ESI)306.1(M+H)+。
d)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼向實施例62(c)化合物(0.147g，0.482mmol)在2ml甲醇的攪拌的溶液中加入水合肼(0.241g，4.82mmol)。于室溫下將所述溶液攪拌24小時并濃縮，經柱層析純化(硅膠，甲醇/二氯甲烷)得到白色泡沫狀目標化合物(0.097g，60％)。MS(ESI)338.2(M+H)+。
e)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯氧基苯基磺酰基)]碳酰肼向實施例62(d)化合物(0.097g，0.288mmol)在2mlDMF的攪拌的溶液中加入吡啶(0.046g，0.576mmol)，隨后加入4-苯氧基苯磺酰氯(0.155g，0.576mmol)。于室溫下將所述溶液攪拌16小時，然后分配于乙酸乙酯和水之間。用鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所述殘留物經柱層析純化(硅膠，乙酸乙酯/己烷)得到為白色固體的目標化合物(0.052g，32％)。MS(ESI)570.1(M+H)+。
實施例632-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]-2’-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備向實施例62(d)化合物(0.100g，0.297mmol)在2mlDMF的攪拌的溶液中加入N-芐氧基羰基-L-丙氨酸(0.070g，0.312mmol)、1-羥基苯并三唑(0.008g，0.059mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.060g，0.312mmol)。于室溫下攪拌16小時后，將所述溶液傾至150ml水中。過濾沉淀并用水(150ml)洗滌，高真空干燥得到為白色固體的目標化合物(0.062g，39％)。MS(ESI)543.1(M+H)+。
實施例642-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯基苯甲酰基)]碳酰肼的制備根據實施例63的方法，但用4-苯基苯甲酸代替N-芐氧基羰基-L-丙氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.121g，53％)。MS(ESI)518.1(M+H)+。
實施例652-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-甲氧基苯甲酰基)]碳酰肼的制備根據實施例63的方法，但用4-甲氧基苯甲酸代替N-芐氧基羰基-L-丙氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.057g，27％)。MS(ESI)472.1(M+H)+。
實施例662-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯氧基苯甲酰基)]碳酰肼的制備根據實施例63的方法，但用4-苯氧基苯甲酸代替N-芐氧基羰基-L-丙氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.102g，43％)。MS(ESI)534.1(M+H)+。
實施例672-(N-乙酰基)-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備向實施例62(d)化合物(0.100g，0.297mmol)中加入乙酸酐(0.303g，2.97mmol)。將所述溶液于室溫下攪拌16小時，然后濃縮為灰白色固體，用二氯甲烷洗滌得到為白色固體的目標化合物(0.086g，76％)。MS(ESI)380.1(M+H)+。
實施例682-[N-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼的制備a)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼根據實施例62(a)-(d)的方法，在步驟(a)中用L-丙氨酸乙酯鹽酸鹽代替L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽制備為淡黃色泡沫狀的目標化合物(1.1g，3.8mmol)。MS(ESI)296.2(M+H)+。
b)2-[N-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼向實施例63(d)(0.150g，0.508mmol)在DMF(2ml)的攪拌的溶液中加入N-乙酰基-L-亮氨酸(0.092g，0.534mmol)、1-羥基苯并三唑(0.014g，0.102mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.102g，0.534mmol)。于室溫下攪拌16小時后，用乙酸乙酯稀釋所述溶液，連續用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.028g，12％)。MS(ESI)451.1(M+H)+。
實施例692-[N-(N-乙酰基-L-丙氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用N-乙酰基-L-丙氨酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.050g，25％)。MS(ESI)473.1(M+Na)+。
實施例702-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酰基)]]碳酰肼的制備a)4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酸甲酯將4-(溴代甲基)苯甲酸甲酯(2.0g，8.73mmol)加至二甲胺在甲醇的飽和溶液中。攪拌25分鐘后，濃縮所述溶液并使殘留物在1N NaOH和乙酸乙酯之間分配。用飽和鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到為無色液狀的目標化合物(1.67g，99％)。
1H NMR(250MHz.CDCl3)δ8.00(d，2H)，7.39(d，2H)，3.91(s，3H)，3.47(d，2H)，2.25(s，6H).
b)4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酸鋰將實施例70(a)化合物(1.67g，8.6mmol)溶于THF/H2O(1∶1)中并加入LiOH.H2O(0.39g，9.3mmol)。于室溫下將所述混合物攪拌1.5小時，然后回流1.5小時。將所述混合物濃縮，重新溶于25ml水中并再濃縮得到白色固體(1.6g，100％)。
1H NMR(400MHz.CD3OD)δ7.94(d，2H)，7.36(d，2H)，3.64(s，2H)，2.35(s，6H).
c)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酰基)]]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酸鋰代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為淡黃色固體的目標化合物(0.050g，17％)。MS(ESI)499.1(M+H)+。
實施例712-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-羥基-[3-(4-嗎啉代甲基)]]苯甲酰基]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用4-羥基-3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.065g，26％)。MS(ESI)557.0(M+H)+。
實施例722-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)芐氧基]羰基-L-亮氨酰基]碳酰肼的制備a)α-異氰酸根合-L-亮氨酸甲酯將L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(25g，0.14mol)溶于二氯甲烷(450ml)中，冷至0℃，加入吡啶(43.5g，0.55mol，44.5ml)，然后緩慢加入1.93M碳酰氯在甲苯(0.18mol，92.7ml)中的溶液。于0℃攪拌2小時后，將所述混合物傾至1400ml 0.5N HCl和900ml冰中。用1400ml 0.5N HCl和900ml冰洗滌有機層。用二氯甲烷(450ml)萃取水層并用1400ml飽和鹽水和900ml冰洗滌合并的有機層，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物蒸餾(56-58℃；0.78mmHg)得到無色液狀的目標化合物(20.4g，86％)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ4.04(dd，1H)，3.82(s，3H)，1.92-1.72(m，1H)，1.69-1.62(m，2H)，0.96(d，3H)，0.94(d，3H).
b)4-(N，N-二甲基氨基)芐醇向實施例70(a)化合物(1.63g，8.4mmol)在25ml乙醚的攪拌的溶液中(冷卻到0℃)滴加1M氫化鋰鋁(8.4mmol，8.4ml)溶液。5分鐘后，加入水(0.33ml)、15％NaOH水溶液(0.33ml)和水(1.0ml)使所述反應終止。過濾去除沉淀，用乙醚洗滌2次并將濾液濃縮得到無色油狀目標化合物(1.36g，98％)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.32(d，2H)，7.28(d，2H)，4.68(s，2H)，3.41(s，2H)，2.22(s，6H).
c)N-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)芐氧基羰基]-L-亮氨酸甲酯將實施例72(a)化合物(1.0g，5.8mmol)和實施例72(b)化合物在甲苯(6ml)中的溶液加熱回流24小時。將所述溶液濃縮并將殘留物經60g230-400目硅膠快速層析純化，用5％甲醇(在二氯甲烷中)洗脫得到淡黃色油狀目標化合物(1.71g，87％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.31(s，4H)，5.13(d，1H)，5.10(s，2H)，4.41(m，1H)，3.74(s，3H)，3.43(s，2H)，2.24(s，6H)，1.70-1.62(m，2H)，1.52(m，1H)，0.96(d，3H)，0.94(d，3H).
d)N-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)]芐氧基羰基]-L-亮氨酸鋰根據實施例70(b)的方法，但用N-[4-(N，N-甲基氨基甲基)芐氧基羰基]-L-亮氨酸甲酯代替4-(N，N-二甲基氨基甲基)苯甲酸甲酯制備為白色固體的目標化合物(1.57g，95％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.35(d，2H)，7.30(d，2H)，5.06(dd，2H)，4.10(dd，1H)，3.48(s，2H)，2.23(d，6H)，1.69-1.5 1(m，3H)，0.94(d，3H)，0.93(d，3H).
e)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)芐氧基]羰基-L-亮氨酰基]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用N-[4-(N，N-二甲基氨基甲基)芐氧基羰基]-L-亮氨酸鋰代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.069g，18％)。MS(ESI)642.1(M+H)+。
實施例732-(N-苯甲酰基)-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例62(e)的方法，但用苯甲酰氯代替4-苯氧基苯磺酰氯制備為白色固體的目標化合物(61mg，31％)。MS(ESI)442.1(M+H)+。
實施例742-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酰基]]碳酰肼的制備a)3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酸甲酯于50℃將嗎啉(0.836g，9.6mmol)和3-(溴代甲基)苯甲酸甲酯在THF(5ml)和DMF(5ml)中的溶液攪拌3小時。使所述溶液分配于乙酸乙酯和水之間。連續用水、飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌有機層。然后干燥(MgSO4)、過濾并濃縮得到無色油(0.872g，3.72mmol)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.99(s，1H)，7.91(d，1H)，7.55(d，1H)，7.47(t，1H)，3.94(s，3H)，3.72(m，4H)，3.53(s，2H)，2.46(m，4H).
b)3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酸向實施例74(a)化合物(0.872g，3.72mmol)在THF(3ml)和水(3ml)的溶液中加入氫氧化鋰一水合物(0.171g，4.08mmol)。于室溫下攪拌3小時后，濃縮所述溶液。將殘留物再溶于水(5ml)中并加入3N HCl，將所述溶液冷凍干燥得到黃色固體(0.822g，3.72mmol)。MS(ESI)222.0(M+H)+。
c)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酰基]]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.056g，20％)。MS(ESI)541.0(M+H)+。
實施例752-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備a)3-芐氧基苯甲酸甲酯向NaH(0.395g，9.87mmol，60％在礦物油中)在DMF(20ml)的懸浮液中加入3-羥基苯甲酸甲酯(1.0g，6.58mmol)。于室溫下攪拌15分鐘后，加入芐基溴(1.1g，6.58mmol)。于室溫下攪拌3小時后，使所述溶液分配于乙酸乙酯和水之間。用水(2X75ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到灰白色固體(1.013g，4.2mmol)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.67(m，2H)，7.48-7.34(m.6H)，7.19(m，1H)，5.12(s，2H)，3.95(s，3H).
b)3-芐氧基苯甲酸向實施例75(a)化合物(0.400g，1.65mmol)在THF(2ml)和水(2ml)的溶液中加入氫氧化鋰一水合物(0.076g，1.82mmol)。攪拌回流5小時后，使所述溶液分配于乙酸乙酯和3N HCl之間。用鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到白色固體(0.355g，1.56mmol)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.58(m，2H)，7.36-7.24(m.6H)，7.10(m，1H)，5.04(s，2H).
c)2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，用3-芐氧基苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.062g，25％)。MS(ESI)548.1(M+H)+。
實施例762-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-[3-(N-N-二甲基氨基)-1-丙氧基]苯甲酰基]]碳酰肼的制備a)4-[3-(N，N-二甲基氨基)-1-丙氧基]苯甲酸甲酯于0℃向4-羥基苯甲酸甲酯(1.0g，6.58mmol)、3-二甲基氨基-1-丙醇(1.01g，9.87mmol)和三苯基膦(2.6g，9.87mmol)在THF(20ml)的溶液中滴加偶氮二羧酸二異丙酯(1.99g，9.87mmol)。于室溫下攪拌16小時后濃縮所述溶液并將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)得到油狀固體的目標化合物(1.25g，5.2mmol)。MS(ESI)238.1(M+H)+。
b)4-[3-(N，N-二甲基氨基)-1-丙氧基]苯甲酸根據實施例74(b)的方法，但用4-[3-(N，N-二甲基氨基)-1-丙氧基]苯甲酸甲酯代替3-(4-嗎啉代甲基)苯甲酸甲酯制備為棕色固體的目標化合物(1.17g，5.2mmol)。MS(ESI)；224.1(M+H)+。
c)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[4-[3-(N-N-二甲基氨基)-l-丙氧基]苯甲酰基]]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用4-[3-(N，N-二甲基氨基)-1-丙氧基]苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.060g，21％)。MS(ESI)543.1(M+H)+。
實施例772-[N-(2-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用2-芐氧基苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.056g，23％)。MS(ESI)548.1(M+H)+。
實施例782-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]]碳酰肼的制備a)4-吡啶基甲氧基苯甲酸甲酯根據實施例76(a)的方法，但用3-羥基苯甲酸甲酯代替4-羥基苯甲酸甲酯，用4-吡啶甲醇代替3-二甲基氨基-1-丙醇制備為黃色固體的目標化合物(0.599g，2.5mmol)。MS(ESI)244.1(M+H)+。
b)4-吡啶基甲氧基苯甲酸根據實施例75(b)的方法，但用4-吡啶基甲氧基苯甲酸甲酯代替3-芐氧基苯甲酸甲酯制備為黃色固體的目標化合物(0.386g，1.69mmol)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.54(d，2H)，7.64(m，2H)，7.57(m，2H)，7.40(m，1H)，7.26(m，1H)，5.24(s，2H).
c)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用4-吡啶基甲氧基苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.219g，67％)。MS(ESI)549.1(M+H)+。
實施例792-[N-(4-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例75(a)-(c)的方法，在步驟(a)中用4-羥基苯甲酸甲酯代替3-羥基苯甲酸甲酯制備為白色固體的目標化合物(0.160g，49％)。MS(ESI)548.1(M+H)+。
實施例802-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-5-甲氧基)苯甲酰基]碳酰肼的制備a)3-羥基-5-甲氧基苯甲酸甲酯將3，5-二羥基苯甲酸甲酯(2.0g，11.9mmol)、K2CO3(1.6g，11.9mmol)和碘甲烷(1.7g，11.9mmol)在丙酮(100ml)中的懸浮液攪拌回流。攪拌3小時后使所述混合物分配于乙酸乙酯和水之間。用鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾，濃縮。將殘留物經柱層析純化得到為白色固體的目標化合物(0.813g，4.4mmol)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.16(m，1H)，7.12(m，1H)，6.61(m，1H)，5.04(s，1H)，3.91(s，3H)3.82(s，3H).
b)3-芐氧基-5-甲氧基苯甲酸甲酯根據實施例80(a)的方法，但用3-羥基-5-甲氧基苯甲酸甲酯代替3，5-二羥基苯甲酸甲酯，用芐基溴代替碘甲烷制備為棕色油狀的目標化合物(1.2g，4.4mmol)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.45-7.31(m， 6H)，7.24(s，1H)，6.76(m，1H)，5.09(s，2H)，3.95(s，3H)，3.84(s，3H).
c)3-芐氧基-5-甲氧基苯甲酸根據實施例75(b)的方法，但用3-芐氧基-5-甲氧基苯甲酸甲酯代替3-芐氧基苯甲酸甲酯，制備為橙色固體的目標化合物(1.14g，4.4mmol)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.42-7.20(m，7H)，6.71(m，1H)，5.05(s，2H)，3.80(s，3H-).
d)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-5-甲氧基)苯甲酰基]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用3-芐氧基-5-甲氧基苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.201g，59％)。MS(ESI)578.0(M+H)+。
實施例812-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-4，5-二甲氧基)苯甲酰基]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用3-芐氧基-4，5-二甲氧基苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.155g，43％)。MS(ESI)607.9(M+H)+。
實施例822-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(3-芐氧基-5-乙氧基)苯甲酰基]碳酰肼的制備根據實施例80(a)-80(d)的方法，但在步驟(a)中用碘乙烷代替碘甲烷制備為白色固體的目標化合物(0.162g，46％)。MS(ESI)592.3(M+H)+。
實施例832-[N-(N-芐氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用N-芐氧基羰基甘氨酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.204g，65％)。MS(ESI)529.2(M+H)+。
實施例842-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-脯氨酰基)]碳酰肼的制備a)2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼根據實施例62(b)-62(d)的方法，但在步驟(b)中用3-芐氧基苯甲酸甲酯代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯，制備為灰白色固體的目標化合物(0.421g，67％)。MS(ESI)301.1(M+H)+。
b)2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-脯氨酰基)]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用N-芐氧基羰基-L-脯氨酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.219g，62％)。MS(ESI)532.0(M+H)+。
實施例852-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-苯基苯乙酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用4-聯苯基乙酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.224g，71％)。MS(ESI)554.2(M+Na)+。
實施例86(2’S)-2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-2-氨基丁酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用(S)-N-芐氧基羰基-2-氨基丁酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.244g，70％)。MS(ESI)520.3(M+H)+。
實施例872，2’-[N，N’-[雙-(4-苯基苯乙酰基)]]碳酰肼的制備向碳酰肼(0.200g，2.22mmol)在DMF(12ml)中的攪拌的溶液中加入4-聯苯基乙酸(1.04g，4.89mmol)、1-羥基苯并三唑(0.060g，0.444mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.937g，4.89mmol)。于室溫下攪拌16小時后，將溶液傾至150ml水中。過濾沉淀并用水(150ml)洗滌并在高真空干燥得到為白色固體的目標化合物(0.977g，92％)。MS(ESI)501.1(M+Na)+。
實施例88(2’RS)-2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[2-(4-苯基苯氧基)丙酰基]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用2-(4-苯基苯氧基)丙酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.183g，73％)。MS(ESI)562.3(M+H)+。
實施例892-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(4-甲基戊酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用4-甲基戊酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.079g，30％)。MS(ESI)399.3(M+H)+。
實施例90(2RS，2’RS)-2，2’-[N，N’-[雙-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]]碳酰肼的制備a)4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊-4-烯酸于0℃將正丁基鋰(2.1ml，5.22mmol，2.5M于己烷中)滴加至二異丙胺(0.537g，5.31mmol)在THF(5.2ml)的攪拌的溶液中。于0℃攪拌15分鐘后，將所述混合物冷至-78℃，滴加4-聯苯基乙酸(0.500g，2.36mmol)在THF(2ml)中的溶液。再一次溫熱至0℃并再冷卻至-78℃，一次性向所述混合物中加入3-溴代-2-甲基丙烯(0.485g，3.54mmol)。于-78℃攪拌1小時后，用2ml水使所述反應終止并濃縮。將殘留物重新溶于水中并用乙醚(100ml)萃取。酸化(3N HCl)水層，并用乙醚(3×100ml)萃取。合并有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到白色固體(0.449g，72％)。MS(ESI)265.3(M+H)-。
b)4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸向實施例90(a)化合物(0.449g，1.69mmol)在乙酸乙酯(25ml)中的攪拌的溶液中加入鈀炭(0.225g)。于氫氣環境下攪拌16小時，用硅藻土過濾所述混合物。將濾液濃縮得到灰白色固體(0.430g，95％)。MS(ESI)267.4(M+H)-。
c)(2RS，2’RS)-2，2’-[N，N’-[雙-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]]碳酰肼根據實施例87的方法，但用4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸代替4-聯苯基乙酸，得到目標化合物，經柱層析純化(硅膠，甲醇/二氯甲烷)得到白色固體(0.143g，33％)。MS(ESI)；591.3(M+H)+。
實施例91(2’RS)-2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.111g，42％)。MS(ESI)588.1(M+H)+。
實施例92(2’RS)-2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.195g，53％)。MS(ESI)551.1(M+H)+。
實施例932-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.341g，91％)。MS(ESI)562.2(M+H)+。
實施例942-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]]碳酰肼的制備a)N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯根據實施例72(c)的方法，但用2-吡啶基甲醇代替4-(N，N-二甲基氨基)芐醇制備為棕色油狀的目標化合物(8.06g，89％)。MS(ESI)281.2(M+H)+。
b)2-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]碳酰肼根據實施例62(b)-62(d)的方法，但在步驟(b)中用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯代替L-亮氨酸甲酯制備為淡黃色泡沫狀的目標化合物(0.598，69％)。MS(ESI)339.3(M+H)+。
c)2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用3-芐氧基苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.057g，33％)。MS(ESI)549.2(M+H)+。
實施例952-[N-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為黃色固體的目標化合物(0.088g，27％)。MS(ESI)550.2(M+H)+。
實施例96(2RS)-2-[N-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基]]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]]碳酰肼的制備根據實施例68(b)的方法，但用4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為黃色固體的目標化合物(0.056g，24％)。MS(ESI)589.4(M+H)+。
實施例972-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基]]碳酰肼的制備用HPLC(Sumipax OA-3100，4.6×150mm，80/20己烷/乙醇，1.0ml/min，保留時間＝5.9min)從實施例91的化合物中制備目標化合物。
實施例982-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[2-(4-苯基苯基)-4-甲基戊酰基]]碳酰肼的制備用HPLC(Sumipax OA-3100，4.6×150mm，80/20己烷/乙醇，1.0ml/min，保留時間＝8.1min)從實施例91的化合物中制備目標化合物。
實施例99
2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基丙基)氨基甲酰基]]碳酰肼的制備向碳酰氯(0.228ml，0.244mmol，12.5％于苯中的溶液)的攪拌的溶液中滴加N-(2-甲基丙基)-N-(苯基苯基)胺(0.050g，0.222mmol)和三乙胺(0.025g，0.244mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液。于室溫下攪拌15分鐘后，于室溫下，將該溶液滴加至實施例1(d)化合物(0.083g，0.244mmol)和三乙胺(0.025g，0.244mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液中。于室溫下攪拌48小時后，加入N-甲基嗎啉(0.022g，0.222mmol)和DMF(2ml)并于50℃加熱16小時。然后用乙酸乙酯(5ml)稀釋所述溶液并連續用水和飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌。干燥(MgSOx)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為黃色固體的目標化合物(0.023g，18％)。MS(ESI)589.4(M+H)+。
實施例1002-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備a)2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼根據實施例68(b)的方法，但用N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸，用2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼代替2-[N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)]碳酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.183g，69％)。MS(ESI)550.4(M+Na)+。
b)2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]-2’-[N’-(N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼將三氟乙酸(0.296g，2.5mmol)加至實施例100(a)化合物(0.100g，0.189mmol)在二氯甲烷(1ml)的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌15分鐘后，濃縮所述溶液，將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.055g，68％)。MS(ESI)428.4(M+H)+。
實施例1012-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例100(a)-100(b)的方法，但在步驟(a)中用2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼代替2-[N-(3-芐氧基苯甲酰基)]碳酰肼制備目標化合物。MS(ESI)465.5(M+H)+。
實施例102(1S)N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(4-苯氧基苯磺酰基)酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰胺將N-甲基嗎啉(3.68g，36.4mmol；4.0ml)和氯代甲酸異丁酯(2.37g，17.3mmol；2.25ml)加至N-芐氧基羰基-L-亮氨酸(4.6g，17.3mmol)在THF中的冷卻至-40℃的攪拌的溶液中。攪拌15分鐘后，向溶液中通入氨氣5分鐘。將所述溶液溫熱至室溫，蒸發，將殘留物溶于乙酸乙酯中，用0.1N HCl和飽和鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)，過濾并蒸發至干得到為白色固體的目標化合物(4.58g，100％)。
b)N-芐氧基羰基-L-亮氨酸硫代酰胺于室溫下將實施例102(a)化合物(4.58g，17.3mmol)和Lawesson’s試劑(4.21g，10.4mmol)在THF中的溶液攪拌16小時。將所述溶液濃縮并將殘留物經230-400目硅膠快速層析純化，用1∶3EtOAc/己烷洗脫得到為淡黃色固體的目標化合物(3.74g，77％)。
c)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷將實施例102(b)化合物(2.20g，7.83mmol)溶于丙酮(35ml)中，冷至-10℃，加入溴代丙酮酸乙酯(1.68g，8.62mmol，1.08ml)。攪拌1小時后，將所述溶液傾至二氯甲烷/水中，然后傾至飽和NaHCO3水溶液中。用二氯甲烷萃取含水層，用飽和鹽水洗滌合并的有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物溶于二氯甲烷中，冷至-20℃，加入吡啶(1.36g，17.2mmol，1.39ml)和三氟乙酸酐(1.81g，8.62mmol，1.22ml)。攪拌1小時后，用飽和NaHCO3水溶液和飽和鹽水洗滌該溶液，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經90g 230-400目硅膠快速層析純化，用1∶3EtOAc/己烷洗脫得到為淡黃色油狀物的目標化合物(2.36g，80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(s，1H)，7.38(m，5H)，5.42(s，3H)，5.23-5.07(m，3H)，4.42(q，2H)，2.01-1.62(m，3H)，1.41(t，3H)，0.99(d，6H)d)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷將實施例102(c)化合物(2.16g，5.73mmol)溶于乙醇(60ml)中，加入水合肼(2.87g，57.3mmol，2.8ml)并將所述溶液于75℃加熱1小時。冷卻所述溶液并蒸發至干得到為淡黃色泡沫狀的目標化合物(2.01g，97％)。1HNMR(400MHz.CDCl3)δ8.35(bs，1H)，8.03(s，1H)，7.37(m，5H)，5.29(d，1H)，5.14-5.09(m，3H)，4.07(bs，2H)，1.92-1.82(m，1H)，1.79-1.66(m，2H)，1.00(d，6H).
e)(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(4-苯氧基苯磺酰基)酰肼于室溫下向實施例102(d)化合物(275mg，0.76mmol)在二氯甲烷中的攪拌的溶液中加入吡啶(180mg，2.28mmol，0.2ml)和4-苯氧基苯磺酰氯(408mg，1.52mmol)。將所述反應物攪拌16小時并蒸發溶劑至殘留物，將殘留物經層析(硅膠，40％乙酸乙酯于己烷中)得到為白色固體的目標化合物(0.310g)。MS(ESI)595.6(M+H)+。
實施例103(1S)-N-[4-[1-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基溴代甲酮將1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(5.9g，40.11mmol)在乙醚(200ml)中的溶液冷至0℃。緩慢加入40％氫氧化鉀溶液并于0℃使重氮甲烷收集于乙醚溶液中30分鐘。
于-40℃將N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸(Bachem)(4.0g，10.58mmol)于四氫呋喃中攪拌。加入N-甲基嗎啉(1.07g，10.58mmol，1.16ml)和氯代甲酸異丁酯(1.45g，10.58mmol，1.38ml)。于-40℃將所述混合物攪拌15分鐘，并過濾至冷的燒瓶中以去除沉淀的鹽。向過濾的溶液中加入預先制備的過量的重氮甲烷溶液并將混合物置于0℃16小時。于0℃下加入過量的30％HBr的乙酸溶液，然后連續用1.0N檸檬酸、飽和碳酸氫鈉水溶液(小心)和鹽水洗滌。將所述溶液經硫酸鈉干燥，過濾并蒸發得到為白色固體的目標混合物(4.10g)。1H NMR(400MHz.CDCl3)δ7.34(m，5H)，6.51(d，1H)，5.15(d，1H)，5.10(s，2H)，4.78(m，1H)，4.20(m，1H)，4.04(dd，2H)，1.63(m，6H)，0.93(m，12H).
b)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺將實施例103(a)化合物(2.0g，4.4mmol)和硫代草酸乙酯(0.59g，4.4mmol)于乙醇中回流4小時。蒸發溶劑并將殘留物層析(硅膠，2.5％甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(1.46g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32(s，1H)，7.21(m，5H)，6.40(d，1H)，5.13(dd，1H)，5.02(s，2H)，4.41(q，2H)，4.06(m，1H)，1.71(m，2H)，1.47(m，4H)，1.33(t，3H)，0.73(m，12H).
c)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺根據實施例102(d)的方法，但用(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷制備目標化合物。MS(ESI)476.3(M+H)+。
d)(1S)-N-[4-[1-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼將N-芐氧基羰基-L-亮氨酸(111mg，0.42mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(80mg，0.42mmol)和1-羥基苯并三唑(13mg，0.096mmol)加至實施例103(c)化合物(180mg，0.38mmol)在二甲基甲酰胺的攪拌的溶液中。于室溫下將所述反應混合物攪拌16小時，過濾并用水洗滌兩次。蒸發溶劑得到為白色固體的目標化合物(0.207g)。MS(ESI)723.9(M+H)+。
實施例104(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(4-苯基苯基乙酰基)酰肼的制備根據實施例103(d)的方法，但用(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，及用4-聯苯基乙酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)557.2(M+H)+。
實施例105(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]酰肼的制備a)3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酸甲酯于0℃將偶氮二羧酸二異丙酯(2.0g，9.87mmol)滴加至3-羥基苯甲酸甲酯(1.0g，6.58mmol)、4-吡啶基甲醇(1.1g，9.87mmol)和三苯基膦(2.6g，9.87mmol)在THF(25ml)中的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌16小時后，濃縮所述溶液并經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.599g，37％)。MS(ESI)244.1(M+H)+。
b)3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酸將氫氧化鋰一水合物(0.113g，2.71mmol)加至實施例105(a)化合物(0.599g，2.47mmol)在THF/H2O(1∶1，10ml)中的攪拌的溶液中。攪拌并回流3.5小時后，加入1.1eq 1N HCl并將所述混合物傾至水中。用乙酸乙酯(2×100ml)萃取混合物。合并有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到為黃色固體的目標化合物(0.386g，68％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.54(d，2H)，7.64(m，2H)，7.57(m，2H)，7.40(m，1H)，7.26(m，1H)，5.24(s，2H).
c)(1S)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)574.2(M+H)+。
實施例106N-[2-(2-氯代苯氧基甲基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氫基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)α-異氰酸根合-L-亮氨酸甲酯將L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(25g，0.14mol)溶于二氯甲烷(450ml)中，冷卻至0℃，加入吡啶(43.5g，0.55mol，44.5ml)，然后緩慢加入1.93M碳酰氯在甲苯中的溶液(0.18mol，92.7ml)。于0℃攪拌2小時后，將混合物傾至0.5N HCl(1400ml)和冰(900ml)中。用0.5N HCl(1400ml)和冰(900ml)洗滌有機層。用二氯甲烷(450ml)萃取水層，用飽和鹽水(1400ml)和冰水(900ml)洗滌合并的有機層，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物蒸餾(56-58℃；0.78mmHg)得到無色液體的目標化合物(20.4g，86％)。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ4.04(dd，1H)，3.82(s，3H)，1.92-1.72(m，1H)，1.69-1.62(m，2H)，0.96(d，3H)，0.94(d，3H).
b)N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯將實施例106(a)化合物(5.10g，29.8mmol)和4-吡啶基甲醇(3.25g，29.8mmol)在甲苯(30ml)中的溶液加熱回流24小時。濃縮所述溶液，將殘留物經250g 230-400目硅膠快速層析純化，用3∶1乙酸乙酯/己烷洗脫得到目標化合物(7.86g，94％)。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.59(d，2H)，7.24(d，2H)，5.33(d，1H)，5.13(s，3H)，4.40(dt，1H)，3.75(s，3H)，1.81-1.51(m，3H)，0.96(d，3H)，0.95(d，3H).
c)N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸向實施例106(b)化合物(1.98g，7.06mmol)在THF(7ml)中的攪拌的溶液中加入7ml水，接著加入LiOH.H2O(325mg，7.76mmol)。將所述混合物攪拌30分鐘并濃縮。將殘留物再溶于水(10ml)中并加入3NHCl(2.6ml)。冷凍干燥所述溶液得到白色固體(2.015g，6.44mmol)。MS(ESI)267.2(M+H)+。
d)N-[2-(2-氯代苯氧基甲基)噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例102(d)的方法，但用2-(2-氯代苯氧基甲基)噻唑-4-羧酸乙酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷制備目標化合物。MS(ESI)284.1(M+H)+。
e)N-[2-(2-氯代苯氧基甲基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-(2-氯代苯氧基甲基)噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)532.1(M+H)+。
實施例107N-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-[4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備
a)N-[2-[4-(1，2，3-噻二唑-4-基)]噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例102(d)的方法，但用2-[4-(1，2，3-噻二唑-4-基)]噻唑-4-羧酸乙酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)304.1(M+H)+。
b)N-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-[4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯基]噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-[4-(1，2，3-噻二唑-4-基)]噻唑-4基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)552.1(M+H)+。
實施例108N-[2-[3-(4-氯代苯基磺酰基甲基)噻吩-2-基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)N-[2-[3-(4-氯代苯磺酰基甲基)噻吩-2-基]噻唑-4-羰基]酰肼根據實施例102(d)的方法，但用2-[3-(4-氯代苯磺酰基甲基)噻吩-2-基]噻唑-4-羧酸酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)414.1(M+H)+。
b)N-[2-[3-(4-氯代苯基磺酰基甲基)噻吩-2-基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-[3-(4-氯代苯基磺酰基甲基)噻吩-2-基]噻唑-4-羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)664.0(M+H)+。
實施例109
(1S，2’RS)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[2’-(4-苯基苯乙酰基)-4-甲基戊酰基]酰肼的制備a)4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊-4-烯酸于0℃將正丁基鋰(2.1ml，5.22mmol，2.5M于己烷中)溶液滴加至二異丙基胺(0.537g，5.31mmol)在THF(5.2ml)的攪拌的溶液中。于0℃攪拌15分鐘后，將所述混合物冷至-78℃，滴加4-聯苯基乙酸(0.500g，2.36mmol)在THF(2ml)中的溶液。再一次溫熱至0℃，冷卻至-78℃，一次性加入3-溴代-2-甲基丙烷(0.485g，3.54mmol)至該混合物中。于-78℃攪拌1小時后，用2ml水使反應終止然后濃縮。將殘留物再溶于水中并用乙醚(100ml)萃取。酸化(3N HCl)水層并用乙醚(3×100ml)萃取。合并有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到白色固體(0.449g，72％)。MS(ESI)265.3(M+H)-。
b)4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸向實施例109(a)化合物(0.449g，1.69mmol)在乙酸乙酯(25ml)中的攪拌的溶液中加入鈀炭(0.225g)。于氫氣環境下攪拌16小時，通過硅藻土過濾所述混合物。濃縮濾液得到灰白色固體(0.430g，95％)。MS(ESI)267.4(M+H)-。
c)(1S，2’RS)-N-[2-[(1-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[2’-(4-苯基苯基乙酰基)-4-甲基戊酰基]酰肼根據實施例101(d)的方法，但用(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)613.2(M+H)+。
實施例110N-[2-(3-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)3-芐氧基苯甲酸甲酯將3-羥基苯甲酸甲酯(1.0g，6.58mmol)加至NaH(0.395g，9.87mmol，60％于礦物油中)在DMF(20ml)的懸浮液中。于室溫下攪拌15分鐘后，加入芐基溴(1.1g，6.58mmol)。于室溫下攪拌3小時，使所述溶液分配于乙酸乙酯和水之間。用水(2×75ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機層，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到灰白色固體(1.013g，4.2mmol)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.67(m，2H)，7.48-7.34(m.6H)，7.19(m，1H)，5.12(s，2H)，3.95(s，3H).
b)3-芐氧基苯甲酰胺于5℃向氯化銨(1.070g，0.02mmol)在20ml甲苯的懸浮液中緩慢加入2M三甲基鋁的甲苯溶液(10ml)中。完全加入后，將所述反應混合物溫熱至室溫并攪拌2小時至氣體不再產生為止。
將0.67M MeAlClNH2(11ml，7.49mmol)在甲苯中的溶液加至實施例110(a)化合物(605mg，2.49mmol)的攪拌的甲苯溶液中。使所述反應混合物回流攪拌過夜。用5％HCl使反應終止，分離有機層，用乙酸乙酯將水層萃取3次。合并有機層，經MgSO4干燥，過濾并濃縮得到為白色固體的目標化合物(409mg，72％)。MS(ESI)228.1(M+H)+。
c)N-[2-(3-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例102(b)-102(d)的方法，但在步驟(b)中用3-芐氧基苯甲酰胺代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酰胺制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)326.2(M+H)+。
d)N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸根據實施例106(a)-106(c)的方法，但在步驟(b)中用2-吡啶基甲醇代替4-吡啶基甲醇制備目標化合物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.50(d，1H)，7.86(dt，1H)，7.51(d，1H)，7.36(dd，1H)，5.20(d，1H)，5.16(d，1H)，4.19(t，1H)，1.78-1.72(m，1H)，1.62(t，2H)，0.97(d，3H)，0.94(d，3H).
e)N-[2-(3-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-(3-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。(106mg，0.184mmol)。MS(ESI)574.2(M+H)+。
實施例111(1RS)-N-[2-[1-(4-苯基苯基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)N-[2-[1-(4-苯基苯基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例102(a)-102(d)的方法，但在步驟(a)中用4-甲基-2-(4-苯基苯基)戊酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)366.3(M+H)+。
b)(1RS)-N-[2-[1-(4-苯基苯基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-[1-(4-苯基苯基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)614.3(M+H)+。
實施例112N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)2-氨基噻唑-4-羧酸乙酯氫溴酸鹽將溴代丙酮酸乙酯(15.4g，78.8mmol)加至硫脲(6.0g，78.8mmol)在乙醇(80ml)中的攪拌的懸浮液中。于45℃將產生的溶液加熱23小時。將所述溶液于0℃冷卻24小時，過濾收集結晶并用冷的乙醇洗滌得到目標化合物(15.8g，79％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.70(s，1H)，4.41(q，2H)，1.38(t，3H).
b)2-溴代噻唑-4-羧酸乙酯將亞硝酸鈉(3.44g，49.8mmol)在水(6ml)中的溶液滴加至實施例112(a)化合物(12.15g，48mmol)在16％HBr水溶液(150ml)中的攪拌的溶液中。攪拌35分鐘后，加入溴化銅(I)(7.83g，54.6mmol)和16％HBr水溶液(60ml)，將所述混合物于70℃加熱1小時。過濾混合物，用NaCl飽和濾液，然后用乙酸乙酯(2×170ml)萃取。干燥(MgSO4)合并的萃取物，過濾并蒸發至干。將殘留物與在第一次過濾中收集的固體合并，在乙醇(500ml)中加熱回流5分鐘，然后過濾。向濾液中加入1.5ml48％HBr水溶液，將所述溶液加熱回流16小時，然后濃縮。使殘留物分配于NaHCO3飽和水溶液和乙酸乙酯之間。用飽和鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，用活性炭脫色，過濾并濃縮得到為淡黃色固體的目標化合物(7.46g，75％)。MS(ESI)236.0(M+H)+。
c)2-芐氧基溴代苯將K2CO3(12.0g，86.7mmol)加至2-溴代苯酚(10.0g，57.8mmol)和芐基溴(9.9g，57.8mmol)在丙酮(150ml)中的攪拌的溶液中。攪拌回流4小時后，使所述混合物分配于乙酸乙酯和水之間。用鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析純化(硅膠，乙酸乙酯/己烷)得到為無色油狀的目標化合物(15.2g，57.8mmol)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.62(m，1H)，7.54(m，2H)，7.45(m，2H)，7.37(m，1H)，7.28(m，1H)，6.98(m，1H)，6.91(m，1H)，5.17(s，2H).
d)2-芐氧基苯基硼酸于-78℃向實施例112(c)化合物(15.2g，57.8mmol)在THF(100ml)的攪拌的溶液中滴加n-BuLi(23.1ml，2.5M于己烷中，57.8mmol)。于-78℃將所述混合物攪拌25分鐘并于-78℃通過套管加入硼酸三異丙酯(54.4g，289mmol)在THF(100ml)中的攪拌溶液中。溫熱至室溫并攪拌3小時后，將所述混合物傾至3N HCl(100ml)中并用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。合并有機層，連續用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析純化(硅膠，乙酸乙酯/己烷)得到為淡黃色固體的目標化合物(6.9g，30.3mmol)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(d，1H)，7.42(m，6H)，7.07(t，1H)，7.02(d，1H)，6.05(s，2H)，5.16(s，2H).
e)2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯向實施例112(b)化合物(4.0g，16.9mmol)、實施例72(d)化合物(4.29g，18.8mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.65g，0.57mmol)在二甲氧基乙烷(60ml)中的攪拌溶液中加入氟化銫(8.58g，56.5mmol)并將所述混合物于85℃加熱16小時。加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.65g，057mmol)并于85℃繼續加熱5小時。用水(60ml)稀釋所述混合物并用乙酸乙酯(2×120ml)萃取。用飽和的NaHCO3水溶液和飽和鹽水洗滌合并的萃取物，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經180g 230-400目硅膠快速層析純化，用15％乙酸乙酯(于己烷中)洗脫，得到為白色固體的目標混合物(3.22g，56％)。MS(ESI)340.3(M+H)+。
f)2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基碳酰肼根據實施例102(d)的方法，但用2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)326.2(M+H)+。
g)N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基碳酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基苯基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)574.3(M+H)+。
實施例113N-[2-[N-甲基-N-(4-苯基苯基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)N-(4-苯基苯基)-2-甲基丙酰胺向4-氨基聯苯(9.53g，56.3mmol)和三乙胺(5.70g，56.3mmol，7.85ml)在二氯甲烷(60ml)，冷至0℃的攪拌的溶液中緩慢加入異丁酰氯(6.0g，56.3mmol，5.90ml)。于0℃攪拌1小時后，用二氯甲烷(120ml)稀釋所述混合物并用1N NaOH和飽和鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物用乙醚洗滌并干燥得到淡黃色結晶固體的目標化合物(9.83g，73％)。1HNMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.58(d，2H)，7.50(m，4H)，7.40-7.25(m，3H)，2.55-2.49(m，1H)，1.18(d，6H).
b)N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)胺用10分鐘將實施例73(a)化合物(9.35g，39mmol)在THF(170ml)中的溶液緩慢加至氫化鋰鋁(58.6mmol)在THF(58.6mmol)中的冷至0℃的攪拌的溶液中。完全加入后，去除冰浴并將所述溶液于55℃加熱30分鐘。將所述混合物冷至0℃，緩慢加入水(2.22ml)，加著加入15％NaOH水溶液(2.22ml)和水(6.67ml)。過濾去除沉淀并用乙醚洗滌4次。將濾液蒸發至干得到為淡黃色固體的目標化合物(8.34g，97％)。MS(ESI)；226.2(M+H)+。
c)N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)硫脲將實施例73(b)化合物(540.7mg，2.0mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液滴加至二氯硫化碳(98.9mg，2.6mmol，198ul)在二氯甲烷(6.5ml)中的冷卻至0℃的攪拌的溶液中。攪拌2小時后加入氨飽和的甲醇(20ml)并將所述溶液于室溫下攪拌2小時。濃縮所述溶液并使殘留物分配于乙酸乙酯和1N HCl之間。用1N HCl洗滌兩次有機層，然后用飽和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經10g230-400目的硅膠快速層析純化，用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脫得到為淡黃色固體的目標化合物(470mg，83％)。MS(ESI)285.3(M+H)+。
d)2-[N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-羧酸乙酯將實施例113(c)化合物(184.6mg，0.65mmol)和溴代丙酮酸乙酯(126.6mg，0.65mmol，81.5ul)在乙醇(2.5ml)中的溶液加熱回流5分鐘，然后濃縮。將殘留物分配于乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液之間。用乙酸乙酯萃取有機層并用飽和鹽水洗滌合并的有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物通過230-400目硅膠塞柱，用12％乙酸乙酯(于己烷中)洗脫得到為淡黃色油狀的目標化合物(230mg，93％)。MS(ESI)381.4(M+H)+。
e)N-[2-[N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例102(d)的方法，但用2-[N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-羧酸乙酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)367.3(M+H)+。
f)N-[2-[N-甲基-N-(4-苯基苯基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-[N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)615.3(M+H)+。
實施例114
N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(4-苯基芐基)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備a)N-[2-(4-苯基芐基)噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例102(a)-102(d)的方法，但在步驟(a)中用4-聯苯基乙酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)310.3(M+H)+。
b)N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(4-苯基芐基)噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-(4-苯基芐基)噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺制備為白色固體的目標化合物(20mg，0.035mmol)。MS(ESI)557.4(M+H)+。
實施例115N-[2-(4-苯基苯基芐基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-(4-苯基芐基)噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺，用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為黃色固體的目標化合物(30mg，0.053mmol)。MS(ESI)558.2(M+H)+。
實施例116N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備a)N-[2-[N-苯基-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例113(a)-113(e)的方法，但在步驟(a)中用苯胺代替4-氨基聯苯制備為桔紅色固體的目標化合物(276mg，0.950mmol)。MS(ESI)291.3(M+H)+。
b)N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼根據實施例103(d)的方法，但用N-[2-[N-苯基N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺制備為白色固體的目標化合物(92mg，0.171mmol)。MS(ESI)560.3(M+Na)+。
實施例117N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例113(a)-113(f)的方法，但在步驟(a)中用苯胺代替4-氨基聯苯制備為黃色固體的目標化合物(50mg，0.092mmol)。MS(ESI)539.4(M+H)+。
實施例118N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(g)中用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(93.8mg，53％)。MS(ESI)574.3(M+H)+。
實施例119N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(g)中用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(149.7mg，85％)。MS(ESI)574.4(M+H)+。
實施例120N-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(g)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(153.5mg，85％)。MS(ESI)609.3(M+H)+。
實施例121N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例113(a)-113(f)的方法，但在步驟(a)中用苯胺代替4-氨基聯苯，在步驟(f)中用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(40mg)。MS(ESI)539.4(M+H)+。
實施例122N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例113(a)-113(f)的方法，但在步驟(a)中用苯胺代替4-氨基聯苯，在步驟(f)中用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(42mg)。MS(ESI)539.4(M+H)+。
實施例123N-[2-(2-甲氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)2-三甲基甲錫烷基苯甲醚于-78℃將2-溴代苯甲醚(1.0g，5.35mmol)在乙醚(2ml)中的溶液滴加至n-BuLi(2.6ml，2.5M于己烷中，6.42mmol)在乙醚(2.5ml)的攪拌的溶液中。于-78℃攪拌1小時后，滴加氯化三甲基錫(6.4ml，1.0M在THF中，6.42mmol)。將所述混合物再攪拌12小時同時緩慢溫熱至室溫。然后用飽和NaHCO3水溶液洗滌混合物。用乙醚(1×50ml)萃取水層并合并有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，己烷)純化得到為無色油狀的目標化合物(1.11g，76％)。1HNMR(400MH.z，CDCl3)δ7.47(d，1H)，7.40(t，1H)，7.05(t，1H)，6.90(d，1H)，3.36(s，3H)，0.34(s，9H).
b)2-(2-甲氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯將實施例112(b)化合物(0.250g，1.06mmol)、實施例83(a)化合物(0.287g，1.06mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.037g，0.0318mmol)在甲苯(2ml)中的混合物攪拌回流16小時。用乙酸乙酯稀釋所述混合物并用水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.081g，29％)。1HNMR(400MHz.CDCl3)δ8.54(d，1H)，8.22(s，1H)，7.45(t，1H)，7.11(t，1H)，7.05(d，1H)，4.48(q，2H)，4.04(s，3H)，1.46(t，3H).
c)N-[2-(2-甲氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例112(f)-112(g)的方法，但在步驟(f)中用2-(2-甲氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯代替2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)498.3(M+H)+。
上述完全公開怎樣制備和應用本發明的化合物。然而，本發明不受上述特定實施方案的限制，而是包括下述權利要求書范圍的所有修改。參照在此引入的所有雜志、專利和其他公開物包括了本領域的現狀并在此引入作參考。
實施例124(2S，1’S)-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基-2-(2-苯基芐氧基羰基)氨基戊酰胺的制備a)(2S，1’S)-2-(叔丁氧基羰基)氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺于室溫下將實施例8(c)化合物(1.2g，3.5mmol)在無水TFA(2.96g，26.0mmol)中攪拌15分鐘。將所述溶液真空濃縮并重新溶于DMF(25ml)中。向攪拌的溶液中加入三乙胺(0.779g，7.7mmol)、BOC-Leu-OH(0.972g，3.9mmol)、1-羥基苯并三唑(0.095g，0.7mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.750g，3.9mmol)。于室溫下攪拌16小時后，用乙酸乙酯稀釋所述溶液并連續用水(2×100ml)、NaHCO3和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(1.15g，72％)。MS(ESI)456.2(M+H)+。
b)(2S，1’S)-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基-2-(2-苯基芐氧基羰基)氨基戊酰胺于0℃將2-聯苯基甲醇(0.486g，2.64mmol)和二異丙基乙胺(0.375g，2.9mmol)加至碳酰氯(1.5ml，2.9mmol，1.93M于甲苯中)的攪拌的溶液中。將所述溶液于0℃攪拌30分鐘。在另一個反應容器中，將溶于TFA(2.0ml)的實施例124(a)化合物(0.150g，0.330mmol)于室溫下攪拌10分鐘后濃縮并重新溶于DMF(3ml)中。將該溶液加至2-聯苯基甲醇溶液中并接著加入二異丙基乙胺(0.213g，1.65mmol)。于室溫下攪拌1小時后，用乙酸乙酯稀釋并連續用水和鹽水洗滌該溶液。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.138g，74％)。MS(ESI)566.3(M+H)+。
實施例125(2S，1’S)-2-[(2-芐基)芐氧基羰基)]氨基-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備根據實施例124(b)的方法，但用2-芐基芐醇代替2-聯苯基甲醇制備為白色固體的目標化合物(0.123g，64％)。MS(ESI)580.0(M+H)+。
實施例126(2S，1’S)-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基-2-[(2-萘基甲氧基羰基)]氨基戊酰胺的制備根據實施例124(b)的方法，但用2-萘基甲醇代替2-聯苯基甲醇制備為白色固體的目標化合物(0.132g，74％)。MS(ESI)540.1(M+H)+。
實施例127
(2S，1’S)-N-[1’-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3’-甲基丁基]-4-甲基-2-[(3-苯氧基芐氧基羰基)]氨基戊酰胺的制備根據實施例124(b)的方法，但用3-苯氧基芐醇代替聯苯基甲醇制備為白色固體的目標化合物(0.107g，56％)。MS(ESI)581.9(M+H)+。
實施例128(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’[2-(2-芐基胍基)噻唑-4-基]-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺的制備a)S-甲基二硫代縮二脲氫碘酸鹽向二硫代縮二脲(5.0g，37mmol)在THF(75ml)的攪拌的溶液中加入碘甲烷(13.1g，92.5mmol，5.76ml)。于室溫下攪拌22小時后，用150ml甲苯稀釋所述溶液并于0℃放置3小時。過濾收集結晶并用冷的2∶1甲苯/THF洗滌，然后真空干燥得到為白色固體的目標化合物(8.7g，85％)。MS(ESI)149.9(M+H)+。
b)3-芐基胍基硫脲將實施例128(b)化合物(4.35g，15.7mmol)溶于異丙醇(80ml)中并加入芐胺(1.77g，16.5mmol，1.8ml)，將所述混合物加熱并回流16小時。過濾熱的溶液并將濾液冷至0℃。5小時后，過濾收集固體并用冷的異丙醇洗滌2次，然后真空干燥得到為白色固體的目標化合物(2.59g，61％)。MS(ESI)209.2(M+H)+。
c)(2S，1’S)-2-(芐氧基羰基)氨基-N-[1’[2-(2-芐基胍基)噻唑-4-基]-3’-甲基丁基]-4-甲基戊酰胺根據實施例(b)的方法，但用3-芐基胍基硫脲代替硫代草酸乙酯制備為白色固體的目標化合物(102mg，79％)。MS(ESI)565.1(M+H)+。
實施例129(1S)-N-[4-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N-甲基-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例26(a)-26(d)的方法，但在步驟(c)中用甲基肼代替肼制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)624.1(M+H)+。
實施例130(1S)-N-[4-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-甲基酰肼的制備a)N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N-甲基酰肼根據實施例26(c)的方法，但用N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷，用甲基肼代替肼制備目標化合物。
b)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷將實施例26(c)化合物(0.57g，1.5mmol)溶于四氫呋喃中并用過量的1.0N氫氧化鈉處理。將所述混合物攪拌4小時，用1.0N檸檬酸使反應終止。蒸發溶劑并用二氯甲烷將水層萃取3次。合并有機層并蒸發得到白色泡沫狀酸(0.55g，100％)。
c)(1S)-N-[4-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-2-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-甲基酰肼根據實施例28(e)的方法，但用N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N-甲酰肼代替(1S)-1-(芐氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷，用(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)624.2(M+H)+。
實施例131N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-L-丙氨酰基酰肼的制備根據實施例27(a)-27(c)的方法，但在步驟(a)中用L-丙氨酸甲酯代替L-亮氨酸甲酯制備為白色固體的目標化合物(225mg，42％)。MS(ESI)598.1(M+H)+。
實施例132N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)甘氨酰基酰肼的制備根據實施例27(a)-27(c)的方法，但在步驟(a)中用甘氨酸甲酯代替L-亮氨酸甲酯制備為白色固體的目標化合物(307mg，42％)。MS(ESI)584.1(M+H)+。
實施例133(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]-1，3，4-三唑-5-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備a)ethyl oxalamidrazonate將水合肼(1.13g，22.6mmol，1.09ml)加至硫代草酸乙酯(3.0g，22.6mmol)在乙醇(50ml)的溶液中。將所述混合物于室溫下攪拌3小時，同時通入濃的氫氧化鈉溶液。將所述溶液放置16小時并蒸發乙醇。將殘留物在30％二氯甲烷(于石油醚中)沸騰，過濾，重結晶得到棕色固體的所需化合物(0.264g，9％)。
b)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基-1，3，4-三唑-5-基)-3-甲基丁烷于-5℃在THF中攪拌N-芐氧基羰基-L-亮氨酸(0.535g，2.0mmol)溶液。加入氯代甲酸乙酯(0.23ml，2.4mmol)和三乙胺(0.25g，2.4mmol，0.34ml)。然后加入實施例10(a)化合物(0.264g，2.0mmol)并將所述混合物于室溫下攪拌過夜。蒸發溶劑并將殘留物溶于二甲苯中，用Dean-Stark裝置加熱至200℃。4小時后，終止加熱并將所述溶液蒸發至殘留物，將其經層析(硅膠，40％乙酸乙酯于己烷中)得到為白色固體的目標化合物(0.498g，69％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(m，5H)，5.71(d，1H)，5.04(s，2H)，4.99(dd，1H)，4.36(q，2H)，1.8(m，2H)，1.59(m，1H)，1.31(t，3H)，0.83(dd，6H).
c)(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-肼基羰基-1，3，4-三唑-5-基)-3-甲基丁烷根據實施例26(c)-26(d)的方法，但在步驟(c)中用(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基-1，3，4-三唑-5-基)-3-甲基丁烷代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-羰基乙氧基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷制備目標化合物。MS(ESI)594.5(M+H)+。
實施例134(1S)-N-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-乙酰基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(95mg，67％)。MS(ESI)518.0(M+H)+。
實施例135(1S)-N-(N-芐氧基羰基-L-丙氨酰基)-N’-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-芐氧基羰基-L-丙氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(129mg，82％)。MS(ESI)568.1(M+H)+。
實施例136(1S)-N-(N-乙酰基-L-丙氨酰基)-N’-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-乙酰基-L-丙氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(74mg，57％)。MS(ESI)498.1(M+Na)+。
實施例137(1S)-N-(N-乙酰基)-N’-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用乙酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(87mg，78％)。MS(ESI)405.1(M+H)+。
實施例138(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(121mg，72％)。MS(ESI)611.0(M+H)+。
實施例139(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(125mg，65％)。MS(ESI)611.2(M+H)+。
實施例140(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(78mg，50％)。MS(ESI)624.3(M+H)+。
實施例141(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(120mg，72％)。MS(ESI)625.3(M+H)+。
實施例142(1’S)-N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(95mg，74％)。MS(ESI)624.3(M+H)+。
實施例143(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基]羰基-N’-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸，制備為白色固體的目標化合物(129mg，59％)。MS(ESI)683.3(M+H)+。
實施例144(1S)-N-[2-[1-(N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)(1S)-N-[2-[1-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-(4-吡啶基甲氧基羰基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物。MS(ESI)591.4(M+H)+。
b)(1S)-N-[2-[1-(N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼向實施例21(a)化合物在二氯甲烷(10ml)的溶液中加入三氟乙酸(3ml)。于室溫下攪拌1小時后，濃縮所述溶液，將殘留物再溶于二氯甲烷中，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，經MgSO4干燥并濃縮得到為白色固體的目標化合物(259mg，68％兩步)。MS(ESI)491.4(M+H)+。
實施例145(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(293mg，74％)。MS(ESI)576.4(M+H)+。
實施例146(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(120mg，87％)。MS(ESI)590.3(M+H)+。
實施例147(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例144(b)的方法，但用(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼代替(1S)-N-[2-[1-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼制備為白色固體的目標化合物(40mg，80％)。MS(ESI)490.3(M+H)+。
實施例148(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例144(b)的方法，但用(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼代替(1S)-N-[2-[1-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼制備為白色固體的目標化合物(39mg，100％)。MS(ESI)476.4(M+H)+。
實施例149(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-咪唑基乙酰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例28(e)的方法，但用(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼代替(1S)-1-(芐氧基羰基)氨基-1-(4-羰基乙氧基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷，用4-咪唑基乙酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(50mg，47％)。MS(ESI)584.4(M+H)+。
實施例150(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼的制備a)N-甲基-L-亮氨酸甲酯將N-甲基-L-亮氨酸(1.3g，8.95mmol)溶于4M HCl、1，4-二氧六環(10ml)和甲醇(10ml)中。于室溫下將所述溶液攪拌過夜，然后濃縮得到為白色固體的目標化合物(100％)。MS(ESI)160.0(M+H)+。
b)N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯向碳酰氯在甲苯中(5.63ml，6.025mmol)的二氯甲烷(10ml)的冷至0℃的攪拌的溶液中滴加N-甲基-L-亮氨酸甲酯(673mg，4.63mmol)和吡啶(1.10g，0.97ml，13.89mmol)在二氯甲烷(4ml)中的溶液。將該溶液于0℃攪拌2小時。然后加入3-吡啶基甲醇(0.56g，5.09mmol，0.49ml)溶液并將所述反應混合物于室溫下攪拌5小時。濃縮所述溶液，并重新溶于乙酸乙酯中，用水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將粗產物在經硅膠柱層析(6％甲醇于二氯甲烷中)純化得到為黃色油狀的目標化合物(88mg，7％)。MS(ESI)295.4(M+H)+。
c)N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸根據實施例130(b)的方法，但用N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷制備為桔黃色固體的目標化合物(84mg，100％)。MS(ESI)281.3(M+H)+。
d)(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(55mg，38％)。MS(ESI)639.4(M+H)+。
實施例151(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(31mg，34％)。MS(ESI)625.4(M+H)+。
實施例152(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(e)中用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(63mg，42％)。MS(ESI)611.5(M+H)+。
實施例153(1’S)-N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-(1-芐氧基羰基)-N’-[2-[1-(N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-甲基酰肼的制備根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸在步驟(e)中用甲肼代替肼制備為白色固體的目標化合物(80mg，70％)。MS(ESI)660.4(M+Na)+。
實施例154(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)N-甲基-N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯將N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯(490mg，1.75mmol)溶于THF(7.0ml)中并加入甲基碘(0.435ml，6.99mmol)。在防潮的燒瓶中將所述反應混合物冷卻至0℃。小心加入氫化鈉分散液(236mg，2.62mmol)并將懸浮液于室溫下攪拌5小時。滴加乙酸乙酯，接著滴加水。真空濃縮所述溶液，使油狀殘留物分配于乙醚和水之間。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機層，用檸檬酸將合并的水層萃取物酸化至pH3。用乙酸乙酯萃取產物，用水、5％硫代硫酸鈉水溶液和水洗滌萃取物，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將粗產物在硅膠柱層析上純化(乙酸乙酯/己烷3∶1)得到黃色油狀物(235mg，46％)。MS(ESI)295.4(M+H)+。
b)N-甲基-N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸根據實施例130(b)的方法，但用N-甲基-N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯代替(1S)-1-芐氧基羰基氨基-1-(2-肼基羰基噻唑-4-基)-3-甲基丁烷制備為白色固體的目標化合物(223mg，100％)。MS(ESI)281.3(M+H)+。
c)(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-甲基-N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(50mg，44％)。MS(ESI)639.5(M+H)+。
實施例155(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)L-亮氨酸叔丁酯異氰酸鹽將L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽(10.185g，45.5mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，冷至0℃并加入吡啶(12.7ml，182.0mmol)，然后加入碳酰氯的苯溶液(47ml，59.1mmol)。將所述溶液于0℃攪拌2小時。將所述反應混合物用300ml冷的0.5M HCl水溶液洗滌兩次。用100ml二氯甲烷萃取水層。用飽和NaCl水溶液和碎冰的混合物洗滌合并的有機層，干燥MgSO4，過濾并濃縮得到黃色液狀的異氰酸鹽(5.37g，55％)。
b)N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸叔丁酯將實施例155(a)化合物(3.05g，14.32mmol)和4-吡啶基甲醇(1.56g，14.32mmol)溶于甲苯(80ml)中并加熱回流過夜。將所述溶液真空濃縮，將殘留物經硅膠柱層析(乙酸乙酯/己烷3∶1)純化得到無色油狀的目標化合物(2.945g，64％)。MS(ESI)323.4(M+H)+。
c)N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸叔丁酯根據實施例154(a)的方法，但用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸叔丁酯代替N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯制備為黃色液狀的目標化合物(2.038g，68％產率)。MS(ESI)337.5(M+H)+。
d)N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸根據實施例144(b)的方法，但用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸叔丁酯代替(1S)-N-[2-[1-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼制備為白色固體的目標化合物(343mg，72％產率)。MS(ESI)281.3(M+H)+。
e)(1S)-N-[2-[1-(N-芐氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-N-甲基-L-亮氨酰基)酰肼根據實施例28(a)-28(e)的方法，但在步驟(a)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，在步驟(e)中用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(50mg，44％)。MS(ESI)639.5(M+H)+。
實施例1562，2’-[N，N’-[雙-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-乙酰基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基L-亮氨酸制備為淡黃色固體的目標化合物(0.153g，23％)。MS(ESI)401.3(M+H)+。
實施例l572-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-甲基戊酰基)]碳酰肼的制備a)N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯向L-亮氨酸甲酯(2.0g，11.0mmol)在1，4-二氧六環(20ml)的攪拌的溶液中加入Na2CO3水溶液(12.1ml，2M于水中)，接著加入氯代甲酸芐酯(1.96g，11.5mmol)。將所述混合物于室溫下攪拌4小時然后分配于乙酸乙酯和水之間。用飽和的鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到無色油狀的目標化合物(3.1g，100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.34(m，5H)。5.27(d，1H)，5.12(s，2H)，4.41(s，2H)，3.75(s，3H)，1.65(m，3H)，0.96(m，6H).
b)N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼向實施例157(a)化合物(3.1g，11.0mmol)在甲醇(15ml)的攪拌的溶液中加入酰肼水合物(5.9g，118mmol，5.7ml)。于室溫下將所述溶液攪拌16小時然后濃縮得到為灰白色固體的目標化合物(3.1g，100％)。MS(ESI)280.2(M+H)+。
c)1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷向實施例157(b)化合物(3.0g，10.8mmol)在甲苯(50ml)的攪拌的溶液中加入碳酰氯(56ml，1.93M于甲苯中)。將所述溶液加熱回流4小時，然后濃縮得到淡黃色泡沫狀目標化合物(3.15g，96％)。MS(ESI)306.1(M+H)+。
d)N-(4-甲基戊酰基)酰肼向異己酸乙酯(2.0g，13.8mmol)在乙醇(25ml)的攪拌的溶液中加入肼一水合物(6.9g，138mmol，6.7ml)。于室溫下攪拌48小時后，濃縮所述溶液得到為白色固體的目標化合物(1.8g，100％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.48(s br，1H)，3.62(s br，2H)，2.13(t，2H)，1.51(m，3H)，0.85(d，6H).
e)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(4-甲基戊酰基)]碳酰肼將實施例157(c)化合物(0.100g，0.325mml)和實施例34(d)化合物(0.042g，0.325mmol)混合并溶于乙醇(1ml)中。將所述溶液加熱回流24小時，然后濃縮得到黃色殘留物，將其用冷的二氯甲烷洗滌得到為白色固體的目標化合物(0.053g，37％)。MS(ESI)436.2(M+H)+。
實施例1582，2’-[N，N’-[雙-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸，經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化制備為白色泡沫狀目標化合物(0.236g，23％)。MS(MH+)613.2。
實施例1592-[N-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備a)2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼向實施例157(c)化合物(3.15g，10.3mmol)在甲醇(2ml)的攪拌的溶液中加入水合肼(5.0g，100mmol，4.8ml)。于室溫下攪拌24小時后，濃縮所述溶液得到淡黃色泡沫狀目標化合物(3.471g，100％)。MS(ESI)338.2(M+H)+。
b)2-[N-(N-乙酰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼向實施例159(a)化合物(0.100g，0.297mmol)、N-乙酰基-L-亮氨酸(0.054g，0.312mmol)和1-羥基苯并三唑(0.008g，0.0594mmol)在DMF(2ml)中的攪拌的溶液中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.060g，0.312mmol)。于室溫下攪拌16小時后，將所述溶液傾至水中并用乙酸乙酯萃取。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.052g，36％)。MS(ESI)493.1(M+H)+。
實施例1602，2’-[N，N’-[雙-(N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]]]碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體狀目標化合物(199mg，64％)。MS(ESI)587.1(M+H)+。
實施例1612，2’-[N，N’-[雙-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]]]碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體狀目標化合物(263mg，81％)。MS(ESI)587.1(M+H)+。
實施例1622-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例159(a)-159(b)的方法，但在步驟(b)中用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸鋰鹽代替N-乙酰基-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(0.040g，15％)。MS(ESI)586.3(M+H)+。
實施例1632-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[N-(4-吡啶基甲氨基羰基)-L-亮氨酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例159(a)-159(b)的方法，但在步驟(b)中用N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸鋰鹽代替N-乙酰基-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(0.045g，17％)。MS(ESI)586.3(M+H)+。
實施例164
2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]]碳酰肼的制備根據實施例159(a)-159(b)的方法，但在步驟(b)中用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸鋰代替N-乙酰基-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(0.084g，32％)。MS(ESI)586.3(M+H)+。
實施例1652，2’-[N，N’-[雙-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]]-2-(N-甲基)碳酰肼的制備a)N-甲基-N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼向N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯(2.2g，8.15mmol)在甲醇(4ml)的攪拌的溶液中加入甲肼(3.7g，80mmol)。于室溫下攪拌16小時，濃縮所述溶液得到為黃色固體的目標化合物(2.14g，7.3mmol)。MS(ESI)294.1(M+H)+。
b)2，2’-[N，N’-[雙-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]]-2-(N-甲基)碳酰肼將實施例157(c)化合物(0.250g，0.819mmol)和實施例165(a)化合物(0.240g，0.819mmol)混合，溶于乙醇中并加熱回流24小時。將所述溶液濃縮并將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.060g，12％)。MS(ESI)599.1(M+H)+。
實施例1662，2’-[N，N’-[雙-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]]]碳酰肼的制備根據實施例29的方法，但用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(157mg，48％)。MS(ESI)587.0(M+H)+。
實施例1671-(N-芐基)-2，2’-[N，N’-[雙-[N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]]碳酰肼的制備
a)N-亞芐基-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼將苯甲醛(0.33ml，3.2mmol)加至實施例157(b)化合物(1g，3.5mmol)在乙醇(30ml)的溶液中。將得到的混合物加熱回流4小時。真空濃縮所述混合物然后經快速層析(硅膠，10-50％EtOAc/己烷)純化得到固體目標化合物(0.31g，23％)。MS(ESI)368.0(M+H)+。
b)N-芐基-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼向實施例167(a)化合物(0.24g，0.65mmol)在THF(5ml)的冷卻的溶液中加入硼烷和四氫呋喃復合物(0.65ml，0.65mmol；1M于THF中溶液)。將得到的混合物于室溫下攪拌4小時，然后真空濃縮，用乙酸乙酯稀釋，用水和飽和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮得到為白色固體的目標化合物(0.25g，89％)。MS(ESI)370.0(M+H)+。
c)1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(3-芐基-1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷根據實施例157(c)的方法，但用N-芐基-N’-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼代替N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼制備為油狀物的目標化合物(0.02g，83％)。MS(ESI)396.0(M+H)+。
d)1-(N-芐基)-2-[-N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)碳酰肼根據實施例159(a)的方法，但在步驟(a)中用1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(3-芐基-1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷代替1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷制備為固體的目標化合物(0.013g，62％)。MS(ESI)428.0(M+H)+。
d)1-(N-芐基)-2，2’-[N，N’-[雙-[N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]]碳酰肼根據實施例159(a)-159(b)的方法，但在步驟(a)中用1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(3-芐基-1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷代替1-芐氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1，3，4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷制備為白色固體的目標化合物(13mg，86％)。MS(ESI)675.0(M+H)+。
實施例168
2-[N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)]-2’-[N’-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)]碳酰肼的制備根據實施例159(a)-159(b)的方法，但在步驟(b)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-乙酰基-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(0.141g，53％)。MS(ESI)599.4(M+H)+。
實施例169N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(e)中用1-萘基硼酸代替2-芐氧基苯基硼酸制備為白色固體的目標化合物(0.094g，58％)。MS(ESI)518.4(M+H)+。
實施例170N-[2-(2-聯苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(e)中用2-聯苯基硼酸代替2-芐氧基苯基硼酸制備為白色固體的目標化合物(0.100g，43％)。MS(ESI)544.3(M+H)+。
實施例171N-(N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例116(a)-116(b)的方法，但在步驟(b)中用N-芐氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(40mg，25％)。MS(ESI)552.5(M+H)+。
實施例172N-[N-甲基-N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例116(a)-116(b)的方法，但在步驟(b)中用N-甲基-N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(70mg，71％)。MS(ESI)553.4(M+H)+。
實施例173N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(g)中用N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(1.015g，94％)。MS(ESI)539.1(M+H)+。
實施例174N-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例116(a)-116(b)的方法，但在步驟(b)中用N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(740mg，85％)。MS(ESI)504.4(M+H)+。
實施例175N-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例116(a)-116(b)的方法，但在步驟(b)中用N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(610mg，69％)。MS(ESI)518.4(M+H)+。
實施例176N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備a)N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼根據實施例144(b)的方法，但用N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼代替(1S)-N-[2-[1-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼制備為白色粉末的目標化合物(0.766g，93％)。MS(ESI)439.3(M+H)+。
b)N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-2-吡嗪基羰基)-L-亮氨酰基)酰肼根據實施例116(b)的方法，但用N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼代替N-[2-[N-苯基-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼，用吡嗪羧酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.146g，94％)。MS(ESI)545.4(M+H)+。
實施例177N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-異煙酰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(b)中用異煙酸代替吡嗪羧酸制備為白色固體的目標化合物(0.135g，87％)。MS(ESI)544.3(M+H)+。
實施例178N-[2-(2-二苯并呋喃基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(d)中用2-溴代二苯并呋喃代替2-芐氧基溴苯制備為白色固體的目標化合物(0.079g，49％)。MS(ESI)558.3(M+H)+。
實施例179N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基]酰肼制備為白色固體的目標化合物(36mg，27％)。MS(ESI)510.4(M+H)+。
實施例180
N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基)]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-甲基-N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基]酰肼制備為白色固體的目標化合物(70mg，72％)。MS(ESI)524.4(M+H)+。
實施例181N-(N-異煙酰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基]酰肼，在步驟(b)中用異煙酸代替吡嗪羧酸制備為白色固體的目標化合物(28mg，22％)。MS(ESI)509.4(M+H)+。
實施例182N-(N-異煙酰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-甲基-N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼，在步驟(b)中用異煙酸代替吡嗪羧酸制備為白色固體的目標化合物(117mg，93％)。MS(ESI)523.4(M+H)+。
實施例183N-[N-(4-咪唑基乙酰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基]酰肼，在步驟(b)中用4-咪唑基乙酸代替吡嗪羧酸制備為白色固體的目標化合物(60mg，53％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.62-7.23(m，8H)，6.81(s，1H)，4.72-4.66(m，1H)，3.75(d，1H)，3.55(d，2H)，1.96-1.93(m，2H).1.76-1.54(m，3H)，0.96-0.84(m，12H).
實施例184N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡啶甲酰基-L-亮氨酰基)酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基]酰肼，在步驟(b)中用吡啶甲酸代替吡嗪羧酸制備為白色固體的目標化合物(50mg，44％)。MS(ESI)509.5(M+H)+。
實施例185N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]甲基[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰胺的制備a)2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸根據實施例105(b)的方法，但用2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯代替3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲酸甲酯制備為白色固體的目標化合物(0.361g，90％)。MS(ESI)312.2(M+H)+。
b)2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基溴代甲酮根據實施例103(a)的方法，但用2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸代替N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(0.327g，73％)。MS(ESI)388.2(M+H)+。
c)2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4基疊氮基甲酮于室溫下將實施例185(b)化合物(0.319g，0.822mmol)、疊氮化鈉(0.064g，0.987mmol)和氟化鉀(0.072g，1.23mmol)在DMF(6ml)中的溶液攪拌16小時。然后用乙酸乙酯稀釋所述溶液并連續用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)合并的有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.087g，30％)。MS(ESI)373.3(M+Na)+。
d)2-疊氮基-1-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基]-1-羥基乙烷于0℃，緩慢將硼氫化鈉(0.031g，0.820mmol)加至實施例185(c)化合物(0.087g，0.249mmol)在THF(1ml)中的攪拌的溶液中。20分鐘后，用乙酸乙酯稀釋所述混合物，并用水然后用鹽水洗滌。干燥有機層(MgSO4)，過濾并濃縮得到為白色固體的目標化合物(0.084g，96％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(m，1H)，7.50(m，2H)，7.38(m，4H)，7.11(m，3H)，5.31(s，2H)，5.08(t，1H)，3.69(m，2H)，3.58(s b，1H).
e)2-氨基-1-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基]-1-羥基乙烷向實施例1 85(d)化合物(0.084g，0.239mmol)在甲醇(2ml)中的攪拌的溶液中加入氯化亞錫二水合物(0.108g，0.478mmol)。于室溫下攪拌16小時后，用乙酸乙酯稀釋所述混合物并連續用水、飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析乙硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.075g，96％)。MS(ESI)327.3(M+H)+。
f)1-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基]-1-羥基-2-(4-吡啶基甲氧基羰基-L-亮氨酰基氨基)乙烷根據實施例116(b)的方法，但用2-氨基-1-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基]-1-羥基乙烷代替N-[2-[N-苯基-N-(2-甲基-1-丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼制備為白色固體的目標化合物(0.075g，57％)。MS(ESI)575.4(M+H)+.
g)N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]甲基[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰胺向實施例185(f)化合物(0.075g，0.131mmol)在二氯甲烷(1ml)中的攪拌的溶液中加入MnO2(0.300g，3.45mmol)。于室溫下攪拌24小時后，過濾所述混合物并將濾液濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)純化得到為淡黃色固體的目標化合物(0.017g，23％)。MS(ESI)573.4(M+H)+。
實施例186N-[2-[N-甲基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)N-苯甲酰基-N’-甲基-N’-(2-甲基丙基)硫脲向N-甲基異丁胺(3.21g，36.8mmol，4.45ml)在40ml CHCl3中的攪拌的溶液中加入苯甲酰基異硫氰酸鹽(6.0g，36.8mmol，4.95ml)。攪拌45分鐘后，濃縮所述溶液得到為淡黃色固體的目標化合物(9.22g，100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3；2∶1旋轉異構體的混合物)δ7.86(d，2H)，7.60(t，1H)，7.50(t，2H)，3.90(d，2H)，3.44(s，3H)，3.41(d，2H)，3.27(s，3H)，2.35-2.32(m，1H)，2.13(m，1H)，1.06(d，6H)，0.90(d，6H).
b)N-甲基-N-(2-甲基丙基)硫脲將實施例186(a)化合物(9.22g，36.8mmol)懸浮于80ml的1∶1甲醇/水中并加入碳酸鉀固體(15.27g，110mmol)。將所述混合物加熱回流48小時，然后冷卻，并分配于乙酸乙酯和水之間。用乙酸乙酯(2X)萃取水層。用飽和鹽水洗滌合并的有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到為淡黃色結晶固體的目標化合物(4.82g，89％)。MS(ESI)147.0(M+H)+。
c)N-[2-[N-甲基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例131(d)-113(f)的方法，但在步驟(d)中用N-甲基-N-(2-甲基丙基)硫脲代替N-(4-苯基苯基)-N-(2-甲基-1-丙基)硫脲制備為白色固體的目標化合物(202mg，97％)。MS(ESI)477.4(M+H)+。
實施例187N-(N-甲基-N-吡啶甲酰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例176(a)-176(b)的方法，但在步驟(a)中用N-(N-甲基-N-叔丁氧基羰基-N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基]酰肼，在步驟(b)中用吡啶甲酸代替吡嗪羧酸制備為白色固體的目標化合物(30mg，41％)。MS(ESI)523.5(M+H)+。
實施例188N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶磺酰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)2-吡啶磺酰氯于0℃向2-巰基吡啶(2.235g，20mmol)在水(7.5ml)和濃鹽酸HCl(26ml)的攪拌的溶液中通入Cl2。30分鐘后，加入75ml冰水并用冷的乙醚(2×75ml)萃取。合并有機層，連續用冷的10％NaHCO3水溶液和冷的鹽水洗滌。干燥(MgSO4)有機層，過濾并濃縮得到澄清油狀目標化合物(3.1g，87％)。
b)N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶磺酰基)-L-亮氨酰基]酰肼向實施例176(a)化合物(0.125g，0.285mmol)和實施例188(a)化合物(0.101g，0.571mmol)在二氯甲烷(2ml)的攪拌的溶液中加入N-甲基嗎啉(0.057g，0.571mmol)。于室溫下攪拌10分鐘后，用乙酸乙酯稀釋所述溶液并連續用水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)合并的有機層，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為淡黃色固體的目標化合物(0.100g，61％)。MS(ESI)580.2(M+H)+。
實施例189N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶磺酰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例188(b)的方法，但用N-(L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼制備為桔黃色固體的目標化合物(56mg，48％)。MS(ESI)545.3(M+H)+。
實施例190N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-甲基-N-(2-吡啶磺酰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例188(b)的方法，但用N-(N-甲基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼制備為桔黃色固體的目標化合物(53mg，40％)。MS(ESI)559.3(M+H)+。
實施例191N-[2-[N-甲基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(c)中用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(138mg，66％)。MS(ESI)477.4(M+H)+。
實施例192N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯基氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例116(a)-116(b)的方法，但在步驟(b)中用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(74mg，41％)-MS(ESI)553.4(M+H)+。
實施例193N-[2-[N-(2-甲基丙基)-N-苯氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例116(a)-116(b)的方法，但在步驟(b)中用N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體的目標化合物(50mg，38％)。MS(ESI)553.4(M+H)+。
實施例194N-[2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(g)中用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(0.028g，15％)。MS(ESI)588.4(M+H)+。
實施例195N-[N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(e)中用1-萘基硼酸代替2-芐氧基苯基硼酸，在步驟(g)中用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(0.072g，36％)。MS(ESI)532.4(M+H)+。
實施例196N-[2-[N，N-(雙)-2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用N，N-二異丁胺代替N-甲基異丁胺制備為黃色固體目標化合物(60mg，39％)。MS(ESI)519.5(M+H)+。
實施例197N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N，N-(雙)-2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用N，N-二異丁胺代替N-甲基異丁胺，在最后一個步驟中用N-芐氧基羰基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為黃色固體目標化合物(131mg，69％)。MS(ESI)518.4(M+H)+。
實施例198N-[2-(4-嗎啉代)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用嗎啉代替N-甲基異丁胺制備為白色固體目標化合物(45mg，31％)。MS(ESI)477.3(M+H)+。
實施例199N-[2-[2-(4-吡啶基甲氧基)苯基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備a)2-甲氧基甲氧基溴代苯于0℃將2-溴代苯酚(6.0g，34.7mmol)滴加至氫化鈉(1.2g，52.1mmol，60％在礦物油中的分散液)在DMF(75ml)中的攪拌的懸浮液中。攪拌20分鐘后，加入溴代甲醚(4.3g，34.7mmol)。于室溫下攪拌16小時后，將所述混合物傾至水(250ml)中并用己烷萃取。用鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將殘留物經柱層析(硅膠，己烷)純化得到為無色油狀的目標化合物(4.0g，53％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.55(d，tH)，7.28(t，1H)，7.16(d，1H)，6.91(t，1H)，5.25(s，2H)，3.54(s，3H).
b)2-(2-甲氧基甲氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯根據實施例112(a)-112(b)和112(d)-112(e)的方法，但在步驟(d)中用2-甲氧基甲氧基溴代苯代替2-芐氧基溴苯制備目標化合物。MS(ESI)294.3(M+H)+。
c)2-(2-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯向實施例199(b)化合物(0.839g，2.86mmol)在乙醇(25ml)的攪拌的溶液中加入10滴濃鹽酸。攪拌并回流2小時后，將所述溶液濃縮然后再溶于乙酸乙酯中。連續用飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮得到為淡黃色固體的目標化合物(0.674g，95％)。MS(ESI)250.2(M+H)+。
d)2-[2-(4-吡啶基甲氧基)苯基]噻唑-4-羧酸乙酯于0℃將偶氮二羧酸二異丙酯滴加至實施例199(c)化合物(0.125g，0.502mmol)、4-吡啶基甲醇(0.071g，0.653mmol)和三苯基膦(0.171g，0.653mmol)在THF(5ml)的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌16小時后，濃縮所述溶液并經柱層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的目標化合物(0.100g，59％)。MS(ESI)341.3(M+H)+。
e)N-[2-[2-(4-吡啶基甲氧基)苯基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼根據實施例112(f)-112(g)的方法，但在步驟(f)中用2-[2-(4-吡啶基甲氧基)苯基]噻唑-4-羧酸乙酯代替2-(2-芐氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯制備為白色固體的目標化合物(146mg，83％)。MS(ESI)575.4(M+H)+。
實施例200N-[2-(2-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(e)中用2-萘基硼酸代替2-芐氧基苯基硼酸制備為白色固體的目標化合物(226mg，75％)。MS(ESI)518.4(M+H)+。
實施例201N-[2-[N，N-(雙)-2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用N，N-二異丁胺代替N-甲基異丁胺，在最后一個步驟用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為黃色固體目標化合物(30mg，25％)。MS(ESI)533.3(M+H)+。
實施例202N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(4-嗎啉代)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用嗎啉代替N-甲基異丁胺，在最后一個步驟用N-芐氧基羰基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(115mg，67％)。MS(ESI)576.4(M+H)+。
實施例203N-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(4-硫代嗎啉代)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用硫代嗎啉代替N-甲基異丁胺制備為白色固體目標化合物(35mg，20％)。MS(ESI)493.4(M+H)+。
實施例204N-(N-芐氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(4-硫代嗎啉代)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用硫代嗎啉代替N-甲基異丁胺，在最后一個步驟用N-芐氧基羰基-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(20mg，20％)。MS(ESI)492.3(M+H)+。
實施例205N-[2-(2，3-亞乙基二氧基-4-甲氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(d)中用2，3-亞乙基二氧基-4-甲氧基溴代苯代替2-芐氧基溴苯制備為白色固體目標化合物(31mg，26％)。MS(ESI)556.4(M+H)+。
實施例206N-[2-[N，N-(雙)-2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用N，N-二異丁胺代替N-甲基異丁胺，在最后一個步驟用N-甲基-N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為黃色固體目標化合物(30mg，30％)。MS(ESI)533.5(M+H)+。
實施例207N-[2-(N-環丙基甲基-N-丙基氨基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼的制備根據實施例186(a)-186(c)的方法，但在步驟(a)中用N環丙基甲基丙胺代替N-甲基異丁胺，制備為黃色固體目標化合物(60mg，23％)。MS(ESI)503.3(M+H)+。
實施例208N-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(8-喹啉基)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(d)中用8-溴代喹啉代替2-芐氧基溴苯制備為白色固體目標化合物(134mg，56％)。MS(ESI)519.3(M+H)+。
實施例209N-[N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(8-喹啉基)噻唑-4-基羰基]酰肼的制備根據實施例112(a)-112(g)的方法，但在步驟(d)中用8-溴代喹啉代替2-芐氧基溴苯，在步驟(g)中用N-甲基-N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸制備為白色固體目標化合物(53mg，22％)。MS(ESI)533.3(M+H)+。
實施例2101-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-聯苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)4-聯苯基磺酰氯將4-聯苯基磺酸(2.4g，10mmol)和五氯化磷(2.1g，10mmol)一起加熱至100℃過夜。將所述反應物冷至室溫，用水稀釋，過濾并用水洗滌。然后將所述固體與EtOAc-乙醚研磨，將淺褐色的固體不經純化用于下一步驟。
b)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-聯苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例51(a)的方法，但用“4-聯苯基磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M-H+＝550。
實施例2111-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(3-聯苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)3-聯苯基-磺酰氯將3-聯苯基溴(9.3g，40mmol)溶于THF(40ml)中并按照標準方式用鎂粉(1.2g，50mmol)制備Grignard試劑。并通過套管將上述反應物通入磺酰氯(10.5g，6.4ml，80mmol)在己烷(25ml)的溶液中，于RT攪拌2小時。用冰水使反應終止，用乙醚萃取，經硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，將其不經純化用于下一步驟。
b)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(3-聯苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例51(a)的方法，但用“3-聯苯基磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M-H+＝550。
實施例2121-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備
a)2-芐氧基-苯基-磺酰氯根據實施例211(a)的方法，但用“2-芐氧基-苯基溴”代替“3-聯苯基溴”制備目標化合物，將其不經純化用于下一步驟。
b)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例51(a)的方法，但用“2-芐氧基苯磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝581，M+Na+＝604，2M+Na+＝1185。
實施例2131-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)4-芐氧基-苯基-磺酰氯根據實施例211(a)的方法，但用“4-苯氧基-苯基溴”代替“3-聯苯基溴”制備目標化合物，將其不經進一步純化用于下一步驟。
b)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例51(a)的方法，但用“4-苯氧基苯磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝568，M+Na+＝590。
實施例2141-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)4-苯氧基-苯基-磺酰氯根據實施例210(a)的方法，但用“2-二苯并呋喃磺酸”代替“4-聯苯基磺酸”制備目標化合物，將其不經進一步純化用于下一步驟。
b)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例51(a)的方法，但用“4-苯氧基苯磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝566，M+Na+＝588。
實施例2151-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(3，4-二甲氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“3，4-二甲氧基-苯磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝536，M+NH4＝553。
實施例2161-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2，5-二氯代二氯硫化碳-3-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“2，5-二氯代二氯硫化碳-3-磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+NH4+＝567，2M+H+＝1101。
實施例2171-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(苯基-砜-5-二氯硫化碳-2-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“苯基-砜-5-二氯硫化碳-2-磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝622。
實施例2181-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“8-喹啉-磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝527。
實施例2191-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-吡啶基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“2-吡啶基磺酰氯”(如J.Org.Chem.1989，54，392所述)代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝477，M+Na+＝499。
實施例2201-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-吡啶基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇將1，3-二氨基丙-2-醇(6.75g，75mmol)溶于DMF(100ml)中并加入Cbz-亮氨酸(20g，75.5mmol)、HOBT-水合物(11g，81.5mmol)和EDCI(15.5g，81.2mmol)。將所述反應物于RT攪拌過夜。將部分所述反應混合物(30ml)真空濃縮，然后加入乙醚(50ml)和MeOH(30ml)。加入1N的鹽酸(于乙醚中，1M，30ml)，形成白色膠狀物，將其用乙醚洗滌幾次。加入MeOH-丙酮并加熱至膠狀物變為白色固體。將所述白色固體溶于DMF(25ml)和DIEA(5ml)中，然后加入4-苯氧基苯磺酰氯。將所述反應物攪拌2小時，真空濃縮，然后經層析純化(硅膠，1∶1EtOAc∶己烷)得到為白色固體的所需產物。
b)亮氨酰基-氨基-3-N-(4-苯氧基苯磺酰基)-氨基-丙-2-醇將1-N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇(1.0g，1.8mmol)溶于EtOH(30ml)中，然后加入10％Pd/C(0.22g)，隨后加入6N鹽酸(2.5mm1)，然后于RT通入氫氣并將所述反應物攪拌4小時。過濾所述反應混合物，濃縮，與甲苯共沸蒸餾，得到白色玻璃體，將其不經純化用于下一步驟。
c)1-N-(N-4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇將亮氨酰基-氨基-3-N-(4-苯氧基苯磺酰基)-氨基-丙-2-醇(0.36g，0.76mmol)溶于DMF(5ml)中，然后加入NMM(0.45m1，4mmol)，接著加入4-吡啶基乙酸(0.13g，0.75mmol)和HBTU(0.29g，0.76mmol)，并將所述反應物于RT攪拌過夜。將所述反應混合物真空濃縮，然后經層析(硅膠，15％MeOH二氯甲烷)得到白色固體的所需產物(90mg，MS(ES)M+H+＝555。
d)1-N-(N-4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮將1-N-(N-4-吡啶基-乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇(45mg，0.08mmol)溶于丙酮(5ml)中，然后加入1N鹽酸(2ml)。真空濃縮所述反應物，然后重新溶于丙酮中。加入Jones試劑(1.5M，幾滴)然后將所述反應物于RT攪拌6小時。加入異丙醇(0.5ml)，真空濃縮所述反應混合物。用pH7的緩沖溶液稀釋所述反應物，然后用EtOAc萃取，經硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，然后經層析(硅膠，5％MeOH-二氯甲烷)純化得到為白色固體的所需產物(27mg，50％)。MS(ES)M+H+＝553。
實施例2211-N-(N-2-吡啶基-磺酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“2-吡啶基-磺酰氯”(如J.O侶.Chem.1989，54，392中所述)代替“4-吡啶基乙酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+475，M+Na+＝497，2M+Na+＝1171。
實施例2221-N-(N-嗎啉代-羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“N-嗎啉代-碳酰氯”代替“4-吡啶基乙酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝547，M+Na+＝569，2M+Na+＝1115。
實施例2231-N-(N-4-吡啶基-羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“4-吡啶基-羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝539。
實施例2241-N-(N-乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“乙酰氯”代替“4-吡啶基乙酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝476，M+Na+＝498，2M+Na+＝973。
實施例2251-N-(N-咪唑乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“咪唑乙酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝542。
實施例2261-N-(N-4-羧基甲基苯甲酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“4-羧基甲基苯甲酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝596，M+Na+＝618，2M+Na+＝1213。
實施例2271-N-(N-(N，N-二甲基甘氨酰基)-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“N，N-二甲基甘氨酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝519。
實施例2281-N-(N-8-喹啉-磺酰胺-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例220(a)-(d)的方法，但用“8-喹啉磺酰氯”代替“4-吡啶基乙酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝625。
實施例2291-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-羰基)-氨基-丙-2-酮的制備將1，3-二氨基丙-2-醇(6.75g，75mmol)溶于DMF(100ml)中并加入Cbz-亮氨酸(20g，75.5mmol)、HOBT-水合物(11g，81.5mmol)和EDCI(15.5g，81.2mmol)。將所述反應物于RT攪拌過夜，將部分所述反應混合物(30ml)真空濃縮，然后加入乙醚(50ml)和MeOH(30ml)。加入1N的鹽酸(于乙醚中)(1M，30ml)，形成白色膠狀物，將其用乙醚洗滌幾次。加入MeOH-丙酮并加熱至膠狀物變為白色固體。將所述白色固體(0.44g，1.1mmol)溶于DMF(3ml)和NMM(0.33ml，0.3mmol)中，接著加入8-喹啉羧酸(0.17g，1.0mmol)和HBTU(0.38g，1.0mmol)，并將所述反應物于RT攪拌過夜。將所述反應物真空濃縮，然后經層析(硅膠，7∶2EtOAc∶己烷)純化。然后將所述固體溶于丙酮(5ml)中，然后加入1N鹽酸(2ml)。真空濃縮所述反應物，然后將其重新溶于丙酮中。加入Jones試劑(1.5M，幾滴)，然后將所述反應物于RT攪拌6小時。加入異丙醇(0.5ml)，真空濃縮所述反應混合物。用pH7的緩沖溶液稀釋所述反應物，然后用EtOAc萃取，經硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，經層析(硅膠，5％MeOH-二氯甲烷)純化得到為白色固體的所需產物(23mg，41％)。MS(ES)M+H+＝491。
實施例2301-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(6-喹啉-羰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“6-喹啉-羧酸”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝491。
實施例2311-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-(4-聯苯基)-4-甲基-丙酰胺)-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“2-異丁基-4-聯苯基乙酸”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝586，M+Na+＝608，2M+Na+＝1193。
實施例2321-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(N-4-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“4-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酸”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝584。
實施例2331-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(苯甲酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“苯甲酰氯”代替“8-喹啉羧酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝440，M+Na+＝462，2M+Na+＝901。
實施例2341-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2，4-二甲基-3-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“2，4-二甲基-3-磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝494。
實施例2351-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(1，3-二甲基-5-氯代-吡唑-4-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“1，3-二甲基-5-氯代-吡唑-4-磺酰氯”代替“4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝494。
實施例2361-N-(N-4-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“4-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝569。
實施例2371-N-(N-3-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“3-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝569。
實施例2381-N-(N-2-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“2-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝569。
實施例2391-N-(N-4-羧基-苯甲酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備將1-N-(4-羧基甲基-苯甲酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮(0.105g，0.176mmol)溶于MeOH(5ml)和水(1ml)中，然后加入LiOH-水合物(15mg，0.35mmol)并將所述反應物于RT攪拌1小時。用水稀釋所述反應物，用6N鹽酸(1ml)酸化，然后用EtOAc(2×10ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾并濃縮，經層析純化(硅膠，50∶50∶1 EtOAc∶己烷∶AcOH)得到為白色固體的所需產物(35.6mg，35％)。MS(ES)M+H+＝582，M+Na+＝604。
實施例2401-N-(N-Me-N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“N-Me-N-Cbz-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝582，M+Na+＝604，2M+Na+＝1185。
實施例2411-N-(4-苯氧基苯甲酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“4-苯氧基苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝517，M+Na+＝539，2M+Na+＝1055。
實施例2421-N-(3-苯氧基苯甲酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“3-苯氧基苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝517，M+Na+＝539，2M+Na+＝1055。
實施例2431-N-(4-苯氧基苯甲酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“4-苯氧基苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝517，M+Na+＝539，2M+Na+＝1055，M-H+＝515。
實施例2441-N-(4-聯苯基乙酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“4-聯苯基乙酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝515，M+Na+＝537，2M+Na+＝1051。
實施例2451-N-(2-芐氧基苯甲酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“2-芐氧基苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝531，M+Na+＝553，2M+Na+＝1083。
實施例2461-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯甲酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“4-芐氧基苯甲酸”代替“8-喹啉羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝546，M+Na+＝568，2M+Na+＝1113。
實施例2471-N-(2-(4-聯苯基)-4-甲基-戊酰氨基)-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“2-(4-聯苯基)-4-甲基-戊酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝571，M+Na+＝593。
實施例2481-N-(2-(3-聯苯基)-4-甲基-戊酰氨基)-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)3-溴代-苯乙酸甲酯將3-溴代苯乙酸(2.15g，10mmol)溶于乙醚中，然后用重氮甲烷溶液處理至黃色。然后用AcOH使反應中止，真空濃縮并將其不經純化用于下一步驟。
b)3-聯苯乙酸甲酯將3-溴代-苯乙酸甲酯(2.29g，10mmol)溶于甲苯(30ml)中。然后加入苯基硼酸(1.46g，12mmol)，隨后加入碳酸鈉水溶液(2M，4.24ml，40mmol)，然后加入四(三苯基膦)鈀(0.35g，0.3mmol)并回流過夜。將所述反應物冷至室溫，用飽和氯化銨稀釋，然后用EtOAc(2×10ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮，經層析(硅膠，5％EtOAc己烷)純化得到為白色固體的所需產物(l.93g，84％)。MS(ES)M+H+＝263。
c)3-聯苯基乙酸將3-聯苯基乙酰基甲酯溶于MeOH(40ml)和水(6ml)中，然后加入LiOH-水合物(0.7g，16.8mmol)，將所述反應物于RT攪拌2小時。用水稀釋所述反應物，用6N鹽酸(1ml)酸化，然后用EtOAc(2×10ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾并濃縮得到為白色固體的所需產物(1.66g，93％)。1H NMRd7.6-7.25(m，9H)，3.7(s，2H)。
d)3-(4-聯苯基)-4-甲基-戊-4-烯酸于0℃將nBuLi(3.26ml，1.6M于己烷中)溶液滴加至二異丙胺(0.74ml，5.3mmol)在THF(6ml)中的溶液中。將所述反應物攪拌15分鐘，然后冷至-78℃。將3-聯苯基乙酸(0.5g，2.35mmol)溶于THF(2ml)中，然后滴加至LDA溶液中。將反應物溫熱至0℃，攪拌40分鐘，然后冷卻至-78℃。將異丁烯基溴(0.475g，3.52mmol)加入其中，并將所述反應物攪拌1小時。加入水(2ml)并真空去除THF。用水稀釋所述反應物，用6N鹽酸(11ml)酸化，然后用EtOAc(2×10ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機層，過濾，濃縮，經層析(硅膠，5％MeOH二氯甲烷)純化得到為白色固體的所需產物(1.66g，93％)。
1H NMRd7.6-7.3(m，9H)，4.75(d，2H)，3.87(t，1H)，2.87(dd，1H)，2.50(dd，1H)，1.70(s，3H).
e)3-(4-聯苯基)-4-甲基-戊酸將3-(4-聯苯基)-4-甲基-戊-4-烯酸(0.5g，1.87mmol)溶于EtOAc(25ml)中。然后加入10％Pd/C(60mg)并將所述反應物于氫氣環境中攪拌2.5h。過濾所述反應物，真空濃縮，然后再溶于1∶5的EtOAcEtOH(15ml)中。然后加入10％Pd/C(80mg)，將所述反應物于氫氣環境中攪拌過夜。過濾所述反應物，真空濃縮，經層析(硅膠5％MeOH二氯甲烷)純化得到為白色固體的所需產物(1.66g，93％)。
1H NMRd7.6-7.3(m，9H)，3.7(t，1H)，2.07-1.95(m，1H)，1.8-1.7(m，1H)，1.6-1.45(m，1H).
f)1-N-(2-(3-聯苯基)-4-甲基-戊酰氨基)-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例213(a)的方法，但用“3-(4-聯苯基)-4-甲基-戊酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝571，M+Na+＝593。
實施例2491-N-(3-聯苯基乙酰基)-氨基)-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例213(a)的方法，但用“3-聯苯基乙酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝515，M+Na+＝537，2M+Na+＝1051。
實施例2501-N-(N-4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備a)1-N-(N-Boc-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇將1，3-二氨基-丙-2-醇(3.375g，37.5mmol)溶于DMF(60ml)中。然后加入HOBT-水合物(5.5g，40.7mmol)，接著加入Boc-L-亮氨酸(9.34g，37.5mmol)和EDCI(7.77g，40.7mmol)。將所述反應物攪拌4小時，然后用DMF稀釋使其成為總體積為100ml的儲備液(0.375mmol/ml)。將該儲備液(18ml，6.75mmol)用NMM(0.89ml，7.28mmol)處理，然后用2-芐氧基苯磺酰氯(1.9g，6.72mmol)處理。將所述反應物再攪拌2h，然后用水稀釋，用EtOAc萃取，經硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，經層析(硅膠，20％EtOAc己烷)純化MS(ES)M+H+＝550。
b)1-N-(亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯磺酰基)-氨基-丙-2-醇將1-N-(Boc-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯磺酰基)-氨基-丙-2-醇(0.7g，1.3mmol)溶于1∶1 TFA∶CM(50ml)中并于RT攪拌2h，真空濃縮，將其不經純化用于下一步驟MS(ES)M+H+＝450。
c)1-N-(N-4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例220(b)-(c)的方法，但用“1-N-亮氨酰基-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇”代替“N-亮氨酰基-氨基-3-N-(4-苯氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-醇”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝567。
實施例2511-N-(N-4-吡啶基羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-吡啶基羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝553。
實施例2521-N-(N-4-咪唑基乙酰-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-咪唑酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝556。
實施例2531-N-(N-(N，N-二甲基甘氨酰基)-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“N，N-二甲基甘氨酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝533。
實施例2541-N-(N-(N-甲基脯氨酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“N-甲基脯氨酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝559。
實施例2551-N-(N-(N-甲基哌啶-4-羰基)-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯基-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“N-甲基哌啶-4-羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝573。
實施例2561-N-(N-(N-甲基哌啶-4-羰基)-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“N-甲基哌啶-4-羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝557。
實施例2571-N-(N-(N-甲基脯氨酰基)-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“N-甲基脯氨酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝543。
實施例2581-N-(N-(N，N-二甲基甘氨酰基)-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“N，N-二甲基甘氨酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝517。
實施例2591-N-(N-4-咪唑基乙酰-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-咪唑乙酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝526。
實施例2601-N-(N-4-吡啶基羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-吡啶基羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝537。
實施例2611-N-(N-4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝551。
實施例2621-N-(N-4-咪唑-丙烯酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-咪唑-丙烯酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝552。
實施例2631-N-(N-吡唑-羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“吡唑羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝538。
實施例2641-N-(N-苯甲酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“苯甲酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝497。
實施例2651-N-(N-2，5-二氟-苯甲酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“2，5-二氟-苯甲酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝535。
實施例2661-N-(N-2，5-二氟-苯基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“2，5-二氟-苯基乙酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝547。
實施例2671-N-(N-苯基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“苯基乙酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝511。
實施例2681-N-(N-4-吡啶基乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-吡啶乙酸”代替“4-吡啶乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝512。
實施例269
1-N-(N-4-吡啶基羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-吡啶基羧酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝498。
實施例2701-N-(N-4-咪唑乙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“4-咪唑乙酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝501。
實施例2711-N-(N-3-苯基丙酰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-(8-喹啉-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例250(a)-(c)的方法，但用“苯基丙酸”代替“4-吡啶基乙酸”，用“8-喹啉磺酸”代替“2-芐氧基苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝525。
實施例272雙-N，N’-(N-4-吡啶基亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-1，3-二氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，但用“4-吡啶基-亞甲氧基-羰基-亮氨酰基”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝585。
實施例273雙-N，N’-(N-3-吡啶基亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-1，3-二氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，但用“3-吡啶基-亞甲氧基-羰基-亮氨酰基”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝585。
實施例274
雙-N，N’-(N-2-吡啶基亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-1，3-二氨基-丙-2-酮的制備根據實施例37的方法，但用“2-吡啶基-亞甲氧基-羰基-亮氨酰基”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝585。
實施例2751-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-芐氧基-苯甲酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“2-芐氧基-苯甲酸”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝546。
實施例2761-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(3-芐氧基-苯甲酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“3-芐氧基-苯甲酸”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝546。
實施例2771-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-聯苯基-乙酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例229的方法，但用“4-聯苯基乙酸”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝530。
實施例2781-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-羧基甲基-二氯硫化碳-3-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例51的方法，但用“2-羧基甲基二氯硫化碳-3-磺酰氯”代替”4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯磺酰氯”制備目標化合物MS(ES)M-H+＝540。
實施例2791-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備
a)N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙烯將N-Cbz-亮氨酸(3.0g，11.3mmol)溶于DMF(50ml)中，然后加入NMM(1.3g，12.4mmol)，接著加入烯丙基胺(0.65g，0.85mmol)和HBTU(4.3g，11.3mmol)，并將所述反應物于RT攪拌過夜。用水稀釋所述反應物，用EtOAc萃取，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，經層析(硅膠，40％EtOAc∶己烷)純化MS(ES)M+H+＝305。
b)N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-氧化丙烯將N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙烯(2.95g，9.7mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，然后加入mCPBA(5.0g，29.1mmol)并將所述反應物攪拌過夜。用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋所述反應物，用EtOAc萃取，經硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，經層析(硅膠，50％EtOAc/己烷)純化。
c)1-N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基-氨基-丙-2-醇將N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-氧化丙烯(400mg，1.25mmol)溶于異丙醇(5ml)中，然后加入甲胺水溶液(2ml)，在密封的高壓氣體儲罐中將所述反應物加熱至70℃2小時。真空濃縮所述反應混合物，將其不經純化用于下一步驟。
d)1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮根據實施例229(a)的方法，但用“1-N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基氨基丙-2-醇”代替“8-喹啉-羧酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝597。
實施例2801-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基-N-(N-4-吡啶基-甲氧基-羰基-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(d)中用“4-吡啶基-亞甲氧基-羰基亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝598。
實施例281
1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(d)中用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“Cbz-亮氨酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝580，M+Na+＝602。
實施例2821-N-甲基-1-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“Cbz-亮氨酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝580。
實施例2831-N-甲基-1N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“N-Cbz-亮氨酸”，在步驟(d)中用“4-吡啶基亞甲氧基羰基-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝580。
實施例2841-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-N-甲基)-氨基-3N-(N-4-吡啶基-亞甲氧基羰基-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“4-吡啶基甲胺”代替“烯丙基胺”和用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“N-Cbz-亮氨酸”及在步驟(d)中用“N-4-吡啶基亞甲氧基羰基-亮氨酰基”代替“N-Cbz-亮氨酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝581。
實施例2851-N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-吡啶基亞甲基)-3N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但用“4-吡啶基甲胺”代替“甲胺”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝674。
實施例2861-N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-吡啶基-亞甲基)-3N-(2-二苯并呋喃磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例284(a)-(d)的方法，但在步驟(d)中用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“Cbz-亮氨酸和HBTU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝657。
實施例2871-N-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-N-(4-吡啶基-亞甲基)-3N-(2-二苯并呋喃磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例284(a)-(d)的方法，但在步驟(d)中用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“Cbz-亮氨酸和HB3TU”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝657。
實施例2881-N-(4-聯苯基乙酰基)-氨基-3-N-(4-吡啶基-亞甲基)-3N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“4-聯苯基乙酸”代替“Cbz-亮氨酸”，用“4-吡啶基甲胺”代替“甲胺”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝621。
實施例2891-N-(4-苯氧基-苯甲酰基)-氨基-3-N-(4-吡啶基亞甲基)-3N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“4-苯氧基苯甲酸”代替“Cbz-亮氨酸”，用“4-吡啶基甲胺”代替“甲胺”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝623。
實施例2901-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-3-N-(4-吡啶基亞甲基)-3N-(N-Cbz-亮氨酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“2-二苯并呋喃磺酰氯”代替“Cbz-亮氨酸和HBTU”，用“4-吡啶基甲胺”代替“甲胺”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝657。
實施例2911-N-(N-3-吡啶基-亞甲氧基-羰基-亮氨酰基)-氨基-3-N-甲基-N-(2-二苯并呋喃-磺酰基)-氨基-丙-2-酮的制備根據實施例279(a)-(d)的方法，但在步驟(a)中用“N-甲基-N-烯丙基胺”代替“烯丙基胺”，在步驟(d)中用“3-吡啶基-亞甲氧基-羰基-亮氨酸”代替“Cbz-亮氨酸”制備目標化合物MS(ES)M+H+＝581。
上述說明書和實施例完全公開怎樣制備和使用本發明的化合物。然而，本發明不受在此所述特定的實施方案的限制，而是包括下述權利要求書范圍的所有的改進。在此引用的各種雜志、專利和其他出版物包括了本領域的現狀并在此引入作參考。
權利要求
1.式VII化合物及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物 其中R34是-H或C1-6烷基；R36是芳基、雜芳基、吡啶基或異喹啉基；R37是C1-6烷基，-CH2Ph或-CH2CH2CO2R34。
2.權利要求1的化合物，其中R36選自
3.權利要求1的化合物，其中所述化合物的R37為Me。
4.權利要求2的化合物，選自1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(4-(3-氯代-2-氰基-苯氧基)-苯基亞磺酰氨基)-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(甲苯磺酰基-氨基)-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-((4-苯氧基-苯基)-亞磺酰氨基)-丙-2-酮；1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-丙-2-酮；1-(Cbz-高-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-丙-2-酮；和1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-(S)-丁-2-酮。
5.權利要求4的化合物，稱為1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-((4-苯氧基-苯基)-亞磺酰氨基)-丙-2-酮。
6.權利要求4的化合物，稱為1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-(S)-丁-2-酮。
7.權利要求4的化合物，稱為1-(Cbz-亮氨酰基)-氨基-3-(2-二苯并呋喃亞磺酰氨基)-丙-2-酮。
8.含有權利要求1的化合物和藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥用組合物。
9.權利要求1的化合物在制備用于抑制半胱氨酸蛋白酶的藥物中的應用。
10.根據權利要求9的應用，其中所述半胱氨酸蛋白酶為組織蛋白酶K。
11.權利要求1的化合物在制備用于治療以骨損失為特征的疾病的藥物中的應用。
12.根據權利要求11的應用，其中所述疾病為骨質疏松。
13.根據權利要求11的應用，其中所述疾病為牙周炎。
14.根據權利要求11的應用，其中所述疾病為齦炎。
15.權利要求1的化合物在制備用于治療以過量軟骨或基質降解為特征的疾病的藥物中的應用。
16.根據權利要求15的應用，其中所述疾病為骨關節炎。
17.根據權利要求15的應用，其中所述疾病為類風濕性關節炎。
全文摘要
本發明提供抑制蛋白酶,包括組織蛋白酶K的化合物,該化合物的藥用組合物,治療過量骨損失或軟骨或基質降解性疾病的方法,所述疾病包括骨質疏松;牙齦疾病包括牙齦炎和牙周炎;關節炎,更具體地說,骨關節炎和類風濕性關節炎;Paget氏疾病;惡性的高血鈣癥;代謝性骨疾病,包括通過給予需要的病人本發明化合物以抑制所述骨損失或過量的軟骨或基質的降解。
文檔編號C07C235/50GK1341592SQ01104788
公開日2002年3月27日 申請日期2001年2月20日 優先權日1995年10月30日
發明者T·J·卡爾, R·L·德斯雅爾萊斯, T·F·嘉拉赫, S·M·哈伯特, H·－J·沃, S·K·湯普森, D·F·維伯, D·S·雅馬施塔, J·H·允 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司