專利名稱：白細胞介素－18抑制劑抑制腫瘤轉移的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及腫瘤轉移和對其抑制的方法。更具體說，本發明涉及通過抑制白細胞介素-18(IL-18)的產生和/或作用來防止腫瘤的轉移。
背景技術：
循環性癌細胞粘附于毛細血管內皮細胞是發生轉移的關鍵步驟(1，2)。血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)(免疫球蛋白超家族中的一個成員)介導造血細胞和活化白細胞對前炎癥細胞因子活化的內皮細胞的粘附(3-5)。然而，動物和人的癌細胞可能篡奪VCAM-1的粘附功能來強化實驗性轉移的擴散(6)。
例如，已知IL-1β和TNF-α促進了肺組織中表達VLA-4的黑色素瘤細胞的轉移，其機制包括上調內皮細胞的VCAM-1表達(7-9)。已證明在正常和脂多糖處理的小鼠中IL-1和TNF-α明顯有助于B16M細胞的肝臟定居(7，8，10-20)。另外，甘露糖受體-介導的肝臟竇狀隙內皮(HSE)細胞的活化包括自分泌性IL-1-β介導HSE細胞的VCAM-1表達，導致增加B16M細胞粘附和轉移(21)。還顯示了IL-1-β活化的HSE細胞釋放VLA-4-刺激因子，其促進了B16M細胞對HSE細胞的粘附(11)。因此，IL-1β誘導VCAM-1的表達和VLA-4-刺激因子從HSE細胞的釋放，這將使它們有能力為某些竇狀隙內-捕獲表達VLA-4的癌細胞創造了轉移前的微環境。
然而封阻IL-1β和TNF-α僅能廢除部分轉移，這表明還有其它因子(或補償它們的缺失或通過其它途徑起作用)參與。另外，大部分轉移性癌細胞和靶組織都不能產生這些前炎癥細胞因子。而且，內毒素或甘露糖受體配體的濃度通常不足以增加到引發前炎癥細胞因子的釋放。所以還未很好地鑒定到癌細胞毛細管內轉移時能引起VCAM-1上調和其牽連物的多種介質。
IL-18(IFNγ-誘導因子)是一種新型的細胞因子，具有IL-1蛋白質家族的結構特征和IL-12的功能特性(23)。有報道說在內毒素誘導的肝損傷中，Kupffer細胞產生的IL-18激活TNF-α和FAS配體介導的肝毒性途徑(24)。近期已揭示IL-18也具有前炎癥特性，它通過直接刺激CD3+/CD4+和自然殺傷細胞TNF-α的基因表達和合成，隨后刺激CD14+細胞群產生IL-1β和IL-8，因此表明IL-18在細胞因子等級系統中出人意料的關鍵地位(25)。然而尚未闡明它在癌轉移中的可能作用。
通過在IL-18珠上進行層析、測序、克隆和在COS7細胞中表達，從尿中純化得到結合白細胞介素-18的蛋白質(IL-18BP)。在體內IL-18BP廢除了IL-18對干擾素-γ(IFN-γ)、IL-8的誘導和對NF-κB的活化。在LPS之后將IL-18BP給予小鼠即消除了循環性IFN-γ。因此，IL-18BP可作為早期Th1細胞因子應答抑制劑起作用。IL-18BP在脾中固有地表達，屬于免疫球蛋白超家族，且與IL-1II型受體具有有限的同源性。它的基因位于人染色體11q13上，且在8.3kb基因組序列中未發現有編碼跨膜區域的外顯子。一些痘病毒編碼的假定蛋白質與IL-18BP高度同源，提示病毒產物可能減弱IL-18的功能和干擾細胞毒性T-細胞應答反應(28和WO 99/09063)。如WO 99/09063中更詳細敘述的那樣，IL-18BP和其突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分或環狀排列衍生物和混合物能結合IL-18和/或能調節IL-18的活性和/或能封阻IL-18的活性。
發明概述本發明提供了在制備用于抑制腫瘤轉移的藥物中針對IL-18產生和/或作用的抑制劑的用途。
IL-18產生的抑制劑是例如天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-1抑制劑。
對IL-18作用的抑制劑選自抗IL-18的抗體、抗IL-18受體亞基的抗體、IL-18受體信號途徑的抑制劑、能與IL-18競爭和封阻IL-18受體的IL-18拮抗劑、和IL-18BP、其突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分或環狀排列衍生物(結合IL-18)。
所用的抑制劑優選IL-18BP，或其突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分或環狀排列衍生物(具有與IL-18BP相同的活性)。
本發明還提供了能抑制IL-18產生和/或活性的藥物組合物來抑制腫瘤轉移。
為了抑制腫瘤轉移另一種抑制IL-18產生和/或作用的方法，是將包含IL-18產生和/或作用抑制劑(如IL-18BP)的編碼序列的表達載體引入體內。
附圖簡述

圖1野生型、IL-1β-/-和ICE-/-小鼠脾內注射B16M細胞后的實驗肝臟定居。在注射B16M細胞后取出肝臟，以含有10％甲醛的磷酸鹽緩沖鹽水固定。IL-1β-/-和ICE-/-小鼠肝中幾乎所有實驗性轉移(黑色素瘤結節)都被根除。
圖2不可逆性ICE抑制劑和抗小鼠IL-18抗體對B16M粘附于HSE細胞和對未處理的和用B16M-CM處理的HSE產生IL-1β和TNF-α的作用。存在B16M-CM時將培養的HSE細胞培養10小時。在一些實驗中，在B16M-CM處理前，未處理的和處理的HSE細胞都接收10μMICEi或10μg/ml抗-小鼠IL-18抗體。按照最初加入的細胞數量的相對值，計算出粘附于HSE底物的B16M細胞的百分比。另外，在粘附前回收培養物上清液，用ELISA測定IL-1β和TNF-α的濃度。4次獨立的實驗數據都以平均值±SD表示，各一式六份(n＝24)。按Student’s雙標記非配對t-檢驗，相對于未處理的HSE，粘附于B16M-CM處理的HSE的B16M細胞和IL-1β或TNF-α產生的增加具有統計學顯著性的(*P＜0.01)。無B16M-CM時，當用ICEi或抗-IL-18抗體處理時，IL-1β或TNF-α的產生和B16M細胞對HSE細胞的粘附沒有統計學顯著性(沒有顯示數據)。
圖3體外ICEi對B16M細胞粘附于B16M-CM處理的HSE的影響。用基礎培養基或B16M-CM培養HSE細胞8小時。在用B16M-CM之前，一些HSE細胞接收過10μM ICEi培養18小時。另外，將1ng/ml重組鼠類IL-1β和B16M-CM一起加入某些HSE細胞中8小時。在其它實驗中，HSE細胞接收1ng/ml鼠類IL-1β或100pg/ml TNF-α6小時，且在用細胞因子處理前1小時加入或不加入10μg/ml兔抗小鼠IL-18多克隆抗體。也將非特異性IgG多克隆抗體加到未處理和細胞因子處理的HSE細胞中。此后，洗滌HSE細胞并加入BCEFCF-AM-標記的B16M細胞，8分鐘后再洗滌。按照最初加入的細胞數量的相對值計算出粘附于HSE底物的B16M細胞的百分比。以平均值±SD表示3次獨立實驗的結果，各一式六份(n＝18)。按Student’s雙標記非配對t-檢驗，未處理的HSE(*)、和IL-1β或TNF-α處理的HSE(**)之間粘附程度的差異具有統計學顯著性(p＜0.01)。B16細胞對其它IECi處理的對照HSE(接收或不接收1ng/ml鼠類IL-1β8小時)粘附的變化沒有統計學顯著性(沒有顯示數據)。
圖4體外B16M細胞粘附于IL-18-處理的HSE。用1ng/ml重組鼠類IL-18培育HSE細胞6小時。一些實驗中，在加入IL-18前10分鐘加入10μg/mlTNF-sRp55或100ng/ml 1L-1Ra。其它實驗中，在加入B16M細胞前30分鐘，在HSE細胞中加入10μg/ml抗-VCAM-1抗體或類似濃度的非特異性抗小鼠IgG。然后，如以下實施例所述測定了B16M細胞的粘附百分比。以平均值±SD表示3次獨立實驗的結果，各一式六份(n＝18)。按Student雙標記非配對t-檢驗，基礎培養基處理的HSE(*)和IL-18處理的HSE(**)之間粘附程度的差異具有統計學顯著性(P＜0.01)。
發明詳述一些前炎癥細胞因子(包括白細胞介素(IL)-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α))能促進癌細胞粘附于內皮細胞，從而導致腫瘤轉移擴散。這些前炎癥細胞因子可能通過誘導血管細胞粘附分子-1(VACM-1)來促進粘附和轉移。本發明顯示用B16黑色素瘤(B16M)細胞培養物的條件培養液(CM)(B16M-CM)處理原代培養的小鼠HSE細胞，促進了體外B16M與HSE細胞的粘附。B16M-CM還能誘導體外HSE細胞產生IL-1β和TNF-α。然而尚未清楚證明腫瘤的轉移確實受IL-18和TNF-α的調節。
本發明顯示B16M-CM誘導HSE細胞產生IL-18而且IL-18是增加B16M細胞與HSE細胞粘附的細胞因子。通過激活HSE細胞中VCAM-1的表達，IL-18促進了粘附，而沒有TNF-α或IL1β的參與。用特異性天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑(10μM，18小時)培養HSE細胞完全消除了B16M-CM誘導的粘附，而不減少TNF-α的產生，且加入鼠IL-1β也不逆轉這種作用。將抗鼠IL-18抗體加到HSE細胞中能防止B16M-CM誘導的粘附，而不干擾B16M-CM誘導IL-1β和TNF-α。類似地，最近克隆的IL-18結合蛋白質(IL-18BP)也能防止B16M-CM誘導的B16M與HSE細胞的粘附(體外)。TNF-α和IL-1β的抑制劑如p55可溶性TNF-受體或IL-1受體拮抗劑不能逆轉IL-18誘導的這種粘附。因此，本發明提供IL-18產生和作用的抑制劑作為工具來抑制腫瘤轉移。IL-18產生的抑制劑包括天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1的抑制劑。IL-18作用的抑制劑選自直接針對IL-18的抗體、直接針對兩種已知IL-18受體亞基中的任何一種的抗體、IL-18受體信號途徑的抑制劑、能與IL-18競爭并封阻IL-18受體的IL-18拮抗劑，和能結合IL-18并封阻其生物活性的IL-18結合蛋白質。
本發明涉及IL-18在前炎癥細胞因子介導的VCAM-1表達的上調中的可能作用，與其它細胞因子可能的相互作用和防止誘導VCAM-1的方法。本發明發現IL-18在引發前炎癥中起作用，導致肝臟竇狀隙壁VCAM-1的上調，并因此有利于癌細胞的粘附和轉移。將用B16M-CM處理的小鼠HSE細胞的原代培養物作為癌細胞依賴性內皮細胞活化模型，來研究B16M細胞誘導的IL-18對B16M細胞粘附于HSE(通過VCAM-1依賴性機制)機理的作用。在特異性IL-1受體阻斷(用IL-1Ra)、成熟IL-1β和IL-18分泌的抑制(用不可逆性IL-1轉化酶抑制劑(ICEi))、TNF-阻斷(用p55TNF-可溶性受體(TNF-sR p55))和IL-18功能的阻斷(用抗IL-18抗體和IL-18結合蛋白質)的條件下，檢驗了IL-18的特異性作用。另外，將B16M細胞脾內注射ICE-/-和IL-1β-/-小鼠。與正常對照相比在缺陷型小鼠中觀察到的低轉移密度提示IL1β可能還有IL-18參與了炎癥的促轉移(prometastatic)作用(表1)。
進行的體外實驗顯示IL-18的產生是(由B16M細胞衍生的上清液)刺激HSE粘附作用的原因。由于VCAM-1的上調刺激了B16M-CM處理的HSE的所有粘附活性，數據表明IL-18介導了細胞因子誘導的HSE表達VCAM-1。另外，抗IL-18抗體減少了B16M-CM抑制的細胞粘附，而對HSE細胞產生TNF-α和IL-1β沒有影響。因此，HSE細胞中IL-1β和TNF-α的產生是IL-18非依賴性的，且不會造成粘附。相反，無論是TNF-sRp55或IL-1R都不能抑制IL-18處理的HSE細胞粘附的增加，證實了自分泌性TNF-α或IL-1β都不是造成IL-18誘導的HSE粘附的原因。
用HSE細胞得到的結果與用其它細胞系統得到的結果相反，如非CD14+人血單個核細胞(25)中IL-18通過TNF-α產生誘導了IL-1β。很可能存在著HSE-特異性前炎癥細胞因子等級體系，其中TNF-α和IL-1β不受IL-18的控制，但可用IL-18作為VCAM-1上調的下游介質。
與小鼠HSE細胞不同，如RT-PCR核查所示B16M細胞不表達IL-18基因，且用ICEi培養18小時不會消除細胞因子-和B16M-CM對HSE細胞的粘附刺激活性。然而，IL-18的局部產生可能影響B16M細胞在肝臟微脈管系統中的轉運或駐留。另一發現是用1ng/ml鼠IL-18培養B16M細胞6小時能2倍增加它們對未處理的HSE的粘附，將抗VCAM-1抗體加入到HSE中減少了80％IL-18介導的粘附，表明有VACM-1/VLA-4相互作用的參與。類似地，接收B16-CM處理的HSE上清液6小時的B16M細胞與HSE的粘附(通過VCAM-1依賴性機制)也明顯地增加了2倍，且抗IL-18抗體消除了這種粘附刺激作用。
本發明的這些發現表明IL-18是前炎癥細胞因子肝臟釋放和轉移發展之間的一種新連接。腫瘤活化的HSE細胞產生IL-18確定了兩種參與調節黑色素瘤細胞與HSE細胞粘附的互補機制；一種是HSE中的自分泌機制，其控制TNF-α/IL-1β-介導的VCAM-1的上調；和一種B16M細胞的旁泌性機制，其上調黑色素瘤細胞VLA-4，強化它們的VCAM-1依賴性粘附能力。這種同時發生的兩種細胞粘附分子的上調使得癌-毛細管內皮細胞相互作用途徑具有很高價值。
可用IL-18產生和/或轉移的抑制劑來消除B16M細胞的Il-18誘導的粘附。IL-18產生的抑制劑是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1。IL-18作用的抑制劑選自直接針對IL-18的抗體、直接針對兩種已知IL-18受體亞基中任何一種的抗體、IL-18受體信號途徑的抑制劑、能與IL-18競爭并封阻IL-18受體的IL-18拮抗劑，和能結合IL-18并封阻其生物活性的IL-18結合蛋白質。
除直接使用IL-18產生和/或作用的抑制劑以外，本發明還考慮將其引入到需要IL-18產生和/或作用抑制效果的細胞中。為了此目的，用于特異性引入的系統(如將編碼IL-18BP的DNA引入細胞)是必需的。一些可以如此進行的方法是本領域已知的。例如，可將合適的攜帶上述DNA的載體引入細胞，該載體能使DNA插入到細胞中從而讓該DNA在細胞中表達。其它文獻中描述了送遞到細胞的方法，如美國專利No.5,910,487、WO 99/29349等。
本發明的用于抑制IL-18產生和/或作用的藥物組合物是那些包含活性成分作為抑制劑的組合物，這些活性成分選自天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1抑制劑、抗IL-18抗體、抗IL-18受體任一亞基的抗體、IL-18受體信號途徑的抑制劑、能與IL-18競爭并封阻IL-18受體的拮抗劑，和IL-18BP或其具有相同活性的突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分或環狀重排衍生物。
術語突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分和環狀重排衍生物與WO 99/09063中所述的含義相同。
IL-18的抗體和IL-18BP是該藥物組合物的優選活性組分。
該藥物組合物還包括常規的載體、賦形劑和其它本領域已知的其它成分(取決于實際應用的方式，即注射、口服或本領域已知的其它任何方式)。
可由臨床醫生根據應用方法、患者體重和其它因素確定實際劑量。
通過以上描述，參考以下用于說明的實施例(對本發明無任何限制作用)更易理解本發明。
實施例試劑自Serotec Ltd.(Oxford，England)得到大鼠抗小鼠IgG和大鼠抗小鼠VCAM-1單克隆抗體。從R&D System Inc.(Minneapolis，MN)得到重組小鼠IL-1β。重組人IL-1受體拮抗劑(IL-1R是Upjohn Co.，Kalamazoo，MI的贈品)和人p55 TNF可溶性受體(TNFsR p55)是Serono Inc.，Norwell，MA的贈品。從AlexisCo.(San Diego，CA)得到IL-1β轉化酶抑制劑(ICEi)。從PeproTech EC Ltd(London，UK)購得重組鼠IL-18和兔抗小鼠IL-18多克隆抗體IgG。如(28)所述制備IL-18結合蛋白質(IL-18BP)。
B16M細胞的培養。如(11)所述培養、維持和傳代B16M細胞。如下制備B16M條件培養液(B16M-CM)將5×105個細胞接種于25cm2T-瓶中，培養24小時。然后在5ml無血清的培養液中培養這些細胞24小時(細胞最終密度為6×104個細胞/cm2)。收集上清液，用新鮮的無血清的培養液作3∶1稀釋，并用0.22微米濾器過濾。
細胞因子分析。用基于抗-小鼠IL-1β和TNF-α單克隆抗體的特異性ELISA試劑盒，按說明書(R&D Systems，Minneapolis，MN)測定原代培養的HSE細胞和B16M細胞的細胞因子釋放。
實施例1定量測定B16M細胞對原代HSE培養物的粘附如(26)所述從同基因小鼠分離HSE、鑒定并培養。如(16)中所述用2’，7’-二-(2-羧乙基)-5，6-羧基熒光素-乙酰氧基甲酯溶液(BCECF-AM，MolecularProbes，Eugene，OR)標記B16M細胞。然后在24-孔板中加入培養的HSE 2×105個細胞/孔，8分鐘后用新鮮培養液洗滌諸孔3次。用基于熒光測定系統所述的定量方法測定了粘附細胞的數量(16)。在一些實驗中，在加入B16M細胞前幾小時用B16M-CM預培育HSE細胞。
實施例2肝臟轉移試驗如(27)所述準備了野生型、IL-1β-/-和ICE-/-雄性C57BL/6J小鼠。使用6到8周齡的小鼠(每籠關養5只)。對麻醉的小鼠(Nembutal，50mg/kg腹腔內)脾內注射3×105B16黑色素瘤活細胞(懸浮于0.1ml Hank平衡鹽溶液中)產生肝臟轉移。注射癌細胞后第10天麻醉下處死這些小鼠。將肝組織進行組織加工。用數字顯微鏡成像密度分析來辨別正常肝組織中轉移的B16M和肝臟轉移的密度，采用所述(17)的立體方法計算每100mm3肝中轉移的數量(根據每個肝臟15張10×10mm2切片檢測到的病灶平均數)。
實施例3注射到IL-1β和ICE缺陷型小鼠中的B16M細胞生長和轉移減少。將不同2批的相同B16M細胞脾內注射入成年C57B1/6J野生型、ICE-/-和IL-1β-/-小鼠中，進行2次獨立的實驗(相隔1年)。尸體解剖顯示所有試驗的小鼠中都有可見的黑色素瘤，用脾重量評估腫瘤大小沒有顯著性差異(表1)。相反，與野生型小鼠肝相比，IL-1β-/-和(尤其是)ICE-/-小鼠肝中轉移的發生明顯降低(圖1)。對轉移病灶的數量和大小進行了定量性組織分析，來確定所研究的小鼠肝中轉移的密度(如病灶數/100mm3)和體積(占器官的百分比)參數。與野生型小鼠相比(表1)，IL-1β-/-和ICE-/-小鼠肝的肝臟轉移密度明顯減少84％-90％，表明大部分注射的B16M細胞不能植入這些小鼠的肝組織中。另外，與野生型小鼠肝臟的數值相比，IL-1β-/-和ICE-/-小鼠肝臟的轉移體積也明顯減少6到7倍(P＜0.01)，表明成功定居于肝臟的B16M細胞的生長速度也降低了。我們還觀察到IL-1β-/-和ICE-/-小鼠肝臟之間這些轉移參數的差異，在實施例I中幾乎所有ICE-/-小鼠肝臟都根除了轉移(圖1)。
表I定量性組織分析脾內注射的B16M細胞在IL-1β-/-和ICE-/-小鼠中的實驗性肝定居小鼠組別 轉移密度(病灶數/100mm3) 轉移體積(％肝體積)實驗I野生型小鼠 234.16±58.36 66.18％IL-1β-/-小鼠 25.18±21.02*10.05％ICE-/-小鼠 13.56±16.20*2.1％實驗II野生型小鼠 198.40±100.5459.62％IL-1β-/-小鼠 33.79±19.89*9.70％ICE-/-小鼠 27.73±15.68*8.08％以平均值±SD顯示兩次獨立實驗的數據(每實驗組使用7-15只小鼠)。
*采用方差分析(ANOVA)和Scheffe F-檢驗，表明與野生型小鼠相比差異有統計學顯著性(雙側，p＜0.01)。
實施例4自分泌性IL-18介導了B16M-CM活化的HSE細胞的TNF-α-和IL-1β誘導的粘附。B16M1-CM明顯增加了HSE細胞的TNF-α和IL-1β的產生，和它們對體外其它B16M細胞的粘附(圖2)。用10μM ICEi培養HSE18小時，完全消除了B16M-CM誘導的粘附，而不減少HSE的TNF-α產生。外源性加入鼠IL-1β不能補償ICei對HSE的封阻作用，這與IL-1β-處理的對照HSE中B16M細胞粘附顯著增加相反(圖3)。當內源產生的TNF-α和外源性加入的IL-1β濃度升高時消除了B16M-CM誘導的粘附增進，這一事實表明這些細胞因子都不直接上調HSE的粘附。重要的是，在用B16M-CM刺激前存在加入到HSE的抗鼠IL-18抗體防止了B16M-CM誘導的粘附，而不影響誘導HSE產生IL-1β和TNF-α(圖2)。另外，抗IL-1β抗體也防止了鼠Il-1β和TNF-α對HSE的刺激粘附作用(圖3)，表明這些細胞因子對HSE的預粘附作用都是受IL-18介導的。RT-PCR證實HSE細胞表達了IL-18基因(沒有顯示數據)。相反地，小鼠IL-1β明顯增強了(P＜0.01)B16M細胞對HSE的粘附(圖4)，且TNF-sR p55或IL-1Ra都不能抑制它，證實無論是自分泌性TNF-α或IL-1β都不是造成IL-18誘導HSE粘附的原因。然而，如圖4所示，抗-VCAM-1抗體完全抑制了B16M細胞對IL-18處理的HSE的粘附。對照非特異性IgG不影響B16M細胞粘附于IL-18處理的HSE的上調。
實施例5IL-18BP防止B16-條件培養液誘導的B16黑色素瘤細胞的粘附。如表2所示，將IL-18BP加入B16-CM刺激的HSE將粘附細胞的百分比從35％減少到8.70％(p＜0.01)。這代表100％抑制，因為該粘附水平低于用基礎培養液培養的粘附細胞的水平。此結果表明除B16M-CM中存在的以外，HSE產生的內源性IL-18可能是IL-18的一種內源性來源。
表2IL-1BP對B16條件培養液介導的B16黑色素瘤細胞對肝臟竇狀隙內皮細胞粘附的抑制作用％黑色素瘤細胞粘附基礎培養液 10.15±1.5B16-CM 35.10±4.4B16-CM/IL-18BP(1ng/ml) 35.10±4.4**B16-CM/IL-18BP(10ng/ml)8.70±1.1**以平均值±SD顯示兩次獨立實驗的數據，各一式六份(N＝12)**采用方差分析(ANOVA)和Scheffe F-檢驗中，表明與野生型小鼠相互差異有統計學顯著性(雙側，p＜0.01)。
參考文獻1.Kohn，E.C.，和Liotta，L.A.(1995)Cancer Res55(9)，1856-622.Nicolson，G.L.，和Winkelhake，J.L.(1975)Nature 225，230-2323.Freedman，A.，Munro，M.，Rich，G.E.，Bevilacqua，M.P.，Morimoto，C.，Mclntyre，B.W.，Rhynhart，K，Pober，J.S.和Nadler，L.M.(1990)Science 249，1030-10334.Miyake，M.，Fuchimoto，S.，Iwagaki，H.，Matsubara，N.，Edamatsu，R.，Hiramatsu，M.，和Orita，K.(1991)Res.Comm.Chem.Pathol.Pharmacol.71，293-307
5.Simmons，P.J.，Maskinovsky，B.，Longenecker，B.M.，Berenson，R.，Torok-Storb，B.，和Gallatin，W.M.(1992)Blood80(2)，388-956.Rice，G.E.，和Bevilacqua，M.P.(1989)Science246，1303-13067.Okahara，H.，Yagita，H.，Miyake，K.，和Okumura，K.(1994)Cancer Res 54，3233-32368.Garofalo，A.，Chirivi，R.G.S.，Foglieni，C.，Pigot，R.，Mortarini，R.，Martin-Padura，I.，Anichini，A.，Gearing，A.J.，Sanchez-Madrid，F.，Dejana，E.，和Giavazzi，R.，(1995)Cancer Res 55，414-4199.Martin-Padura，I.，Mortarini，R.，Lauri，D.，Bernasconi，S.，Sanchez-Madrid，F.，Parmiani，G.Mantovani，A.，Anichini，A.，和Dejana，E.(1991)Cancer Res 51，.Lauri，D.，Bertomeu，M.-C.，和Orr，F.W.(1990)Clin Exp Metastasis 8，27-3211.Anasagasti，M.J.，Alvarez，A.，Martin，J.J.Mendoza，L.，和Vidal-Vanaclocha，F.(1997)Hepatology 25，840-84612.Bani，M.R.，Garofalo，A.，Scanziani，E.，和Giavazzi，R.(1991)J.Natl.CancerInst.83，119-12313.Bertomeu，M.C.，Gallo，S.，Lauri，D.，Hass，T.A.，Orr，F.W.Bastida，E.，和Buchanan，M.R.(1993)Clin Exp Metastasis 11，243-25014.Burrows，F.J.，Haskard，D.O.，Hart，I.R.，Marsall，J.F.，Selkirk，S.，Poole，S.，和Thorpe(1991)Cancer Res 51，.Chirvi，R.G.S.，Garofalo，A.，Paudura，I.M.，Mantovani，A.，和Giavazzi，R.(1993)Cancer Res 53，.Vidal-Vanaclocha，F.，Alvarez，A.，Asumendi，A.，Urcelay，B.，Tonino，P.，和Dinarello，C.A.(1994)Cancer Res 54，.Vidal-Vanaclocha，F.，Alvarez，A.，Asumendi，A.，Urcelay，B.，Tonino，P.，和Dinarello，C.A.(1996)J Natl Cancer Inst 88，198-20518.Malik，S.T.，Naylor，M.S.East，N.，Oliff，A.，和Balkwill，F.R.(1990)Eur JCancer 26..Orosz，P.，Echtenacher，B.，Falk，W.Rushoff，J.，Weber，D.，和Mannel，D.N.(1993)J Exp Med 177，1391-1398
20.Orosz，P.，Kruger，A.，Hubbe，M.，Ruschoff，J.，Von Hoegen，P.，和Mannel，D.N.(1995)Int.J.Cancer 60，867-87121.Mendoza，L.，Olaso，E.，Anasagasti，M.J.，Fuentes，A.，和Vidal-Vanaclcha，F.(1998)J Cell Physiol 174，322-33022.Bazan，J.F.，Timans，J.C.，和Kastelein，R.A.(1996)Nature 379(6556)，59123.Okamura，H.，Tsutsui，H.，Komatsu，T.，Yutsudo，M.，Hakura，A.，Tanimoto，T.，Torigoe，K.，Okura，T.，Nukada，Y.Hattori，K.，Akita，K.，Namba，M.，Tanaber，F.，Konishi，K.，Fukuda，S.，和Kurimoto，M.(1995)Nature 378，88-9124.Tsutsui，H.，Matsui，K.，Kawada，N.Hyodo，Y.，Hayashi，N.，Okamura，H.，Higashino，K.，和Nakanishi，K.(1997)J Immunol 159(8)，3961-725.Puren，A.J.，Fantuzzi，G.，Gu，Y.，Su，M.S.S.，和Dinarello，C.A.(1998)J ClinInvest 101，711-72426.Vidal-Vanaclocha，F.，Rocha，M.，Asumendi，A.，和Barbera-Guillem，E.(1993)Hepatology 18，328-33927.Fantuzzi，G.，Puren，A.J.，Harding，M.W.，Livingston，D.J.，和Dinarello，C.A.(1998)Blood 91，.Novick，D.Kim，S-H，Fantuzzi，G.，Reznikov，L.L.，Charles A.Dinarello，C.A.，和Rubinstein，M.(1999)Immunity 10，127-13權利要求
1.IL-18產生和/或作用的抑制劑在制備抑制腫瘤轉移藥物中的用途。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的IL-18產生的抑制劑是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1的抑制劑。
3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的IL-18作用的抑制劑選自抗IL-18抗體、抗IL-18受體任一亞基的抗體、IL-18受體信號途徑的抑制劑、能與IL-18競爭并封阻IL-18受體的IL-18拮抗劑、和IL-18結合蛋白、其具有相同活性的突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分或環狀排列衍生物。
4.如權利要求3所述的用途，其特征在于，所述的IL-18作用的抑制劑是IL-18的抗體。
5.如權利要求3所述的用途，其特征在于，所述的IL-18作用的抑制劑是IL-18BP或其具有與IL-18相同活性的突變蛋白、衍生物或片斷。
6.一種用于抑制IL-18產生和/或作用以抑制腫瘤轉移的藥物組合物，其特征在于，所述的組合物包括抗IL-18抗體、抗IL-18受體任一亞基的抗體、IL-18受體信號途徑的抑制劑、能與IL-18競爭并封阻IL-18受體的IL-18拮抗劑、和IL-18結合蛋白、其具有相同活性的突變蛋白、融合蛋白、功能性衍生物、活性組分或環狀排列衍生物，它們能結合IL-18并封阻其生物活性。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述的組合物包括IL-18的抗體。
8.如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述的組合物包括IL-18結合蛋白質、其具有相同活性的突變蛋白、衍生物或片斷。
9.編碼IL-18產生和/或作用抑制劑的表達載體在制備用于抑制腫瘤轉移藥物中的用途。
全文摘要
本文公開了IL－18抑制劑在抑制腫瘤轉移中的用途。優選IL－18結合蛋白質(IL－18BP)的用途。
文檔編號C07K16/24GK1364086SQ00810689
公開日2002年8月14日 申請日期2000年7月17日 優先權日1999年7月22日
發明者C·迪納洛 申請人:耶達研究發展有限公司