專利名稱：用酶使油脫膠的方法
用酶使油脫膠的方法
本申請是申請日為2005年7月18日，題為“用酶使油脫膠的方法”的中國專利申請200580023982. 5號的分案申請。
相關申請
本申請參考了以下相關申請1999年7月20日提交的美國申請序列號 09/750, 990,美國申請序請號 10/409，391，W02004/064537，W02004/064987，PCT/ IB2004/004378和PCT/IB2004/004374。每一篇申請和這些申請的每一篇中引用的每個文獻(申請引用的文獻)，每一篇本發明所參考和引用的每篇文獻，無論在文本中或者在那些申請的訴訟(prosecution)過程中，以及在這些訴訟過程中提出的所有支持專利性的論證，都包含在本文中作為參考。本文文本也引用了各種文件(“本文引用的文件”)。每一篇“本文引用文件”和每一篇在“本文所引用文件”中引用或者參考的文獻都并入本文中作為參考。發明領域
本發明涉及使用脂質酰基轉移酶(lipid acyltransferase)通過酶促反應使食用油油脫膠的方法。
本發明進一步涉及一種或多種脂質酰基轉移酶。
本發明進一步涉及脂質酰基轉移酶用于脫膠食用油油的應用。技術背景
傳統上有兩種方法用于油類的脫膠，是物理脫膠和化學脫膠方法。在1990年代基于胰腺磷脂酶(pancreatic phospholipase)的使用出現了酶脫膠方法。由于該酶按猶太教規不是清潔可食的(non-kosher),所以該磷脂酶最后由微生物的磷脂酶Al (Lecitase UltraTM-N0V0Zymes，丹麥)代替。與化學或物理脫膠方法相比，酶方法具有若干優點，包括成本節省，產率更高，更環保。發明內容
在一個方面，本發明提供一種使用如本文定義的脂質酰基轉移酶對植物油或食用油進行酶脫膠的方法。
本發明還提供一種植物油或食用油的酶脫膠方法，其包括用本發明的脂質酰基轉移酶處理食用油或植物油，從而去除大部分的磷脂。
本發明還提供一種植物油或食用油的酶脫膠方法，其包括用本發明的脂質酰基轉移酶處理食用油或植物油，從而將來自大部分磷脂的酰基轉移到一種或多種酰基受體上， 例如轉移到一種或多種留醇(stenol)和/或留燒醇(stanol)上。
另一方面，本發明提供一種或多種脂質酰基轉移酶。
在一個方面，本發明提供脂質酰基轉移酶，其包括SEQ ID No. 16所示的氨基酸序列。
另一方面，本發明提供含有SEQ ID No 16所示的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶， 或與SEQ ID No. 16具有75%或更多，優選85%或更多，更優選90%或更多，還更優選95% 或更多，還更優選98 %或更多，或還更優選99 %或更多同源性的氨基酸序列。
在又一個方面，本發明提供脂質酰基轉移酶在食用油脫膠中的應用，用來(i)去除磷脂(例如磷脂酰膽堿)和/或(ii)提高固醇酯和/或留烷醇酯在油中形成和/或(iii) 去除磷脂(例如磷脂酰膽堿)和/或提高固醇酯和/或留烷醇酯在油中形成，而不會顯著增多油中的游離脂肪酸。
優選的方面
用于本發明的脂質酰基轉移酶可以是天然脂質酰基轉移酶，也可以是變體脂質酰基轉移酶。
例如用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可以是如W02004/064537或 W02004/064987,或 PCT/IB2004/004378 或 GB0513859. 9 所述的脂質酰基轉移酶。
本文使用的術語“脂質酰基轉移酶”是指一種具有酰基轉移酶活性(通常分類為 E. C. 2. 3. I. x)的酶，該酶能夠將酰基從脂質轉移到一個或多個受體底物，例如以下物質的一種或多種固醇；留烷醇；碳水化合物；蛋白質；蛋白質亞基；甘油；優選固醇和/或甾烷醇。
優選地，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明的方法和/或用途的脂質酰基轉移酶能夠將酰基從脂質(如本文定義的)轉移到一種或多種下述酰基受體底物固醇或甾烷醇，優選固醇。
在一些方面中，本發明的“酰基受體”可以是包含羥基(-0H)的任何化合物，例如多價醇類包括甘油、固醇、留烷醇、碳水化合物；羥基酸包括果酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸和抗壞血酸；蛋白質或其亞基如氨基酸、蛋白質水解物和肽(部分水解的蛋白質)，及其混合物和衍生物。優選地，本發明的“酰基受體”不是水。
優選酰基受體不是甘油單酯。
在一個方面，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶既能夠將酰基從脂質轉移到固醇和/或留烷醇，還能夠將酰基從脂質轉移到下列物質中的一種或多種碳水化合物，蛋白質，蛋白質亞基，甘油。
優選地，本發明脂質酰基轉移酶作用的脂質底物是下列脂質中的一種或多種磷脂例如卵磷脂(lecithin)，如磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine)。
該脂類底物在此可以被稱為“脂質酰基供體”。這里使用的術語卵磷脂包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
對于一些方面，優選地，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶對其起作用的脂質底物是磷脂，諸如卵磷脂，例如磷脂酰膽堿。
對于一些方面，優選地，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶不能或基本不能作用于甘油三酯和/或I-甘油單酯和/或2-甘油單酯。
適宜地，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶可顯示出下列脂酶的活性中的一種或多種磷脂酶A2活性(E. C. 3. I. I. 4)，磷脂酶Al活性(E. C. 3. I. I. 32)。
適宜地，對于一些方面，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途3/63 頁的脂質酰基轉移酶可將酰基從磷脂轉移到固醇和/或留烷醇。
對于一些方面，優選本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶可將酰基從磷脂轉移到固醇和/或留烷醇，以形成至少固醇酯和/或留烷醇酯。
對于一些方面，優選本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶不表現三酰甘油脂肪酶活性(E. C. 3. I. I. 3)，或不表現顯著的三酰甘油脂肪酶活性(E. C. 3. I. I. 3)。
本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和/或用途的脂質酰基轉移酶可將酰基從脂類轉移到固醇和/或留烷醇。因此，在一個實施方案中，本發明的“酰基受體”既可為固醇又可為留烷醇，或固醇和留烷醇二者的組合。
優選地，本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可用下列標準表征
(i)該酶具有酰基轉移酶活性，該活性可定義為酯轉移活性，憑借該活性，脂質酰基供體的原始酯鍵的酰基部分被轉移到酰基受體以形成新的酯；以及
(ii)該酶含有氨基酸序列基序GDSX，其中X是下列氨基酸殘基中的一種或多種 L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M 或 S。
優選地，⑶SX基序的X是L或Y。更優選地，⑶SX基序的X是L。因此，優選本發明的酶含有氨基酸序列基序GDSL。
GDSX基序由四種保守氨基酸構成。優選地，所述基序中的絲氨酸是脂質酰基轉移酶的催化性絲氨酸。適宜地，⑶SX基序中的絲氨酸可以在與嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)脂肪分解酶中與Ser-16相對應的位置，如Brumlik和Buckley (Journal of Bacteriology Apr. 1996，Vol. 1，No. 7，p 2060-2064)的教導。
為確定蛋白質是否具有本發明所述⑶SX基序，根據W02004/064537或 W02004/064987教導的方法,將該序列優選與Pfam數據庫中的隱藏markov模型圖譜(model profile) (HMM圖譜)進行比較。
Pfam是蛋白質結構域家族的數據庫。Pfam包括為每個家族的輔助(curated)多重序列比對以及用于在新序列中鑒定這些結構域的隱藏Markov模型圖譜(HMM圖譜)。對 Pfam 的介紹可見于 Bateman A 等 (2002) Nucleic Acids Res, 30 ;276_280。隱藏 Markov 模型被應用于許多旨在對蛋白質進行分類的數據庫中，綜述見Bateman A和Haft DH (2002) BriefBioinform 3 ;236_245。
//www.nchi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi cmd = Retrieve& db = PuhMed&list_uids = 12230032&dopt = Abstract
//www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi cmd = Retrieve&db = PubMed&list_uids = 11752314&dopt = Abstract
對隱藏Markov模型的詳細解釋和這些模型如何在Pfam數據庫中應用參見Durbin R, Eddy S,和 Krogh A(1998)Biological sequence analysis !probabilistic models of proteins and nucleic acids. Cambridge University Press, ISBN 0-521-62041-4。 Hammer 軟件包可從華盛頓大學(Washington University), St Louis, USA 獲得。
可選擇地，⑶SX基序可以使用Hammer軟件包識別，說明由Durbin R, Eddy S,和7Krogh A(1998)Biological sequence analysis !probabilistic models of proteins and nucleic acids. Cambridge University Press, ISBN 0-521-62041-4 及其中的參考文獻， 以及本說明書中提供的HMMER2的資料中提供。
PFAM數據庫可以通過，例如，目前位于如下網址的幾個服務器進行訪問
//www. sanger. ac. uk/Software/Pfam/index, shtml
//pfam.wustl.edu/
//pfam. jouy. inra. fr/
//pfam.cgb.ki.se/
數據庫提供了檢索工具，在此可以輸入蛋白質序列。然后使用數據庫的默認參數， 對蛋白質序列中Pfam結構域的存在進行分析。GDSX結構域是在數據庫中已建立的區域，因此任何查詢序列中存在的該結構域可以得到識別。數據庫將返回Pfam00657共有序列與查詢序列的比對。
優選用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可以用Pfam00657共有序列進行比對(詳細描述參見 W02004/064537 或 W02004/064987)。
優選地,與pfam00657結構域家族的隱藏markov模型圖譜(HMM圖譜)的陽性匹配表明本發明的GDSL或GDSX結構域的存在。
優選地，當與Pfam00657共有序列比對時，用于本發明的方法或用途的脂質酰基轉移酶可具有至少一個，優選一個以上，優選兩個以上下列區域，⑶Sx區(block)、GANDY 區、HPT區。適宜地，脂質酰基轉移酶可具有⑶Sx區和GANDY區。可選擇地，所述酶可具有 ⑶Sx區和HPT區。優選地，所述酶至少含有⑶Sx區。
優選地，GANDY基序的殘基選自GANDY，GGNDA, GGNDL,最優選GANDY。
優選地，當與Pfam00657共有序列比對時，用于本發明方法或用途中的酶與對照嗜水氣單胞菌(A. hydrophilia)多肽序列即SEQ ID No. I比較時具有至少一個,優選一個以上，優選兩個以上，優選三個以上，優選四個以上，優選五個以上，優選六個以上，優選七個以上，優選八個以上，優選九個以上，優選十個以上，優選十一個以上，優選十二個以上，優選十三個以上，優選十四個以上下列氨基酸殘基28hid, 29hid, 30hid, 31hid, 32gly, 33Asp,34Ser,35hid,130hid,131Gly,132hid,133Asn,134Asp,135hid, 309His。
Pfam00657⑶SX結構域是將具有該區域的蛋白與其它酶區分的獨特標識。
Pfam00657共有序列，表示為

圖12的SEQ ID No. 2。這是從Pfam00657家族第6 版數據庫的鑒定衍生出來的，本文也稱其為pfam00657. 6。
共有序列可通過使用新版Pfam數據庫來更新(如參見W02004/064537或 W02004/064987)。
發現來自兩個版本(release)的數據庫的Pfam00657家族中都存在⑶Sx區、 GANDY區和HPT區。其它版本的pfam數據庫可用來鑒定pfam00657家族。
在一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可用下列標準來表征
(i)該酶具有轉移酰基的活性，其可定義為酯轉移活性，由此將脂質酰基供體的原始酯鍵上的酰基部分轉移到酰基受體上形成新酯；
(ii)該酶包含氨基酸序列基序GDSX，其中X是下列氨基酸殘基中的一種或多種L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M*S;
該酶包含His-309或包含在對應于嗜水氣單胞菌脂肪分解酶的His-309位的組氨酸殘基，所述嗜水氣單胞菌脂肪分解酶如圖11和13所示(SEQ ID No. I或SEQ ID No. 3)。
優選地，⑶SX基序的氨基酸殘基是L。
在SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I中，前18個氨基酸殘基形成信號序列。全長序列 (其為包含信號序列的蛋白質)的His-309，等同于該蛋白質成熟部分(即不含有信號序列的序列)中的His-291。
在一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶包括下列催化三聯體Ser-34，Asp-134和His-309或者包含位置分別對應于圖13 (SEQ ID No. 3)或圖11 (SEQ ID No. I)所示的嗜水氣單胞菌脂肪分解酶中Ser-34，Asp-134和His-309的絲氨酸殘基、 天冬氨酸殘基和組氨酸殘基。如上所述，在SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I所示序列中，前 18個氨基酸殘基形成信號序列。全長序列(包含信號序列的蛋白質)的Ser-34，Asp-134 和His-309,等同于蛋白質成熟部分(即不含有信號序列的序列)的Ser-16, Asp-116和 His-291。在圖12(SEQ ID No. 2)所示的Pfam00657共有序列中，活性位點殘基對應于 Ser-7, Asp-157 和 His-348。
在一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可以用下列標準來表征
(i)該酶具有轉移酰基的活性，其可定義為酯轉移活性，由此將第一脂質酰基供體原始酯鍵上的酰基部分轉移到酰基受體形成新酯；并且
(ii)該酶包含至少 Gly-32，Asp-33, Ser-34, Asp-134 和 His-309 或者包含位置分別對應于圖13 (SEQ ID No. 3)或圖11 (SEQ ID No. I)所示的嗜水氣單胞菌脂肪分解酶中 Gly-32, Asp-33, Ser-34, Asp-134和His-309的甘氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、天冬氨酸和組氨酸。
合適地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶包含下列氨基酸序列中的一種或多種。
(i)SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列(見圖13)
(ii)SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列(見圖14)
(iii) SEQ ID No. 5所示的氨基酸序列(見圖15)
(iv)SEQ ID No. 6所示的氨基酸序列(見圖16)
(V)SEQ ID No. 7所示的氨基酸序列(見圖17)
(vi)SEQ ID No. 8所示的氨基酸序列(見圖18)
(vii) SEQ ID No. 9所不的氣基酸序列(圖9)
(viii)SEQ ID No. 10所示的氨基酸序列(圖10)
(ix) SEQ ID No. 11所示的氨基酸序列(圖21)
(X)SEQ ID No. 12所示的氨基酸序列(圖22)
(Xi)SEQ ID No. 13所示的氨基酸序列(圖23)
(xii)SEQ ID No. 14所示的氨基酸序列(圖24)
(xiii)SEQ ID No. I所示的氨基酸序列(圖11)
(xiv)SEQ ID No. 15所示的氨基酸序列(圖25)或
與SEQ ID No. 1，SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. 5，SEQ ID No. 6，SEQ ID No. 7，SEQ ID No. 8，SEQ ID No. 9，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14，SEQ ID No. 15所示序列中的任一個具有75%或者更高同一性的氨基酸序列。
合適地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶包含如SEQ ID No. 3或如SEQ ID No. 4或SEQ ID No. I或SEQ ID No. 15所示的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列或SEQ ID No. I所示的氨基酸序列或 SEQ ID No. 15所示的氨基酸序列具有75%或以上，優選80%或以上，優選85%或以上，優選90%或以上，優選95%或以上同一性的氨基酸序列。
合適地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶包含一段氨基酸序列，該序列與 SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. 5，SEQ ID No. 6，SEQ ID No. 7，SEQ ID No. 8， SEQ ID No. 9，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14， SEQ ID No. 1,SEQ ID No. 15所示序列中的任一個具有80%或以上，優選85%或以上，更優選90%或以上，還更優選95%或以上的同一性。
合適地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶包含下列氨基酸序列中的一個或多個
(a)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的1_100氨基酸殘基所示的氨基酸序列；
(b)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的101-200氨基酸殘基所示的氨基酸序列；
(c)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的201-300氨基酸殘基所示的氨基酸序列；或
(d)與上述(a)-(c)定義的氨基酸序列中的任一個具有75%或75%以上，優選 85 %或85 %以上，更優選90 %或90 %以上，還更優選95%或95 %以上同一性的氨基酸序列。
合適地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶包含下列氨基酸序列中的一個或多個
(a)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的氨基酸殘基28_39所示的氨基酸序列；
(b)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的氨基酸殘基77_88所示的氨基酸序列；
(c)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的氨基酸殘基126-136所示的氨基酸序列；
(d)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的氨基酸殘基163-175所示的氨基酸序列；
(e)如SEQ ID No. 3或SEQ ID No. I的氨基酸殘基304-311所示的氨基酸序列；或
(f)與上述(a)-(e)定義的氨基酸序列中任一個具有75%或75%以上，優選85% 或85%以上，更優選90%或90%以上，還更優選95%或95%以上同一性的氨基酸序列。
在一個方面中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可以是如EP 1275711 中教導的來自近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)的脂質酰基轉移酶。因此在一個方面用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為含有SEQ ID No. 17 (圖28)或SEQ ID No. 18 (圖29)教導的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
更優選地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為含有SEQ ID No. 16所示氨基酸序列的脂質酰基轉移酶(圖10)，或與SEQ ID No. 16具有75%或更多，優選85%或更多，更優選90 %或更多，還更優選95 %或更多，還更優選98 %或更多，還更優選99 %或更多同源性的氨基酸序列。該酶可以被認為是變體酶。
在一個方面中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可以為卵磷脂膽固醇酰基轉移酶(LCAT)或其變體(例如通過分子進化產生的變體)。
合適的LCAT是本領域公知的，并可從下列一種或多種生物體中得到，例如哺乳動物、大鼠、小鼠、鳥(chickens)、黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)、植物,包括擬南芥 (Arabidopsis)和稻(Oryza sativa)、線蟲、真菌和酵母。
在一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為可從并優選從含有pPetl2aAhydro和pPetl2aASalmo的大腸桿菌(E. coli)菌株T0P10中獲得，該菌株由 Langebrogade I, DK-1001 Copenhagen K, Denmark 的 Danisco A/S,根據布達佩斯條約關于用于專利程序的國際認可的微生物保藏(the Buddapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the purpose of Patent Procedure)在2003年12月22日保藏于英國蘇格蘭阿伯丁圣馬恰爾街23號國立工業、海洋和食品細菌保藏中心(NCIMB) (the National Collection of Industrial,Marine and Food Bacteria (NCIMB) 23St. Machar Street, Aberdeen Scotland, GB),登錄號分別為 NCIMB41204 和 NCIMB 41205。
高度優選用于本發明方法的脂質酰基轉移酶包括分離自氣單胞菌屬(Aeromonas spp.)，優選嗜水氣單胞菌或殺鮭氣單胞菌，最優選殺鮭氣單胞菌。最優選用于本發明的脂質酰基轉移酶由SEQ ID Nos 1，3，4，15，16編碼。本領域技術人員公知優選該酰基轉移酶的信號肽在轉移酶表達過程中被切割。SEQ ID 1，3，4，15和16的信號肽是氨基酸1-18。因此對于SEQ ID No I和SEQ ID No 3 (嗜水氣單胞菌)最優選的區域是氨基酸19-335，對于SEQ ID No 4, SEQ ID No 15和SEQ ID No 16 (殺鮭氣單胞菌)最優選的區域是19-336。 當用于測定氨基酸序列的同一性的同源性時，優選如本文所述使用成熟序列進行比對。
因此用于測定同源性(同一性)時，對于SEQ ID No I和3(嗜水氣單胞菌)最優選的區域是氨基酸19-335，對于SEQ ID No 4，15和16 (殺鮭氣單胞菌)最優選的區域是 19-336。SEQ ID 34和35是高度優選的、分別來自嗜水氣單胞菌和殺鮭氣單胞菌的脂質酰基轉移酶的成熟蛋白質序列。
用于本發明的脂質酰基轉移酶也可以分離自Thermobifida,優選T. fusca,最優選由SEQ ID No 28編碼。
用于本發明的脂質酰基轉移酶也可以分離自鏈霉菌屬(Streptomyces),優選S.avermitis，最優選由SEQ ID No. 32編碼。其它可用于本發明的酶來自鏈霉菌屬，包括由 SEQ ID Nos 5，6，9，10，11，12，13，14，31，33 編碼的那些。實施例表明由 SEQ ID No. 33 編碼的酶在酶脫膠過程中非常有效。
用于本發明的脂質酰基轉移酶也可以分離自棒桿菌屬(Cornebacterium),優選 C. efficiens，最優選由 SEQ ID No. 29 編碼。
合適地，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可以是含有如下序列的脂質酰基轉移酶如SEQ ID Nos 37，38，40，41，43，45，或47所示氨基酸序列中的任一個，或與其具有至少70%，75%，80%，85%，90%，95%，96%，97%或98%同源性的氨基酸序列，或由 SEQ ID Nos 36，39，42，44，46，或48所示核苷酸序列中的任一個或者與其具有至少70%， 75%，80%，85%，90%，95%，96%，97%或98%同源性的核苷酸序列編碼。
優選地，用于本發明的方法和用途的脂質酰基轉移酶是能水解至少半乳糖脂和/或能將酰基從至少半乳糖脂轉移到一種或多種酰基受體底物的脂質酰基轉移酶，其中所述酶可從，優選從鏈霉菌屬菌種獲得。
在一個實施方案中，用于本發明的方法和用途的脂質酰基轉移酶優選為能夠水解至少半乳糖脂和/或能夠將酰基從至少半乳糖脂轉移到一種或多種酰基受體底物的脂質酰基轉移酶，其中所述酶是由選自下組的核酸編碼
a)含有SEQ ID No. 36所不核苷酸序列的核酸；
b)依據遺傳密碼簡并性與SEQ ID No. 36的核苷酸序列相關的核酸；和
c)含有與SEQ ID No. 36所不核苷酸序列具有至少70%同一丨丨生的核苷酸序列的核酸。
在一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶優選為含有SEQ ID No. 37所示氨基酸序列或與其具有至少60%同一性的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
在另一個實施方案中，用于本發明的方法和用途的脂質酰基轉移酶優選為能夠水解至少半乳糖脂和/或能夠將酰基從至少另一半乳糖脂轉移到另一或多種酰基受體底物的脂質酰基轉移酶，其中所述酶含有SEQ ID No. 37所示氨基酸序列或與其具有至少60%同一性的氨基酸序列。
優選地，用于本發明的方法和用途的脂質酰基轉移酶是能夠水解至少半乳糖脂和 /或能夠將酰基從至少半乳糖脂轉移到一種或多種酰基受體底物的脂肪分解酶，其中所述酶可從，優選從thermobifida菌種，優選Thermobifida fusca獲得。
優選地，用于本發明的方法和用途的脂質酰基轉移酶是能夠水解至少半乳糖脂和 /或能夠將酰基從至少半乳糖脂轉移到一種或多種酰基受體底物的脂肪分解酶，其中所述酶可從，優選獲自棒桿菌菌種，優選Corynebacterium efficiens。
在另一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為含有如下序列的脂質酰基轉移酶如SEQ ID Nos 37，38，40，41，43，45或47所示氨基酸序列中的任一個，或與其具有至少70%，75%，80%，85%，90%，95%，96%，97%或98%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID Nos 39,42,44,46或48所示核苷酸序列中的任一個或與其具有至少 70%，75%，80%，85%，90%，95%，96%，97%或 98% 同一性的核苷酸序列編碼。
在另一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為用于本文所述用途的含有SEQ ID No 38，40，41，45或47所示氨基酸序列中的任一個或與其具有至少 70%，75%，80%，85%，90%，95%，96%，97%或98%同一性的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
在另一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為用于本文所述用途的含有SEQ ID No 38，40，或47所示氨基酸序列中的任一個或與其具有至少70%， 75 %，80 %，85 %，90 %，95 %，96 %，97 %或98 %同一性的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
更優選在一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為含有 SEQ ID No. 47所示氨基酸序列或與其具有至少70%，75%，80%，85%，90%，95%，96%， 97%或98%同一性的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
在另一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為含有SEQ ID No. 43或44所示氨基酸序列或與其具有至少80 %，85 %，90 %，95 %，96 %，97 %或98 %同一性的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
在另一個實施方案中，用于本發明方法和用途的脂質酰基轉移酶可為含有SEQ ID No. 41所示氨基酸序列或與其具有至少70 %，75 %，80 %，85 %，90 %，95 %，96 %，97 %或 98%同一性的氨基酸序列的脂質酰基轉移酶。
在一個實施方案中，用于本發明的方法和用途的脂質酰基轉移酶可為能夠水解至少半乳糖脂和/或能夠將酰基從至少半乳糖脂轉移到一種或多種酰基受體底物的脂質酰基轉移酶，其中所述酶可由選自下組的核酸編碼
a)含有SEQ ID No. 36所示核苷酸序列的核酸；
b)依據遺傳密碼簡并性與SEQ ID No. 36的核苷酸序列相關的核酸；和
c)含有與SEQ ID No. 36所不核苷酸序列具有至少70%同一丨丨生的核苷酸序列的核酸。
在一個實施方案中，本發明的脂質酰基轉移酶是可從，優選從鏈霉菌屬菌株 L130或L131獲得的脂質酰基轉移酶,該菌株由Langebrogade I, DK-IOOlCopenhagen K, Denmark的Danisco A/S,根據布達佩斯條約關于用于專利程序的國際認可的微生物保藏(the Buddapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the purpose of Patent Procedure)在 2004 年 6 月 23 日保藏于國立工業、海洋和食品微生物保藏中心(NCIMB) (23St. Machar Street, Aberdeen Scotland, GB)，登錄號分別為 NCIMB 41226 和 NCMB 41227。
適用于本發明和/或本發明所述方法的脂質酰基轉移酶可以包含下列氨基酸序列中的任一個和/或由下列核苷酸序列編碼
編碼本發明脂質酰基轉移酶的多核苷酸(SEQ ID No 16)；
本發明的脂質酰基轉移酶的氨基酸序列(SEQ ID No 17)；
適用于本發明方法的脂質酰基轉移酶還可通過使用采用默認設定的Align X， VectorNTI的Clustal W配對比對算法與L131 (SEQ ID No. 37)序列進行比對而鑒定。
L131和來自除蟲鏈霉菌(S. avermitilis)和T. fusca的同源物的比對說明了 ⑶Sx基序(在L131和除蟲鏈霉菌和T. fusca中的⑶SY)，GANDY盒，其為GGNDA或GGNDL， 以及HPT區(認為是保守的催化組氨酸(histadine))的保守性。這些三個保守區在圖61 中關出顯不。
當與pfam Pfam00657共有序列(如W004/064987所述)和/或本文公開的L131 序列(SEQ ID No 37)比對時，可以鑒定三個保守區域，⑶Sx區，GANDY區和HTP區(進一步詳述參見 W004/064987)。
當與pfam Pfam00657共有序列(如W004/064987所述)和/或本文公開的L131 序列(SEQ ID No 37)比對時，
i)本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法的脂質酰基轉移酶，優選具有 ⑶Sx基序，更優選⑶Sx基序選自⑶SL或⑶SY基序。
和/或
ii)本發明的脂質酰基轉移酶或用于本發明方法的脂質酰基轉移酶，優選具有 GANDY區，更優選GANDY區含有氨基GGNDx，更優選GGNDA或GGNDL。
和/或
iii)本發明的酶或用于本發明方法的酶具有優選的HTP區。
并優選地
本發明的或用于本發明方法的半乳糖脂酶/脂質酰基轉移酶優選具有GDSx或 ⑶SY基序，及含有氨基GGNDx的GANDY區，優選GGNDA或GGNDL，及HTP區(保守組氨酸)。
合適地，當用于本發明方法或用途的脂質酰基轉移酶可為變體脂質酰基轉移酶， 在這樣情況下該酶的特征在于所述的酶包含氨基酸序列基序GDSX，其中X是以下氨基酸殘基中的一個或多個L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M或S，其中該變體酶與親本序列相比較，在組2或組4或組6或組7 (在下文定義)中定義的任何一個或多個氨基酸殘基上包含一種或多種氨基酸修飾。
例如，用于本發明方法或用途的脂質酰基轉移酶變體的特征可在于該酶包含氨基酸序列基序⑶SX，其中X是以下氨基酸殘基中的一個或多個L，A, V，I，F，Y，H，Q，T，N， M或S，并且其中所述變體酶與親本序列相比，在組2或組4或組6或組7 (在下文定義)中詳述的任何一個或多個氨基酸殘基上包含一種或多種氨基酸修飾，所述修飾通過將所述親本序列與本文定義的P10480的結構模型進行比對來鑒定，其優選通過將P10480的晶體結構坐標與本文教導的IIVN. PDB和/或1DE0. PDB進行結構比對來獲得。
在進一步的實施方案中，用于本發明方法或用途的變體脂質酰基轉移酶的特征可在于該酶包含氨基酸序列基序⑶SX，其中X是以下氨基酸殘基中的一個或多個L，A, V，I， F，Y，H，Q，T，N，M或S，并且其中所述變體酶與親本序列相比，在組2教導中的任何一個或多個氨基酸殘基上包含一種或多種氨基酸修飾，所述修飾在將所述親本序列與Pfam共有序列(SEQ ID No. 2-圖12)進行對比時被鑒定并且根據P10480的結構模型來修飾以保證最優擬合重疊(best fit overlap)(參見圖30),如本文所述。
合適地，變體脂質酰基轉移酶可包含氨基酸序列，該氨基酸序列如SEQ ID No. 34， SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. 5，SEQ ID No. 6，SEQ ID No. 7，SEQ ID No. 8，SEQ ID No. 19，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14，SEQ ID No. 1，SEQ ID No. 15，SEQ ID No. 25，SEQ ID No. 26，SEQ ID No. 27，SEQ ID No. 28，SEQ ID No. 29，SEQ ID No. 30，，SEQ ID No. 32，或 SEQ ID No. 33 所示，除了在組 2 或組 4 或組 6 或組7 (在下文定義)中定義的任何一個或多個氨基酸殘基上包含一種或多種氨基酸修飾， 所述修飾通過與SEQ ID No. 34進行序列比對來鑒定。
可選地，變體脂質酰基轉移酶可包含氨基酸序列，該氨基酸序列如SEQ ID No. 34， SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. 5，SEQ ID No. 6，SEQ ID No. 7，SEQ ID No. 8，SEQ ID No. 19，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14，SEQ ID No. I, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29，SEQ ID No. 30，，SEQ ID No. 32，或 SEQ ID No. 33 所示，除了在組 2 或組 4 或組 6 或組7定義的任何一個或多個氨基酸殘基上包含一種或多種氨基酸修飾，所述修飾通過將所述親本序列與本文定義的P10480結構模型進行結構比對來鑒定，其優選地通過將P10480 晶體結構坐標與如本文教導的I IVN. PDB和/或1DE0. PDB進行結構比對而獲得。
可選擇地，變體脂質酰基轉移酶可包含氨基酸序列，該氨基酸序列如SEQ ID No. 34，SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. 5，SEQ ID No. 6，SEQ IDNo. 7，SEQ ID No. 8， SEQ ID No. 19，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14， SEQ ID No. 1，SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 25，SEQ ID No. 26，SEQ ID No. 27，SEQ ID No. 28,SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30，，SEQ ID No. 32，或 SEQ ID No. 33 所示，除了在組 2 教導的任何一個或多個氨基酸殘基上包含一種或多種氨基酸修飾，所述修飾在將所述親本序列與 pfam共有序列(SEQ ID No. 2)進行對比時被鑒定，并且根據P10480的結構模型來修飾以保證最優擬合重疊(參見圖30)，如在下文所教導的。
本文所用術語“修飾”指添加，取代和/或缺失。優選術語“修飾”指“取代”。
為了免除懷疑，當親本酶中的氨基酸被取代時，優選用與親本酶中該位置初始存在的氨基酸不同的氨基酸進行取代，由此產生變體酶。換句話說，術語“取代”的意思不包括用同樣的氨基酸進行氨基酸替換。
優選地，該親本酶是包含SEQ ID No. 34和/或SEQ ID No. 15和/或SEQ ID No. 35 所示的氨基酸序列的酶。
優選地，該變體酶是包含氨基酸序列的酶，所述氨基酸序列如SEQ ID No. 34或SEQ ID No. 35所示，除了在組2或組4或組6或組7中定義的任何一個或多個氨基酸殘基處的一種或多種氨基酸修飾。
在一個實施方案中，優選該變體酶與親本序列相比在組4中定義的至少一個氨基酸殘基處包含一種或多種氨基酸修飾。
合適地，與親本酶相比較，該酶變體包含一種或多種下述氨基酸修飾
S3E，A, G，K，M，Y，R，P，N，T 或 G
E309Q，R 或 A，優選 Q 或 R
-318Y，H，S 或 Y，優選 Y。
優選地，⑶SX基序的X是L。所以，優選親本酶包含氨基酸基序⑶SL。
優選地，制備脂質酰基轉移酶變體的方法進一步包含下述的一個或多個步驟
I)結構同源性作圖或
2)序列同源性比對。
合適地，結構同源性作圖可包括下述的一個或多個步驟
i)將親本序列與圖46所示的結構模型(1IVN. PDB)進行比對；
ii)在活性位點上以甘油分子的中心碳原子為圓心在IOA范圍內選擇一個或多個氨基酸殘基(參見圖47)(例如在組I或組2中定義的一個或多個氨基酸殘基)；和
iii)在親本序列中修飾根據步驟(ii)選擇的一個或多個氨基酸。
在一個實施方案中，所選擇的氨基酸殘基可位于活性位點中以甘油分子的中心碳原子為圓心的9人以內，優選在8，7，6，5，4，或3人范圍以內(參見圖47)。
合適地，結構同源性作圖可包括下述的一個或多個步驟
i)將親本序列與圖46所示的結構模型(1IVN. PDB)進行比對；
ii)在活性位點上以甘油分子的中心碳原子為圓心在IOA范圍內選擇一個或多個氨基酸殘基(參見圖47)(例如在組I或組2中定義的一個或多個氨基酸殘基)；和
iii)確定根據步驟(ii)所選擇的一個或多個氨基酸殘基是否是高度保守的(具體為是否是活性位點殘基和/或部分GSDx基序和/或部分GANDY基序)；以及
iv)在所述親本序列中修飾根據步驟(ii)選擇的一個或多個氨基酸，其不包括根據步驟(iii)鑒定的保守區域。
在一個實施方案中，選擇的氨基酸殘基可以位于以活性位點中甘油分子的中央碳原子為中心的9人以內，優選8，7，6，5，4或3A范圍以內(參見圖47)。
二中擇一地，或與上述的結構同源性作圖相結合，結構同源性作圖可如下進行選擇來源于Pfam比對(比對2，圖48)用P10480模型及IIVN覆蓋的特異性環狀區(LRs)或插入區(IVRs)。下面表中定義了環狀區(LRs)或插入區(IVRs)
權利要求
1.一種食用油的酶脫膠方法，包括用脂質酰基轉移酶處理該食用油從而將大部分磷脂的酰基轉移到一種或多種酰基受體上，其中所述酰基受體是一種或多種固醇和/或甾烷醇，所述脂質酰基轉移酶分類為E. C. 2. 3. I. X，且所述脂質酰基轉移酶具有定義為酯轉移活性的酰基轉移酶活性，由此將脂質酰基供體的原始酯鍵上的酰基部分轉移到酰基受體上形成新酯。
2.權利要求I的方法，其中形成了固醇酯和/或留烷醇酯。
3.權利要求I或2的方法，其中所述酰基受體是固醇。
4.前述權利要求中任一項的方法，其中所述磷脂是卵磷脂。
5.前述權利要求中任一項的方法，其中所述脂質酰基轉移酶是天然脂質酰基轉移酶。
6.權利要求1-4中任一項的方法，其中所述脂質酰基轉移酶是變體脂質酰基轉移酶。
7.前述權利要求中任一項的方法，其中所述脂質酰基轉移酶可從來自下列一個或多個屬的生物體中獲得氣單胞菌屬、鏈霉菌屬、酵母屬、乳球菌屬、分枝桿菌屬、鏈球菌屬、乳桿囷屬、脫亞硫Ife囷屬、牙抱桿囷屬、彎曲桿囷屬、弧囷科、木桿囷屬、硫化葉囷屬、曲霉屬、裂殖酵母屬、李斯戎氏菌屬、奈瑟氏球菌屬、Mesorhizobium、Ralstonia、黃單胞菌屬、假絲酵母屬、Thermobifida和棒桿菌屬。
8.前述權利要求中任一項的方法，其中所述脂質酰基轉移酶可從下列一種或多種獲得嗜水氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、天藍色鏈霉菌、龜裂鏈霉菌、Streptomyces thermosacchari、除蟲鏈霉菌、分枝桿菌屬、釀膿鏈球菌、乳酸乳球菌、釀膿鏈球菌、嗜熱鏈球菌、瑞士乳桿菌、脫鹵脫亞硫酸菌、芽孢桿菌、空腸彎曲桿菌、弧菌科、苛養木桿菌、硫磺礦硫化葉菌、釀酒酵母、土曲霉、粟酒裂殖酵母、無害李斯忒氏菌、單核細胞增生李斯忒氏菌、 腦膜炎奈瑟氏球菌、Mesorhizobium loti、Ralstonia solanacearum、野油菜黃單胞菌、地經草黃單胞菌、近平滑假絲酵母、Thermobifida fusca 和 Corynebacterium efficiens。
9.前述權利要求中任一項的方法，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. I, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7，SEQ ID No. 8，SEQ ID No. 9，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14 或 SEQ ID No. 15，SEQ ID No. 16，SEQ ID No. 17，SEQ ID No. 18，SEQ ID No. 36，SEQ ID No. 38，SEQ ID No. 40，SEQ ID No. 41，SEQ ID No. 45，SEQ ID No. 47 和 SEQ ID No. 50。
10.權利要求9的方法，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. I 和 SEQ ID No. 15。
11.權利要求9的方法，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. 36，SEQ ID No. 38，SEQ ID No. 40，SEQ ID No. 41，SEQ ID No. 45，SEQ ID No. 47 和 SEQ ID No. 50。
12.權利要求9的方法，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. 17 和 SEQ ID No. 18。
13.權利要求9的方法，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為SEQID No. 16。
14.前述權利要求中任一項的方法，其中在處理過程中所述食用油中有少于1%的水。
15.權利要求14的方法，其中有少于0.6%的水。
16.權利要求15的方法，其中不含水。
17.前述權利要求中任一項的方法，其中該方法包括通過過濾去除由脂質酰基轉移酶的作用而生成的溶血磷脂。
18.脂質酰基轉移酶的用途，所述用途用于在食用油中脫膠以去除磷脂，并增加該油中固醇酯和/或留烷醇酯的形成，所述脂質酰基轉移酶分類為E. C. 2. 3. I. X，且所述脂質酰基轉移酶具有定義為酯轉移活性的酰基轉移酶活性，由此將脂質酰基供體的原始酯鍵上的酰基部分轉移到酰基受體上形成新酯。
19.權利要求18的用途，其中處理后油中的游離脂肪酸沒有顯著增加。
20.權利要求18或19的用途，其中所述磷脂是卵磷脂。
21.權利要求18-20中任一項的用途，其中所述脂質酰基轉移酶是天然脂質酰基轉移酶。
22.權利要求18-20中任一項的用途，其中所述脂質酰基轉移酶是變體脂質酰基轉移酶。
23.權利要求18-22中任一項的用途，其中所述脂質酰基轉移酶可從來自下列一個或多個屬的生物體中獲得氣單胞菌屬、鏈霉菌屬、酵母屬、乳球菌屬、分枝桿菌屬、鏈球菌屬、 乳桿囷屬、脫亞硫Ife囷屬、牙抱桿囷屬、彎曲桿囷屬、弧囷科、木桿囷屬、硫化葉囷屬、曲霉屬、裂殖酵母屬、李斯戎氏菌屬、奈瑟氏球菌屬、Mesorhizobium、Ralstonia、黃桿菌屬、假絲酵母屬、Thermobifida和棒桿菌屬。
24.權利要求18-23中任一項的用途，其中所述脂質酰基轉移酶可從下列一種或多種獲得嗜水氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、天藍色鏈霉菌、龜裂鏈霉菌 Streptomyces thermosacchari、除蟲鏈霉菌、分枝桿菌屬、釀膿鏈球菌、乳酸乳球菌、釀膿鏈球菌、嗜熱鏈球菌、瑞士乳桿菌、脫鹵脫亞硫酸菌、芽孢桿菌、空腸彎曲桿菌、弧菌科、苛養木桿菌、硫磺礦硫化葉菌、釀酒酵母、土曲霉、粟酒裂殖酵母、無害李斯忒氏菌、單核細胞增生李斯忒氏菌、 腦膜炎奈瑟氏球菌、Mesorhizobium loti、Ralstonia solanacearum、野油菜黃單胞菌、地經草黃單胞菌、近平滑假絲酵母、Thermobifida fusca 和 Corynebacterium efficiens。
25.權利要求18-24中任一項的用途，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. I, SEQ ID No. 3,SEQ ID No. 4,SEQ ID No. 5,SEQ ID No. 6， SEQ ID No. 7，SEQ ID No. 8，SEQ ID No. 9，SEQ ID No. 10，SEQ ID No. 11，SEQ ID No. 12，SEQ ID No. 13，SEQ ID No. 14 或 SEQ ID No. 15，SEQ ID No. 16，SEQ ID No. 17，SEQ ID No. 18， SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 38,SEQ ID No. 40,SEQ ID No. 41,SEQ ID No. 45,SEQ ID No. 47 和 SEQ ID No. 50。
26.權利要求25的用途，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. I 和 SEQ ID No. 15。
27.權利要求25的用途，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. 36，SEQ ID No. 38，SEQ ID No. 40，SEQ ID No. 41，SEQ ID No. 45，SEQ ID No. 47 和 SEQ ID No. 50。
28.權利要求25的用途，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示中的一種或多種SEQ ID No. 17 和 SEQ ID No. 18。
29.權利要求25的用途，其中所述脂質酰基轉移酶的氨基酸序列為SEQIDNo. 16。
30.權利要求18-29中任一項的用途，其中在處理過程中所述食用油中有少于1%的
31.權利要求30的用途，其中有少于0.6%的水。
32.權利要求31的用途，其中不含水。
33.脂質酰基轉移酶，其氨基酸序列如SEQID No. 16所示。
34.經酶脫膠的食用油，其由權利要求1-17中任一項所述的方法獲得。
全文摘要
本發明提供了食用油的酶脫膠方法，包括用脂質酰基轉移酶處理該食用油，從而將酰基基團從大部分磷脂轉移到一種或多種酰基受體，其中所述酰基受體是一種或多種固醇和/或甾烷醇。當該酰基受體是固醇和/或甾烷醇時，會形成酯。用于本發明方法的脂類酰基轉移酶的氨基酸序列為如下所示的一種或多種SEQ ID No 1，SEQ ID No 3，SEQ ID No 4，SEQ ID No 5，SEQ ID No 6，SEQ ID No 7，SEQ ID No 8，SEQ ID No 9，SEQ ID No 10，SEQ ID No 11，SEQ ID No 12，SEQ ID No 13，SEQ ID No 14或SEQ ID No 15，SEQ ID No 16，SEQ ID No 17，SEQ ID No 18，SEQ ID No 36，SEQ ID No 38，SEQ ID No 40，SEQ ID No 41，SEQ ID No 45，SEQ ID No 47，SEQ ID No 50。還教導了一種新型脂類酰基轉移酶，其具有SEQ ID No 16所示氨基酸序列。本發明還涉及由本發明的酶脫膠方法獲得的食用油。
文檔編號C11C3/00GK102533440SQ201110462189
公開日2012年7月4日 申請日期2005年7月18日 優先權日2004年7月16日
發明者喬恩·B·索, 馬克·特納 申請人:丹尼斯科公司