專利名稱：一種用固定化磷脂酶c脫膠的方法
技術領域：
本發明涉及一種固定化磷脂酶C脫膠的方法。
背景技術：
在油脂加工工業中，油脂脫膠一直是人們關注的焦點之一，脫膠就是脫除油中的膠溶性雜質，主要成分是磷脂。磷脂主要分為水化磷脂和非水化磷脂，水化磷脂可通過傳統的水化脫膠方法除去，但非水化磷脂具有顯著的疏水性，很難脫除。而傳統的脫膠方法主要有水化脫膠、酸煉脫膠、吸附脫膠、電聚法脫膠、熱凝聚脫膠、超級脫膠、特殊濕法脫膠、超濾脫膠和酶法脫膠用來處理毛油，降低毛油中膠溶性雜質含量的方法。通常來說，每種方法都有其自身的特點和使用范圍，根據不同的油脂精煉工藝要求、生產設備投入、環境等因素，選取最適合要求的脫膠方法。在這些脫膠工藝中，酶法脫膠以其良好的經濟環保性能受到 越來越多的重視。酶法脫膠是油脂精煉的一項高新技術，該技術在提高油脂工業的經濟效益和環保效益方面具有巨大的應用價值。傳統的酶法脫膠是水解磷脂的脂肪酸鏈而生成溶血性磷脂，可以通過水化的方法除去。因此，磷脂酶脫膠是油脂脫膠的一種新方法，同傳統的脫膠方法相比，酶法脫膠可大大節約化學物質的消耗量，幾乎不產生廢水，在環保、經濟、質量等方面具有潛在的優勢。而磷脂酶c (PLC)卻能特異性水解磷酸基與甘油基之間的磷氧鍵，生成甘油二酯，甘油二酯溶于油中成為食用油的一部分；因此，采用磷脂酶C脫膠，不僅能實現物理精煉，還可提高脫膠油的得率。
發明內容
本發明是針對游離酶混溶在反應體系中不僅不易分離回收，而且酶的制取一般較困難，且成本高昂，難以反復或連續使，且油脂中磷脂主要分為水化磷脂和非水化磷脂，水化磷脂可通過傳統的水化脫膠方法除去，但非水化磷脂具有顯著的疏水性，很難脫除等問題，而提出的用固定化磷脂酶C來進行脫膠的方法。用固定化磷脂酶C來進行脫膠的方法通過以下步驟實現一、磷脂酶C的固定化。二、固定化磷脂酶C脫膠。利用固定化磷脂酶C脫膠中，固定化酶具有重復使用的作用，提高了酶在反應體系中的活性和穩定性，從而有利于酶的回收，由于磷脂酶c (PLC)能特異性水解磷酸基與甘油基之間的磷氧鍵，生成甘油二酯，甘油二酯溶于油中成為食用油的一部分；因此，采用磷脂酶C脫膠，既能實現物理精煉，又可提高脫膠油的得率。
具體實施例方式具體實施方式
一一種固定化磷脂酶C脫膠的方法通過以下步驟實現一、磷脂酶C的固定化首先稱取一定量的海藻酸鈉于40°C水浴保溫溶解，同時稱取一定量的殼聚糖于5%的醋酸溶液中，40°C水浴保溫溶解，再向完全溶解的殼聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaC12溶液，充分混勻。稱取一定量的磷脂酶C，加入到10 mL海藻酸鈉溶液中，攪拌均勻，靜置一段時間，用滅菌后的注射器吸取混合液，以約5滴/s的速度注入殼聚糖醋酸溶液、CaC12混合溶液中，以180 r/min轉速攪拌，將其置于4°C環境固定化10 h ;二、固定化酶脫膠取水化大豆油300 g，預熱至75°C，加入45%檸檬酸O. 6 mL混合攪拌維持30 min。冷卻至溫度為3(T40°C左右，加入4mol/L NaOH溶液和一定量的蒸餾水混合均勻，然后取一定量的固定化磷脂酶加入大豆油中，60 r/min機械攪拌，在溫度50°C下水浴反應一段時間，取樣測定脫膠油磷含量。得到脫膠后的大豆毛油磷含量為3. 8mg/kg，磷脂酶C脫膠后的油脂得率增長I. 2倍。并確定了固定化磷脂酶C連續用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結果酶活力仍保持在80%左右。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將油相中起始PH值為5. 5 8. O的條件下進行固定化磷脂酶C對大豆油脫膠其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將油相中起始PH值為5. 5 8. 0，反應時間30 90min的條件下，進行固定化磷脂酶C對大豆油脫 膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將油相中起始PH值為5. 5 8. 0，反應時間30 90min，反應溫度為35 65°C的條件下，進行固定化磷脂酶C對大豆油脫膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將油相中起始pH值為5. 5 8. O,反應時間30 90min，反應溫度為35 65°C，固定化酶添加量
O.01% O. 09%的條件下，進行固定化磷脂酶C對大豆油脫膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將由單因素確定的結果再進一步優化得到固定化條件，優化的固定化條件為油相中起始PH值為6. O 8. 0，反應時間40 80min，反應溫度為40 60°C，固定化酶添加量O. 02% O. 06%,用優化結果進行固定化磷脂酶C對大豆油脫膠。在最優狀態下磷含量最低3. 8mg/kg。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將固定化酶脫膠后的油脂得率與常規酶法脫膠后油脂得率進行比較，得到固定化磷脂酶C脫膠后的油脂得率增長I. 2倍。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟二中將固定化磷脂酶C連續用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結果酶活力仍保持在80%左右。
權利要求
1.一種用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法通過以下步驟實現一、磷脂酶C的固定化首先稱取一定量的海藻酸鈉于40°C水浴保溫溶解；同時稱取一定量的殼聚糖于5%的醋酸溶液中，40°C水浴保溫溶解；再向溶解的殼聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl2溶液，混勻；稱取一定量的磷脂酶C，加入到10 mL海藻酸鈉溶液中，攪拌均勻，靜置一段時間，用滅菌后的注射器吸取混合液，以約5滴/s的速度注入殼聚糖醋酸溶液、CaCl2混合溶液中，以180 r/min轉速攪拌，將其置于4°C環境固定化10 h ;二、固定化酶脫膠取水化大豆毛油300 g，預熱至75°C，加入45%檸檬酸0. 6 mL混合攪拌維持30 min ;冷卻至溫度為3(T40°C左右，加入4mol/L NaOH溶液和一定量的蒸餾水混合均勻，然后取一定量的固定化磷脂酶加入大豆毛油中，60 r/min機械攪拌，在溫度50°C下水浴反應一段時間；得到脫膠后的大豆毛油磷含量為3. 8mg/kg，磷脂酶C脫膠后的油脂得率增長I. 2倍；并確定了固定化磷脂酶C連續用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結果酶活力仍保持在80%左右。
2.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟四中將油相中起始PH值為5. 5 8. 0的條件下進行固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠。
3.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中油相中起始PH值為5. 5 8. 0，反應時間30 90min的條件下，進行固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠。
4.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中油相中起始PH值為5. 5 8. 0，反應時間30 90min，反應溫度為35 65°C的條件下，進行固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠。
5.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中油相中起始PH值為5. 5 8. 0，反應時間30 90min，反應溫度為35 65°C，固定化酶添加量0. 01% 0. 09%的條件下，進行固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠。
6.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中固定化酶脫膠條件進行進一步確定，結果為油相中起始PH值為6. 0 8. 0，反應時間40 80min，反應溫度為40 60°C，固定化酶添加量0. 02% 0. 06%，用優化結果進行固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠。
7.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中將固定化酶脫膠后的油脂得率與常規酶法脫膠后油脂得率進行比較，得到固定化磷脂酶C脫膠后的油脂得率增長I. 2倍。
8.根據權利要求I所述的用固定化磷脂酶C對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中將固定化磷脂酶C連續用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結果酶活力仍保持在80%左右。
全文摘要
本發明提供一種用固定化磷脂酶C(PLC)對大豆毛油脫膠的方法。由于游離磷脂酶C能特異性水解磷酸基與甘油基之間的磷氧鍵，生成甘油二酯，甘油二酯溶于油中成為食用油的一部分，可以提高脫膠油的得率。但是由于自然酶混溶在反應體系中不僅不易分離回收，且成本高昂，難以反復或連續使用，因此，將固定化后的磷脂酶C添加到大豆毛油中，進行脫膠。對脫膠后磷含量、油脂得率及固定化磷脂酶C的重復使用次數的確定，得到脫膠后磷含量最低為3.8mg/kg，且油脂得率提高1.2倍，磷脂酶C連續使用6個批次后固定化酶相對活力仍保持在80％左右。因此，采用固定化后的磷脂酶C脫膠，既可提高精煉率，又可降低生產成本。
文檔編號C11B3/00GK102807917SQ20121024833
公開日2012年12月5日 申請日期2012年7月18日 優先權日2012年7月18日
發明者于殿宇, 江連洲, 張立國, 胡立志, 劉晶, 張春艷, 宋云花, 王玥, 宋鵬, 李萬振, 劉鑫, 鄒小雨 申請人:東北農業大學