專利名稱：一種萌芽大豆提取物及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種萌芽大豆提取物及其制備方法與應用。
背景技術：
大豆主要活性成分是大豆異黃酮、大皂皂苷、大豆卵磷脂、大豆蛋白、氨基酸以多種維生素等。特別是大豆異黃酮也叫植物雌性激素。它是一種天然的雌激素，對人體無任何副作用。用于化妝品中能防止皮膚膠原量的減少，保持皮膚彈性，預防皮膚黑色素的形成；起到凈白肌膚、抗松弛、恢復肌膚彈性、解決因更年期雌性激素的減少所產生的問題，創造肌膚第二春。關于豆芽的最早記載見于《靈樞經》和《神農本草經》，在宋代以前，豆芽僅為藥用，并未把它當作蔬菜食用。大量文獻報道，大豆經發芽后，其活性成分得到進一步的改善，大豆異黃酮的結構成分發生了改變，異黃酮苷元含量明顯提高，氨基酸、各種維生素的含量也大幅提高，這些活性成分的變化進一步奠定了其用于化妝品的功效性。

發明內容
本發明的目的是提供一種萌芽大豆提取物及其制備方法。本發明所提供的萌芽大豆提取物是按照包括下述步驟的方法制備得到的以粉碎后的萌芽大豆為原料，用質量濃度為60 % -80 %的乙醇水溶液進行提取，得到所述萌芽大豆提取物；所述萌芽大豆是由大豆萌發2-5天得到的。其中，所述乙醇水溶液優選質量濃度為75%的乙醇水溶液。所述萌芽大豆與所述乙醇水溶液的配比可為Ig (10-20)ml，優選為Ig 20ml, 所述萌芽大豆的質量以干重計；所述提取具體為超聲提取；所述超聲提取的溫度可為 40-70°C，優選為55°C;時間為30-40分鐘，優選為35分鐘；超聲頻率可為60-100KHZ。所述粉碎后的萌芽大豆的粒度可為40-60目。本發明的方法還包括下述純化的步驟提取結束后，離心、收集提取液，將所述提取液中的乙醇蒸發除去(至無乙醇味即可)，再將剩余物質用丙二醇等適用于化妝品中的有機溶劑溶解，收集溶液，滅菌，得到純化后的萌芽大豆提取物。在純化步驟中，所述離心的轉速為4000-5000rpm，優選為4000rpm ；離心的時間為 10-30分鐘，優選為20分鐘；在純化步驟中，所述丙二醇的加入量與所述剩余物質的配比為10_15ml Ig;所述滅菌的溫度為80-100°C，時間為30-45min。本發明中所采用的原料萌芽大豆具體是按照下述方法得到的1)將大豆清洗干凈，加水浸泡；2)將浸泡后的大豆在20°C -25°C下萌發2_5天，得到所述萌芽大豆。其中，步驟1)中，所述水與大豆的質量比可為(1.5-3) 1，優選2 1 ；所述浸泡的時間可為6-10h，優選8h，浸泡溫度為室溫即可；步驟幻中，大豆萌發的具體方法如下將浸泡后的大豆浙干水分并置于墊有濕潤
3脫水棉的容器中，并用紗布覆蓋，置于一定溫度下培養萌發，萌發溫度為20°C 25°C，優選溫度為22°C ；每隔一定時間淋水一次，保持大豆濕潤，每24h用清水清洗一次，防止豆芽發霉腐爛；發芽時間為2 5天，優選3天；發芽結束后將豆芽用清水清洗一次，取出，50°C低溫烘干。本發明的再一個目的是提供上述萌芽大豆提取物的應用。本發明所提供的萌芽大豆提取物的應用是其在制備化妝品中的應用；尤其是制備具有延緩衰老功效化妝品中的應用。含有本發明萌芽大豆提取物的化妝品以及含有該萌芽大豆提取物的組合物也屬于本發明的保護范圍。本發明所提供的提取分離方法簡便，所得產品純度較高，產品質量有了很大的改進。由于大豆中所含的異黃酮具有活躍細胞代謝，防止皮膚膠原量的減少，保持皮膚彈性， 預防皮膚黑色素的形成，阻隔斑點的形成及退化暗晦膚色等功效，能全面緩解女性更年期出現的肌膚問題，讓失調的肌膚回復均衡狀態。大豆中所含的皂苷、多種維生素等活性成分還具有抗氧化，清除自由基、預防皮炎、抵抗日光損害等功能，通過萌芽的方法，進一步提高了活性成分的含量和改善了活性成分的質量。所得到的提取物經試驗驗證具有較強的自由基清除能力以及較高的酪氨酸酶活性抑制能力。因此萌芽大豆提取物可以作為延緩皮膚衰老的功效添加劑，在制備化妝品中，尤其是制備具有延緩皮膚衰老功效的化妝品，具有廣泛應用。


圖1為本發明提供的制備萌芽大豆提取物的生產工藝流程圖；圖2為大豆萌芽前后大豆異黃酮和大豆皂苷含量比較的柱形圖；圖3為大豆萌芽前后煙酸、維生素B6、游離生物素和維生素C含量比較的柱形圖；圖4為萌芽大豆提取物清除DPPH自由基能力測定；圖5為萌芽大豆提取物抑制酪氨酸酶活性的測定。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發明的方法進行說明，但本發明并不局限與此。下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業途徑獲得。實施例1、制備萌芽大豆提取物萌芽大豆提取物的生產工藝流程圖如圖1所示，具體制備過程如下1)制備萌芽大豆取一定質量的大豆，清洗干凈，加大豆質量2倍的去離子水，室溫下浸泡他；浸泡結束后，將大豆浙干水分并置于墊有濕潤脫水棉的容器中，并用紗布覆蓋，置于22°C下培養萌發；每隔一定時間淋水一次，保持大豆濕潤，每24h用清水清洗一次，防止豆芽發霉腐爛； 發芽3天后將豆芽用清水清洗一次，取出。2)提取將50g豆芽(以干重計)粉碎至40-60目，按料液比Ig 20ml加入提取液(IOOOmL
4質量濃度為75%的乙醇水溶液)；在55°C下以100KHZ的超聲頻率超聲提取35min (加蓋保鮮膜，減少蒸發)；自然冷卻至室溫后，4000r/min的轉速下離心20分鐘，取上清液；對上清液進行真空濾餅抽濾，收集濾液；旋轉蒸發除去濾液中的乙醇，按質量體積(m ν)= Ig 15ml加入丙二醇，使旋蒸后剩余的物質充分攪拌溶解，過濾除去不溶物得澄清溶液。 將澄清溶液在90°C高溫滅菌30min后，得到萌芽大豆提取物溶液。實施例2、制備萌芽大豆提取物萌芽大豆提取物的生產工藝流程圖如圖1所示，具體制備過程如下1)制備萌芽大豆取一定質量的大豆，清洗干凈，加大豆質量1. 5倍的去離子水，室溫下浸泡他；浸泡結束后，將大豆浙干水分并置于墊有濕潤脫水棉的容器中，并用紗布覆蓋，置于22°C下培養萌發；每隔一定時間淋水一次，保持大豆濕潤，每24h用清水清洗一次，防止豆芽發霉腐爛；發芽2天后將豆芽用清水清洗一次，取出。2)提取將50g豆芽(以干重計)粉碎至40-60目，按料液比Ig IOml加入提取液(IOOOmL 質量濃度為60%的乙醇水溶液)；在40°C下以60KHZ的超聲頻率超聲提取30min(加蓋保鮮膜，減少蒸發)；自然冷卻至室溫后，4000r/min的轉速下離心20分鐘，取上清液；對上清液進行真空濾餅抽濾，收集濾液；旋轉蒸發除去濾液中的乙醇，按質量體積(m ν)= Ig 15ml加入丙二醇，使旋蒸后剩余的物質充分攪拌溶解，過濾除去不溶物得澄清溶液。 將澄清溶液在90°C高溫滅菌30min后，得到萌芽大豆提取物溶液。實施例3、制備萌芽大豆提取物萌芽大豆提取物的生產工藝流程圖如圖1所示，具體制備過程如下1)制備萌芽大豆取一定質量的大豆，清洗干凈，加大豆質量3倍的去離子水，室溫下浸泡他；浸泡結束后，將大豆浙干水分并置于墊有濕潤脫水棉的容器中，并用紗布覆蓋，置于25°C下培養萌發；每隔一定時間淋水一次，保持大豆濕潤，每24h用清水清洗一次，防止豆芽發霉腐爛； 發芽5天后將豆芽用清水清洗一次，取出。2)提取將50g豆芽(以干重計)粉碎至40-60目，按料液比Ig 20ml加入提取液(IOOOmL 質量濃度為80%的乙醇水溶液)；在70°C下以80KHZ的超聲頻率超聲提取40min(加蓋保鮮膜，減少蒸發)；自然冷卻至室溫后，4000r/min的轉速下離心20分鐘，取上清液；對上清液進行真空濾餅抽濾，收集濾液；旋轉蒸發除去濾液中的乙醇，按質量體積(m ν)= Ig 15ml加入丙二醇，使旋蒸后剩余的物質充分攪拌溶解，過濾除去不溶物得澄清溶液。 將澄清溶液在90°C高溫滅菌30min后，得到萌芽大豆提取物溶液。實施例4、萌芽大豆提取物的功能測定試驗將實施例1、2、3中制備得到的萌芽大豆提取物分別依次進行如下實驗。下述試驗中所用的萌芽大豆提取物溶液，是將實施例1、2、3制備得到的萌芽大豆提取物溶液記為質量濃度為100%的提取物溶液，其它濃度的提取物溶液是將該溶液進行相應稀釋得到的。1、大豆萌發前后活性成分成分含量的比較
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將實施例1制備得到的萌芽大豆于50°C低溫烘干，得干燥的萌芽大豆。測定干豆與干燥的萌芽大豆中活性成分的含量。大豆異黃酮的測定參照如下文獻提供的方法進行1)鞠興榮，袁建，汪海峰，三波長紫外分光光度法測定大豆異黃酮含量的研究，食品科學，2001年第22期46-48 ；2)申海進，汪海峰，袁健等，大豆發芽期異黃酮含量變化的研究及其促進劑的影響，中國糧油學報， 2006 年第 6 期75-78。大豆皂苷含量的測定參照如下文獻提供的方法進行阮洪生，陳志寶，朱丹等，豆粕中大豆皂苷提取工藝的研究，食品科技，2008年15卷第3期15-17。豆芽中維生素C含量的測定參照如下文獻提供的方法進行郭紅轉，路占國，王彩艷，豆芽生長過程中維生素C的消長規律研究，食品研究與開發，2006年第27卷第二期。煙酸的測定、維生素B6的測定、游離生物素的測定分別采用GB/T 5009. 89-2003、 GB/T 5009. 154-2003、GB/T 5413. 19-197 的方法進行。實施例1得到的萌芽大豆的實驗結果見圖2和圖3。由圖可知，與未發芽大豆相比，大豆發芽3天后大豆異黃酮、維生素C、煙酸、游離生物素的含量得到明顯提高，尤其是維生素C在干大豆并不存在，大豆皂苷和維生素B6的含量在大豆發芽前后沒有明顯變化。 說明本發明所采用的萌發3天的大豆，其中所含的活性成分含量較高。實施例2和3中得到的萌芽大豆的結果與上述結果無顯著差異。2、清除DPPH自由基能力測定DPPH清除率測定方法按照如下文獻提供的方法進行鄭大貴，葉青，葉紅德，余衍文，DPPH法評價Vc、異Vc及其衍生物的抗氧化性能，食品工業科技，2008年第04期 113-115。1，1-二苯基-2-三硝基苯胼(DPPH·)是一種穩定的有機自由基，在可見光區最大吸收峰為517nm，在乙醇溶液中，每個DPPH分子在溶液中可生成一個穩定的含氮自由基，具有典型紫色，當它與提供1個電子的自由基清除劑作用時，生成無色產物，使溶液的典型紫色變淺。其褪色程度與配對電子數成化學計量關系。因而可用分光光度法進行定量分析，來檢測自由基清除情況，從而評價樣品的抗氧化能力。其能力用清除率來表示，清除率越大， 則表明其抗氧化能力越強。實驗方法取一定質量的提取液用丙二醇進行梯度稀釋，稀釋后提取液濃度分別為 0g/100ml、lg/100ml、2g/100ml、3g/100ml、4g/100ml、5g/100ml、6g/100ml。取等體積的待測液與2X 10_4mOl/L的DPPH溶液加入同一試管中混勻(各取鈿1)，30min后用95%乙醇作參比，在517nm下測其吸光度A3 ；同時測定2 X lO^mol/L的DPPH溶液與等體積95%乙醇混合后的吸光度A1以及測定待測液與等體積95%乙醇混合液的吸光度A2。DPPH 清除率=[I-(A3-A2) /A1] X 100%(A3-A2)消除了料液自身顏色造成的誤差，其與A1的比值就是未被清除的自由基所顯現出來的顏色深淺程度，用1減去該比值即得到料液對DPPH的清除率。所用的對比物-未發芽大豆提取物按照實施例1中的提取方法進行制備，只需將萌芽大豆替換為未發芽大豆。實施例1制備得到的萌芽大豆提取物的實驗結果見圖4。由圖可知，自由基清除率隨提取液濃度的加大而升高，當提取液濃度在4g/100ml時對自由基的清除率非常高，比未
6發芽大豆提取物的自由基清除效果明顯。說明本發明提供的萌芽大豆提取物具有較強的自由基清除能力，具有一定的抗衰老功效。實施例2和3制備得到的萌芽大豆提取物的結果與上述結果無顯著差異。3、抑制酪氨酸酶活性的測定黑色素的形成在于皮膚黑色素細胞組織中的酪氨酸在酪氨酸酶等酶的作用下經多巴、多巴醌、多巴色素、二羥基吲哚等中間體逐步轉化為真黑色素；進而，黑色素細胞組織將黑色素轉移到角蛋白細胞中，并隨著角質層周期換新而脫落，人體膚色的差異主要取決于真黑色素和褐黑素的含量及分布，但當真黑色素過速增長和分布不均時，就會造成局部皮膚過黑或色素沉著。參與黑色素合成主要有三種酶酪氨酸酶，多巴色素互變酶 (Dopachrom tautomerase)和二羥基吲哚羧酸(DHICA)氧化酶。酪氨酸酶屬氧化還原酶，是黑色素合成的主要限速酶，其活性大小決定黑色素形成的數量，目前市場上銷售的許多美白、祛斑產品都是以抑制酪氨酸酶活性達到美白作用，故對酪氨酸酶抑制作用的強弱是評價增白化妝品的主要指標。L-酪氨酸酶與其底物L-酪氨酸可以發生催化反應。當在實驗體系中添加了有 L-酪氨酸酶活性抑制作用的試劑后，對催化反應可以產生抑制作用，通過測定添加試劑前后于475nm處的吸光光度，來評價試劑對L-酪氨酸酶活性的抑制率。實驗方法(I)C2管配好搖勻后，在37°C水浴鍋中水浴加熱lOmin，波長475nm下調零。(2) C1管溶液配好搖勻，37°C水浴IOmin后，加酪氨酸酶1ml，繼續水浴10分鐘，測
Sc1吸光度值。(3)按(1) (2)同樣方法，以T2調零測定T1吸光度值。(4)計算樣品對酪氨酸酶的活性抑制率T )。公式)= (C1-T1)ZC1XlOO^表1試劑配比表
單位(mL)C1C2T1T2L-酪氨酸2222樣品0022PBS4523酪氨酸酶1010總體積7777注=C1和T1均加入ImL酪氨酸酶，酶活為100U/mL。實施例1得到的萌芽大豆提取物的實驗結果見圖5。由圖可知，萌芽大豆提取液對酪氨酸酶活性的抑制效果隨起濃度的升高而加大，當提取液濃度為6g/100ml時抑制率達到60%以上，抑制效果明顯。說明本發明提供的萌芽大豆提取物具有較高的酪氨酸酶活性
7抑制能力，可用于制備化妝品，尤其是用來制備具有延緩衰老和美白功效的化妝品。實施例 2和3得到的萌芽大豆提取物的結果與上述結果無顯著差異。
權利要求
1.一種制備萌芽大豆提取物的方法，包括下述步驟以粉碎后的萌芽大豆為原料，用質量濃度為60-80%的乙醇水溶液進行提取，得到所述萌芽大豆提取物；其中，所述萌芽大豆是由大豆萌發2-5天得到的。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述萌芽大豆與所述乙醇水溶液的配比為Ig 10-20ml，優選為Ig 20ml，所述萌芽大豆的質量以干重計；所述提取為超聲提取； 所述超聲提取的溫度為40-70°C，時間為30-40分鐘，超聲頻率為60-100KHZ ；所述粉碎后的萌芽大豆的粒度為40-60目。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述方法還包括下述純化的步驟提取結束后，離心、收集提取液，將所述提取液中的乙醇蒸發除去，再將剩余物質用丙二醇溶解，收集溶液，滅菌，得到純化后的萌芽大豆提取物。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述離心的轉速為4000-5000rpm，優選為 4000r/min ；離心的時間為10-30分鐘，優選為20分鐘；所述丙二醇的加入量與所述剩余物質的配比為10_15ml lg；所述滅菌的溫度為80-90°C，時間為30-45min。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于所述萌芽大豆是按照下述方法得到的1)將大豆清洗干凈，加水浸泡；2)將浸泡后的大豆在20°C-25°C下萌發2-5天，得到所述萌芽大豆。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟1)中，所述水與大豆的質量比為 (1.5-3) 1，優選2 1 ；所述浸泡的時間為6-10h，優選他，浸泡溫度為室溫；步驟2)中， 所述萌發的溫度為22°C，時間為3天。
7.權利要求1-6中任一項所述方法制備得到的萌芽大豆提取物。
8.權利要求7所述的萌芽大豆提取物在制備化妝品中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于所述化妝品為具有延緩衰老和美白功效的化妝品。
10.一種具有延緩衰老和美白功效的化妝品，其特征在于所述化妝品含有權利要求8 所述的萌芽大豆提取物。
全文摘要
本發明公開了一種萌芽大豆提取物及其制備方法與應用。該萌芽大豆提取物是按照包括下述步驟的方法制備得到的以粉碎后的萌芽大豆為原料，用質量濃度為75％的乙醇水溶液進行提取，得到所述萌芽大豆提取物；其中，所述萌芽大豆是由大豆萌發2-5天得到的。本發明所提供的提取分離方法簡便，所得產品純度較高，產品質量有了很大的改進。大豆經萌芽后，其活性成分的含量和質量都有所提高。以萌芽大豆為原料進行提取，所得到的提取物經驗證具有較強的自由基清除能力以及較高的酪氨酸酶活性抑制能力。因此該萌芽大豆提取物可以作為延緩皮膚衰老的功效添加劑，在制備化妝品中，尤其是制備具有延緩皮膚衰老功效的化妝品，具有廣泛應用。
文檔編號A61Q19/08GK102397172SQ20101027541
公開日2012年4月4日 申請日期2010年9月7日 優先權日2010年9月7日
發明者何聰芬, 彭立偉, 王領, 董銀卯, 趙華 申請人:北京工商大學