一種苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應用
【專利摘要】本發明涉及醫藥技術領域，公開了一種苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應用。該苯丙素類化合物顯示出可以抑制細胞炎癥因子NO的含量，抑制細胞炎癥因子TNF?α，IL?1β，IL?6的表達作用，具有對羥基自由基的(?OH)的抑制作用，進而具有抗炎及抗氧化活性，為炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關節炎等疾病的治療藥物的開發提供方向。
【專利說明】
一種苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽在制備治療炎癥 性疾病的藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽在制 備治療炎癥性疾病的藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 從天然藥物中提取分離得到的成分結構多樣、活性顯著，對其進行分離純化、結構 修飾、改造和全合成，一直是新藥研發的一個主要思路。
[0003] TNF-α:是一種能夠直接殺傷腫瘤細胞而對正常細胞無明顯毒性的細胞因子，是迄 今為止所發現的直接殺傷腫瘤作用最強的生物活性因子之一，然而其毒副作用也非常嚴 重。
[0004] IL-Ιβ:在局部低濃度時協同刺激APC和T細胞活化，促進B細胞增殖和分泌抗體，進 行免疫調節。大量產生時有內分泌效應:誘導肝臟急性期蛋白合成，引起發熱和惡病質。
[0005] IL-6:人類IL-6基因位于第7號染色體上；IL-6分子量在21~30KD之間。主要由單 核巨噬細胞、Th2細胞、血管內皮細胞、成纖維細胞產生。能夠刺激活化B細胞增殖，分泌抗 體;刺激T細胞增殖及CTL活化;刺激肝細胞合成急性期蛋白，參與炎癥反應;促進血細胞發 育。
[0006] IL-6可由多種細胞合成，包括活化的T細胞和B細胞、單核一巨噬細胞、內皮細胞、 上皮細胞以及成纖維細胞等。IL-6作用的靶細胞很多，包括巨噬細胞、肝細胞、靜止的T細 胞、活化的B細胞和漿細胞等;其生物效應也十分復雜。
[0007] OH為生物系統中最具活性的活性氧物質，能導致細胞及生物體內DNA，蛋白質和脂 質氧化損傷。
[0008] 巨噬細胞能產生多種炎癥介質參與炎癥反應，其中，NO為重要的細胞炎癥因子，NO 參與多種生理病理過程，過量NO會促進炎癥性疾病的發生與發展，并且還能誘導其他炎癥 因子。
[0009] 因此，尋求新的化合物，以抑制細胞炎癥因子NO的含量，抑制細胞炎癥因子了冊-a，IL-li3，IL_6的表達作用，抑制羥基自由基(-OH)的活性，應用于炎癥性疾病的治療，是非 常有必要的。
[0010] 千斤拔藥材為豆科(Leguminosae)千斤拔屬(Flemingl .Roxb.或Moghania)植物大 葉千斤拔(Moghaniamacrophylla(Wilid. )0·Kuntze)的干燥根，在我國主要分布于東南部 地區。該植物在中國植物志（1995，41: 313)、中國臺灣植物志（1977，3 : 258)、海南植物志 (1965,2:311)、《中國高等植物圖鑒》（1972,2:510)、中國主要植物圖說（1955，？?707)和廣 州植物志（1956，pp361)中均有收錄。千斤拔藥材為廣西地區的道地藥材，史載于《植物名實 圖考》，有著廣泛的民間用藥基礎。其性味甘，微澀，平，具有清熱除濕等功效，主要用于治療 風濕骨痛、跌打損傷、慢性腎炎、痛經和白帶多等婦科疾病。該藥材目前已收載入2005年版 《中國藥典》附錄。
[0011] 大葉千斤拔已報道的成分主要有黃酮類、留類、萜類、蒽醌類、揮發油類成分，均具 有一定的藥理活性，其藥理活性多樣，報道較多的有神經保護作用，抗炎、抗氧化作用，對病 原微生物的驅蟲作用、類激素作用、細胞毒作用，抗菌作用以及免疫增強作用、抗疲勞作用。
[0012] 千斤拔目前廣泛應用于婦科、風濕痹痛等類型的中成藥生產，如婦科千金片、婦科 千金膠囊、金雞沖劑、金雞膠囊等，此類中成藥主要用于婦科病(痛經、子宮寒冷不孕、子宮 下垂、盆腔炎、乳腺炎、白帶多、產后血虛、關節痛、產后腰膝痛、缺乳和乳瘡等），虛弱貧血 (婦女貧血，氣血虛弱和病后氣虛等）。近年來，臨床報道較多的是婦科千金片在治療婦科炎 癥方面的作用。
[0013] 目前，在千斤拔的文獻中，報道苯丙素類化合物的文獻極少，尋找有效的苯丙素類 新化合物，對其進行分離純化、結構修飾和合成，開發新藥，應用于炎癥性疾病的治療，意義 重大。

【發明內容】

[0014] 本發明要解決的技術問題是，尋找一種有效成分，其能抑制細胞炎癥因子NO的含 量，抑制細胞炎癥因子TNF-α，IL-1 β，IL-6的表達作用，具有對羥基自由基的(-OH)的抑制作 用，能應用于制備治療炎癥性疾病的藥物中。本發明提供一種苯丙素類化合物，其可以抑制 細胞炎癥因子NO的含量，抑制細胞炎癥因子TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的表達作用，具有對羥基自 由基的（-OH)的抑制作用，進而具有抗炎及抗氧化活性，為抗炎藥物的開發提供方向，用于 治療相關炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關節炎等。
[0015] 本發明的目的是提供一種苯丙素類化合物的醫藥應用。
[0016] 提供一種苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽作為制備治療炎癥性疾病的藥 物中的應用，所述苯丙素類化合物的結構式如式(I)所示：
[0017]
[0018] 所述苯丙素類化合物藥學上可接受的鹽的結構如式（Π )或式(ΙΠ )所示：
[0019]
[0020] 其中，R為無機酸，辦或辦或辦為磺酸根、堿金屬離子或銨根中的任意一種或任意兩 種或任意三種。
[0021] 優選地，所述苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽在制備抑制細胞炎癥因子 NO的含量或抑制細胞炎癥因子TNF-α，IL-1 β，IL-6的表達或抑制羥基自由基的活性的藥物 中的應用，應用于治療炎癥性疾病的藥物中。
[0022] 優選地，所述炎癥性疾病為宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關 節炎。
[0023] 所述藥學上可接受的鹽為式（I)所示苯丙素類化合物與酸或堿形成的藥學上可接 受的鹽，其中，式（Π )中，R為無機酸，式（m)中，R1SR2或R3磺酸根、堿金屬離子或銨根中的 任意一種或任意兩種或任意三種。
[0024] 所述無機酸為鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸或乳酸;所述 磺酸根為具有芳基的磺酸根;所述堿金屬離子為鉀離子、鈉離子、鈣離子、鎂離子或鋰離子。
[0025] 所述具有芳基的磺酸根為苯磺酸根或對甲苯磺酸根。
[0026] 所述苯丙素類化合物藥學上可接受的鹽為銨鹽。
[0027] 所述藥物含有藥學上允許的輔料和/或載體。
[0028] 優選地，所述藥物還含有其他藥效成分。
[0029] 優選地，所述藥物還含有金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當歸、黨參中的 一種或幾種。
[0030] 優選地，所述藥物還含有金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當歸、黨參中的 一種或幾種的提取物。
[0031] 所述提取物為按專利公告號 CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、 〇附296071(：、0附321631(：、0附296072(：、0價296073(：的任意一件或幾件專利文件中所述的提 取方法制備得到。
[0032] 所述藥物的劑型為片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、注 射劑、軟膏劑、栓劑或噴霧劑。
[0033] 本發明的目的是從傳統的中藥處方中，通過從婦科千金片及婦科千金膠囊的處方 中，通過溶劑提取、柱層析分離、制備液相分離、純化制得一種新苯丙素類化合物，并通過實 驗證實，其可以應用于炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關 節炎等疾病的治療。
[0034] 具體地，發明人通過從婦科千金片、婦科千金膠囊的處方中，選取大葉千斤拔的干 燥根，通過溶劑提取、柱層析分離、制備液相分離、純化，得到本發明所述苯丙素類化合物， 然后對該苯丙素類化合物進行細胞試驗，測定其對細胞炎癥因子NO，TNF-α，IL-Ιβ，IL-6及 羥基自由基(-OH)的抑制程度，實驗表明，該苯丙素類化合物在濃度(8.75-15.75yg/mL)范 圍內對LPS引起的NO含量升高有明顯的抑制作用，并表現出明顯的劑量依賴關系。在濃度 (8.75-15.75yg/mL)范圍內LPS引起的Raw 264.7細胞炎癥因子TNF-α，IL-Ιβ，IL-6含量均有 明顯的抑制作用(P <〇. 05)，并表現出明顯的劑量依賴關系，在濃度(5.25 -15.75yg/mL)范 圍內對LPS引起的OH含量變化有明顯的抑制作用(p <0.05 )，并表現出劑量依賴關系。
[0035]本發明的有益效果：
[0036] 本發明從傳統中藥處方角度出發，從傳統中藥婦科千金片、婦科千金膠囊中提取、 分離、純化得到一種苯丙素類化合物，經實驗證明，該苯丙素類化合物顯示出可以抑制細胞 炎癥因子NO的含量，抑制細胞炎癥因子TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的表達作用，具有對羥基自由基 的(-OH)的抑制作用，為炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或 關節炎等疾病的治療藥物的開發提供了方向。
[0037] 本發明提供的新的苯丙素類化合物結構簡單、純度高，且提取分離方法簡便、易于 合成，可適應新藥的產業化應用。
【附圖說明】
[0038] 圖1為本發明所述苯丙素類化合物的核磁共振氫譜圖。
[0039] 圖2為本發明所述苯丙素類化合物的核磁共振碳譜圖。
[0040] 圖3為本發明所述苯丙素類化合物對細胞活性的影響圖。
[0041]圖4為本發明所述苯丙素類化合物對NO的抑制作用圖。
[0042]圖5為本發明所述苯丙素類化合物對TNF-a的抑制作用圖。
[0043]圖6為本發明所述苯丙素類化合物對IL-I邱勺抑制作用圖。
[0044]圖7為本發明所述苯丙素類化合物對IL-6的抑制作用圖。
[0045] 圖8為本發明所述苯丙素類化合物對OH的抑制作用圖。
【具體實施方式】
[0046] 以下結合說明書附圖和具體實施例來進一步說明本發明，但實施例并不對本發明 做任何形式的限定。除非特別說明，本發明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規試 劑、方法和設備。除非特別說明，本實施例所用的原料和設備均為本技術領域常規市購的原 料和設備。
[0047] 本發明的化合物是所述式（I)所示的苯丙素類化合物及式（Π )或式（ΙΠ )所示該化 合物藥學上可接受的鹽。該化合物可以采用本發明提供的以大葉千斤拔為原料提取的方法 制備得到，也可以根據本發明提供的結構式結合采用本領域的化學合成等方法制備得到。
[0048] 作為本發明所述苯丙素類化合物的鹽，只要是藥學上可接受的鹽即可，可列舉為 與鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸等無機酸形成的無機酸鹽;與 磺酸形成的磺酸鹽;與鉀、鈉、鈣、鎂、鋰等堿金屬的氫氧化物形成的堿金屬鹽，與銨形成的 銨鹽等。
[0049] 本發明苯丙素類化合物可用作如宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/ 或關節炎等炎癥性疾病的治療藥物。
[0050] 本發明化合物可以與藥學上允許的輔料和/或載體一起用作藥物組合物，也可以 在加入藥學上允許的輔料和/或載體的情況下與金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、 當歸、黨參中的一種或幾種中藥材或提取物的組合用作藥物組合物，本發明化合物還可以 與其他藥學上可接受的藥效成分一起用作藥物組合物。
[0051] 作為藥物組合物，可以是片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿 劑、注射劑、軟膏劑、栓劑、噴霧劑等。
[0052] 進一步地，片劑可以是在添加藥學上允許的輔料和/或載體的情況下制成的糖衣 片、薄膜衣片、腸溶性包衣片或雙層片、多層片。
[0053]本發明的輔料和/或載體可以如下：
[0054] 制成固體制劑，可以使用添加劑，例如蔗糖、乳糖、纖維素糖、麥芽糖醇、葡萄糖、淀 粉類、瓊脂、海藻酸鹽類、甲殼素、殼聚糖類、果膠類、阿拉伯樹膠類、明膠類、膠原類、酪蛋 白、白蛋白、磷酸鈣、山梨糖醇、甘氨酸、甘油、聚乙二醇、碳酸氫鈉、滑石等。
[0055] 制成半固體制劑，可以使用動植物性油脂(橄欖油、玉米油、蓖麻油等）、礦物性油 月旨(凡士林、白凡士林、固態石蠟等）、蠟類(霍霍巴油、巴西棕櫚蠟、蜂蠟等）、部分合成或全 合成的甘油脂肪酸酯（月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸等）等。
[0056] 制成液體制劑，可使用添加劑，例如氯化鈉、葡萄糖、山梨糖醇、甘油、橄欖油、丙二 醇、乙醇等。尤其制成注射劑的情況下，可以使用無菌水溶液，例如生理鹽水、等滲液、油性 液，如麻油、大豆油。另外，還可以根據需要，并用適當的助懸劑，如羧甲基纖維素鈉，非離子 表面活性劑、助溶劑，如苯甲酸芐酯、苯甲醇等。
[0057]這些制劑的有效成分的量為制劑的0.01~80重量％，適宜為1~50重量％，給藥量 根據患者的癥狀、體重、年齡等不同而變化。
[0058]實施例1苯丙素類化合物的制備
[0059] 本實施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟：
[0060] Sl.取大葉千斤拔50kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。經8倍量60%的乙醇回流 提取3次，每次2小時，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用；
[0061] S2.將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于IOL水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對其進行洗 脫，洗脫劑為水，洗脫3個柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用；
[0062] S3.將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進行洗脫，洗脫劑為甲醇-水 系統，其體積比為25:75，洗脫18個柱體積，按每3個柱體積收集一個流分的洗脫液，按順序 收集6個流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用；
[0063] S4.將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml/min，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇:水：乙酸的體積比為25:75: 0.01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個流分，分別命名為MM-121，麗-122，麗-123，MM- 124，MM-125，MM-126，MM-127,備用；
[0064] S5.將步驟S4中收集到的流分MM-126用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85: 〇. 01，收集洗脫液，重結晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0065] 實施例2苯丙素類化合物的制備
[0066] 本實施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟：
[0067] Sl.取大葉千斤拔40kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。經6倍量50%的乙醇回流 提取2次，每次1小時，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用；
[0068] S2.將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于5L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對其進行洗 脫，洗脫劑為乙醇與水的體積比為15:85,洗脫3個柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用；
[0069] S3.將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進行洗脫，洗脫劑為甲醇-水 系統，其體積比為20:80，洗脫18個柱體積，按每3個柱體積收集一個流分的洗脫液，按順序 收集6個流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用；
[0070] S4.將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*25Omm，流速：I OmI /miη，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇：水：乙酸的體積比為3 5: 65:0.01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個流分，分別命名為麗-121，麗-122，11-123，11-124，ΜΜ-125，ΜΜ-126，ΜΜ-127,備用；
[0071] S5 .將步驟S4中收集到的流分ΜΜ-126用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85: 〇. 01，收集洗脫液，重結晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0072] 實施例3苯丙素類化合物的制備
[0073] 本實施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟：
[0074] Sl.取大葉千斤拔60kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。7倍量70%的乙醇回流提 取4次，每次3小時，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用；
[0075] S2.將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于8L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對其進行洗 脫，洗脫劑為乙醇與水的體積比為10:90,洗脫3個柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用； [0076] S3.將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進行洗脫，洗脫劑為甲醇-水 系統，其體積比為30:70，洗脫18個柱體積，按每3個柱體積收集一個流分的洗脫液，按順序 收集6個流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用；
[0077] S4.將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*25Omm，流速：I OmI /miη，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇：水：乙酸的體積比為30: 70:0.01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個流分，分別命名為麗-121，麗-122，11-123，11-124，ΜΜ-125，ΜΜ-126，ΜΜ-127,備用；
[0078] S5.將步驟S4中收集到的流分ΜΜ-126用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85: 〇. 01，收集洗脫液，重結晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0079] 實施例4苯丙素類化合物的制備
[0080] 本實施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟：
[0081 ] Sl.取大葉千斤拔50kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。8倍量60%的乙醇回流提 取2次，每次1.5小時，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用；
[0082] S2.將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對其進行洗 脫，洗脫劑為乙醇與水的體積比為5:95,洗脫3個柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用；
[0083] S3.將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進行洗脫，洗脫劑為甲醇-水 系統，其體積比為25:75，洗脫18個柱體積，按每3個柱體積收集一個流分的洗脫液，按順序 收集6個流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用；
[0084] S4.將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*25Omm，流速：I OmI /miη，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇：水：乙酸的體積比為25: 75:0.01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個流分，分別命名為麗-121，麗-122，11-123，11-124，ΜΜ-125，ΜΜ-126，ΜΜ-127,備用；
[0085] S5.將步驟S4中收集到的流分ΜΜ-126用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85: 〇. 01，收集洗脫液，重結晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0086] 實施例5苯丙素類化合物的制備
[0087] 本實施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟：
[0088] Sl.取大葉千斤拔50kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。8倍量80%的乙醇回流提 取2次，每次1.5小時，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用；
[0089] S2.將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對其進行洗 脫，洗脫劑為乙醇與水的體積比為10:90,洗脫3個柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用；
[0090] S3.將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進行洗脫，洗脫劑為甲醇-水 系統，其體積比為28:72，洗脫18個柱體積，按每3個柱體積收集一個流分的洗脫液，按順序 收集6個流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用；
[0091] S4.將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*25Omm，流速：I OmI /miη，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇：水：乙酸的體積比為10: 90:0.01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個流分，分別命名為麗-121，麗-122，11-123，11-124，ΜΜ-125，ΜΜ-126，ΜΜ-127,備用；
[0092] S5.將步驟S4中收集到的流分ΜΜ-126用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85: 〇. 01，收集洗脫液，重結晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0093] 將實施例1至實施例5制備得到的化合物進行質譜、核磁共振氫譜、核磁共振碳譜 的檢測，結果證明所得化合物為:4,5_吡喃環-Γ烯-2'-葡萄糖基-Γ，3'_二羥基-2-甲氧 基-3-羥基苯甲酸。其結構式如式(I)所示：
[0094]
[0095]其質譜、核磁共振氫譜、核磁共振碳譜的譜圖數據如下：
[0096] HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 453.1158,結合核磁特征，可得分子式為C18H22O12，不 飽和度為8。
[0097] 4-^^(60011^,0)300):6.14(8,110,4.73((1,110,4.71^110,3.79(8,3103.00-4.00(H-2'-6'），2.59(d，2H)。
[0098] 13C-匪R(150MHz,CD3OD): 154.6(C-1),153.3(C-2),131.4(C-4),115.6(C-5)， 131 ·4(C-3)，128.2(C-6)，114.7(02'），104.8(C-r)，93.2(C-r)78.7(C-3'），76.8-61.2 (C-2"-6"），50.4(C-4，）。
[0099] 實施例6苯丙素類化合物鹽的制備
[0100] 苯丙素類化合物鹽酸鹽的制備：
[0101] 攪拌下將該苯丙素類化合物甲醇溶液中滴加飽和鹽酸至pH值2-3,攪拌下滴加乙 腈，抽濾，干燥得到白色粉末固體，即為苯丙素類化合物的鹽酸鹽。
[0102] 苯丙素類化合物磺酸鹽的制備：
[0103] 在含有該苯丙素類化合物、溶劑、磺酸、中性油和促進劑的反應體系中加入堿金屬 的氫氧化物，加入溶劑、低級醇和助促進劑，通入二氧化碳，分離得到白色粉末固體，即為苯 丙素類化合物的磺酸鹽。
[0104] 苯丙素類化合物鉀鹽或鈉鹽的制備：
[0105] 將溶于乙醇中的KOH或NaOH加入該苯丙素類化合物中，攪拌下加熱回流反應，冷制 室溫，攪拌下滴加乙腈，抽濾，干燥得白色固體，即為苯丙素類化合物的鉀鹽或鈉鹽。
[0106] 苯丙素類化合物銨鹽的制備：
[0107] 攪拌下將該苯丙素類化合物甲醇溶液中滴加飽和氨水至pH值9-11，攪拌下滴加乙 腈，抽濾，干燥得到白色固體，即為苯丙素類化合物的銨鹽。
[0108] 上述化合物鹽的譜圖數據：
[0109] 苯丙素類化合物鹽酸鹽：ESIMS顯示m/z 466.89，核磁特征1!1-匪1?(60(^取， CD30D): 1H-NMlKeOOMHz ,CD3OD) :6.17(s，lH)，4.77(d，lH)，4.70(t，lH)，3.78(s，3H)3.00-4.00(H-2'-6'），2.44(d，2H)。
[0110] 苯丙素類化合物磺酸鹽：ESIMS顯示為m/z 494.27，核磁特征咕-麗1?(6001〇^， 0)300):^-^^(60011^,0)300):6.17(8,110,4.78((1,110,4.89(1110,3.66(8, 3H)3.00-4.00(H-2'-6'），2.51(d，2H)。
[0111] 苯丙素類化合物鉀鹽或鈉鹽：
[0112] 鉀鹽：ESMS顯示m/z 468 · 33，核磁特征1H-匪R(600MHz，CD30D): 1H-匪R(600MHz， CD3OD):6.11(s，lH)，4.69(d，lH)，4.66(t，lH)，3.73(s，3H)3.00-4.00(H-2，-6，），2.50(d， 2H)〇
[0113] 鈉鹽:ESMS顯示m/z 452 · 63，核磁特征1H-NMR(600MHz，CD3OD): 6 · 17(s，1H)，4 · 50 (d，lH)，4.61(t，lH)，3.40(s，3H)3.00-4.00(H-2'-6'），2.10(d，2H)。
[0114] 苯丙素類化合物銨鹽:ESMS顯示m/z 445.26，核磁特征咕-匪1?(60010^，0)300): 1H-Nmr(GoOMHz1CD3OD) :6.18(s，lH)，4.78(d，lH)，4.46(t，lH)，3.46(s，3H)3.00-4·00(Η-2，-6，），2.51(d，2H)。
[0115] 上述苯丙素類化合物鹽的結構式如式(IV)~式(VI)所示。
[0116]
[0117]
[0118] 其中，式(IV)為制備得到的苯丙素類化合物鹽酸鹽，式（V)為制備得到的苯丙素 類化合物的其中一種磺酸鹽，式（VI)為制備得到的苯丙素類化合物的其中一種鉀鹽，式 (VD)為制備得到的苯丙素類化合物的其中一種鈉鹽，式(VI)為制備得到的苯丙素類化合物 的其中一種銨鹽。
[0119] 實驗例7應用試驗
[0120] 本發明所述化合物以及鹽對LPS誘導的RAW 264.7巨噬細胞氧化應激與炎癥的影 響。（為了實驗過程中記錄方便，以下將本發明所述的苯丙素類化合物標號為:藥物MM-126， 即本發明中所述的藥物MM-126即是指本發明式（I)所示苯丙素類化合物或其藥學上可接受 的鹽。）
[0121] 1材料與方法
[0122] 1.1藥品及儀器
[0123] 脂多糖（Iipopolysaccharide，LPS)，MTT購自 Sigma公司；小鼠巨·細胞Raw264 · 7 購自湘雅細胞庫;PBS; DMEM高糖培養基、胎牛血清、青霉素與鏈霉素;全自動酶標儀;恒溫 CO2培養箱。
[0124] 小鼠白介素 l-f3(IL-1-f3)ELISA檢測試劑盒，批號：2014/06(96T);小鼠白介素6 (IL-6)ELISA檢測試劑盒，批號：2014/06(96T);小鼠腫瘤壞死因子-a(TNF-a)ELISA檢測試 劑盒，批號：2014/06(96T);小鼠一氧化氮(NO)ELISA檢測試劑盒，批號：2014/10(96T);小鼠 羥基自由基(OH)ELISA檢測試劑盒，批號:2014/10(96T)。
[0125] 1.2藥物制備
[0126] 首先用少量DMSO溶解，然后用DMEM稀釋至一定的濃度，使終濃度中DMSO含量少于 1%0 〇
[0127] 1.3細胞培養
[0128] 小鼠巨噬細胞Raw 264.7培養于含10%熱滅活（56°(：，3〇1^11)的胎牛血清卬83)、 lOU/mL青霉素鈉、100yg/mL鏈霉素的DMEM培養基中，37°C、5 % CO2恒溫培養箱中孵育生長。
[0129] 1.4細胞活力測定
[0130] 細胞活力通過MTT法來測定。將細胞制成細胞懸液接種于96孔板(I X 104個/孔)孵 育24h，再同步化24h，然后將不同濃度的藥物作用于細胞2h，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激 24h，吸棄原培養基，每孔加入IOOyL的MTT(0.5mg/mL)繼續孵育4h，吸棄培養基，每孔加入 150yL的DMSO，搖床振搖IOmin，在490nm處測定吸光度。
[0131] 1.5 NO含量測定
[0132] Raw 264.7細胞接種于96孔板24h，再同步化24h，然后將不同濃度的藥物作用于細 胞2h，然后再加入LPS( 30yg/mL)刺激24h，最后收集上清液，并于1000 Orpm離心5min，分裝上 清并置于-80°C保存備用。通過小鼠 NO試劑盒測定NO含量。
[0133] 1 · 6炎癥因子TNF-α，IL-Ιβ，IL-6測量
[0134] 樣品取1.5制備好的樣品用于后續炎癥因子測定。細胞產生TNF-a，IL-lf3，IL_6的 量通過小鼠 TNF-a，IL-Ιβ，IL-6試劑盒來測定。
[0135] 1.7 OH含量測定
[0136] 樣品取1.5制備好的樣品用于OH因子測定。通過OH試劑盒測定含量。
[0137] 1.8統計分析
[0138] 采用SPSS17.0軟件，實驗數據以（x±s表示;所得數據通過用單因素方差分析，方 差齊性用LSD檢驗，方差不齊用Dunnett T3檢驗。
[0139] 2實驗結果
[0140] 2.1細胞活力
[0141] 藥物對細胞活力的影響通過MTT法來評價。如圖3所示，藥物MM-126在1.75-15.75μ g/mL濃度范圍內對Raw 264.7細胞活力沒有顯著影響；因此在此范圍濃度下的藥物濃度對 于后續實驗是合適的。
[0142] 2.2藥物抑制NO的產生
[0143] 如圖4所示，通過1^刺激1^￥ 264.7細胞，其產生^)(65.81±2.9311]/11^)含量與 正常組勵（33.61±2.1911]/11^)相比明顯升高（口<0.01)。藥物1^-126在濃度（8.75-15.754 g/mL)范圍內對LPS引起的NO含量升高有明顯的抑制作用，并表現出明顯的劑量依賴關系。
[0144] 2.3藥物抑制了陬-€[，幾-10，幾-6的產生
[0145] 如圖5至圖7所示，通過LPS刺激Raw 264.7細胞，Raw 264.7細胞炎癥因子TNF-a (132 · 16 ± 5 · 28pg/mL)，IL-10(358 · 80 ± 24 · 64pg/mL)，IL-6(198 · 39 ± 5 · 97pg/mL)含量與正 常組TNF-a (65 · 41 ±6 · 29pg/mL)，IL-10( 172 · 67 ± 10 · 06pg/mL)，IL-6( 103 · 34± 2 · 88pg/mL) 相比含量明顯升高(P<〇.01);說明LPS能夠刺激Raw 264.7細胞產生大量炎癥因子。
[0146] 藥物麗-126在濃度(8.75-15.75以8/1^)范圍內對1^3刺激1^￥ 264.7細胞產生炎癥 因子TNF-α，IL-Ιβ，IL-6含量均有明顯的抑制作用(p<0.05)，并表現出明顯的劑量依賴關 系。
[0147] 2.4藥物抑制OH的產生
[0148] 如圖8所示，通過LPS刺激Raw 264.7細胞，其產生0H(113.58±6.03ng/mL)含量與 正常組0H(63 · 40± 1 · 19ng/mL)相比明顯升高（p<0 · 01)。
[0149] 藥物MM-126在濃度(5.25-15.75yg/mL)范圍內對LPS引起的OH含量變化有明顯的 抑制作用(P <〇. 05 )，并表現出劑量依賴關系。
[0150] 本實驗經體外培養，研究了藥物麗-126對小鼠巨噬細胞勵，了冊-€[，11^10，11^6,0!1 生成的影響。
[0151] 藥物MM-126需在中高濃度時對^^冊-€1，幾-1|3，11^6的含量有明顯抑制效果，說 明其發揮抗炎活性需要較高藥物濃度實現;其對OH的抑制活性明顯，說明其有一定的抗氧 化活性。
[0152] 實施例8
[0153] 片劑的制備:按實施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及利用該化 合物與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸)或磺酸或堿 金屬的氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋰)或銨制成的鹽，按 該化合物或其任意一種鹽與賦形劑重量比為1:10的比例加入賦形劑，制粒壓片。
[0154] 實施例9
[0155] 散劑的制備:按實施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及利用該化 合物與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸)或磺酸或堿 金屬的氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋰)或銨制成的鹽，按 常規散劑制法制成散劑。
[0156] 實施例10
[0157] 膠囊劑或顆粒劑的制備：按實施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以 及利用該化合物與無機酸（如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸） 或磺酸或堿金屬的氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋰)或銨 制成的鹽，按該化合物或其任意一種鹽與賦形劑重量比為1:10的比例加入賦形劑，制成膠 囊劑或顆粒劑。
[0158] 實施例11
[0159] 注射劑的制備：按實施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及利用該 化合物與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸)或磺酸或 堿金屬的氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋰)或銨制成的鹽， 按常規注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射劑。
[0160] 實施例12
[0161] -種藥物組合物，含有實施例1方法制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及利用 該化合物與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸)或磺酸 或堿金屬的氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋰)或銨制成的 鹽，以及金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當歸、黨參制成的粉末，和輔料。
[0162] 實施例13
[0163] -種藥物組合物，含有實施例1方法制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及金櫻 根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當歸、黨參制成的粉末，和輔料。
[0164] 實施例14
[0165] -種藥物組合物，含有實施例1方法制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及金櫻 根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當歸、黨參的提取物，和輔料。提取物是按專利公告號 CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、CN1296071C、CN1321631C、CN1296072C、 CN1296073C的任意一件或幾件專利文件中提取方法制備得到。
[0166] 實施例15
[0167] -種藥物組合物，含有實施例1方法制得式（I)所示的苯丙素類化合物，以及利用 該化合物與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、羧酸、磷酸、乳酸)或磺酸 或堿金屬的氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋰)或銨制成的 鹽，以及金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當歸、黨參的提取物，和輔料。提取物是按 專利公告號 CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、CN1296071C、CN1321631C、 CN1296072C、CN1296073C的任意一件或幾件專利文件中提取方法制備得到。
[0168] 以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特征和本發明的優勢。本領域的技術 人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本 發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這對本 領域技術人員而言是顯而易見的，這些變化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發 明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
【主權項】
1. 一種苯丙素類化合物及其藥學上可接受的鹽在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應 用，所述苯丙素類化合物的結構式如式(I)所示：2. 根據權利要求1所述應用，其特征在于，是在制備抑制細胞炎癥因子NO的含量或抑制 細胞炎癥因子TNF-a，比-1β，比-6的表達或抑制徑基自由基的活性的藥物中的應用。3. 根據權利要求1所述應用，其特征在于，所述炎癥性疾病為宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔 炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關節炎。4. 根據權利要求1至3任一項所述的應用，其特征在于，所述藥學上可接受的鹽為式（I) 所示苯丙素類化合物與酸或堿形成的藥學上可接受的鹽， 所述苯丙素類化合物藥學上可接受的鹽的結構如式（Π )或式(虹)所示：其中，R為無機酸，扣或1?2或R3為橫酸根、堿金屬離子或錠根中的任意一種或任意兩種或 任意Ξ種。5. 根據權利要求4所述應用，其特征在于，所述無機酸為鹽酸、氨漠酸、氨氣酸、氨艦酸、 硫酸、硝酸、簇酸、憐酸或乳酸;所述橫酸根為具有芳基的橫酸根;所述堿金屬離子為鐘離 子、鋼離子、巧離子、儀離子或裡離子。6. 根據權利要求5所述應用，其特征在于，所述具有芳基的橫酸根為苯橫酸根或對甲苯 橫酸根。7. 根據權利要求1至3任一項所述應用，其特征在于，所述藥物含有藥學上允許的輔料 和/或載體。8. 根據權利要求7所述應用，其特征在于，所述藥物還含有金樓根、單面針、雞血藤、功 勞木、穿屯、蓮、當歸、黨參中的一種或幾種。9. 根據權利要求7所述應用，其特征在于，所述藥物還含有金樓根、單面針、雞血藤、功 勞木、穿屯、蓮、當歸、黨參中的一種或幾種的提取物。10. 根據權利要求7所述應用，其特征在于，所述藥物的劑型為片劑、膠囊劑、散劑、顆粒 劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、注射劑、軟膏劑、栓劑或噴霧劑。
【文檔編號】C07H15/203GK106074583SQ201610153535
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年3月17日 公開號201610153535.1, CN 106074583 A, CN 106074583A, CN 201610153535, CN-A-106074583, CN106074583 A, CN106074583A, CN201610153535, CN201610153535.1
【發明人】張鵬, 彭開鋒, 林麗美, 伍實花, 夏博候, 佘娜, 陽苗
【申請人】株洲千金藥業股份有限公司