連翹苷、其衍生物、連翹苷/連翹脂素組合物在制備治療細菌感染藥物中的應用
【專利摘要】本發明公開了一種連翹苷、其衍生物、連翹苷/連翹脂素組合物在制備治療細菌感染藥物中的新應用。試驗證明，連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷與連翹脂素組合物治療細菌感染的療效顯著，見效快、毒副作用小、是一種安全、高效、穩定、制備工藝簡單的治療細菌感染藥物，適于工業化生產，易于推廣。本發明為預防、緩解和治療細菌感染及其并發癥提供了一種新的藥物來源。
【專利說明】
連翹苷、其衍生物、連翹苷/連翹脂素組合物在制備治療細 菌感染藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發明涉及醫藥領域，涉及一種治療細菌感染的藥物或保健食品，特別涉及一種 中藥連翹及連翹葉提取成分在緩解和/或治療細菌感染藥物或保健食品中的應用。
【背景技術】
[0002] 在全球范圍內，抗生素耐藥性己成為一個令人擔憂的普遍性問題，導致與感染性 疾病相關的發病率和死亡率及其治療費用的不斷上升，并且，細菌對新出現的抗菌藥物產 生耐藥性的周期越來越短，已經成為困擾臨床醫生的一大難題，如何解決抗生素耐藥性問 題是廣大科研工作者和臨床醫生不可回避的重要課題。細菌對-內酞胺類抗生素耐藥是抗 生素耐藥中最為普遍和重要的耐藥類型。目前革蘭陰性桿菌中最引人注目的問題是細菌對 第三代頭抱菌素和新的廣譜-內酞胺類抗生素耐藥，其主要機制是細菌產超廣譜-內酰胺 酶（extended spectrum-laetamases, ESBLs)導致細菌對第三代一內酰胺類抗生素和氨曲 南耐藥。ESBLs是一組由質粒介導，能水解絕大多數頭飽菌素、單酞胺類抗生素的酶，大多 數EsBLs能被酶抑制劑如他唑巴坦和克拉維酸抑制。ESBLs主要分為SHV、TEM、CTX - M、 0ΧΑ和其它型。在不同的國家、地區和醫院，由于抗生素的使用不同，ESBLs的基因型各不 相同，在我國主要是以CTX - Μ型為主.因而對產CTX - Μ型ESBLs細菌感染的疾病采用 何種藥物進行治療就成了我國目前治療產ESBLS細菌的難點和重點"
[0003] 連翹是中藥臨床常用傳統藥物之一，應用廣泛，用量巨大，它具有清熱〃解毒〃消 腫散結"清除自由基的功能，臨床上常與其他的中草藥制成配方，用于各類細菌感染治療。 但是，其中具體活性成分尚不清楚，
【發明人】經過艱苦探索，制備提取了其中活性單體化合物 連翹苷，并經化學合成，制備了相應的衍生物，進行了一系列的藥理活性研究，發現連翹苷、 連翹苷衍生物、連翹苷與連翹脂素組合物具有抑制細菌感染，增強人體免疫功能活性，為細 菌感染患者開辟了新的治療途經。
[0004]
[0005] 本發明人通過大量的現代科學研究，采用先進的分離純化技術從連翹及連翹葉中 提取其治療細菌感染的有效成分連翹苷，并經進一步研究合成制備了連翹苷衍生物。可以 為細菌感染患者提供一種高效低毒的藥物。

【發明內容】

[0006] 本發明的首要目的是針對現有治療細菌感染的藥物或保健品在應用過程中存在 的技術問題，提供連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷與連翹脂素組合物（即連翹苷/連翹脂 素）預防、緩解或/和治療細菌感染所導致的疾病的性能和功效，并提供連翹苷、連翹苷衍 生物、連翹苷與連翹脂素組合物新的藥用用途，即在治療、調理、預防和緩解細菌感染的藥 物或保健食品中的新應用。
[0007] 為實現上述目的，本發明一方面提供一種連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷與連翹脂 素組合物在制備預防或/和治療細菌感染所致疾病的藥物或保健品中的應用。
[0008] 在篩選具有預防、緩解、治療細菌感染作用的天然活性成分的過程中，發明人發現 連翹的化學成分中連翹苷、連翹苷衍生物、連翹脂素具有強烈的抑制細菌感染的作用。
[0009] 其中，所述藥物或保健品由連翹苷、連翹苷衍生物或連翹苷與連翹脂素組合物和 藥學上可接受的載體組成。
[0010] 特別是，所述連翹苷衍生物選擇連翹脂素葡萄糖醛酸衍生物。
[0011] 特別是，所述連翹苷衍生物包括33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（33-Hydroxy phi 1 lygenin-8-〇- β -D-glucuronide)、9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（9-Hydroxy phillygenin-8-〇-β -D-glucuronide)、33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸 苷（33,34-Methylenedioxy phillygenin-8-〇-0-D-glucuronide)、連翅脂素葡萄 糖酸酸甲酯（（2R，3R，4R，5S)-methyl6-(5-((lR，4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydrofuro[3, 4~c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3, 4, 5-trihydroxyte tra hydr〇-2H-pyran-2_carboxylate)、連翅脂素葡萄糖酸酸鈉（sodium(2R, 3R, 4R, 5S) -6 -(5-((1R, 4S)-4-(3, 4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3, 4~c]furan-1-yl)-2~met hoxyphenoxy)_3, 4, 5-trihydroxytetrahydr〇-2H-pyran-2_carboxylate)、連翅月旨素 葡萄糖酸酸鉀（potassium(2R,3R, 4R,5S)-6_ (5-( (1R,4S)-4_ (3, 4-dimethoxyphenyl) hexahydrofuro[3, 4~c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3, 4, 5-trihydroxytetrahydr〇-2H-pyran-2-carboxylate)、連翹脂素葡萄糖醛酸（(2R, 3R, 4R, 5S)-6-(5_((lR, 4S)-4_(3, 4 -dimethoxyphenyl) hexahydrofuro [3, 4~c] furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3, 4, 5~trih ydroxytetrahydr〇-2H-pyran-2_carboxylic acid);優選為 33-羥基-連翅脂素葡萄糖酸 酸苷、9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、連翹 脂素葡萄糖醛酸甲酯、連翹脂素葡萄糖醛酸鈉或連翹脂素葡萄糖醛酸鉀。
[0012] 特別是，所述連翹苷與連翹脂素組合物中連翹苷與連翹脂素的重量份配比為2~ 98 :2~98 ;優選為2-10:90-98 ;進一步優選為80:20或20:80,進一步優選為90:10或 10:90,更進一步優選為98:2或2:98 ;再進一步優選為98:2。
[0013] 其中，所述的連翹苷、連翹苷衍生物的含量多1%，優選為多30%，進一步優選為 多60%，更進一步優選為多80%，再更進一步優選為多98% ;連翹苷與連翹脂素組合物含 量多1%，優選為多30%，進一步優選為多60%，更進一步優選為多80%，再更進一步優選 為彡98%。
[0014] 特別是，所述的連翹苷、連翹苷衍生物含量為1%~98% ;優選為30~80% ;連翹 苷與連翹脂素組合物含量為1 %~98 % ;優選為30~80 %。
[0015] 特別是，藥學上可接受的載體通常被保健專家認可用于這一目的且作為 藥劑的非活性成分。有關藥學上可接受的載體的匯編可以在《藥物賦形劑手冊》 (Handbook of Pharmaceutical excipients，第 2 版，由 A. Wade 和 P.J. Weller 編輯； American Pharmaceutical Association 出片反，Washington and The Pharmaceutical Press, London, 1994)等工具書中找到。
[0016] 尤其是，所述的載體包括賦形劑，如淀粉、水等；潤滑劑，如硬脂酸鎂等；崩解劑， 如微晶纖維素等；填充劑，如乳糖等；粘結劑，如預膠化淀粉、糊精等；甜味劑；抗氧化劑；防 腐劑、矯味劑、香料等；
[0017] 其中，所述藥物以片劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑形式存在。
[0018] 特別是，所述的連翹苷、連翹苷衍生物含量彡1%，優選為彡30%，進一步優選為 多60%，更進一步優選為多80%，再更進一步優選為多98% ;連翹苷與連翹脂素組合物含 量多1%，優選為多30%，進一步優選為多60%，更進一步優選為多80%，再更進一步優選 為彡98%。
[0019] 本發明另一方面提供一種含有連翹苷、連翹苷衍生物或連翹苷與連翹脂素組合物 的預防、緩解和/或治療細菌感染導致的疾病的藥物或保健品。
[0020] 其中，所述連翹苷衍生物選擇連翹脂素葡萄糖醛酸衍生物。
[0021] 特別是，所述連翹苷衍生物包括33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、9-羥基-連翹 脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、連翹脂素葡萄糖醛酸甲 酯、連翹脂素葡萄糖醛酸鈉、連翹脂素葡萄糖醛酸鉀、連翹脂素葡萄糖醛酸；優選為33-羥 基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亞甲基二氧-連翹 脂素葡萄糖醛酸苷、連翹脂素葡萄糖醛酸甲酯、連翹脂素葡萄糖醛酸鈉或連翹脂素葡萄糖 醛酸鉀。
[0022] 其中，所述連翹苷與連翹脂素組合物中連翹苷與連翹脂素的重量份配比為2~ 98 :2~98 ;優選為2-10:90-98 ;進一步優選為80:20或20:80,進一步優選為90:10或 10:90,更進一步優選為98:2或2:98 ;再進一步優選為98:2。
[0023] 特別是，所述的連翹苷、連翹苷衍生物的含量多1%，優選為多30%，進一步優選 為多60 %，更進一步優選為多80 %，再更進一步優選為多98% ;連翹苷與連翹脂素組合物 含量多1%，優選為多30%，進一步優選為多60%，更進一步優選為多80%，再更進一步優 選為彡98%。
[0024] 尤其是，所述的連翹苷、連翹苷衍生物的含量多1%，優選為1%~98% ;優選為 30~80%，更進一步優選為60%;連翹苷與連翹脂素組合物含量多1 %，優選為1 %~98%; 優選為30~80 %，更進一步優選為60 %。
[0025] 特別是，所述連翹苷、連翹苷衍生物或連翹苷與連翹脂素組合物的重量與所述藥 物或保健品的總重量之比為〇. 01-10 :1〇〇,優選為〇. 1~10 :1〇〇,進一步優選為1~10 : 100〇
[0026] 其中，所述連翹苷/連翹脂素組合物以連翹苷和連翹脂素以單體組成、或采用溶 劑加熱提取方法制備而成的連翹脂素-連翹苷提取組合物，或連翹脂素和連翹苷與環糊精 或環糊精的衍生物組合而成連翹脂素-連翹苷-環糊精組合物。
[0027] 特別是，所述連翹脂素-連翹苷-環糊精組合物選擇連翹脂素和連翹苷與α _、 β-或γ-環糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或連翹脂素和連翹苷與α-、β-或 γ -環糊精或其衍生物經物理、化學方法處理形成的復合物。
[0028] 其中，所述連翹脂素-連翹苷-環糊精組合物中連翹苷和連翹脂素重量與環糊精 或環糊精的衍生物的重量之比為1 :1-50。
[0029] 特別是，所述環糊精為α -或β -、γ -環糊精；所述環糊精衍生物為羥乙基-環 糊精、2, 6-二甲基-環糊精、2, 3, 6-三甲基-環糊精、2, 6-二乙基-環糊精、2, 3, 6-三乙 基-環糊精、麥芽糖基-環糊精或磺丁醚β-環糊精、對甲基苯磺酰氯（p-TsCl)取代的 β -環糊精、6-位取代的β -⑶對甲基苯磺酸酯（β -環糊精-6-OTs)、2_氧羥丙基-β -環 糊精、2-位單取代的對甲基苯磺酸酯（β-環糊精-2-OTs)、β-環糊精對甲基苯磺酸酯 (Tosyl- β -CD)、β -環糊精的星形大分子 PCL- (Tos) 7- β -CD。
[0030] 特別是，所述藥物或保健品中還包括穿心蓮提取物，四季青提取物，金銀花提取 物，板藍根提取物，蒲公英提取物，黃柏提取物，黃連提取物，黃芩提取物，馬齒莧提取物，白 頭翁提取物，大蒜提取物，魚腥草提取物，野菊花提取物，苦參提取物、維生素 C及其衍生物 或維生素 E及其衍生物。
[0031] 與現有技術相比，本發明具有如下的明顯優點：
[0032] 1、本發明對已知化合物連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷/連翹脂素組合物發掘了 新的藥用價值，將其用于預防、緩解、治療細菌感染，并可制備成預防、緩解和/或治療細菌 感染的藥物或保健食品，從而為連翹及連翹葉藥材的應用開拓了一個新的領域。
[0033] 2、本發明的系列試驗研究證明已知化合物連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷/連翹 脂素組合物具有顯著的緩解、治療細菌感染的功效。
[0034] 3、本發明的已知化合物連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷/連翹脂素組合物藥理作 用強，用于緩解、預防、治療細菌感染的功效顯著，見效快、毒副作用小、安全性好，能夠長期 服用，具有良好的藥用前景。
[0035] 4、本發明的產品原料來源豐富、價廉、臨床使用安全，制備工藝簡單，可制成各種 劑型，且服量小，使用方便，因此易于推廣。
[0036] 5、本發明既可采用單一成分的連翹苷、連翹苷衍生物或連翹苷/連翹脂素組合物 活性成分制備預防、緩解、治療細菌感染所致疾病的藥物，又可采用連翹苷、連翹苷衍生物 或連翹苷/連翹脂素組合物與其它活性成分（例如與穿心蓮提取物，四季青提取物，金銀花 提取物，板藍根提取物，蒲公英提取物，黃柏提取物，黃連提取物，黃零提取物，馬齒莧提取 物，白頭翁提取物，大蒜提取物，魚腥草提取物，野菊花提取物，苦參提取物、維生素 C及其 衍生物或維生素 E及其衍生物）共同組方，制備預防、治療細菌感染的復方藥物。
【具體實施方式】
[0037] 下面通過【具體實施方式】來進一步描述本發明所述配方的有益效果，這些實施例包 括了本發明的連翹苷、連翹苷衍生物的膠囊、片劑、軟膠囊劑的藥效學試驗。這些實施例僅 是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離 本發明的配方思路、用途范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但 這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。
[0038] 本發明中所述連翹苷衍生物33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、9-羥基-連翹 脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷與專利申請（申請號： 201510319303. 4,優先權號：201510164294.6)中所述連翹苷衍生物相同；連翹脂素葡萄糖 醛酸甲酯、連翹脂素葡萄糖醛酸鈉、連翹脂素葡萄糖醛酸鉀、連翹脂素葡萄糖醛酸與專利申 請（申請號：201510320579. 4,優先權號：201410825547. 5)中的相同。
[0039] 實施例1連翹苷片劑
[0040] 1、按照如下配比準備原料
[0041] 連翹苷（純度50%) 500g 淀粉 l〇〇〇g 滑石粉 15g 硬脂酸鎂 15g
[0042] 2、將連翹苷和淀粉混合均勻后制成顆粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂混合均勻后壓制 成10000片。
[0043] 實施例2連翹苷膠囊劑
[0044] 1、按照如下配比準備原料
[0045] 連翹苷（純度) 2〇Og
[0046] 淀粉 1000g
[0047] 2、將連翹苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0048] 實施例3連翹苷膠囊劑
[0049] 1、按照如下配比準備原料
[0050] 連翹苷（純度98% ) 500g
[0051] 淀粉 1000g
[0052] 2、將連翹苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0053] 實施例4連翹苷片劑
[0054] 1、按照如下配比準備原料
[0055] 連翹苷（純度63%) 50g 穿心蓮提取物 200 g 維生素 C 400 g 淀粉 i〇〇〇g 滑石粉 1_% 硬脂酸鎂 1%
[0056] 2、將連翹苷、穿心蓮提取物、維生素 C和淀粉混合均勻后，制成顆粒，加入滑石粉 和硬脂酸鎂混合均勻后壓制成10000片。
[0057] 實施例5連翹苷膠囊劑
[0058] 1、按照如下配比準備原料
[0059] 連翹苷（純度98%) 300g 金銀花提取物 400 g 維生素 C 600 g 淀粉 1000 g
[0060] 2、將連翹苷、金銀花提取物、維生素 C和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0061] 實施例6連翹苷顆粒劑
[0062] 1、按照如下配比準備原料
[0063] 連翹苷（純度92%) 500g 黃芩提取物 200 g 維生素 C 600 g 蔗糖粉 5000 g
[0064] 2、將連翹苷、黃芩提取物、維生素 C和蔗糖粉混合均勻制成顆粒后裝袋，制成 10000 袋。
[0065] 實施例7連翹苷口服液
[0066] 1、按照如下配比準備原料
[0067] 連翹苷 4g 蒲公英提取物 3g 馬齒莧提取物 3g 葡萄糖糖漿 5|
[0068] 全方最終加去離子水至100%。
[0069] 2、取連翹苷、蒲公英提取物、馬齒莧提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖漿，最終 加去離子水至l〇〇ml，即得。
[0070] 實施例8 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷片劑
[0071] 1、按照如下配比準備原料
[0072] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度66%) 5Wg 淀粉 1細〇§ 滑石粉 15g 硬脂酸鎂 15g:
[0073] 2、將33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后，制成顆粒，加入滑石粉 和硬脂酸鎂混合均勻后壓制成10000片。
[0074] 實施例9 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0075] 1、按照如下配比準備原料
[0076] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度60 % ) 200g
[0077] 淀粉 l〇〇〇g
[0078] 2、將33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0079] 實施例10 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0080] 1、按照如下配比準備原料
[0081] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98 % ) 500g
[0082] 淀粉 l〇〇〇g
[0083] 2、將33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0084] 實施例11 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷片劑
[0085] 1、按照如下配比準備原料
[0086] 33-羥基-連翅脂素葡萄糖醛酸苷（純度63%) 50g 金銀花提取物 20 g 維牛i C 400 g 淀粉 1000g 滑石粉 14.7g 硬脂酸鎂 14.7g
[0087] 2、將33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、金銀花提取物、維生素 C和淀粉混合均勻 后制粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂混勻后壓制成10000片。
[0088] 實施例12 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0089] 1、按照如下配比準備原料
[0090] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%) 板藍根提取物 30 g 維生素 C 600 g 遼粉 1000g
[0091] 2、將33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、板藍根提取物、維生素 C和淀粉混合均勻 后裝膠囊，制成10000粒。
[0092] 實施例13 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷顆粒劑
[0093] 1、按照如下配比準備原料
[0094] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度92%) 500? 白頭翁提取物 30 g 維 600 g 蔗糖粉 邠00 g
[0095] 2、將33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、維生素 C和蔗糖粉混合均 勻制成顆粒后裝袋，制成10000袋。
[0096] 實施例14 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷口服液
[0097] 1、按照如下配比準備原料
[0098] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%) 4g 金銀花提取物 3g 白頭翁提取物 3g 葡萄糖糖漿 5g 去離子水 適量
[0099] 2、取33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、金銀花提取物，用乙醇溶 解后加入葡萄糖糖漿，最終加去離子水至l〇〇ml，即得。
[0100] 實施例15 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷片劑
[0101] 1、按照如下配比準備原料 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度66%) 500g
[0102] 淀粉 KKM) g 滑石粉 15g
[0103] 硬脂酸鎂 15g
[0104] 2、將9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后，制成顆粒，加入滑石粉 和硬脂酸鎂混合均勻后壓制成10000片。
[0105] 實施例16 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0106] 1、按照如下配比準備原料
[0107] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度97% ) 200g
[0108] 淀粉 1000g
[0109] 2、將9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0110] 實施例17 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0111] 1、按照如下配比準備原料
[0112] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98 % ) 500g
[0113] 淀粉 1000g
[0114] 2、將9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0115] 實施例18 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷片劑
[0116] 1、按照如下配比準備原料
[0117] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度63%) 50g 金銀花提耽物 20 g 維生素 C 400 g 淀粉 1000 g 滑石粉 14.7g 硬脂酸鎂 14.7g
[0118] 2、將9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、金銀花提取物、維生素 C和淀粉混合均勻 后制粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂混勻后壓制成10000片。
[0119] 實施例19 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0120] 1、按照如下配比準備原料
[0121] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%) 300 g 板藍根提取物 30 g 維生素 C 600 g 淀粉 1000 g
[0122] 2、將9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、板藍根提取物、維生素 C和淀粉混合均勻 后裝膠囊，制成10000粒。
[0123] 實施例20 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷顆粒劑
[0124] 1、按照如下配比準備原料
[0125] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度92%) 500g 白頭翁提取物 30 g 維生素 C 600 g 蔗糖粉 5000 g
[0126] 2、將9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、維生素 C和蔗糖粉混合均 勻制成顆粒后裝袋，制成10000袋。
[0127] 實施例21 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷口服液
[0128] 1、按照如下配比準備原料
[0129] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%) 4g 魚腥草提取物 3.:g_ 白頭翁提取物 3:;g. 葡萄糖糖漿 ：5:g 去離子水 適量
[0130] 2、取9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、魚腥草提取物，用乙醇溶解 后加入葡萄糖糖漿，最終加去離子水至l〇〇ml，即得。
[0131] 實施例22 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷片劑
[0132] 1、按照如下配比準備原料
[0133] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷(純度66%) 5繼g 淀粉 丨000g 滑石粉 15g 硬脂酸鎂 1?
[0134] 2、將33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后，制成顆粒， 加入滑石粉和硬脂酸鎂混合均勻后壓制成10000片。
[0135] 實施例23 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0136] 1、按照如下配比準備原料
[0137] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度97% ) 200g
[0138] 淀粉 1000g
[0139] 2、將33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成 10000 粒。
[0140] 實施例24 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0141] 1、按照如下配比準備原料
[0142] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98% ) 500g
[0143] 淀粉 1000g
[0144] 2、將33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均勻后裝膠囊，制成 10000 粒。
[0145] 實施例25 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷片劑
[0146] 1、按照如下配比準備原料
[0147] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度63%) 50g 魚腥草提取物 ：2(Jg 維生素 C 400 g 淀粉 1000 g 滑石粉 14.7g 硬脂酸鎂 14.7g
[0148] 2、將33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、魚腥草提取物、維生素 C和淀 粉混合均勻后制粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂混勻后壓制成10000片。
[0149] 實施例26 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷膠囊劑
[0150] 1、按照如下配比準備原料
[0151] 飛3, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%) 3繼g 板藍根提取物 30 g 維生素 C 淀粉 I朋§:g
[0152] 2、將33,34_亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、板藍根提取物、維生素 C和淀 粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0153] 實施例27 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷顆粒劑
[0154] 1、按照如下配比準備原料 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷' (純度92%) DOOg
[0155] 白頭翁提取物 30 g 維牛.尜C 600 g
[0156] 蔗糖粉 5000 g
[0157] 2、將33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、維生素 C和蔗 糖粉混合均勻制成顆粒后裝袋，制成10000袋。
[0158] 實施例28 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷顆粒劑
[0159] 1、按照如下配比準備原料
[0160] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%) 300g 白頭翁提取物 3?g 維牛.索C 600 g 蔗糖粉 5000 g
[0161] 制成 10000 袋
[0162] 2、將33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、維生素 C和蔗 糖粉混合均勻制成顆粒后裝袋，制成10000袋。
[0163] 實施例29 33,34_亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷口服液
[0164] 1、按照如下配比準備原料
[0165] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（純度98%> 4g 魚腥草提取物 3g 白頭翁提取物 ：3:g: 葡萄糖糖漿 5g 去離子水 適量
[0166] 2、取33,34_亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷、白頭翁提取物、魚腥草提取物， 用乙醇溶解后加入葡萄糖糖漿，最終加去離子水至l〇〇ml，即得。
[0167] 實施例30連翹苷和連翹脂素組合物片劑制備
[0168] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的片劑：
[0169] 連翹苷/連翹脂素組合物(兩者重量比為98:2) 500g 淀粉 480g 滑石粉 l〇g 硬脂酸鎂 l〇g
[0170] 2、取連翹苷490g、連翹脂素10g與淀粉混合均勻后，制成顆粒，加入滑石粉和硬脂 酸鎂混合均勻后壓制成10000片。
[0171] 實施例31連翹苷/連翹脂素組合物顆粒劑制備
[0172] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的顆粒劑：
[0173] 連翹苷/連翹脂素組合物（兩者重量比為98:2) 100g
[0174] 微晶纖維素 10000g
[0175] 2、取連翹苷98g、連翹脂素2g與微晶纖維素混合均勻后，制成顆粒裝袋，制成 10000 袋。
[0176] 實施例32連翹苷/連翹脂素組合物膠囊劑制備
[0177] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的膠囊劑：
[0178] 連翹苷/連翹脂素組合物（兩者重量比為98:2) 250g
[0179] 淀粉 2500g
[0180] 2、取連翹苷245g、連翹脂素5g與淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0181] 實施例33-36連翹苷/連翹脂素組合物膠囊劑制備
[0182] 實施例33-36中，連翹苷/連翹脂素組合物分別按下表的重量比與淀粉混合均勻 后裝膠囊，各制成10000粒膠囊。
[0183]
[0184] 實施例：37-40連翹苷/連翹脂素組合物顆粒劑制備
[0185] 實施例37-30中，連翹苷/連翹脂素組合物分別按下表的重量比與微晶纖維素混 合均勻后，制成顆粒裝袋，制成10000袋。
[0186]
[0187] 實施例41連翹苷/連翹脂素組合物片劑制備
[0188] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的片劑： 連翹苷/連翹脂素組合物(兩者重量比為98:2) 500g 淀粉 380g
[0189] 黃芩提取物 100g 滑石粉 10g
[0190] 硬脂酸鏷 10g
[0191] 2、稱取連翹苷490g、連翹脂素10g與黃芩提取物粉末混合均勻，再與淀粉混合均 勻后制成顆粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂混合均勻后壓制成10000片。
[0192] 實施例42連翹苷/連翹脂素組合物顆粒劑制備
[0193] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的顆粒劑：
[0194] 連翹苷/連翹脂素組合物(兩者重量比為98:2) 250g 野菊花提取物 250g 黃芩提取物 25t)g 微晶纖維素 24500g
[0195] 2、取連翹苷245g、連翹脂素5與野菊花提取物、黃芩提取物粉末混合均勻，再與微 晶纖維素混合均勻后制成顆粒裝袋，制成10000袋。
[0196] 實施例43連翹苷/連翹脂素組合物膠囊劑制備
[0197] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的膠囊劑：
[0198] 連翹衍連翹脂素組合物(兩者重量比為98:2) 250g 苦參提取物 25% 四季青提取物 250g 穿心蓮提取物 250g 淀粉 1000g
[0199] 2、連翹苷245g、連翹脂素5g與苦參提取物、四季青提取物、穿心蓮提取物粉末混 合均勻，再與淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0200] 實施例44連翹苷/連翹脂素組合物片劑制備
[0201] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的片劑：
[0202] 連翹苷/連翹脂素組含物(兩者重量比為紐:額） 500g 淀粉 480g 四季青提取物 50% 滑石粉 1% 硬脂酸鎂 l〇g
[0203] 2、取連翹苷490g、連翹脂素10g與四季青提取物粉末混合均勻，再與淀粉混合均 勻后制成顆粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂混合均勻后壓，制成10000片。
[0204] 實施例45連翹苷/連翹脂素組合物顆粒劑制備
[0205] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的顆粒劑：
[0206] 連翹苷/連翹脂素組合物(兩者重量比為90:10) 1000g 魚腥草提取物 500g 板藍根提取物 500g 微晶纖維素 10000g
[0207] 2、取連翹苷900g、連翹脂素100g與上述提取物（魚腥草、板藍根）粉末混合均勻， 再與微晶纖維素混合均勻后制成顆粒裝袋，制成10000袋。
[0208] 實施例46連翹苷/連翹脂素組合物膠囊劑制備
[0209] 1、按照如下配比制備連翹苷/連翹脂素組合物的膠囊劑：
[0210] 連翹苷/連翹脂素組合物(兩者重量比為94:6) 2000g 魚腥草提取物 250g 草豆蔻提取物 500g 四季青提取物 250g 淀粉 1000g
[0211] 2、連翹苷1880g、連翹脂素120g與上述提取物（魚腥草、草豆蔻、四季青）粉末混 合均勻，再與淀粉混合均勻后裝膠囊，制成10000粒。
[0212] 試驗例1連翹苷抗菌作用的實驗研究
[0213] 1實驗材料
[0214] 1. 1藥物與試劑
[0215] 連翹苷（含量> 98% )，白色粉末，大連富生天然藥物開發有限公司生產，經高 效液相色譜兩種檢測器紫外檢測器和蒸發光散射檢測器面積歸一化法測定，其純度為 99. 5%，并用中國藥品生物制品含量測定用連翹苷對照品標定和確認其含量為99. 5%。批 號：20130303。
[0216] 1.2 菌種
[0217] (1)細菌枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大腸桿菌（Escherichia coli)，
[0218] (2)霉菌黑曲霉（Aspergillus niger)、黃曲霉（Aspergillus flavus)，桔青霉 (Penicillium citrinum)，
[0219] (3)酵母（Saccharomyces cerevisiae) 〇
[0220] 以上菌種均由大連醫科大學微生物實驗室提供。
[0221] 1.3實驗儀器及培養基
[0222] 微量多點接種儀：北京醫科大學昆侖藥物發展研究所生產。
[0223] 培養基：Mueller_Hinton瓊脂（法國事物梅里埃公司，簡稱M-Η瓊脂）。
[0224] 1. 4實驗方法
[0225] 采用瓊脂稀釋法，用M-Η瓊脂進行連翹苷的定量抗菌實驗。
[0226] 1)藥液稀釋：取無菌試管10只排列于試管架中，于第2~10只試管中分別加入 無菌蒸餾水101^;接著取0.3%連翹苷無菌0.5%01(：-~&溶液（稱取連翹苷38，用適量的 0. 5% CMC-Na溶液混懸后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混勻后使用。）10mL加入 到第1只試管中；然后再取10mL的0. 3%連翹苷無菌0. 5% CMC-Na溶液加入到第2只試管 中，混勻后從第2只試管中取10mL混合液加入到第3只試管內，再混合均勻后取10mL混合 液加入到第4只試管中，混勻后再從第4只試管中取10ml混合液計入到第5只試管中，混 勻，如此連續稀釋至第9只試管混勻后，取出10mL棄掉。第10只試管中只有無菌蒸餾水， 以第10只試管中的無菌蒸餾水作為對照。這樣1~9管含有不同濃度藥液各10mL。
[0227] 2)含藥平板制備
[0228] 在無菌操作臺上按照無菌操作方法，將已經溶化的無菌M-Η瓊脂900mL，分裝于 10個三角瓶中，每瓶90mL熔融的無菌M-Η瓊脂，將第1只試管中含有的10mL的0. 3%連 翹苷無菌蒸餾水溶液放入到含90mL培養基的第1個三角瓶中，混合后平均傾倒至7個平板 (即平皿）中，每個平板約含14mL含藥（即連翹苷）瓊脂，凝固后備用，為第1含藥瓊脂平 板組，其中：第1含藥瓊脂平板組每個平板中實際含連翹苷3. Omg/ml。
[0229] 第2-10只試管內的溶液按照與第1只試管內的溶液同樣的方法傾倒平板，制成第 2-10含藥平板組，每個平板組含有7個平板，每個平板約含14mL含藥（即連翹苷）瓊脂，凝 固后備用。第2含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷1. 5mg/ml ;第3含藥瓊脂平板組 中每個平板實際含連翹苷為〇. 75mg/ml ;第4含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷為 0. 375mg/ml ;第5含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷為0. 1875mg/ml ;第6含藥瓊脂 平板組中每個平板實際含連翹苷為0. 〇938mg/ml ;第7含藥瓊脂平板組中每個平板實際含 連翹苷為0. 〇469mg/ml ;第8含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷為0. 0234mg/ml ;第 9含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷為0. 0117mg/ml ;第10含藥瓊脂平板組中每個 平板實際含連翹苷為〇. 〇mg/ml。
[0230] 3)用多點接種儀分別吸取各種菌液并將菌液點種于含不同藥物濃度的瓊脂平板 上。于35°C培養18~24h，觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+)，不生長菌體為陰性 (一），以不生長菌體的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC)。
[0231] 2實驗結果
[0232] 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉抑菌效 果測定結果如表1所示。
[0233] 表1連翹苷對7種細菌的MIC
[0234]
[0235] 注：-表示無菌生長；+表示菌體生長少；++表示菌體生長較多；+++表示菌體生長 多，下同
[0236] 由表1的研究結果表明，連翹苷對金黃色葡萄球菌、酵母菌、桔青霉菌、黑曲霉菌 等抗菌作用顯著，其對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃 曲霉的 MIC 為：0· 0469mg/ml、1. 5mg/ml、1. 5mg/ml、0. 1875mg/ml、0. 0469mg/ml、0. 0469mg/ ml、0.1875mg/ml〇
[0237] 試驗例2連翹苷衍生物抗菌作用的實驗研究
[0238] 1實驗材料
[0239] 1. 1藥物與試劑
[0240] 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（連翹苷衍生物A)，（含量> 98% )，白色粉末， 大連富生天然藥物開發有限公司生產，批號=20130301。經高效液相色譜兩種檢測器紫外檢 測器和蒸發光散射檢測器面積歸一化法測定，其純度為98. 5%。
[0241] 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（連翹苷衍生物B)，（含量> 98% )，白色粉末， 大連富生天然藥物開發有限公司生產，批號=20130302。經高效液相色譜兩種檢測器紫外檢 測器和蒸發光散射檢測器面積歸一化法測定，其純度為99. 2%。
[0242] 33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷（連翹苷衍生物C)，（含量>98%)， 白色粉末，大連富生天然藥物開發有限公司生產，批號=20130301。經高效液相色譜兩種檢 測器紫外檢測器和蒸發光散射檢測器面積歸一化法測定，其純度為98. 7%。
[0243] 1. 2 菌種
[0244] 菌種與試驗例1相同，均由大連醫科大學微生物實驗室提供。
[0245] 1. 3實驗儀器及培養基
[0246] 與試驗例1相同。
[0247] L 4實驗方法
[0248] 采用瓊脂稀釋法，用M-Η瓊脂進行連翹苷的定量抗菌實驗。
[0249] 1)配制連翹苷衍生物藥液
[0250] 稱取33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷3g，用適量的0. 5% CMC-Na溶液混懸后， 加0. 5 % CMC-Na溶液至1000ml，充分混勻，制得0. 3 % 33-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷無 菌0. 5% CMC-Na溶液（簡稱連翹苷衍生物A藥液），備用；
[0251] 稱取9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷3g，用適量的0. 5% CMC-Na溶液混懸后，加 0. 5 % CMC-Na溶液至1000ml，充分混勾，制得0. 3% 9-羥基-連翹脂素葡萄糖醛酸苷無菌 0. 5% CMC-Na溶液（簡稱連翹苷衍生物B藥液），備用；
[0252] 稱取33, 34-亞甲基二氧-連翹脂素葡萄糖醛酸苷3g，用適量的0.5 % CMC-Na溶 液混懸后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混勻，制得0. 3% 33, 34-亞甲基二氧-連翹 脂素葡萄糖醛酸苷無菌〇. 5 % CMC-Na溶液（簡稱連翹苷衍生物C藥液），備用。
[0253] 2)藥液稀釋：
[0254] 取無菌試管30只分成3組，每組10只分布排列于試管架中，在第一組的10只試 管中于第2~10只試管中分別加入無菌蒸餾水10mL ;接著取連翹苷衍生物A藥液10mL加 入到第1只試管中；再取10mL連翹苷衍生物A藥液加入到第2只試管中，混勻后從第2只 試管中取10mL混合液加入到第3只試管內，再混合均勻后取10mL混合液加入到第4只試 管中，混勻后再從第4只試管中取10ml混合液計入到第5只試管中，混勻，如此連續稀釋至 第9只試管混勻后，取出10mL棄掉。第10只試管中只有無菌蒸餾水，以第10只試管中的 無菌蒸餾水作為對照。這樣1~9管含有不同濃度藥液各10mL。
[0255] 第二組試管中除了加入的藥液是連翹苷衍生物B藥液之外，其它操作方法與第一 組試管的藥液進行稀釋方法相同；第三組試管中除了加入的藥液是連翹苷衍生物C藥液之 外，其它操作方法與第一組試管的藥液進行稀釋方法相同。
[0256] 3)含藥平板制備
[0257] 3-1)連翹苷衍生物A含藥瓊脂平板組
[0258] 在無菌操作臺上按照無菌操作方法，將已經溶化的無菌M-Η瓊脂900mL，分裝于10 個三角瓶中，每瓶90mL熔融的無菌M-Η瓊脂，將第一組試管中的第1只試管中含有的10mL 的連翹苷衍生物A藥液放入到含90mL培養基的第1個三角瓶中，混合后平均傾倒至7個平 板（即平皿）中，每個平板約含14mL含藥（即連翹苷衍生物A)瓊脂，凝固后備用，為第1 含藥瓊脂平板組，其中：第1含藥瓊脂平板組每個平板中實際含連翹苷衍生物A 3. 0mg/ml。
[0259] 第一組試管中的第2-10只試管內的溶液按照與第1只試管內的溶液同樣的方法 傾倒平板，制成第2-10含藥平板組，每個平板組含有7個平板，每個平板約含14mL含藥（即 連翹苷衍生物A)瓊脂，凝固后備用。第2含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷衍生物 Al. 5mg/ml ;第3含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷衍生物A為0. 75mg/ml ;第4含 藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷衍生物A為0. 375mg/ml ;第5含藥瓊脂平板組中每 個平板實際含連翹苷衍生物A為0. 1875mg/ml ;第6含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連 翹苷衍生物A為0. 0938mg/ml ;第7含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷衍生物A為 0. 0469mg/ml ;第8含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷衍生物A為0. 0234mg/ml ;第 9含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷衍生物A為0. 0117mg/ml ;第10含藥瓊脂平板 組中每個平板實際含連翹苷衍生物A為0. 0mg/ml。
[0260] 3-2)連翹苷衍生物B、C含藥瓊脂平板組
[0261] 按照連翹苷衍生物A含藥瓊脂平板組的配制方法制備連翹苷衍生物B含藥瓊脂平 板組，除了向第二組三角瓶中加入第二組試管中的連翹苷衍生物B藥液之外，其余與步驟 3-1)相同。
[0262] 按照連翹苷衍生物A含藥瓊脂平板組的配制方法制備連翹苷衍生物C含藥瓊脂平 板組，除了向第三組三角瓶中加入第三組試管中的連翹苷衍生物C藥液之外，其余與步驟 3-1)相同。
[0263] 4)用多點接種儀分別吸取各種菌液并將菌液點種于含不同藥物濃度的瓊脂平板 上。于35°C培養18~24h，觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+)，不生長菌體為陰性 (一），以不生長菌體的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC)。
[0264] 2實驗結果
[0265] 連翹苷衍生物A、連翹苷衍生物B和連翹苷衍生物C對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、 枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉抑菌效果測定結果如表2-4所示。
[0266] 表2連翹苷衍生物A對7種細菌的MIC
[0267]
[0268] 表3連翹苷衍生物B對7種細菌的MIC
[0269]
[0270] 表4連翹苷衍生物C對7種細菌的MIC[0271]
[0272] 由表2-4的研究結果表明，連翹苷衍生物A、B、C對金黃色葡萄球菌、酵母菌、 桔青霉菌、黑曲霉菌等抗菌作用顯著，連翹苷衍生物A對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯 草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉的MIC為：0. 0234mg/ml、0. 75mg/ml、0. 75mg/ ml、0. 0938mg/ml、0. 0469mg/ml、0. 0234mg/ml、0. 0938mg/ml。連翹苷衍生物 B 對金黃色葡 萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉的MIC為：0. 0938mg/ml、 0· 75mg/ml、0. 75mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0469mg/ml。
[0273] 連翹苷衍生物C對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑 曲霉、黃曲霉的 MIC 為：0· 0469mg/ml、1. 5mg/ml、1. 5mg/ml、0. 1875mg/ml、0. 0469mg/ml、 0· 0469mg/ml、0. 1875mg/ml。
[0274] 試驗例3連翹苷/連翹脂素組合物抗菌作用的實驗研究
[0275] 1實驗材料
[0276] 1. 1藥物與試劑
[0277] 連翹苷/連翹脂素組合物A，連翹苷（含量>98%)，白色粉末，大連富生天然藥物 開發有限公司生產，批號：20130303 ;連翹脂素（含量> 98% )，白色粉末，大連富生天然藥 物開發有限公司生產，批號：20130301 ;連翹苷與連翹脂素的重量之比為98 :2。
[0278] 連翹苷/連翹脂素組合物B，連翹苷（含量>98%)，白色粉末，大連富生天然藥物 開發有限公司生產，批號：20130303 ;連翹脂素（含量> 98% )，白色粉末，大連富生天然藥 物開發有限公司生產，批號：20130301 ;連翹苷與連翹脂素的重量之比為89 :11。
[0279] 1. 2 菌種
[0280] 菌種與試驗例1相同，均由大連醫科大學微生物實驗室提供。
[0281] 1.3實驗儀器及培養基
[0282] 與試驗例1相同。
[0283] 1. 4實驗方法
[0284] 采用瓊脂稀釋法，用M-Η瓊脂進行連翹苷的定量抗菌實驗。
[0285] 1)配制連翹苷/連翹脂素組合物藥液
[0286] 稱取連翹苷/連翹脂素組合物A 3g，用適量的0. 5%CMC_Na溶液混懸后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混勻，制得0. 3 %連翹苷/連翹脂素組合物A無菌0. 5 % CMC-Na 溶液（簡稱連翹苷/連翹脂素組合物A藥液），備用；
[0287] 稱取連翹苷/連翹脂素組合物B 3g，用適量的0. 5%CMC_Na溶液混懸后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混勻，制得0. 3 %連翹苷/連翹脂素組合物B無菌0. 5 % CMC-Na 溶液（簡稱連翹苷/連翹脂素組合物B藥液），備用；
[0288] 2)藥液稀釋：
[0289] 取無菌試管20只分成2組，每組10只分布排列于試管架中，在第一組的10只試 管中于第2~10只試管中分別加入無菌蒸餾水10mL ;接著取連翹苷/連翹脂素組合物A藥 液10mL加入到第1只試管中；再取10mL連翹苷/連翹脂素組合物A藥液加入到第2只試 管中，混勻后從第2只試管中取10mL混合液加入到第3只試管內，再混合均勻后取10mL混 合液加入到第4只試管中，混勻后再從第4只試管中取10ml混合液計入到第5只試管中，混 勻，如此連續稀釋至第9只試管混勻后，取出10mL棄掉。第10只試管中只有無菌蒸餾水， 以第10只試管中的無菌蒸餾水作為對照。這樣1~9管含有不同濃度藥液各10mL。
[0290] 第二組試管中除了加入的藥液是連翹苷/連翹脂素組合物B藥液之外，其它操作 方法與第一組試管的藥液進行稀釋方法相同。
[0291] 3)含藥平板制備
[0292] 3-1)連翹苷/連翹脂素組合物A含藥瓊脂平板組
[0293] 在無菌操作臺上按照無菌操作方法，將已經溶化的無菌M-Η瓊脂900mL，分裝于 10個三角瓶中，每瓶90mL熔融的無菌M-Η瓊脂，將第一組試管中的第1只試管中含有的 lOmL的連翹苷/連翹脂素組合物A藥液放入到含90mL培養基的第1個三角瓶中，混合后 平均傾倒至7個平板（即平皿）中，每個平板約含14mL含藥（即連翹苷/連翹脂素組合物 A)瓊脂，凝固后備用，為第1含藥瓊脂平板組，其中：第1含藥瓊脂平板組每個平板中實際 含連翹苷/連翹脂素組合物A 3. Omg/ml。
[0294] 第一組試管中的第2-10只試管內的溶液按照與第1只試管內的溶液同樣的方 法傾倒平板，制成第2-10含藥平板組，每個平板組含有7個平板，每個平板約含14mL含 藥（即連翹苷/連翹脂素組合物A)瓊脂，凝固后備用。第2含藥瓊脂平板組中每個平板 實際含連翹苷/連翹脂素組合物Al. 5mg/ml ;第3含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹 苷/連翹脂素組合物A為0. 75mg/ml ;第4含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連 翹脂素組合物A為0. 375mg/ml ;第5含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連翹脂 素組合物A為0. 1875mg/ml ;第6含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連翹脂素 組合物A為0. 0938mg/ml ;第7含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連翹脂素組 合物A為0. 0469mg/ml ;第8含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連翹脂素組合 物A為0. 0234mg/ml ;第9含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連翹脂素組合物A 為0. 0117mg/ml ;第10含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹苷/連翹脂素組合物A為 0· Omg/ml 〇
[0295] 3-2)連翹苷/連翹脂素組合物B含藥瓊脂平板組
[0296] 按照連翹苷/連翹脂素組合物A含藥瓊脂平板組的配制方法制備連翹苷/連翹脂 素組合物B含藥瓊脂平板組，除了向第二組三角瓶中加入第二組試管中的連翹苷/連翹脂 素組合物B藥液之外，其余與步驟3-1)相同。
[0297] 4)用多點接種儀分別吸取各種菌液并將菌液點種于含不同藥物濃度的瓊脂平板 上。于35°C培養18~24h，觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+)，不生長菌體為陰性 (一），以不生長菌體的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC)。
[0298] 2實驗結果
[0299] 連翹苷/連翹脂素組合物A、連翹苷/連翹脂素組合物B對金黃色葡萄球菌、大腸 桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉抑菌效果測定結果如表5、6所示。
[0300] 表5連翹苷/連翹脂素組合物A對7種細菌的MIC

[0303] 表6連翹苷/連翹脂素組合物B對7種細菌的MIC
[0305] 由表5、6的研究結果表明，連翹苷/連翹脂素組合物A、連翹苷/連翹脂素組 合物B對金黃色葡萄球菌、酵母菌、桔青霉菌、黑曲霉菌等抗菌作用顯著，連翹苷/連翹脂 素組合物A對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉的 MIC 為：0· 0234mg/ml、0. 375mg/ml、0. 375mg/ml、0. 0469mg/ml、0. 0234mg/ml、0. 0234mg/ml、 0.0469mg/ml〇
[0306] 連翹苷/連翹脂素組合物B對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、 桔青霉、黑曲霉、黃曲霉的 MIC 為：0· 0938mg/ml、0. 75mg/ml、0. 75mg/ml、0. 0938mg/ml、 0· 0938mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0469mg/ml。
[0307] 根據上述試驗結果可知，連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷與連翹脂素組合物均具有 抑制細菌的作用，這一試驗結果對指導臨床預防常見致病菌感染具有重要指導意義。
[0308] 試驗例4連翹脂素抗菌作用的實驗研究
[0309] 1實驗材料
[0310] 1. 1藥物與試劑
[0311] 連翹脂素（含量>98%)，白色粉末，大連富生天然藥物開發有限公司生產，批號： 20130301ο
[0312] 1.2 菌種
[0313] 與試驗例1相同
[0314] 1.3實驗儀器及培養基
[0315] 與試驗例1相同
[0316] 1.4實驗方法
[0317] 采用瓊脂稀釋法，用M-Η瓊脂進行連翹脂素的定量抗菌實驗。
[0318] 1)藥液稀釋：取無菌試管10只排列于試管架中，于第2~10只試管中分別加入無 菌蒸餾水10mL ;接著取0. 3%連翹脂素無菌0. 5% CMC-Na溶液（稱取連翹脂素3g，用適量 的0. 5 % CMC-Na溶液混懸后，加0. 5 % CMC-Na溶液至1000ml，充分混勻后使用。）10mL加 入到第1只試管中；然后再取10mL的0. 3%連翹脂素無菌0. 5% CMC-Na溶液加入到第2只 試管中，混勻后從第2只試管中取10mL混合液加入到第3只試管內，再混合均勻后取10mL 混合液加入到第4只試管中，混勻后再從第4只試管中取10ml混合液計入到第5只試管 中，混勻，如此連續稀釋至第9只試管混勻后，取出10mL棄掉。第10只試管中只有無菌蒸 餾水，以第10只試管中的無菌蒸餾水作為對照。這樣1~9管含有不同濃度藥液各10mL。
[0319] 2)含藥平板制備
[0320] 在無菌操作臺上按照無菌操作方法，將已經溶化的無菌M-Η瓊脂900mL，分裝于10 個三角瓶中，每瓶90mL熔融的無菌M-Η瓊脂，將第1只試管中含有的10mL的0. 3%連翹 脂素無菌蒸餾水溶液放入到含90mL培養基的第1個三角瓶中，混合后平均傾倒至7個平板 (即平皿）中，每個平板約含14mL含藥（即連翹脂素）瓊脂，凝固后備用，為第1含藥瓊脂 平板組，其中：第1含藥瓊脂平板組每個平板中實際含連翹脂素3. Omg/ml。
[0321] 第2-10只試管內的溶液按照與第1只試管內的溶液同樣的方法傾倒平板，制成 第2-10含藥平板組，每個平板組含有7個平板，每個平板約含14mL含藥（即連翹脂素）瓊 月旨，凝固后備用。第2含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹脂素 1. 5mg/ml ;第3含藥瓊 脂平板組中每個平板實際含連翹脂素為0. 75mg/ml ;第4含藥瓊脂平板組中每個平板實際 含連翹脂素為〇. 375mg/ml ;第5含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹脂素為0. 1875mg/ ml ;第6含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹脂素為0. 0938mg/ml ;第7含藥瓊脂平板組 中每個平板實際含連翹脂素為〇. 〇469mg/ml ;第8含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹 脂素為〇. 〇234mg/ml ;第9含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹脂素為0. 0117mg/ml ;第 10含藥瓊脂平板組中每個平板實際含連翹脂素為〇. 〇mg/ml。
[0322] 3)用多點接種儀分別吸取各種菌液并將菌液點種于含不同藥物濃度的瓊脂平板 上。于35°C培養18~24h，觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+)，不生長菌體為陰性 (一），以不生長菌體的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC)。
[0323] 2實驗結果
[0324] 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黃曲霉抑菌效 果測定結果如表7所示。
[0325] 表7連翹脂素對7種細菌的MIC
[0326]
[0327] 注：-表示無菌生長；+表示菌體生長少；++表示菌體生長較多；+++表示菌體生長 多，下同
[0328] 由表7的研究結果表明，當連翹脂素達到3mg/ml時，其對金黃色葡萄球菌、酵母 菌、桔青霉菌、黑曲霉菌等細菌的生長也沒有抑制作用。因此可知連翹苷基本沒有抗菌的作 用。
【主權項】
1. 連翹苷、連翹苷衍生物、連翹苷與連翹脂素組合物在制備用于預防和/或治療細菌 感染的藥物或保健品中的應用。2. 根據權利要求1所述的應用，其特征是所述藥物由連翹苷、連翹苷衍生物或連翹苷 與連翹脂素組合物和藥學上可接受的載體組成。3. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征是所述藥物以片劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆 粒劑、糖漿劑、溶液劑形式存在。4. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征是所述的連翹苷、連翹苷衍生物的純度為 彡1% ;連翹苷與連翹脂素組合物的含量彡1%。5. 根據權利要求4所述的應用，其特征是所述的連翹苷、連翹苷衍生物的純度為1 %~ 98% ;連翹苷與連翹脂素組合物的含量為1 %~98%。6. -種預防或/和治療細菌感染的藥物或保健品，其特征是含有連翹苷、連翹苷衍生 物或連翹苷與連翹脂素組合物。7. 根據權利要求6所述的藥物或保健品，其特征是所述的連翹苷、連翹苷衍生物的純 度為彡1% ;連翹苷與連翹脂素組合物的含量彡1%。8. 根據權利要求6所述的藥物或保健品，其特征是所述連翹苷、連翹苷衍生物或連翹 苷與連翹脂素組合物的重量與所述藥物或保健品的總重量之比為〇. 01-10 :1〇〇。9. 根據權利要求6所述的藥物或保健品，其特征是所述連翹苷與連翹脂素組合物選擇 連翹脂素和連翹苷與α_、β-或γ-環糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或連翹脂素 和連翹苷與α-、β-或γ-環糊精或其衍生物經物理、化學方法處理形成的復合物。10. 根據權利要求6所述的藥物或保健品，其特征是還包括穿心蓮提取物，四季青提取 物，金銀花提取物，板藍根提取物，蒲公英提取物，黃柏提取物，黃連提取物，黃芩提取物，馬 齒莧提取物，白頭翁提取物，大蒜提取物，魚腥草提取物，野菊花提取物，苦參提取物、維生 素 C及其衍生物或維生素 Ε及其衍生物。
【文檔編號】A23L33/105GK106063793SQ201510690295
【公開日】2016年11月2日
【申請日】2015年10月21日 公開號201510690295.4, CN 106063793 A, CN 106063793A, CN 201510690295, CN-A-106063793, CN106063793 A, CN106063793A, CN201510690295, CN201510690295.4
【發明人】王凱乾, 富力, 惠敏, 魯明明, 劉正賢, 王碩, 付強, 劉國友
【申請人】富力