一種海星甾醇固體分散體及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種海星甾醇固體分散體，所述海星甾醇固體分散體由如下制備方法制備得到：S1.將海星粉粹后，加入溶劑浸泡10~20h，加熱回流10~15h；S2.將S1中所得加熱回流液皂化，萃取，洗滌干燥后即得所述海星甾醇提取物；S3.將S2中所得海星甾醇提取物加入聚乙烯吡咯烷酮，噴霧干燥后即得所述海星甾醇固體分散體。本發明提供的海星甾醇固體分散體具有治療良性前列腺增生、少精癥、高血脂癥及高膽固醇癥、脫發疾病的療效，可達到顯著的治療效果，同時具有毒性低的優點。因此，可用于制備治療前列腺增生、少精癥、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病的藥物、保健食品、食品添加劑及外用制劑。
【專利說明】
一種海星甾醇固體分散體及其應用
技術領域
[0001] 本發明涉及中藥材海星，更具體地，涉及海星留醇固體分散體及其在制備用于治 療或預防良性前列腺增生、少精癥、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病藥物、保健食品、 食品添加劑以及外用制劑中的應用。
【背景技術】
[0002] 良性前列腺增生癥(Benign Prostatic Hyperplasia,BPH)是前列腺尿道周圍細 胞增生，腺體進行性腫大，使前列腺尿道狹窄，引起膀胱尿液流出梗塞。臨床表現為尿頻、排 尿困難、尿潴留等下尿路癥狀(LUTS)癥狀。這是一種常見的男性老年性疾病。50歲以上的男 性大約30 %~50 %的人會出現不同程度的良性前列腺增生，且發病率隨著年齡增大而增 加。據報道，70歲~79歲的男性發病率為70%，80歲以上的男性則高達90 %。現有治療該疾 病的藥物以非那留胺(Finasteride，商品名：保列治、保發治）為代表，作用機理是抑制5α-還原酶的活性，抑制前列腺增生以及治療脫發，存在著造成患者陽痿、少精等副作用。高血 脂癥及高膽固醇癥與良性前列腺增生常常伴隨發生，許多研究表明高血脂癥及高膽固醇癥 加速良性前列腺增生的發展，同時伴隨有少精癥出現，有年輕化趨勢。因此，研究開發一種 治療良性前列腺增生、少精癥、陽痿、高血脂癥及高膽固醇癥、脫發疾病藥物，而且效果好、 毒副作用小，這對保證老年人健康將具有十分重要的意義。
[0003] 海星是我國海洋中藥材，民間有服用海星的習慣，用于藥料燉湯用，有"平肝鎮驚， 制酸和胃"功效。有專利公開一種從海星中提取海星留體皂甙的方法，使用溶有表面活性劑 的多元醇/水混和溶液作為助溶劑采用超臨界C〇2萃取海星皂甙(200410052085.4);有專利 報道從海星萃取多糖、神經酰胺、胺基酸，能確實達到保濕、美白、抗老化等效果 (201410647646.9)，該專利提及的海星物質與本專利申請的物質屬于不同類別。還有專利 公開海龍為原料制備固體分散體治療良性前列腺增生的方法(200710027064.0 )，本專利申 請使用的海星為原料提取的留醇類物質，與海龍使用的物質上是不同。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于根據現有技術中的不足，提供一種海星留醇固體分散體。
[0005] 本發明的另一目的在于提供上述海星留醇固體分散體在制備用于治療或預防良 性前列腺增生、少精癥、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病藥物、保健食品、食品添加劑 以及外用制劑中的應用。
[0006] 本發明通過如下技術方案實現上述技術目的：
[0007] 本發明提供了一種海星留醇固體分散體，所述海星留醇固體分散體由如下制備方 法制備得到：
[0008] SI.將海星粉粹后，加入溶劑浸泡10~20h，加熱回流10~15h;
[0009] S2.將SI中所得加熱回流液皂化，萃取，洗滌干燥后即得所述海星留醇提取物；
[0010] S3.將S2中所得海星留醇提取物加入聚乙烯吡咯烷酮，噴霧干燥后即得所述海星 甾醇固體分散體。
[0011] Sl中，溶劑作為一般性溶解試劑使用，海星在上述溶劑中具有一定的溶解度即可。
[0012] 優選地，S3中，所述海星甾醇提取物和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為1:1~1:40。
[0013] 更優選地，S3中，所述海星留醇提取物和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為（1:4)~（1: 15)。優選地，S1中，溶劑為正己烷，所述海星按0.1~0.5g/ml的比例加入到正己烷中；S2中， 皂化為加入含10 %氫氧化鉀的甲醇溶液進行皂化，皂化溫度為50~70°C，皂化時間為5~ 6h〇
[0014] 本發明通過對所得海星留醇提取物進行成分檢測，其中含有以下結構式的組分：
[0015]
[0016] 本發明另外提供一種甾醇類組合物，包括如下組分：豆甾-5,22-二烯-3β_醇、膽 甾-5，24-二烯-3β-醇、膽甾-7-烯-3β-醇、膽甾-5-烯-3α-醇、膽甾烷-3β-醇、膽甾-5，7-二 烯-3β_醇、麥角留_5，7，22-三烯-3β-醇、麥角留-7，22-二烯-3β-醇、麥角留-7，9，22-三烯-3 醇、?留 _7，22-二稀_3β_醇、麥角留_7_稀_3β_醇、?留_7_稀_3β_醇。
[0017] 優選地，按重量份計，包括如下組分:豆甾-5，22-二烯-3β-醇為1~15份;膽甾-5， 24-二烯-3β-醇為2~15份;膽甾-5-烯-3β-醇為4~20份、膽甾-5-烯-3β-醇為1~10份、膽 甾-7-烯-3β-醇為1~15份;膽甾烷-3β-醇為2~20份;膽甾-5，7_二烯-3β-醇為5~90份;麥 角甾-5，7，22-三烯-3β-醇為5~25份;麥角甾-7，22-二烯-3β-醇為5~25份;麥角甾-7，9， 22-三烯-3β-醇為8~70份;豆留-7，22-二烯-3β-醇為5~25份;麥角留-7-烯-3β-醇為5~25 份;豆留-7-烯-3β-醇為5~25份。
[0018] 優選地，所述留醇類組合物的組分還包括藥學上可接受的鹽、酯或苷。
[0019] 本發明經實驗證明，海星留醇固體分散體對良性前列腺增生、少精癥、陽痿、高血 脂癥、高膽固醇癥疾病、脫發具有良好的療效，具有毒性低的優點。因此，可用于制備治療良 性前列腺增生、少精癥、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病的藥物、保健食品、食品添加 劑以及外用制劑的應用中。
[0020]所述的海星用于制備治療良性如列腺增生、少精癥、陽瘦、尚血脂癥、尚膽固醇癥、 脫發疾病的藥物、保健食品、營養補充劑以及外用制劑的應用，是將海星先經粉碎、皂化處 理，有機溶劑萃取提取海星留醇，加入藥用輔料聚乙烯吡咯烷酮(PVP Κ30)制備固體分散體 用于制備藥物及保健食品。所用海星提取、皂化處理產物加入藥用輔料制備固體分散體，加 入常用藥劑根據需要制成適當的劑型，片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑或栓劑等，也可 制備口服液、保健酒(藥酒），通常以口服方式使用，當然也可以采用其它給藥方式;其每天 使用海星留醇劑量一般為約1~50000毫克，成年人常用量為每天10~10000毫克，最常用劑 量為30~3000毫克;每天一次或分數次使用，海星留醇和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為1:1~ 1:40,一般為(1:2)~（1:25)，常用比例為(1:3)~（1:15)，最常用劑量為(1:4)~（1:15)。
[0021] 與現有技術相比，本發明具有以下技術效果：
[0022] 本發明提供的海星留醇固體分散體具有對治療良性前列腺增生、少精癥、高血脂 癥及高膽固醇癥、脫發疾病的療效，可達到顯著的治療效果，同時具有毒性低的優點，可用 于制備治療或預防良性前列腺增生、少精癥、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病藥物、 保健食品、食品添加劑以及外用制劑。
【附圖說明】
[0023]圖1實施例1中得到的海龍甾醇提取物的GC-MS圖譜。
【具體實施方式】
[0024] 實施例1海星固體分散體制備及急性毒性實驗
[0025] 一、材料
[0026]實驗樣品：海星干品（中華五角海星、多棘海盤車、羅氏海盤車，重量各占33.3% )， 由中山大學生命科學學院提供。
[0027]實驗動物:NIH系小鼠，由廣東省醫學實驗中心提供。
[0028] 二、方法與結果
[0029] 海星留醇固體分散體制備:海星干品（中華五角海星、多棘海盤車、羅氏海盤車，重 量各1公斤）超微粉碎，正己烷1000 Oml裝在燒瓶中冷浸過夜，72°C加熱回流12小時，回收溶 劑并轉移到圓底燒瓶中，減壓干燥后加入1500ml含10%Κ0Η甲醇溶液，搖勻，于60°C水浴充 分皂化，每隔15min搖勻一次，持續反應5-6小時后蒸干甲醇加 400ml蒸餾水稀釋，轉移到分 液漏斗中搖勻，用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液用飽和NaCl溶液洗滌，加過量無水Na2SO 4干 燥3小時，過濾回收熔劑，蒸干乙醚熔劑即可得到海星留醇提取物89克，經過3次重結晶獲得 海星留醇提取物60克，總留醇純度為85%。取60克海星留醇溶于無水乙醇1000 ml，加入聚乙 烯吡咯烷酮300克，加熱溶解，使用小型噴霧干燥機120°C噴霧干燥得到海星留醇固體分散 體346克，海星留醇制得固體分散體后在水溶液中的溶解性比海星留醇提高20倍以上，提示 海星留醇固體分散體比海星留醇具有更好的吸收以及藥理功效。
[0030] 海星甾醇提取物的檢測：
[0031] 檢測條件為:色譜條件
[0032] DSQ II單四極桿氣相色譜-質譜聯用儀(美國ThermoFisher公司）；
[0033] TG-5SILMS 毛細管柱，30m X 0 · 25mm X 0 · 25μπι;
[0034] 載氣:氦氣，流量20ml/min;
[0035] 進樣器溫度280°C，程序升溫：80°C進樣，保留3min，10min/°C升溫至100°C，5°C/ min升至 180°C，2°C/min升溫至280°C。
[0036]質譜條件
[0037] 電離方式EI，電子能量70eV，離子源溫度250°C，掃描速度3.5842s/sec。
[0038]利用GC-MS對海龍甾醇提取物的成分進行了分析，根據GC-MS圖譜(如圖1所示)和 甾體裂解規律，再結合文獻資料，上述海龍留醇提取物中含有以下成分，見表1所示：
[0039]表 1

[0042]急性毒性實驗:選擇健康NIH系小鼠，體重20±2g，20只，雌雄各半，將海星留醇固 體分散體配成150mg/ml受試液，對小鼠一次灌胃受試物受試液0.8ml/20g體重，連續觀察七 天，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或異常反應，限于受試物濃度和體積不能再增大， 不能測出其LD 5Q，故進行最大耐受量試驗。選擇健康小鼠20只，雌雄各半，于24小時內分10次 灌服海星留醇固體分散體受試液（150mg/ml)，每次0.5ml/20g體重，觀察7天，此期間讓小鼠 自由進食和飲水，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或異常反應。
[0043] 三、結論
[0044] 小鼠每天灌胃給予海星甾醇固體分散體最大耐受量應不小于0.5X10X0.15X 50 = 37.5g/kg，即海星留醇提取物最大耐受量應不小于6.25g/kg，海星留醇提取物屬于實際 無毒級物質。
[0045] 實施例2海星留醇固體分散體治療良性前列腺增生的作用
[0046] 一 ·材料
[0047] 1.1實驗動物:健康昆明小鼠，4周齡，雄性，60只，體重約20克；10天齡胎鼠，20只， 均由廣東省醫學實驗動物中心提供。生理多用儀，上海益聯醫學儀器發展有限公司提供。
[0048] 1.2實驗藥品及試劑：陽性對照藥:保列治，默沙東（英國）公司，美國默克公司分 部，分裝廠家，杭州默沙東制藥有限公司;海星甾醇固體分散體(制備方法如實驗例1)，由中 山大學生命科學學院提供;酸性磷酸酶(ACP)測試盒，由南京建成生物工程研究所提供;血 清鋅測定試劑盒，由溫州市東歐生物工程有限公司提供。
[0049] 二.方法與結果
[0050]選取60只健康雄性昆明小鼠飼養一周后，腹腔注射水合氯醛麻醉后，無菌操作剖 開腹部，仔細分離前列腺腹葉，在手術顯微鏡下用顯微鑷子向兩個前列腺腹葉內各植入1個 16天齡胎鼠的尿生殖竇組織，逐層縫合腹壁。假手術對照組僅用鑷子尖端刺入前列腺組織。 分為六個組，分別為假手術對照組、模型組、海星留醇固體分散體低、中、高劑量組、陽性藥 物組，每組10只。同時開始給予受試物，每天通過灌胃方式給藥，假手術對照組、模型組大鼠 灌胃給予PVP 240mg/Kg體重，海星留醇固體分散體低、中、高劑量小鼠灌胃劑量分別為60、 120、240mg/Kg體重，陽性藥物組給予保列治lmg/Kg體重，持續灌胃40天。
[0051] 連續給藥40天，第41天稱量體重，摘眼取血，離心分離血清，稱取前列腺腹葉、背 葉，計算前列腺臟器指數（內臟重量/體重），測定ACP活性、血清鋅濃度。T檢驗統計分析，結 果如表1所示。
[0052] 表1海星留醇固體分散體對尿生殖竇誘導小鼠良性前列腺增生模型的影響（x± S.D.，n = 10)
[0054] 注:與模型對照組比較廣P<0 · 01，***P<0 · 001。
[0055] 由實驗結果可知，尿生殖竇誘導小鼠良性前列腺增生模型中，模型對照組的前列 腺腹葉及腹葉指數均比正常對照組有明顯增加(p〈0.001)，提示良性前列腺增生模型制備 成功。海星留醇固體分散體低、中、高劑量分別對前列腺腹葉及腹葉指數均有明顯的降低作 用，呈劑量依賴關系(p〈0.001)，說明海星留醇固體分散體具有治療良性前列腺增生的藥理 作用。
[0056] 實施例3海星留醇固體分散體治療少精癥的作用
[0057] 一 ·材料
[0058]注射用環磷酰胺，廣東博宏藥業有限公司生產，SCI型計算機輔助精子質量分析， Microptic 公司；
[0059]實驗動物:健康昆明小鼠，4周齡，雄性，50只，體重約20克；由廣東省醫學實驗動物 中心提供。
[0060] 二.方法與結果
[0061] 選取50只健康雄性昆明小鼠飼養一周后，隨機分為5組，分別為正常組、模型組、海 星甾醇低、中、高劑量組，每組10只。除正常對照組外，各組小鼠每周腹腔注射環磷酰胺 100mg/kg-次，持續五周，正常對照組小鼠每天腹腔注射等劑量的生理鹽水。同時開始給予 受試物，每天通過灌胃方式給藥，海星留醇固體分散體低、中、高劑量小鼠灌胃劑量分別為 90、180、360mg/Kg體重，每天以灌胃方式進行給藥，持續五周。5周后使用精子質量分析儀精 子活力、活率和密度。
[0062]表2海星留醇固體分散體對小鼠少精癥模型精子活力、活率和密度的影響（ x*S.D.;n = 10)
[0064] 與模型組比較廣*Ρ<0·001。
[0065] 與正常組相比，模型組精子活力、活率和密度顯著降低(Ρ〈0.001)，提示環磷酰胺 誘導小鼠少精癥模型復制成功。與模型組相比，海星留醇固體分散體低、中、高劑量能夠顯 著提高精子活力、活率和密度(P〈〇. 001 )，海星留醇固體分散體具有治療少精癥的作用。
[0066] 實施例4海星留醇固體分散體治療陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥的作用
[0067] 一 ·材料
[0068] 高脂高膽固醇飼料，由中山大學生命科學學院提供;總膽固醇(TC)測定試劑盒，甘 油三酯（TG)測定試劑盒，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒，低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C)測定試劑盒，由中生北控生物科技股份有限公司提供;陽性對照藥:保列治，默沙東 (英國）公司，美國默克公司分部，分裝廠家，杭州默沙東制藥有限公司。
[0069]實驗動物:健康SD大鼠，60只，體重約200克；由廣東省醫學實驗動物中心提供。 [0070] 二、方法與結果
[0071] 60只雄性SD大鼠，經10%水合氯醛生理鹽水溶液腹腔注射麻醉后在無菌條件下進 行睪丸切除手術。其中10只雄性大鼠，切開陰囊皮膚，分離但不切除睪丸，再縫合，作為假手 術組;所有大鼠每天肌肉注射青霉素7.14萬單位/kg體重，治療4天，恢復一周。分為六個組， 分別為假手術對照組、模型組、海星留醇固體分散體低、中、高劑量組、陽性藥物組，每組10 只。除假手術對照組大鼠喂養普通飼料，其余動物喂養高脂高膽固醇飼料，同時開始給予受 試物，每天通過灌胃方式給藥，假手術對照組、模型組大鼠灌胃給予PVP 200mg/Kg，海星甾 醇固體分散體低、中、高劑量小鼠灌胃劑量分別為50、100、200mg/Kg體重，陽性藥物組給予 保列治lmg/Kg體重，連續灌胃60天。
[0072] 第61天進行大鼠陰莖電刺激實驗，調整生理多用儀參數：電壓50V，頻率30Hz，波寬 0.2ms，幅度1，將生理多用儀的電極至于大鼠陰莖部位，給予局部電刺激，測量從電刺激開 始到陰莖勃起的間隔時間，即為勃起潛伏期。取血分離血清，測定TC、TG、HDL-C和LDL-C含 量。
[0073]表3海星留醇固體分散體對良性前列腺增生、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥模型的 作用（^S.D., n = 10)
[0075] 與模型組比較廣Ρ<〇 · 05廣Ρ<0 · 01
廣，<0 · 001。
[0076]與假手術組相比，模型組大鼠前列腺背葉均顯著增加 (ρ〈0.001)，模型組大鼠陰莖 勃起潛伏期顯著增加 (Ρ〈〇. 001)，模型組大鼠血清TC、TG、和LDL-C含量顯著增加 (ρ〈0.001)， HDL-C含量顯著減少(p〈0.001 )，提示良性前列腺增生、陽痿、高血脂高膽固醇癥模型建立成 功，海星甾醇低、中、高劑量組能夠顯著降低前列腺背葉指數(Ρ〈〇.001)，降低大鼠血清TC、 TG、和LDL-C含量（ρ〈0.001)，海星甾醇中、高劑量能夠顯著升高HDL-C含量（ρ〈0.05, ρ〈 0.01)，提示海星留醇對前列腺增生、陽痿、高血脂、高膽固醇癥具有治療作用。
[0077] 實施例5海星留醇固體分散體治療脫發的作用
[0078] 一 ·材料
[0079] 1.1海星甾醇固體分散體(海星甾醇:PVP比例為1: 10)，由中山大學生命科學學院 提供;使用時用無水乙醇配成含有海星留醇5mg/50ml濃度，每次噴涂脫發處均濕潤為適量， 每天早午晚各噴涂1次。
[0080] 二·方法與結果
[0081 ]選取全頭性圓形脫發患者60例，其中男性38例，女性22例，年齡40歲至60歲，試用 90天，生發出硬發者42例，生發出硬發濃密者38例，試用180天，生發生出硬發者57例，生發 出硬發濃密者48例，總有效率95%，顯效率80%，無效率5%，提示海星留醇固體分散體具有 治療脫發的作用。
【主權項】
1. 一種海星留醇固體分散體，其特征在于，所述海星留醇固體分散體由如下制備方法 制備得到：51. 將海星粉粹后，加入溶劑浸泡10~20h，加熱回流10~15h;52. 將S1中所得加熱回流液皂化，萃取，濃縮、洗滌干燥后即得所述海星留醇提取物；53. 將S2中所得海星留醇提取物加入聚乙烯吡咯烷酮，噴霧干燥后即得所述海星甾醇 固體分散體。2. 根據權利要求1所述的海星留醇固體分散體，其特征在于，S3中，所述海星留醇提取 物和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為1:1~1:40。3. 根據權利要求1所述的海星留醇固體分散體，其特征在于，S3中，所述海星留醇提取 物和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為（1:4M 1:15)。4. 根據權利要求1所述的海星留醇固體分散體，其特征在于，S1中，溶劑為正己烷，所述 海星按0.05~0.3g/ml的比例加入到正己燒中；S2中，皂化為加入含10%氫氧化鉀的甲醇溶液 進行皂化，皂化溫度為50~70°C，皂化時間為5~6h。5. 權利要求1至4任一所述海星留醇固體分散體在制備用于治療或預防良性前列腺增 生、少精癥、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病藥物、保健食品、食品添加劑及外用制劑 中的應用。6. -種甾醇類組合物，其特征在于，包括如下組分：豆甾-5, 22-二烯-3β-醇、膽甾-5， 24-二烯-3β-醇、膽留-7-烯-3β-醇、膽留-5-烯-3α-醇、膽留烷-3β-醇、膽留-5，7-二烯-3β-醇、麥角甾-5,7,22-三烯-3β-醇、麥角甾-7,22-二烯-3β-醇、麥角甾-7，9，22-三烯-3β-醇、?留，22-二稀_3β_醇、麥角留_7_稀_3β_醇、?留_7_稀_3β_醇。7. 根據權利要求6所述的留醇類組合物，其特征在于，按重量份計，包括如下組分:包括 如下組分:豆留-5, 22-二烯-3β-醇為1~15份;膽留-5, 24-二烯-3β-醇為2~15份;膽甾-5-烯-3β_醇為4~20份、膽留-5-烯-3β-醇為1~10份、膽留-7-烯-3β-醇為1~15份;膽留烷-3β-醇 為2~20份;膽留-5，7-二烯-3β-醇為5~90份；麥角留_5,7，22-三烯-3β-醇為5~25份；麥 角甾-7, 22-二烯-3β-醇為5~25份；麥角甾-7, 9, 22-三烯-3β-醇為8~70份;豆甾-7，22-二烯-3β-醇為5~25份;麥角留-7-烯-3β-醇為5~25份;豆留-7-烯-3β-醇為5~25份。8. 權利要求6或7所述的留醇類組合物在制備用于治療或預防良性前列腺增生、少精 癥、陽痿、高血脂癥、高膽固醇癥、脫發疾病藥物、保健食品、食品添加劑以及外用制劑中的 應用。9. 根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述留醇類組合物的組分還包括藥學上可 接受的鹽、酯或苷。
【文檔編號】A23L33/10GK105963324SQ201610304291
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月9日
【發明人】許東暉, 梅雪婷
【申請人】中山大學