一種脂肪干細胞組合物及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及干細胞領域，尤其涉及一種脂肪干細胞組合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002]關節炎是指發生在人體關節及其周圍組織炎癥性疾病，包括風濕性關節炎、類風濕關節炎、骨關節炎、痛風性關節炎、強直性脊柱炎、反應性關節炎及感染性關節炎等數十種類型。世界衛生組織的權威報告顯示，全球約有1/10的人患有關節炎，而我國的關節炎患者有一億人以上，極大地增加了關節炎患者家庭的巨大醫療費用和負擔。
[0003]目前，關節炎的治療主要分為鍛煉治療、外科手術治療以及藥物治療等方法。功能鍛煉是關節炎患者關節功能得以恢復及維持的一種重要方法。一般說來，在關節腫痛明顯的急性期，應適當限制關節活動。然而，一旦關節的腫痛改善，就可以在不增加患者痛苦的前提下進行適當的功能活動。對于關節炎的藥物治療，主要需要根據具體的關節炎的類型采用相應的藥物，目前主要有非留類抗炎藥、軟骨保護劑、慢作用抗風濕藥、腎上腺皮質激素、免疫抑制劑、免疫和生物制劑及植物藥等。非留類抗炎藥比如布洛芬、阿司匹林等是最常用的治療關節炎的藥物，其主要作用是抑制前列腺素的合成，從而達到抗炎止痛的效果。軟骨保護劑比如硫酸氨基葡萄糖，能夠抑制關節軟骨的分解，同時促進軟骨的合成，對關節炎具有較好的保護作用。腎上腺皮質激素也是一種使用較多的關節炎藥物。其他的比如治療類風濕關節炎由于目前大多數研究都在一定程度上顯示其為一類自身免疫性疾病，因此，藥物治療類風濕關節炎中最重要的之一為免疫抑制劑藥物和生物制劑藥物。免疫抑制劑類藥物常用的有甲氨蝶呤、羥氯喹、來氟米特、環孢素、金諾芬、白芍總苷等。目前，在類風濕關節炎的治療上，已經有幾種生物制劑被批準上市，并且取得了一定的療效，尤其在難治性類風濕關節炎的治療中發揮了重要作用，包括英夫利昔單抗、依那西普、阿達木單抗以及妥珠單抗。其中，前三種主要是針對分子TNF-alpha的藥物，而妥珠單抗主要是針對IL-6。
[0004]然而，藥物治療或多或少都具有副作用，同時由于一些關節炎種類比如類風濕關節炎的形成機制并未明確，因此目前的方法對關節炎的治療效果非常有限，急需開發新的能夠治療關節炎的藥物。
[0005]因此，現有技術還有待于改進和發展。

【發明內容】

[0006]鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種脂肪干細胞組合物及其制備方法，旨在解決現有關節炎治療效果有限的問題。
[0007]本發明的技術方案如下:
一種脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，按質量比計，將以下組分進行混合均勻: 脂肪干細胞 10?50%;
水凝膠50?90%。
[0008]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述水凝膠為基于殼聚糖-β-甘油磷酸鈉的可注射溫敏性水凝膠。
[0009]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述水凝膠為基于纖維素的可注射溫敏性水凝膠。
[0010]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述水凝膠為基于聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯的可注射溫敏性水凝膠。
[0011]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述水凝膠為基于PLGA-PEG-PLGA的可注射溫敏性水凝膠。
[0012]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述基于殼聚糖-β-甘油磷酸鈉的可注射溫敏性水凝膠的制備過程包括:
將脫乙酰基的殼聚糖融入低濃度鹽酸中得到混合物，再將甘油磷酸鈉加入到上述混合物中，制備成水凝膠混合液，最后干燥成粉末。
[0013]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述基于纖維素的可注射溫敏性水凝膠的制備過程包括:
首先將甲基纖維素與海藻酸鈉混合溶于水得到混合液，然后將氯化鈉或者氯化鈣加入上述混合液中制成水凝膠混合物，最后干燥成粉末。
[0014]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述基于聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯的可注射溫敏性水凝膠的制備過程包括:
將聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯與殼聚糖混合，然后干燥成粉末。
[0015]所述的脂肪干細胞組合物的制備方法，其中，所述基于PLGA-PEG-PLGA的可注射溫敏性水凝膠的制備過程包括:
將PLGA-PEG-PLGA與海藻酸鈉混合，然后干燥成粉末。
[0016]—種脂肪干細胞組合物，其中，采用如上任一項所述的制備方法制得。
[0017]有益效果:本發明主要是結合了脂肪干細胞治療關節炎的良好效果以及水凝膠的優勢制得的了能夠有效治療關節炎的脂肪干細胞組合物，水凝膠和脂肪干細胞混合之后，在室溫下呈現出液態，當混合物注射到關節炎部位后，在體內37攝氏度條件下凝固成凝膠態，能夠對脂肪干細胞提供有效的附著，延長了脂肪干細胞在體內的存活時間，因而提高了脂肪干細胞治療關節炎的療效的持久性和有效性。同時，可注射型溫敏性水凝膠能夠與關節炎部位無縫貼合，避免了之前使用的堅硬的預塑形支架材料對關節部位造成的損傷。
【附圖說明】
[0018]圖1為實施例1中的脂肪干細胞組合物的制備和使用流程圖。
[0019]圖2為實施例2中的脂肪干細胞組合物的鑒定流程圖。
[0020]圖3為實施例3中的脂肪干細胞組合物的制備流程圖。
[0021 ]圖4為實施例4中的脂肪干細胞組合物的制備流程圖。
[0022]圖5為實施例5中的脂肪干細胞組合物的制備流程圖。
[0023]圖6為實施例6中的脂肪干細胞組合物的制備流程圖。
【具體實施方式】
[0024]本發明提供一種脂肪干細胞組合物及其制備方法，為使本發明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0025]本發明中，選擇脂肪干細胞來制成脂肪干細胞組合物，在針對關節炎的干細胞療法中，相比較于其他類型的干細胞，脂肪干細胞(Adipose stem cell, ASC)具有得天獨厚的優勢。自從2001年，P.A.Zuk等發現脂肪來源的干細胞以來，因其來源廣泛、易于分離、取材方便、給患者帶來的痛苦較小、細胞增殖快、不存在免疫排斥并且不涉及道德倫理問題等優點而日益受到研究者的重視。脂肪來源的干細胞與骨髓來源的間充質干細胞在多分化潛能上和表面分子標記上都比較相似，因而又有人稱這種干細胞為脂肪間充質干細胞。脂肪干細胞具有多分化潛能性，其在體外可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、骨骼肌細胞、內皮細胞、神經樣細胞以及心肌細胞等。
[0026]脂肪干細胞具有如下應用:第一，脂肪干細胞作為種子細胞:以干細胞為基礎的組織工程的發展已經成為治療各種組織缺陷的重要有效手段，先將脂肪干細胞在體外分化成為某一特定類型的細胞比如軟骨細胞，然后與相應的三維支架共培育，之后移植入人體內，從而使組織缺陷得以修復;第二，脂肪干細胞分泌多種因子可支持造血:比如脂肪干細胞分泌巨噬細胞集落刺激因子、粒細胞2巨噬細胞集落刺激因子、腫瘤壞死因子α等從而刺激造血干細胞增殖和分化;第三，脂肪干細胞還可以作為基因工程載體，當帶有目的基因的病毒直接用于基因治療時，因體內的抗病毒效應以及病毒的整合性，往往達不到理想的基因治療效果，用脂肪干細胞作為基因治療載體后可以大大降低病毒感染對體內細胞組織的直接損傷，而且脂肪干細胞本身可以分泌一些營養因子，從而更加有助于組織缺陷的康復。
[0027]但是，由于脂肪干細胞在體內并非單獨懸浮存在于液體之中，而是具有一定的微環境，需要附著在一定的支架比如細胞外基質上面，才能夠生存。因此，當采用ASC進行關節炎治療時，無法單純地向關節疼痛處注射脂肪干細胞，這樣的治療效果大打折扣因為沒有附著支架就不能夠有效增殖，甚至很快凋亡。因此，本發明根據脂肪干細胞在體內存在的特點，設計ASC能夠附著的類似細胞外基質的材料，以便ASC能夠在體內更為長時間地生存及增殖，從而發揮治療關節炎的作用。<