一種利用響應面法優化沉香葉茶多酚的提取工藝的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種沉香葉茶多酪的提取工藝，尤其設及一種利用響應面法優化沉香 葉茶多酪的提取工藝。
【背景技術】
[0002] 沉香為瑞香科植物白木香Aquilariasinensis(Lour. )Gilg含有樹脂的木材，是 我國名貴中草藥材，具有行氣止痛，溫中止嘔，納氣平喘等功效，用于胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔 吐呢逆、腎虛氣逆喘急。如今對沉香的利用情況僅限在只有含樹脂的沉香木材，其可作為藥 用，其他部位如葉、種子、樹枝、不含樹脂的木材均被作為廢物處理，造成資源的大量浪費。 沉香葉為白木香的非藥用部位，其相關研究還很少。
[0003] 茶多酪是茶葉中的有效成分，具有較強的生理活性和抗氧化性能。另外，茶多酪還 具有抗癌治病、防衰老、降血糖等一系列特殊的藥理功能，對食品的色和味有重要的作用。
[0004] 響應面法是利用試驗設計并通過實驗得到一定量的數據，借助多元二次回歸方程 擬合因素與響應值之間的函數關系，對回歸方程進行分析W得到最優工藝參數，是解決多 變量問題的一種統計方法。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種工藝簡單、易于工業化生產的利用響應面法優化沉香 葉中茶多酪的提取工藝。
[0006] 本發明是通過如下技術方案實現的：
[0007] -種利用響應面法優化沉香葉茶多酪的提取工藝，包括如下步驟：
[000引 1)供試液的制備
[0009] 將沉香葉粉碎，用包裝袋裝好備用；準確稱取粉碎的沉香葉2.Og,用體積分數為 30-70%的乙醇溶液進行水浴浸提，浸提時間為10-50min，液料比為20-40血，g1，浸提溫度 為50-90°C;將粗提取液W轉速3500r/min離屯、6min后，取上清液并加入與上清液等體積 的氯仿混勻脫色，在黑暗條件中靜置Ih后取上層清液即茶多酪母液；移取Iml茶多酪母液 于100mL容量瓶，用去離子水定容至刻度，搖勻，待測；
[0010] 2)提取液中茶多酪含量測定
[0011] ①沉香葉樣品中干物質的含量測定
[0012] 按照GB/T8302-2013的方法進行沉香葉的精準取樣，稱取5g(精確至0.OOlg)樣 品于烘皿中，置于120°C干燥箱中，加熱Ih后加蓋取出，于干燥器內冷卻至室溫，稱量（精確 至0.OOlg)，干物質含量為：
[0013]
[0014] 式中：m。:試樣的原始質量，單位為克（g)
[0015] mi:干燥后的試樣質量，單位為克（g)
[001引②制備測試液
[0017] 曰、配制10%福林酪試劑（現配）
[0018] 將25ml福林酪試劑轉移到250ml容量瓶中，用水定容至刻度線，搖勻。
[0019]b、配制質量分數為7. 5%的碳酸鋼溶液
[0020] 稱取37. 50g胞2〇)3,用適量水溶解后移至500ml容量瓶中，用水定容至刻度線，搖 勻。
[0021] C、配制沒食子酸標準儲備液（現配）
[0022] 稱取0.IlOOg沒食子酸，用適量水溶解后移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度 線，搖勻。
[0023] t配制沒食子酸工作液
[0024]分別移取 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0血的沒食子酸標準儲備 液于100血容量瓶中，分別定容至刻度線，搖勻。得到濃度分別為5、10、15、20、25、30、35、 40、45、50yg/mL的沒食子酸工作液。
[0025] ③茶多酪含量測定及結果計算
[0026] 分別移取已配制的一系列梯度沒食子酸工作液、供試液、水各1.00血于25血比 色管內，在每個比色管管內分別加入5.OmL福林酪試劑（10% )，搖勻，反應3-8分鐘，加入 4.OmlNazCOs溶液（7. 5% )，加水定容后搖勻。在室溫下遮光放置60min，用紫外可見分光光 度計進行波長掃描及吸光度的測定。
[0027] 比較試樣和標準工作液的吸光度，茶多獻含量（％)
[0028] 式中：
[0029] A:供試液吸光度；V:樣品提取液體積；d:稀釋因子；SLOPEstd:沒食子酸標準曲 線的斜率;M:樣品中干物質的含量（％ ) ;Mi:樣品質量（g)。
[0030] 3)實驗設計與統計分析
[0031] ①單因素實驗
[0032] 準確稱取粉碎的沉香葉2.Og,選用不同的浸提時間、液料比、浸提溫度、乙醇濃度 進行水浴浸提單因素試驗，每個條件設置=個平行樣，反復=次浸提，并按步驟2)所述的 方法計算提取液中的茶多酪含量；
[0033] ②響應面法優化設計
[0034]W單因素試驗結果為基礎，采用SAS軟件應用Box-Behnken設計方法，選擇浸提時 間（A)、液料比度）、浸提溫度似、乙醇濃度做作為響應變量，編碼水平為-UO和1，且W 沉香葉茶多酪含量（Y)作為響應值，采用響應曲面法對沉香葉茶多酪提取條件進行優化； 對各因素進行回歸擬合之后，得到回歸方程：
[0035] 茶多酪含量（％)=-17.50450-0.39913八+1.296278+0.010700〔+0.591770-0. 014800AB+9. 32500X10 3AC+3. 85000X10 3AD+ 3. 5000X10 4BC+2.IX10 化0 - 9. OOOOOX 10 4CD+1. 05917X 10 3八2- 0. 013763B 2-1. 67833X 10 3〔2- 8. 90333X 10化2;
[0036] 4)實驗結果分析與優化
[0037] 通過Design-Expert. 8. 05軟件對回歸方程進行計算，得到浸提沉香葉茶多酪最 佳工藝條件。
[0038] 本發明優點如下：
[0039] 1)W乙醇作為溶劑提取沉香葉中的茶多酪，工藝簡單，提取率高，易于實現工業化 生產；
[0040] 2)通過響應面法探究和優化沉香葉中茶多酪的提取工藝，對于積極開展沉香葉的 利用研究，實現沉香資源的綜合利用，提高沉香的經濟價值具有積極的現實意義。
【附圖說明】
[0041] 圖1為浸提時間對沉香葉茶多酪含量提取的影響圖。
[0042] 圖2為液料比對沉香葉茶多酪含量提取的影響圖。
[0043] 圖3為浸提溫度對沉香葉茶多酪含量提取的影響圖。
[0044] 圖4為乙醇濃度對沉香葉茶多酪含量提取的影響圖。 具體實施例
[0045] 實施例1 : 一種利用響應面法優化沉香葉茶多酪的提取工藝，包括如下步驟：
[0046] 1)供試液的制備
[0047] 將沉香葉粉碎，用包裝袋裝好備用；準確稱取粉碎的沉香葉2.Og,用體積分數為 30-70%的乙醇溶液進行水浴浸提，浸提時間為10-50min，液料比為20-40血，g1，浸提溫度 為50-90°C;將粗提取液W轉速3500r/min離屯、6min后，取上清液并加入與上清液等體積 的氯仿混勻脫色，在黑暗條件中靜置Ih后取上層清液即茶多酪母液；移取Iml茶多酪母液 于100mL容量瓶，用去離子水定容至刻度，搖勻，待測；
[0048] 2)提取液中茶多酪含量測定
[0049] ①沉香葉樣品中干物質的含量測定
[0050] 按照GB/T8302-2013的方法進行沉香葉的精準取樣，稱取5g(精確至0.OOlg)樣 品于烘皿中，置于120°C干燥箱中，加熱比后加蓋取出，于干燥器內冷卻至室溫，稱量（精確 至0.OOlg),干物質含量為：
[0051]
[00閲式中：m。:試樣的原始質量，單位為克（g)
[0053] mi:干燥后的試樣質量，單位為克（g)
[0054] ②制備測試液
[0055] a、配制10 %福林酪試劑（現配）
[0056] 將25ml福林酪試劑轉移到250ml容量瓶中，用水定容至刻度線，搖勻。
[0057] b、配制質量分數為7. 5%的碳酸鋼溶液
[0058] 稱取37. 50g胞2〇)3,用適量水溶解后移至500ml容量瓶中，用水定容至刻度線，搖 勻。
[0059]C、配制沒食子酸標準儲備液（現配）
[0060] 稱取0.IlOOg沒食子酸，用適量水溶解后移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度 線，搖勻。
[0061] t配制沒食子酸工作液
[0062] 分別移取 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0血的沒食子酸標準儲備 液于100血容量瓶中，分別定容至刻度線，搖勻。得到濃度分別為5、10、15、20、25、30、35、 40、45、50yg/mL的沒食子酸工作液。
[0063] ③茶多酪含量測定及結果計算
[0064] 分別移取已配制的一系列梯度沒食子酸工作液、供試液、水各1. 00血于25血比 色管內，在每個比色管管內分別加入5.OmL福林酪試劑（10% )，搖勻，反應3-8分鐘，加入 4.OmlNazCOs溶液（7. 5% )，加水定容后搖勻。在室溫下遮光放置60min，用紫外可見分光光 度計進行波長掃描及吸光度的測定。
[0065] 比較試樣和標準工作液的吸光度，茶多齡含量（％)
[0066] 式中：
[0067] A:供試液吸光度；V:樣品提取液體積；d:稀釋因子；SLOPEstd:沒食子酸標準曲 線的斜率;M:樣品中干物質的含量（％ ) ;Mi:樣品質量（g)。
[0068] 3