阿霉素脂質體的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥品技術領域，尤其涉及一種阿霉素脂質體的制備方法。
【背景技術】
[0002]脂質體由于具有良好的靶向性、緩釋性、細胞親和性等優點，已廣泛用于抗腫瘤藥物、抗寄生蟲藥物、抗結核、抗菌藥物、激素類、蛋白多肽以及基因治療藥物等的載體。然而由磷脂和膽固醇組成的脂質體為熱力學不穩定體系，在體內外的穩定性很差。為此，近年來很多學者采用各種高聚物來修飾脂質體以提高其穩定性，取得了良好的效果。擬采用維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)來修飾脂質體，考察其對阿霉素脂質體理化性能的影響。TPGS是一種維生素E的水溶性衍生物，由維生素E琥珀酸和聚乙二醇酯化而成，是一種性能優良的非離子型表面活性劑，在制劑中可作為增溶劑、吸收促進劑、乳化劑、增塑劑以及固體分散體的載體對P-gp有抑制作用，可有效地逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥性，已廣泛用于抗腫瘤藥物的傳遞系統中。
[0003]但這類材料存在制備困難:且產量低，并且制備藥力無法掌控的缺點。嚴重限制了其臨床應用和工業化生產。
【發明內容】
[0004]本發明就是針對上述問題，提供一種克服材料在釋藥動力學上的缺限的一種阿霉素脂質體的制備方法。
[0005]為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案。
[0006]阿霉素脂質體的制備方法，包括下步驟。
[0007](1)精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇lOOmg，用20mL乙醇超聲溶解，于旋轉蒸發儀上減壓蒸發成膜，加入0.3M硫酸銨溶液10mL，劇烈震搖使膜脫落，50°C水化2h，冰浴下用細胞破碎儀探頭超聲200次，室溫冷卻并放置4h后，轉移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室溫透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀釋至25mL，與2mg.mL-1鹽酸阿霉素的10%蔗糖溶液等體積混合，40°C孵育1.5h，即制得含TPGS修飾的阿霉素脂質體。
[0008](2)精密吸取 0.750,0.625,0.500,0.375,0.250,0.125mL 鹽酸阿霉素標準貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇(含0.1MHC1)至刻度，配成濃度分別為30，25，20，標準溶液，以80%酸性乙醇為空白，在495nm處測其吸光度。
[0009](3)精密吸取lmg.mL-1鹽酸阿霉素標準貯備液，并加入0.5mL空白脂質體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30 μ g -mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度。
[0010](4)取制備的阿霉素脂質體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數。
[0011]作為一種優選方案，取脂質體滴加于銅網上，用濾紙從銅網邊緣吸去多余液體，滴加3%的磷鎢酸溶液進行負染，吸干負染液，自然風干，置于透射電鏡下觀察脂質體的形態。
[0012]本發明有益效果。
[0013]本發明本研究過程中還發現外水相介質對阿霉素脂質體的穩定性有較大的影響，當選用PH7.4的HBS作為外水相介質時，一星期內的泄漏率超過40%，而用10%蔗糖作為外水相時，其滲漏率大大減小，這可能是與蔗糖溶液的粘度，密度，“水置換”等作用有關。另外蔗糖可作為脂質體的凍干保護劑，可將制得的脂質體直接凍干，而無需加入其它保護劑，減少凍干添加劑對脂質體性能的影響。
[0014]【具體實施方式】阿霉素脂質體的制備方法，包括下步驟。
[0015](1)精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇lOOmg，用20mL乙醇超聲溶解，于旋轉蒸發儀上減壓蒸發成膜，加入0.3M硫酸銨溶液10mL，劇烈震搖使膜脫落，50°C水化2h，冰浴下用細胞破碎儀探頭超聲200次，室溫冷卻并放置4h后，轉移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室溫透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀釋至25mL，與2mg.mL-1鹽酸阿霉素的10%蔗糖溶液等體積混合，40°C孵育1.5h，即制得含TPGS修飾的阿霉素脂質體。
[0016](2)精密吸取 0.750,0.625,0.500,0.375,0.250,0.125mL 鹽酸阿霉素標準貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇(含0.1MHC1)至刻度，配成濃度分別為30，25，20，標準溶液，以80%酸性乙醇為空白，在495nm處測其吸光度。
[0017](3)精密吸取lmg.mL-1鹽酸阿霉素標準貯備液，并加入0.5mL空白脂質體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30 μ g -mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度。
[0018](4)取制備的阿霉素脂質體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數。
[0019]作為一種優選方案，取脂質體滴加于銅網上，用濾紙從銅網邊緣吸去多余液體，滴加3%的磷鎢酸溶液進行負染，吸干負染液，自然風干，置于透射電鏡下觀察脂質體的形態。
[0020]脂質體包封率的測定方法有分子排阻法(凝膠柱分離法)，超速離心法，超濾法，透析法等。葡聚糖凝膠柱分離法存在藥品稀釋大、耗時長等缺點，冷凍超速離心法需要設備要求高，而超濾法對于易變形或小粒徑的脂質體也有不同程度的濾過。本實驗采用陽離子交換樹脂吸附游離藥物，使含藥脂質體和游離藥物有效分離而測得藥物包封率，具有操作簡單、耗時短、成本低等優點，可用于弱堿性藥物脂質體包封率的測定，但需要注意的是所用的磷脂必須是中性或負電性，不可用于陽離子型脂質。
[0021]把制好的脂質體置于冰箱4°C保存，3個月后重新測定阿霉素的包封率，普通脂質體中阿霉素的包封率急劇下降，滲漏非常嚴重，而TPGS修飾的脂質體中阿霉素的包封率幾無改變，表明TPGS能顯著提高阿霉素的穩定性。
【主權項】
1.阿霉素脂質體的制備方法，其特征在于，包括下步驟； (1)精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇lOOmg，用20mL乙醇超聲溶解，于旋轉蒸發儀上減壓蒸發成膜，加入0.3M硫酸銨溶液10mL，劇烈震搖使膜脫落，50°C水化2h，冰浴下用細胞破碎儀探頭超聲200次，室溫冷卻并放置4h后，轉移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室溫透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀釋至25mL，與2mg *niL-l鹽酸阿霉素的10%蔗糖溶液等體積混合，40°C孵育1.5h，即制得含TPGS修飾的阿霉素脂質體； (2)精密吸取0.750,0.625,0.500,0.375,0.250,0.125mL鹽酸阿霉素標準貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇(含0.1MHC1)至刻度，配成濃度分別為30，25，20，標準溶液，以80%酸性乙醇為空白，在495nm處測其吸光度； (3)精密吸取lmg.mL-1鹽酸阿霉素標準貯備液，并加入0.5mL空白脂質體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30 μ g.mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度； (4)取制備的阿霉素脂質體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數。2.根據權利要求1所述阿霉素脂質體的制備方法，其特征在于，取脂質體滴加于銅網上，用濾紙從銅網邊緣吸去多余液體，滴加3%的磷鎢酸溶液進行負染,吸干負染液，自然風干，置于透射電鏡下觀察脂質體的形態。
【專利摘要】阿霉素脂質體的制備方法屬于藥品技術領域，尤其涉及一種阿霉素脂質體的制備方法。本發明提供一種克服材料在釋藥動力學上的缺限的一種阿霉素脂質體的制備方法。阿霉素脂質體的制備方法，包括下步驟。（1）精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇100mg，用20mL乙醇超聲溶解。（2）精密吸取0.750，0.625，0.500，0.375，0.250，0.125mL鹽酸阿霉素標準貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇至刻度。（3）精密吸取1mg·mL-1鹽酸阿霉素標準貯備液，并加入0.5mL空白脂質體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30μg·mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度。（4）取制備的阿霉素脂質體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數。
【IPC分類】A61P35/00, A61K9/127, A61K47/26, A61K31/704, A61K47/34
【公開號】CN105287378
【申請號】CN201410376256
【發明人】孫仁
【申請人】孫仁
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2014年8月3日