一種microRNA在制備治療前列腺癌的藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體的，涉及一種microRNA在制備治療前列腺癌的藥 物中的應用。
【背景技術】
[0002] 前列腺癌是男性生殖中最常見的惡性腫瘤，發病隨年齡而增加，僅次于肺癌，是男 性因癌癥死亡的第二大原因。2009年，美國估計有192280例前列腺癌新發患者和27360例 死亡患者。由于我國人口老齡化，前列腺癌發病率有所增加。臨床上，手術或放療針對局限 前列腺癌是有效的，但是對于轉移者是不可治愈的，針對轉移性前列腺癌治療仍然缺乏有 效的藥物。miRNA是調芐基因表達的內源性非編碼小分子RNA，在轉錄后水平對基因表達進 行調控，參與細胞周期、凋亡、發育、分化和新陳代謝等生理過程。miRNA在細胞中表達失調 會導致癌癥在內的多種疾病的發生，最新研究表明，一些miRNA在前列腺中異常表達，但何 種miRNA與前列腺癌的發生、發展有關仍未達成共識。
[0003] 因此有必要尋找與前列腺癌發生、發展有關的miRNA，從而為臨床上治療轉移性前 列腺癌提供一種有效手段。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于提供一種抑制前列腺癌發展的含有miRNA的藥物組合物，為臨 床上治療轉移性前列腺癌提供可能。
[0005] 本發明的發明人在對前列腺癌的轉移機制進行研究的過程中發現miR-487在前 列腺癌上皮細胞系PC-3、DU145細胞中表達顯著性降低，同時發現miR-487能夠抑制癌細胞 增殖和迀移、促進細胞凋亡，miR-487能夠抑制裸鼠體內前列腺腫瘤細胞的轉移。前列腺癌 細胞中miR-487的表達量高低可作為癌細胞轉移的一個分子標記物。
[0006] 本發明的一個方面提供了miR-487在制備治療前列腺癌的藥物中的應用，所述 miR-487的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。
[0007] 可選的，所述應用包括制備抑制前列腺癌細胞迀移、侵襲和增殖的藥物。
[0008] 可選的，所述應用包括將miR-487與載體結合后與抗腫瘤藥物和/或藥物可接受 的輔料復配制成藥物組合物。
[0009] 本發明的一個方面提供了miR-487在制備抑制前列腺癌細胞高轉移性細胞系 PC-3和/或DU145的迀移能力的藥物中的應用。
[0010] 本發明還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物以miR-487為活性成分，其中， 所述miR-487的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。
[0011] 可選的，所述藥物組合物含有與載體結合的miR-487和/或藥物可接受的輔料。
[0012] 在本發明所提供的藥物組合物中，載體可以為本領域常用的適合于miRNA在宿主 細胞中表達的載體種類，例如，所述載體可以為脂質體、殼聚糖或慢病毒表達載體。
[0013] 在本發明的一種實施方式中，所述表達載體為慢病毒表達載體，優選的，所述慢病 毒表達載體可以為pWPXL、pMD2. G或psPAX2慢病毒表達載體。
[0014] 在本發明的一個優選的實施方案中，所述藥物組合物還任選地包含一種或多種其 他對前列腺癌有效的腫瘤藥物，可選的，所述藥物組合物中含有鉑類抗腫瘤藥物，還可以包 含以鉑類抗腫瘤藥為基礎的聯合化療方案中常規使用的其他腫瘤藥物，這些其他腫瘤藥物 是本領域技術人員所熟知的。
[0015] 可選的，所述抗腫瘤藥物為順鉑或卡鉑。
[0016] 當將miR-487與鉑類抗腫瘤藥物聯合使用時，鉑類抗腫瘤藥物的用量可以減少至 常規化療方案中用量的20-80%。
[0017] 本發明中，所述藥物組合物的給藥途徑為靜脈內、動脈內灌注或局部注射等，也可 以采用本領域技術人員所熟知的靶向給藥技術進行睪丸或腫瘤靶向給藥。
[0018] 本發明所提供的藥物組合物能夠通過miR-487對前列腺癌細胞轉移能力的抑制 作用來抑制前列腺癌的發展過程，抑制效率高達80%。見圖5.
【附圖說明】
[0019] 圖1為miR-487抑制細胞增殖及克隆成球。
[0020] 其中，（A)為 miR-487 轉染 PC-3, Q-PCR 檢測 miR-487 的表達量；（B)為 miR-487 轉 染PC-3后檢測細胞增殖；(C)為克隆成球能力檢測。
[0021] 圖2為miR-487能夠促進前列腺癌細胞凋亡結果圖。
[0022] 其中，（A)為miR-487轉染PC-3后，Annexin V-FITC/PI染色檢測細胞凋亡；(B) 為凋亡細胞數目量化圖。
[0023] 圖3為miR-487抑制前列腺癌細胞迀移和侵襲結果圖。
[0024] 其中，（A-D)為miR-487轉染PC-3細胞，細胞刮痕實驗檢測細胞迀移；(E)為 miR-487轉染PC-3細胞，transwell實驗檢測細胞迀移；(F)為miR-487轉染PC-3后， transwell實驗檢測細胞侵襲。
[0025] 圖4為Western blot檢測細胞迀移侵襲相關蛋白分子變化。
[0026] 其中，㈧為PC-3轉染miR-487后細胞形態發生變化。⑶為western blot檢測 miR-487轉染PC-3后E-cad和N-cad的表達變化。
[0027] 圖5為經過轉化miR-487后的PC-3細胞接種到裸鼠皮下的成瘤情況
【具體實施方式】
[0028] 下面將通過【具體實施方式】對本發明進行詳細說明。
[0029] 在本發明中，術語"miR-487"是指包含SEQIDNo.1所示序列或其同源序列的微 小RNA。本領域中已知各種來源的miR-487,例如，人、鼠、兔等，這些同源序列均包含在本發 明的術語miR-487中。本發明的術語中還包含上述天然存在的miR-487序列經取代、缺失 或添加一個或幾個核苷酸，或經過生物學化學修飾后仍具有miR-487生物活性的衍生RNA。 本發明中，人工合成的以及可以通過購買市售商品方式獲得的具有miR-487生物學活性的 miR-487模擬物也屬于本發明的保護范圍。
[0030] 此外，本發明所述的miR-487也可以為前體形式，miR-487前體是指在被施用對象 的細胞內或體內可以被加工成為miR-487的前體。獲得天然存在的miR-487前體的方法為 本領域技術人員所公知。
[0031] 本領域技術人員公知，miR-487的初始轉錄產物經過一系列的加工后，形成成熟的 miR-487。miR-487前體只有在加工成成熟的miR-487后才具有相應的生物學功能。
[0032] 本發明所提供的組合物可以用于治療前列腺癌。所述組合物中含有有效量的本發 明的 miR-487。
[0033] 在本發明中，所述藥物可接受的輔料包括各種賦形劑、稀釋劑和佐劑。輔料其本身 并不是必要的活性成分，且使用后沒有過分的毒性。這類輔料包括但不限于：生理鹽水、緩 沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇等。
[0034] 在本發明的一種實施方式中，所述組合物的形式適合于：直接裸microRNA注射 法、脂質體包裹RNA直接注射法、繁殖缺陷細菌攜帶質粒DNA法或復制缺陷腺病毒攜帶目的 DNA法等。
[0035] 本發明的miR-487的有效劑量可以隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴重程度等 進行相應的調整。優選的有效