抗etbr抗體和免疫偶聯物的制作方法
【專利說明】抗ETBR抗體和免疫偶聯物 發明領域
[0001] 本發明涉及包含抗ETBR抗體的免疫偶聯物和使用它們的方法。
【背景技術】
[0002] 黑色素瘤是最近發病率已經歷驚人增長的皮膚癌的侵入性形式。雖然可以通過局 部病灶的外科切除獲得治愈，但黑色素瘤的晚期僅對目前批準的治療反應較差。IV期轉移 性黑色素瘤的5年存活率為大約10%。對于轉移性黑色素瘤的新的治療方法（包括反義 Bcl2、CTLA4抗體、小分子RAF激酶抑制劑和過繼性免疫療法）目前處于臨床試驗中。這些 最近研宄的一些結果看似鼓舞人心，但對總存活數的持久影響可能將需要包括另外的新藥 劑的治療組合。
[0003] 20多年以前，內皮素 -I (ET-I)從主動脈內皮細胞分離并發現具有強效的血管收 縮活性。之后不久克隆內皮素的受體并且其在各種細胞類型（包括黑色素細胞和黑色素瘤 細胞）中的表達指出不依賴其在內皮中的作用而起作用。現在廣為人知的是在胚胎發育期 間內皮素 B受體（ETBR、EDNBR)對于從神經嵴發出的黑色素細胞的忠實衍生是關鍵的。黑 色素細胞前體依靠 ETBR活性來增殖并從神經管迀移至其最終目的地。具有編碼ETBR或內 皮素-3(ET-3)的基因缺陷的小鼠展現皮毛色素沉著缺陷以及也來源于神經嵴的腸神經節 細胞的缺乏。這些特征非常類似于與人類瓦登伯革氏綜合癥（Waardenburg syndrome)的 WS4變體有關的那些特征，后者已歸因于ET-3或ETBR中的種系突變。此綜合癥的另一種變 體WS2,已映射到小眼相關轉錄因子（MITF)中的遺傳突變，該因子為黑色素細胞發育和黑 色素瘤原癌基因的關鍵調節劑。
[0004] 將ETBR活性與黑色素母細胞的命運聯系的有力的遺傳學證據強調了該受體在黑 色素瘤進展中的潛在作用。據報道在從發育不良性痣（dysplastic nevi)到轉移性黑色素 瘤的疾病進展期間ETBR mRNA和蛋白質的表達增加。ETBR活性被2種獨立的小分子抑制劑 阻斷干擾黑色素瘤細胞和腫瘤異種移植物的生長和存活。這些臨床前研宄將ETBR視為黑 色素瘤進展的潛在驅動力。
[0005] 本領域需要用于診斷和治療ETBR相關的病狀（諸如癌癥）的靶向ETBR的藥劑。 本發明滿足該需要并提供其他益處。
[0006] 發明概述
[0007] 本發明提供抗ETBR抗體和免疫偶聯物以及使用它們的方法。
[0008] 在一些實施方案中，提供包含結合與細胞毒性劑共價連接的ETBR的抗體的免疫 偶聯物，其中所述抗體結合SEQ ID NO :10的氨基酸64至101內的表位。在一些實施方案 中，細胞毒性劑為奈莫柔比星（nemorubicin)衍生物。
[0009] 在一些實施方案中，抗體包含（i)含有SEQ ID NO : 14的氨基酸序列的HVR-H3， (ii)含有SEQ ID N0:17的氨基酸序列的HVR-L3,和（iii)含有SEQ ID N0:13的氨基酸 序列的HVR-H2。在一些實施方案中，抗體包含（i)含有SEQ ID NO :12的氨基酸序列的 HVR-H1，（ii)含有 SEQ ID NO :13 的氨基酸序列的 HVR-H2,和（iii)含有 SEQ ID NO :14 的 氨基酸序列的HVR-H3。在一些實施方案中，抗體包含（i)含有SEQ ID NO :12的氨基酸序列 的 HVR-H1，（ii)含有 SEQ ID NO :13 的氨基酸序列的 HVR-H2,（iii)含有 SEQ ID NO :14 的 氨基酸序列的HVR-H3,（iv)含有SEQ ID N0:15的氨基酸序列的HVR-L1，（V)含有SEQ ID NO :16的氨基酸序列的HVR-L2,和（vi)含有SEQ ID NO :17的氨基酸序列的HVR-L3。在一 些實施方案中，抗體包含（i)含有SEQ ID NO : 15的氨基酸序列的HVR-Ll，（ii)含有SEQ ID NO :16的氨基酸序列的HVR-L2,和（iii)含有SEQ ID NO :17的氨基酸序列的HVR-L3。在 一些實施方案中，抗體包含：a)與SEQ ID NO :8的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的 VH序列；或b)與SEQ ID NO :7的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；或c) 如（a)中的VH序列和如（b)中的VL序列。在一些實施方案中，抗體包含具有SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO :8的氨基酸序列的VH序列。在一些實施方案中，抗體包含具有SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的VL序列。在一些實施方案中，抗體為IgGl、IgG2a或IgG2b抗體。
[0010] 在一些實施方案中，提供包含結合與細胞毒性劑共價連接的ETBR的抗體的免疫 偶聯物，其中所述抗體包含（a)具有SEQ ID NO :8的氨基酸序列的VH序列和具有SEQ ID NO :7的氨基酸序列的VL序列，并且其中所述細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
[0011] 在一些實施方案中，免疫偶聯物具有式Ab-(L-D) P，其中：(a) Ab為抗體；(b) L為連 接子；（c)D為細胞毒性劑；并且（d)p的范圍為1-8。
[0012] 在一些實施方案中，D為奈莫柔比星衍生物。在一些此類實施方案中，D具有選自 以下的結構：
[0013]
【主權項】
1. 一種包含結合與細胞毒性劑共價連接的ETBR的抗體的免疫偶聯物，其中所述抗體 結合SEQIDNO;10的氨基酸64至101內的表位，并且其中所述細胞毒性劑為奈莫柔比星 衍生物。
2. 根據權利要求1所述的免疫偶聯物，其中所述抗體包含（i)含有SEQIDNO;14的 所述氨基酸序列的^3-冊，（11)含有569 10^;17的所述氨基酸序列的^1?-1^3，和（1^) 含有SEQIDNO;13的所述氨基酸序列的HVR-肥。
3. 根據權利要求1或權利要求2所述的免疫偶聯物，其中所述抗體包含（i)含有SEQIDN0;12的所述氨基酸序列的HVR-H1，（ii)含有SEQIDN0;13的所述氨基酸序列的 HVR-肥，和（iii)含有SEQIDNO;14的所述氨基酸序列的HVR-冊。
4. 根據權利要求1所述的免疫偶聯物，所述抗體包含（i)含有SEQIDNO; 12的所述 氨基酸序列的HVR-H1，（ii)含有SEQIDN0;13的所述氨基酸序列的HVR-肥，（iii)含有 SEQIDNO;14的所述氨基酸序列的HVR-冊，（iv)含有SEQIDNO;15的所述氨基酸序列的 HVR-L1，（V)含有SEQIDNO;16的所述氨基酸序列的HVR-L2,和（vi)含有SEQIDNO;17 的所述氨基酸序列的HVR-L3。
5. 根據權利要求1至3中任一項所述的免疫偶聯物，其中所述抗體包含（i)含有 SEQIDN0;15的所述氨基酸序列的HVR-L1，（ii)含有SEQIDN0;16的所述氨基酸序列的 HVR-L2,和（iii)含有SEQIDNO;17的所述氨基酸序列的HVR-L3。
6. 根據權利要求1至5中任一項所述的免疫偶聯物，其中所述抗體包含： a) 與SEQIDNO;8的所述氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列；或 b) 與SEQIDNO;7的所述氨基酸序列具有至少95%序列同一性的化序列；或 C)如（a)中的VH序列和如化）中的化序列。
7. 根據權利要求6所述的免疫偶聯物，其包含具有SEQIDNO;8或SEQIDNO;9的所 述氨基酸序列的VH序列。
8. 根據權利要求6所述的免疫偶聯物，其包含具有SEQIDNO;7的所述氨基酸序列的 化序列。
9. 一種包含結合與細胞毒性劑共價連接的ETBR的抗體的免疫偶聯物，其中所述抗體 包含（a)具有SEQIDNO;8的所述氨基酸序列的VH序列和具有SEQIDNO;7的所述氨基 酸序列的化序列，并且其中所述細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
10. 根據權利要求1至9中任一項所述的免疫偶聯物，其中所述抗體為IgGl、I