專利名稱：包含中鏈單酸甘油酯的疏水性制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一些物質在其通常不溶于的疏水性溶劑中的制劑，以及獲得這種制劑的方法。具體地說，本發明涉及親水性物質在中鏈單酸甘油酯(MCM)和甘油二酯混合物中的制劑。
本發明尤其適用于在油或其它疏水性溶劑中通常為不可溶的親水性大分子。
對于許多應用，如在藥物科學，食品制造業或化妝品工業中，由于其親水性和高度的極性限制了它們可作用或摻入脂相中的程度，對蛋白和類似大分子的加工出現了問題。許多天然系統采用脂質屏障(如皮膚，細胞膜)以防止親水性分子與內部區室接觸；將蛋白質分散在脂質賦形劑中的能力將打開一個新的將這些大分子導入生物體系中的途徑，從而含有蛋白質的脂質介質可與屏障的疏水性成分整合在一起而不是被它們排斥。
以前我們在WO-A-9513795、WO-A-9617593和WO-A-9617594中公開了制備疏水性制劑的方法，其中親水性物質被溶解在它通常不溶于的疏水相中。尤其是，這此方法適宜于溶解蛋白質。
雖然上述制劑提供簡單而有效的溶解大分子如蛋白質的方法，但我們現已發現通過使用特定的油相和任選的特定的兩親物可以改善制劑的大分子送遞性質。由于本文公開的制劑不僅增加治療大分子的攝取，而且提供良好的劑量重復性，因此當被溶解的大分子為蛋白質如藥物活性蛋白時，這尤其有利。
因此，第一個方面，本發明提供一種疏水性制劑，包括(ⅰ)包含一種或多種中鏈單酸甘油酯的油相；和(ⅱ)至少一種兩親性物質；(ⅲ)一種溶解或以其它方法分散在甘油酯混合物中的親水性物質；其中該親水性物質在所述一種或多種單酸甘油酯中通常為不溶的。
在本發明上下文中，“疏水性制劑”為其中親水性物質不存在于水相中的制劑。該疏水性制劑尤其適宜于用于口服送遞親水性大分子，如蛋白質。
現有技術的確包含許多在腸中用中鏈單酸甘油酯作為通透增強劑的實例(Sekine等，藥物生物動力學雜志(J.Pharmacobiodyn.),7:856-63(1984)；Higaki等，藥物生物動力學雜志，9:532-9(1986)；Unowsky等，化學療法(Chemotherapy),34:272-6(1988)；Watanabe等，藥物科學雜志(J.Pharm.Sci.),77:847-9(1988)；Yeh等；藥物研究(Pharm.Res.),11:1148-54(1994)；Constinides等，藥物研究，11:1385-90(1994))。然而，在每種情況下，所公開的制劑中活性成分/藥物都溶解在水相中。事實上直至尤其是WO-A-9513795中公開的方法，才可獲得其中親水性物質真正并且容易地溶解在疏水相中并保留了生物活性的制劑。
根據本發明的制劑將通常不含有大量水相并且可能不含有游離水分子。
在一個優選的具體實施方案中，油相中將包含中鏈單酸甘油酯和甘油二酯的混合物，適宜地，用于本發明的中鏈甘油酯具有8-10個碳原子的鏈長度，例如，它們可包含直鏈飽和脂肪酸。在另一個具體實施方案中，油相中可包含一種或多種鏈單酸甘油酯和至少一種其它成分，如油酸、單油酸甘油酯或gelucires。對于這兩個具體實施方案，必需成分為中鏈單酸甘油酯，不管是單獨使用中鏈單酸甘油酯還是使用甘油酯等的混合物，使用的油成分應在確保油成分在45℃或更低的溫度下保持液體狀態的同時使存在的單酸甘油酯的量盡可能大。尤其是，單酸甘油酯可占存在的油的總量的40-90％，優選60-70％，適宜的甘油酯混合物的一個實例為Akoline MCMTM，它包含中鏈單酸甘油酯和甘油二酯，其可從Karlshamns Sweden AB公司購得，地址瑞典S/374 82Karlshamn。
優選地，兩親性物質大分子的比例在1∶1-20∶1的范圍內(按重量計)，更優選在2∶1-8∶1的范圍內(按重量計)。
適宜的兩親性物質的實例包括磷脂，如磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和它們的溶血衍生物，辛基葡糖苷和其它糖脂、生育酚琥珀酸酯和膽固醇半琥珀酸酯。其它適宜的兩親性物質包括磷脂酰絲氨酸、磺基琥珀酸二辛酯鈉(sodium docusate)和羥丙基纖維素。可使用一種以上的兩親性物質。
在一個優選的具體實施方案中，使用的兩親水性物質為膽汁鹽。在本發明中，應理解因為其鹽或其偶聯酸是否存在將取決于周圍環境的pH，因此術語膽汁鹽和膽汁酸可互換使用。
膽汁鹽為天然產生的表面活性劑，它們是一組存在于在所有動物和高等植物中的的具有膽酸共同“骨架”結構的化合物。膽汁鹽可被單羥基化、二羥基化或三羥基化；它們總包含3α-羥基，而最通常在C6、C7或C12位的其它羥基可定位在分子的平面之上(β)或之下(α)。
在描述為膽汁鹽的一類化合物中，包括具有羧基作為一級側鏈一部分的兩親性多羥基甾醇。哺乳動物中其最常見的膽汁鹽實例由膽甾醇代謝產生并且在膽汁中以及整個腸中以衍生化形式存在。
在說明書上下文中，該術語還可適用于顯示類似生物學效果的天然產生的膽汁鹽的合成類似物，或微生物產生的分子，如羧鏈孢酸和其衍生物。
膽汁鹽(或多種鹽)可為非偶聯或偶聯的。術語“非偶聯”指其中一級側鏈具有一個位于未端并且未被取代的單一羧基的膽汁鹽。非偶聯膽汁鹽的實例包括膽酸鹽、烏索脫氧膽酸鹽、鵝脫氧膽酸鹽和脫氧膽酸鹽。偶聯膽汁鹽為其中一級側鏈具有一個取代的羧基的那些。通常取代基為借助于氮原子與膽汁鹽羧基相連的氨基酸衍生物。偶聯膽汁鹽的實例包括牛磺膽酸鹽、甘膽酸鹽、牛磺脫氧膽酸鹽和甘脫氧膽酸鹽。
因此，本發明中，適宜的膽汁鹽的實例包括膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、鵝脫氧膽酸鹽和烏索脫氧膽酸鹽，烏索脫氧膽酸鹽為尤其優選的。可采用的其它膽汁鹽包括牛磺膽酸鹽、牛磺脫氧膽酸鹽、牛磺烏索脫氧膽酸鹽、牛磺鵝脫氧膽酸鹽、甘膽酸鹽、甘脫氧膽酸鹽、甘牛磺脫氧膽酸鹽、甘鵝脫氧膽酸鹽、石膽酸鹽、牛磺石膽酸鹽和甘石膽酸鹽。
在本發明中，術語“親水性物質”指通常可溶于水性溶劑中但不溶于疏水性溶劑的任何物質。用于本發明的親水性物質的范圍變化多樣，但親水性大分子代表可使用的物質的一個實例。
許多大分子適且用于本發明。通常，由于在將疏水性大分子溶于油溶液中常常很少困難，因此，大分子化合物為親水性的或至少具有親水性區域。適宜大分子的實例包括蛋白質和糖蛋白，寡核酸和多核酸，例如DNA如質粒DNA和RNA，以及DNA和/或RNA類似物，多糖如肝素(尤其是低分子量肝素)和任何這些物質的超分子復合物。在一些情況下包括整個細胞或細胞器。將小分子如維生素與大分子尤其是多糖如環糊精一起共溶也可能是很方便的。還可將一些分子如維生素B12與大分子進行化學偶聯，并因此將其包括在組合物中。
可成功地被本發明方法溶解的具體蛋白質的實例包括胰島素、降鈣素、血紅蛋白、細胞色素C、辣根過氧化物酶、抑肽酶、磨菇酪氨酸酶、紅細胞生成素、促生長素、生長激素、生長激素釋放因子、galanin、尿激酶、因子Ⅸ、組織纖溶酶原激活劑、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、鐵蛋白、干擾素、因子Ⅷ和其片段(上面所有蛋白可來自任何適宜來源)。其它蛋白質包括大豆胰蛋白酶抑制劑、GLP1、其它凝血因子、促生長素抑制素、水蛭素和LHPH以及所有它們的類似物和片段。
一種或多種這些或其它蛋白質的混合物可被本發明溶解。
由于具有約1000000分子量的葡聚糖可容易地被本發明的方法所溶解，看來對于大分子化合物分子量沒有上限。
除開大分子，本發明方法可用于溶解較小的有機分子和或大分子。小有機分子的實例包括葡萄糖、羧基熒光素和許多藥劑，如抗癌劑，但是當然該方法同樣可用于其它小有機分子，例如維生素或藥物活性劑或生物活性劑。此外，使用該方法還可溶解如氯化鈣和磷酸鈉這些化合物。確實，由于使用非含水溶液可使得分子進入體內的途徑得以改變，例如增加生物利用度，因此本發明對于藥物活性劑和生物活性劑尤為有利。
可摻入到本發明包含大分子的制劑中的小有機分子包括穩定劑如聚甘油、PEG和甘油(尤其是在胰島素或可能為其它蛋白的情況下)，螯合劑如檸檬酸、EDTA和EGTA，以及抗氧化劑如抗壞血酸。
可包括在本發明疏水性組合物中的其它類型的物質為無機物，如小無機分子或膠狀物質，例如膠態金屬。本發明的方法使得膠態金屬，如膠態金、鈀、鉑或銠的一些性質甚至在疏水溶劑中也得以保持，其中在正常條件下，這些顆粒在疏水性溶劑中發生凝集。這可以尤其用于在有機溶劑中進行的反應的催化。
本發明的疏水性制劑還可任選地包含其它成分。這些的實例包括抗氧化劑、金屬螯合劑、緩沖劑和分散劑，適宜分散劑的實例包括表面活性劑，如Tween、Span和Brij類試劑以及聚氧乙基化的蓖麻油衍生物和其它含POE的表面活性劑。
本發明的疏水性制劑可使用下面方法來制備，該方法包括(ⅰ)在一種液體介質中將親水性物質與兩親性物質結合，使得在該液體介質中不存在兩親性物質與親水性物質之間的化學作用。
(ⅱ)除去液體介質，剩下的兩親性分子陣列其親水性頭部基團朝向親水性物質；和(ⅲ)在親水物質/兩親性物質陣列的周圍提供中鏈單酸甘油酯和甘油二酯的混合物。
這種方法公開在WO-A-9513795中。尤其是，本發明的疏水性制劑可通過公開在PCT專利申請號PCT/GB97/00749中的方法來制備，該方法包括(ⅰ)在存在疏水相時，將親水物質與兩親性物質結合；和(ⅱ)除去存在的任何親水性溶劑；其中親水性溶劑的除去步驟在將疏水相保持為固態的條件下進行。
優選地，當使用該方法時，首先將親水性物質和兩親性物質溶解在一種親水性溶劑中，如水性溶劑，通常僅為水，接著將該溶液與甘油酯混合物結合。親水溶劑除去步驟很方便地通過冷凍干燥而得以完成，這樣在確保甘油酯混合物被保持為固態的溫度下完成，直至所有水被除去。在某些情況下，由于在所有親水性溶劑已被除去的固體塊的某些部分(通常在表面和邊緣)溫度的局部升高的結果，在冷凍干燥中油可能變為液體。這里來源于親水溶劑升華的冷卻效應不再存在，并且在那些區域油將熔化。只要一出現，油即被允許從固體塊的剩余部分中流出，那么這種情況將導致令人滿意的終產品的產生(如果不是如此，積累的油將形成阻止親水溶劑進一步除去的一層)。
另一方面，可以保持冷凍干燥期間的溫度，這樣甚至在親水溶劑被除去后，油仍保持固態。在這種情況下，在冷凍干燥后，升高制劑的溫度以產生單相制劑。這通過簡單地將冷凍干燥制劑的溫度升至室溫來實現，該溫度將導致甘油酯混合物回到液態。也可采用其它除去親水溶劑的方法，如噴霧干燥。
本發明的疏水性制劑為多能的，具有許多用途。它們可被單獨使用或可與水相混合以形成構成本發明第二個方面的乳液或類似的兩相組合物。
在本發明的這個方面，提供一種包含親水相和疏水相的兩相組合物，其中疏水相包含一種可由上述方法獲得的本發明的疏水性制劑。
通常，在這類組合物中，疏水相分散在親水相中。
如本文所提到的，本發明的疏水性制劑具有特殊的優點，因為在口服給藥后親水物質易于被吸收至如血液中。因此它們尤其適用于如蛋白質的口服送遞。然而，技術人員將認識到本發明的制劑還將為其它給藥途徑如局部或陰道給藥提供便利。因此，在本發明的第三個方面，提供一種包含本發明疏水性制劑的藥物制劑。本發明范圍內的藥物制劑包括膠囊劑、片劑和其它制型。此外，在本發明的第四個方面，提供本發明的疏水性制劑在制備用于口服遞送親水性物質例如親水性大分子如蛋白質的藥物中的用途。本發明還可通過刺激或抑制作用被用來改變免疫應答。
本發明各個方面的優選特征同樣也可用于各個其它方面，反之亦然。
現將參考下面的實施例來說明本發明，其中這些實施例不應被認為以任何方式限制本發明。實施例1包含降鈣素/PC復合物的制劑的制備(ⅰ)磷脂分散體的制備
1．在帶磨口玻璃塞的蒸煮管中稱取1.6g大豆磷脂酰膽堿并加入蒸鎦水至8g的最終重量。用氮吹洗，將蓋塞緊，用石蠟膜密封并在定軌搖床上輕輕混合直至分散所有固體。
2．轉移至玻璃圓底超聲容器中。
3．將超聲容器夾至裝有1英寸直徑探頭的Sonics 4 Materials VibraCell VCX 600超聲波儀中，并浸沒探頭直至其基部充分位于液體彎液面之下。用一粘膜條在探頭和管頂部之間形成一個套環，用氮清洗液體上面的空氣空間。將超聲容器浸沒在冰浴中。
4．以50％振幅，1秒鐘發射間以4秒鐘冷卻間隔將液體懸浮液超聲處理，直至形成乳白色分散體(通常總超聲處理時間為4分鐘)。
5．將分散體轉移至塑料圓錐形離心管中并以1200g離心15分鐘，將上清與存在的任何沉淀分離。
6．用蒸餾水稀釋兩倍以產生100mg/ml的磷脂終濃度。
(ⅱ)蛋白質溶液的制備7．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取20mg抑酶肽并加入1ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
8．在1ml玻璃螺口小瓶中稱取16ml鮭魚降鈣素并加入0.8ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所固體溶解。
9．在1ml玻璃螺口小瓶中稱取50mg抗壞血酸和5mg檸檬酸并加入1ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
10．向三個10ml玻璃螺口小瓶的每一個中分配2ml來自步驟6的磷脂分散體(200mg固體)，250μl來自步驟7的抑酶肽溶液(5mg固體)，250μl來自步驟8的降鈣素溶液(5mg固體)和200μl來自步驟9的抗壞血酸/檸檬酸溶液(分別為10mg和1mg固體)，輕輕混合各瓶的內容物。
(ⅲ)水相的冷凍干燥11．在液氮中聲迅速冷凍各瓶的內容物。
12．在低于-40℃的冷凝器溫度以及小于0.1毫巴的真空下冷凍干燥過夜。
(ⅳ)油相的制備
13．將0.8g多乙氧基醚80和7.2g Akoline MCM稱至B8玻璃螺口小瓶中。用氮清洗小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封，在輥筒式混合器上輕輕混合直至獲得均勻溶液。
(ⅴ)在油相中溶解14．樣品在冷凍干燥器中完全干燥后，向每小瓶中加入1.779g來自步驟13的油相。用氮清洗各小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封。
15．通過室溫下在輥筒式混合器中混合2小時讓固體溶解，接著在37℃下搖動直至形成清亮溶液。
16．貯存于+4℃下直至需要時使用。
(ⅵ)體內給藥17．水浴中將各小瓶加溫至37℃以熔化油并形成一清亮溶液。
18．向各小瓶中加入4ml溫的PBS，渦旋30秒，如上所述，對1只豬經頸靜脈內給藥1.2ml。
實施例2、包含胰島素/鵝脫氧膽酸鹽復合物的制劑的制備(ⅰ)鵝脫氧膽酸鹽溶液的制備1．在玻璃錐形燒瓶中稱取6.0g鵝脫氧膽酸鈉，加入蒸餾至60g的最終重量。用氮清洗，塞緊并用石蠟膜密封，在定軌搖床輕輕混合直至所有固體溶解。
(ⅱ)蛋白質溶液的制備2．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取120mg抑酶肽并加入60ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
3．將獨立的三份106.5mg胰島素稱至(A)100ml錐形燒瓶，(B)25ml錐形燒瓶和(C)10ml螺口小瓶中。向燒瓶(A)中加入30ml來自步驟3.1.1的鵝脫氧膽酸鹽溶液(1g固體)。向燒瓶(B)加入15ml鵝脫氧膽酸鹽溶液(1.5g固體)，并向小瓶(C)中加入7.5ml(0.75g固體)。用石蠟膜覆蓋燒瓶和小瓶，并在37℃下，在定軌搖床上輕輕混合直至所有固體溶解。
4．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取54mg檸檬酸并加入6.0ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
5．向十二個7ml玻璃口小瓶的每個中分配2ml來自步驟3的胰島素/鵝脫氧膽酸鹽溶液(A),100μl來自步驟2的抑酶肽溶液和100μl來自步驟4的檸檬酸溶液。輕輕混合各小瓶中的內容物。
6．向十二個7ml玻璃螺口小瓶的每個中分配1ml來自步驟3的胰島素/鵝脫氧膽酸鹽溶液(B),100μl來自步驟2的抑酶肽溶液和100μl來自步驟4的檸檬酸溶液。輕輕混合各小瓶中的內容物。
7．向十二個7ml玻璃螺小瓶的每個中分配0.5ml來自步驟3的胰島素/鵝脫氧膽酸鹽溶液，100μl來自步驟2的抑酶肽溶液和100μl來自步驟4的檸檬酸溶液。輕輕混合小瓶中的內容。
(ⅲ)水相的冷凍干燥8．在液氮中將各小瓶的內容物迅速冷凍并在低于-40℃的冷凝器溫度和小于0.1毫巴的真空下冷凍干燥過液。
(ⅳ)油相的制備9．將6.0g多乙氧基醚80和54g Akoline MCM稱至100ml玻璃瓶中。用氮清洗小瓶，將蓋旋緊，用石蠟膜密封并在輥筒式混合器上輕輕混合直至獲得均勻溶液。
(ⅴ)在油酸中溶解10．樣品在冷凍干燥器中完全干燥后，向各小瓶中加入來自步驟10的0.79g油相制劑(A)。用氮清洗各小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封。
11．樣品在冷凍干燥器中完全干燥后，向各小瓶中加入來自步驟10的0.8g油相制劑(B)。用氮清洗各小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封。
12．相品在冷凍干燥器中完全干燥后，向各小瓶中加入來自步驟10的0.94g油相制劑(C)。用氮清洗各小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封。
13．通過室溫下在輥筒式混合器中混合2小時讓固體溶解，接著在37℃搖動直至形成一清澈溶液，貯存于+4℃下直至需要時使用。
(ⅵ)體內給藥14．水浴中將小瓶加溫至37℃以熔化油并形成一清澈溶液。
15．向各小瓶中加入2ml溫的PBS，渦旋30秒，并如上所述，對一只豬經頸靜脈內給藥一整瓶的內容物。
實施例3．包含胰島素/PC復合物的制劑的制備(ⅰ)磷脂分散體的制備1．在帶磨口玻璃塞的煮管中稱取2g大豆磷脂酰酰膽堿并加入蒸餾水以產生8g的最終重量。用氮洗滌，塞緊，用石蠟膜密封并在定軌搖床上輕輕混合直至分散所有固體。
2．轉移至玻璃圓底超聲容器中。
3．將超聲容器夾至裝有1英寸直徑探頭的Sonics Material VibraCellVC×60超聲波儀中，并浸沒探頭直至其基部位于液體彎液面之下1cm。使用一粘膜條在探頭和管頂部之間形成一個套環，用氮清洗液體上面的空氣空間，將超聲容器浸沒在冰浴中。
4．以50％振幅，1秒鐘脈沖間以4秒鐘冷卻間隔將液體懸浮液超聲處理，直至形成乳白色分散體(通常總超聲處理時間為4分鐘)。
5．將分散體轉移至塑料圓錐形離心管中并以1200g離心15分鐘。將存在的任何沉淀與上清分離。
(ⅱ)蛋白質溶液的制備6．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取30mg抑酶肽并加入1.5ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
7．將110mg胰島素稱至25ml錐形燒瓶中，并加入15ml其中加入了150μl冰醋酸的蒸餾水。用石蠟膜覆蓋燒瓶，并在37℃下，在定軌搖床上輕輕混合直至所有固體溶解。
8．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取10mg檸檬酸鈉并加入1.5ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
9．向十二個7ml玻璃螺口小瓶的每一個中分配1ml來自步驟7的胰島素溶液(7.33mg固體，200iu)，100μl來自步驟8的檸檬酸鈉(0.67mg固體)，100μl來自步驟6的抑酶肽溶液(2mg固體)以及400μl來自步驟5的磷脂分散體(100mg固體)。輕輕混合各小瓶的內容物。
(ⅲ)油相的制備10．將1.5g多乙氧基醚80和13.5g Akoline MCM稱至20ml玻璃瓶中。用氮清洗小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封，在輥筒式混合器上輕輕混合直至獲得均勻溶液。
(ⅳ)水相的冷凍干燥11．使用大體積正位移分配器向步驟9中的各小瓶中加入1ml來自步驟10的akoline/多乙氧基醚80混合物。
12．將各小瓶迅速渦旋10秒，接著立即在液氮中冷凍。
13．在低于-40℃的冷凝器溫度及小于0.1毫巴的真空下冷凍干燥兩夜。
(ⅴ)油溶液的制備14．從冷凍干燥器中取出各小瓶，用氮清洗，蓋緊并用石蠟膜密封。37℃輕輕搖動下保溫直至獲得清澈溶液，貯存于+4℃直至需要時使用。
(ⅵ)體內給藥15．水浴中將各小瓶加溫至37℃以熔化油并形成清澈溶液。
16．向各小瓶中加入2ml溫PBS，渦旋30秒，并如上所述，對一只豬經頸靜脈給藥一整瓶的內容物。
實施例4．包含胰島素/烏索脫氧膽酸鹽復合物的制劑的制備(ⅳ)烏索脫氧膽酸鹽溶液的制備1．在玻璃錐形燒瓶中稱取525mg烏索脫氧膽酸鈉并加入蒸餾水至產生15g的最終重量。用氮清洗，蓋緊，用石蠟膜密封并在定軌搖床上輕輕混合直至所有固體溶解。
(ⅱ)蛋白質溶液的制備2．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取30mg抑酶肽并加入1.5ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體熔解。
3．將110mg胰島素稱至25ml錐形燒瓶中并加入15ml來自步驟1的烏索脫氧膽酸鹽溶液(525g固體)。用石蠟膜覆蓋燒瓶，并在37℃在定軌搖床上輕輕混合直至固體溶解。
4．在2ml玻璃螺口小瓶中稱取13.5mg檸檬酸鈉并加入1.5ml蒸餾水。將蓋旋緊并輕輕混合直至所有固體溶解。
5．向十二個7ml玻璃螺口小瓶的每一個中分配1ml來自步驟3胰島素/鵝脫氧膽酸鹽溶液(7.3mg胰島素/35mg膽汁鹽)，100μl來自步驟4的檸檬酸鈉(0.9mg固體)以及100μl來自步驟2的抑酶肽溶液(2mg固體)。輕輕混合各小瓶的內容物。
(ⅲ)油相的制備6．將1.5g多乙氧基醚80和13.5g akoline MCM稱至20ml玻璃瓶中。用氮清洗小瓶，將蓋旋緊并用石蠟膜密封，在輥筒式混合器上輕輕混合直至獲得均勻溶液。
(ⅳ)水相的冷凍干燥7．使用大體積正位移分配器向步驟5中的各小瓶中加入1ml來自步驟6的akoline/多乙氧基醚80混合物。
8．將各小瓶迅速渦旋10秒，接著立即在液氮中冷凍。
9．在低于-40℃的冷凝器溫度以及小于0.1毫巴的真空下冷凍干燥兩夜。
(ⅴ)油溶液的制備10．從冷凍干燥器中取出各小瓶，用氮清洗，蓋緊并用石蠟膜密封。37℃下保溫10分鐘直至獲得清澈溶液。
11．貯存于+4℃直至需要時使用。
(ⅵ)體內給藥12．水浴中將各小瓶加溫至37℃以熔化油并形成清澈溶液。
13．向各小瓶中加入2ml溫PBS，渦旋30秒，并如上所述，對一只豬經頸靜脈給藥一整瓶的內容物。
實施例5用于腸送遞降鈣素的制劑如下制備制劑1)鮭魚降鈣素與akoline MCM的混合物如實施例1，只是(a)省去磷脂分散體(b)含蛋白質的冷凍干燥物不被溶于油相中，(c)在對動物給藥之前，將蛋白質冷凍干燥物溶解在4ml磷酸緩沖鹽溶液中，以及(d)將產生的溶液加至2ml油相中(Akoline MCM/Tween 80)并通過旋渦來分散。
2)鮭魚降鈣素與二油酸甘油酯的混合物如制劑(1)，只是采用二油酸甘油酯代替Akoline MCM。
3)鮭鉭降鈣素與油酸的混合物。
如制劑(1)，只是采用油酸代替Akoline MCM。
4)在Akoline MCM中包含鮭魚降鈣素/PC復合物的油如實施例1中所述。
5)在Akoline MCM中包含鮭鉭降鈣素/鵝脫氧膽酸鹽復合物的油制劑在組成上與本實施例制劑(4)的相同，只是在油相中采用100mg/g濃度的鵝脫氧膽酸鹽代替PC。
6)在Akoline MCM中包含鮭魚降鈣素/鵝脫氧膽酸鹽復合物的油制劑在組成上與本實施例制劑(4)的相同，只是省去抑酶肽以及在油相中采用17.5mg/g濃度的鵝脫氧膽酸鈉代替PC。
7)在Akoline MCM中包含鮭魚降鈣素/烏索脫氧膽酸鹽復合物的油制劑在組成上與上面(4)中的相同，只是省去抑酶肽以及在油相中采用17.5mg/g濃度的烏索脫氧膽酸鈉代替PC。
8)在Akoline中包含鮭魚降鈣素/琥珀酸生育酚酯復合物的油制劑在組成上與上面(4)中的相同，只是省去抑酶肽以及在油相中采用25mg/g濃度的琥珀酸α-生育酚酯代替PC。
9)在Akoline MCM中包含鮭魚降鈣素/磺基琥珀酸二辛酯鈉復合物的油。
制劑在組成上與上面(4)中的相同，只是省去抑酶肽以及在油相中采用25mg/g濃度的磺基琥珀酸二辛酯鈉代替PC。實施例6用于腸送遞胰島素的制劑如下制備制劑10)胰島素與Akoline MCM的混合物如制劑(1)，只是采用7.3mg胰島素(200iu)，2mg抑酶肽和1ml Akoline/Tween 80油相。
11)在Akoline MCM中包含胰島素/PC復合物的油如實施例2。
12)在Akoline MCM中包含胰島素/鵝脫氧膽酸鹽復合物且為高膽汁鹽濃度的油如實施例3。
13)在Akoline MCM中包含胰島素/鵝脫氧膽酸鹽復合物且為中等膽汁鹽濃度的油如實施例3。
14)在Akoline MCM中包含胰島素/鵝脫氧膽酸鹽復合物且為低膽汁鹽濃度的油如實施例3。
15)在Akoline MCM中包含胰島素/烏索脫氧膽酸鹽復合物的油(含抑酶肽)如實施例4。
16)在Akoline MCM中包含胰島素/烏索脫氧膽酸鹽復合物的油(不含抑酶肽)完全同實施例4，只是從制劑中省去抑酶肽。
17)胰島素/烏索脫氧膽酸鹽的磷酸緩沖鹽溶液如實施例4步驟(3)制備胰島素的冷凍干燥溶液。給藥前，重新溶解在磷酸緩沖鹽溶液中(7.3mg胰島素/2ml)。
實施例7動物實驗動物實驗動物模型的準備用來檢測降鈣素口服制劑的動物模型為幼豬。之所以選擇豬是因為它具有類似于人的體重，并且小腸的結構、功能和大小與人小腸相似。為了消除與人與豬之間差別有關的擔心，對動物進行手術操作，這樣借助于埋藏插管可將物質直接導入空腸中。這也減少了通常與口服給藥劑量到達腸中的時間有關的不確定性，并導致獲得的統計學質量的提高。
在首次給藥之前至少10天，將一細塑料插管經手術插入豬的空腸中并接著在豬的背部從皮膚下引出，這樣可不使動物痛若而將試驗物質注入空腸。將也穿過背部皮膚而引出的埋藏導管通過中隱動脈插入主動脈中，這樣可獲得重復的血樣。第二個導管還被導入頸動脈中。制劑的給藥在意識完全清醒禁食狀態下對豬進行試驗，在取出三個基線血樣后，借助于口服途徑給予肽制劑。單個實驗通常占用8-9小時的時間，被進行手術操作的豬在四周時間內參與試驗，每周多達3次。試驗完畢后將豬殺死，檢查小腸的肉眼及顯微鏡下的變化。
實驗期間不限量地提供水，在8:00和15:30對豬進行喂食。在16:30清除15:30喂食后剩下的任何食物。在處理期間，撤去08:00的食物，在抽取最后血樣后提供每日全部需要量的3/4。
在處理期間，借助于通向空腸中的埋藏插管通過滴注來提供給藥溶液。將插管在給藥前用1ml溫(25-30℃)無菌磷酸緩沖鹽溶液充分清洗，并在給藥后相同溫度下用5ml相同物質充分清洗。以其中2ml油被渦旋在4ml溫的磷酸緩沖鹽溶液中的分散體的形式提供摻合在脂質送遞系統中的降鈣素，并且對每只動物給1.3ml產生的分散體。每只動物接受5000iu的降鈣素。在全部3毫升被經頸靜脈給藥至一個單一動物之前也以其中1ml含200iu胰島素的油被分散在2ml溫的磷酸鹽溶液中的分散體的形式提供胰島素制劑。動物中的樣品收集用肝素化的鹽溶液(500iu/ml)每天將用于收集血液的導管清洗一次。取樣期間，在取樣的導管中采用較低濃度的肝素溶液(50iu/ml)。
在研究期間，9:00時，在取出2ml血液以從導管中除去任何殘留抗凝劑之后，抽取不超出5ml的血樣，接著用50iu/ml肝素溶液清洗導管以防止導管中的凝結。接著根據處理方案對動物進行給藥。將取血樣和約藥交叉進行以使得能同時對許多動物進行處理，在如對9:00(零時間)進行樣品給藥后0.25；0.5；1.0；1.5；2.0；3.0；4.0和6.0小時，在各時間點抽取總共4ml的血樣。分析方法如下處理血樣棄去第一份血后，將第一個2ml放至被肝素化的塑料容器中。在冷凍離心機中以3000rpm離心20分鐘之前，將樣品貯存于+4℃達30分鐘，接著將產生的血漿分成兩份并轉移至兩個適宜的容器中，并在使用Kone自動分析儀對血漿鈣或葡萄糖濃度進行比色分析之前，冷凍至-20℃。對一個樣品進行分析，而保留另一樣品。結果下面表1和2通過鈣或葡萄糖水平降低的AUC以及鈣或葡萄糖水平的峰降低來提供動物實驗的結果。
表1如實施例5所述的降鈣素制劑的結果
表2如實施例6所述的胰島素制劑的結果
<p>在表2中，將胰島素配制成中鏈單酸甘油酯中的疏水性溶液(17)產生比各成分簡單的兩相混合物(11)更大的功效。葡萄糖降低的AUC而非峰葡萄糖的降低更為顯著，這說明在提高功效中較長的作用期是一個重要因素。從(11)和(17)中減去組(18)的AUC值給出由送遞賦形劑產生的作用大于和高于以游離形式給藥的胰島素的效果貢獻。可以看出，配制成中鏈單酸甘油酯中的溶液的胰島素產生大于由各成分的簡單混合物所提供的增強作用的二倍的作用。
權利要求
1．一種疏水性制劑，包含(ⅰ)一種包含一種或多種中鏈單酸甘油酯的油相；(ⅱ)至少一種兩親性物質；和(ⅲ)一種溶解或以其它方式分散在所述一種或多種甘油酯中的親水性物質；其中親水性物質在所述一種或多種甘油酯中通常為不溶的。
2．權利要求1所述的疏水性制劑，其中油相包含中鏈單酸甘油酯和甘油二酯的混合物。
3．權利要求2所述的疏水性制劑，其中中鏈甘油酯具有8-10個碳原子的鏈長。
4．權利要求2或3所述的疏水性制劑，其中油相進一步包含其它化合物，如油酸、單油酸甘油酯或gelucires。
5．權利要求4所述的疏水性制劑，其中油相包含40-90％單酸甘油酯。
6．權利要求5所述的疏水性制劑，其中油相包含60-70％單酸甘油酯。
7．權利要求1-6任一項所述的疏水性制劑，其中油相包含Akoline MCM。
8．權利要求1-7任一項所述的疏水性制劑，其中兩親性物質親水物質的比例在1∶1至20∶1的范圍內(按重量計)。
9．權利要求8所述的疏水性制劑，其中兩親性物質親水物質的比例為1.2∶1至8∶1(按重量計)。
10．權利要求1-9任一項所述的疏水性制劑，其中兩親性物質為磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸或其溶血衍生物、辛基葡糖苷或其它糖脂、生育酚琥珀酸酯和膽固醇半琥珀酸酯、磺基琥珀酸二辛酯鈉或羥丙基纖維素。
11．權利要求1-9任一項所述的疏水性制劑，其中兩親性物質為膽汁鹽。
12．權利要求11所述的疏水性制劑，其中兩親性物質了膽汁鹽，包括膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、鵝脫氧膽酸鹽、烏索脫氧膽酸鹽、牛磺膽酸鹽、牛磺脫氧膽酸鹽、牛磺烏索脫氧膽酸鹽、牛磺鵝脫氧膽酸鹽、甘膽酸鹽、甘脫氧膽酸鹽、甘烏索脫氧膽酸鹽、甘鵝脫氧膽酸鹽、石膽酸鹽、牛磺石膽酸鹽或甘石膽酸鹽。
13．權利要求1-12任一項所述的疏水性制劑，其中親水性物質為親水性大分子。
14．權利要求13所述的疏水性制劑，其中親水性大分子包括蛋白質、糖蛋白、寡核酸和/或多核酸如DNA或RNA，以及其類似物，多糖如肝素或其超分子復合物。
15．權利要求13或14所述的疏水性制劑，其中小分子與親水性大分子共溶。
16．權利要求15所述的疏水性制劑，其中小分子為多糖如環糊精或維生素B12。
17．權利要求13-16任一項所述的疏水性制劑，其中大分子為蛋白質。
18．權利要求17所述的疏水性制劑，其中蛋白質為胰島素、降鈣素、血紅蛋白、大豆胰蛋白酶抑制劑、抑酶肽、GLP1、紅細胞生成素、促生長素、生長激素、生長激素釋放因子、galanin、尿激酶、血液因子如因子Ⅷ和因子Ⅸ、組織纖溶酶原激活劑、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、干擾素、促生長素抑制素、水蛭素、LHRU或其類似物或片段。
19．權利要求1-12任一項所述的疏水性制劑，其中親水性物質為小有機分子、小無機分子或膠態物質。
20．權利要求19所述的疏水性制劑，其中親水性物質為葡萄糖、羧基熒光素、抗癌劑、維生素、氯化鈣、磷酸鈉或膠態金屬，如膠態金、鈀、鉑或銠。
21．權利要求1-20任一項所述的疏水性制劑，其進一步包含一種或多種選自抗氧化劑、金屬螯合劑、緩沖劑和分散劑的其它成分。
22．一種乳劑，其包含如權利要求1-21任一項所定義的疏水性制劑。
23．一種藥劑，其包含如權利要求1-21任一項所定義的疏水性制劑。
24．權利要求1-21任一項所定義的疏水性制劑在制備用于口服送遞親水性物質的藥物中的用途。
全文摘要
可用作藥物送遞系統等的疏水性制劑,包括:(i)包含一種或多種中鏈單酸甘油酯如AkolineMCM
文檔編號A61K9/107GK1224360SQ97196069
公開日1999年7月28日 申請日期1997年7月2日 優先權日1997年7月2日
發明者R·R·C·紐, C·J·吉比 申請人:科特克斯(英國)有限公司