本發明涉及(ji)生物醫藥領域，具體地說，是一種抗(kang)幽門螺桿(gan)菌(jun)的(de)納米(mi)材料(liao)及(ji)其制備方法與應用。

背景技術：

1、幽(you)門(men)(men)螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)(h.pylori)是一種革蘭(lan)氏陰性桿(gan)(gan)菌(jun)，呈(cheng)螺(luo)旋(xuan)形彎曲(qu)，特異(yi)性定植于(yu)胃(wei)(wei)上(shang)皮(pi)細(xi)胞，通過分(fen)泌尿素酶(mei)和一系列毒力因子(zi)(如caga、vaca)引起胃(wei)(wei)黏(nian)膜損傷。在臨床上(shang)，大多幽(you)門(men)(men)螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)感染(ran)者(zhe)并無癥狀，只在胃(wei)(wei)鏡檢查中和病理學上(shang)發生炎(yan)癥性改(gai)變，然(ran)而不(bu)施加干預可(ke)能(neng)導致患(huan)(huan)者(zhe)患(huan)(huan)有淺表性胃(wei)(wei)炎(yan)，進一步向前發展(zhan)為(wei)萎(wei)縮性胃(wei)(wei)炎(yan)，腸化生、異(yi)型增生乃至胃(wei)(wei)癌，部分(fen)患(huan)(huan)者(zhe)還會發生消化性潰瘍或胃(wei)(wei)黏(nian)膜相關淋巴(ba)樣組織(malt)淋巴(ba)瘤。多項研究表明(ming)，根除(chu)幽(you)門(men)(men)螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)的(de)獲益十(shi)分(fen)顯著，不(bu)僅能(neng)明(ming)顯改(gai)善(shan)胃(wei)(wei)黏(nian)膜的(de)萎(wei)縮性病變，而且(qie)降低(di)了患(huan)(huan)胃(wei)(wei)癌的(de)風(feng)(feng)險。因此，對(dui)于(yu)幽(you)門(men)(men)螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)感染(ran)者(zhe)應當采(cai)取“早(zao)(zao)根除(chu)，早(zao)(zao)獲益”的(de)策略，及早(zao)(zao)干預，降低(di)風(feng)(feng)險。

2、幾十年來(lai)，根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)幽(you)門螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)最(zui)(zui)主要的(de)(de)(de)(de)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)方(fang)法(fa)依(yi)然(ran)是三聯或(huo)四聯療(liao)(liao)法(fa)，即(ji)兩(liang)種(zhong)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)聯合鉍劑(ji)或(huo)質子(zi)泵抑制劑(ji)。治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)方(fang)案(an)的(de)(de)(de)(de)選(xuan)(xuan)擇，尤其(qi)首次(ci)根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)選(xuan)(xuan)擇的(de)(de)(de)(de)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)十分(fen)(fen)關(guan)鍵，不(bu)僅(jin)可提高根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)率，而(er)且能(neng)降低(di)根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)成(cheng)本和發(fa)(fa)生(sheng)藥(yao)(yao)物不(bu)良反應(ying)的(de)(de)(de)(de)風險。但對(dui)用(yong)于(yu)根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)最(zui)(zui)主要的(de)(de)(de)(de)兩(liang)種(zhong)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(甲(jia)硝(xiao)唑和克拉(la)霉素(su)(su))的(de)(de)(de)(de)耐藥(yao)(yao)性(xing)不(bu)斷上升(sheng)，由此帶來(lai)的(de)(de)(de)(de)根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)率的(de)(de)(de)(de)降低(di)也使(shi)部分(fen)(fen)高危人群預(yu)防胃(wei)癌(ai)發(fa)(fa)作(zuo)的(de)(de)(de)(de)策略(lve)受到限制。對(dui)于(yu)根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)失敗的(de)(de)(de)(de)患者，通常(chang)會更換抗(kang)生(sheng)素(su)(su)進行替代性(xing)一線或(huo)二線治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)，但重(zhong)(zhong)復嘗試的(de)(de)(de)(de)成(cheng)功率較低(di)，更不(bu)用(yong)說與之相關(guan)的(de)(de)(de)(de)藥(yao)(yao)物不(bu)良反應(ying)、根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)失敗的(de)(de)(de)(de)并發(fa)(fa)癥和治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)費用(yong)的(de)(de)(de)(de)成(cheng)倍增加等。因此，在(zai)(zai)高耐藥(yao)(yao)的(de)(de)(de)(de)背景下，如何提高幽(you)門螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)根(gen)(gen)除(chu)(chu)(chu)(chu)率，擺脫被抗(kang)生(sheng)素(su)(su)裹挾的(de)(de)(de)(de)困(kun)境是一直以來(lai)都在(zai)(zai)面臨的(de)(de)(de)(de)嚴峻挑(tiao)戰。必須(xu)重(zhong)(zhong)視對(dui)取締抗(kang)生(sheng)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)菌(jun)方(fang)案(an)的(de)(de)(de)(de)探索，開發(fa)(fa)出一種(zhong)無抗(kang)生(sheng)素(su)(su)消滅幽(you)門螺(luo)桿(gan)(gan)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)方(fang)案(an)。

3、中國專(zhuan)利文獻cn?116099000a公開了一(yi)(yi)種可(ke)注射(she)(she)多功(gong)能復(fu)合(he)(he)微(wei)粒及其制備(bei)方(fang)法，其包括(kuo)奧(ao)沙(sha)利鉑、吲哚菁綠和(he)(he)plga，所述(shu)吲哚菁綠和(he)(he)奧(ao)沙(sha)利鉑共同(tong)負載(zai)于plga中，形成(cheng)可(ke)注射(she)(she)多功(gong)能復(fu)合(he)(he)微(wei)粒；通過(guo)術(shu)中注射(she)(she)的(de)(de)(de)方(fang)式將納米微(wei)粒植(zhi)入到(dao)(dao)區(qu)域淋(lin)(lin)巴(ba)引流區(qu)及腫瘤(liu)切除后的(de)(de)(de)瘤(liu)床，對區(qu)域淋(lin)(lin)巴(ba)結進行熒(ying)光(guang)(guang)成(cheng)像示蹤定位以(yi)指導淋(lin)(lin)巴(ba)結清掃，對殘存轉(zhuan)移淋(lin)(lin)巴(ba)結以(yi)及殘存癌灶進行精準的(de)(de)(de)光(guang)(guang)熱輔(fu)助治療(liao)，構建具有藥物緩釋、光(guang)(guang)熱性能的(de)(de)(de)復(fu)合(he)(he)納米顆粒，提高胃癌患者生存率。中國專(zhuan)利文獻cn?111588853a公開了一(yi)(yi)種化(hua)(hua)療(liao)-光(guang)(guang)療(liao)協(xie)同(tong)抗腫瘤(liu)微(wei)球(qiu)，為(wei)包裹化(hua)(hua)療(liao)藥物和(he)(he)光(guang)(guang)敏劑的(de)(de)(de)芯(xin)(xin)殼(ke)微(wei)球(qiu)，所述(shu)光(guang)(guang)敏劑為(wei)吲哚菁綠，所述(shu)化(hua)(hua)療(liao)藥物和(he)(he)光(guang)(guang)敏劑被包載(zai)于芯(xin)(xin)殼(ke)微(wei)球(qiu)中。該微(wei)球(qiu)同(tong)時通過(guo)化(hua)(hua)學療(liao)法、光(guang)(guang)動力療(liao)法、光(guang)(guang)熱療(liao)法聯合(he)(he)作(zuo)用達到(dao)(dao)協(xie)同(tong)抗腫瘤(liu)效果(guo)，同(tong)時解決(jue)了傳統化(hua)(hua)療(liao)藥物毒副作(zuo)用大的(de)(de)(de)問題(ti)。

4、但(dan)是關于一種能(neng)夠聯合聲動力(li)療(liao)法根除幽(you)門螺桿菌(jun)的負載(zai)吲哚菁綠的殼聚糖/巖藻糖納米(mi)材料及其制備方法和應(ying)用(yong)目前還未見報道。

技術實現思路

1、本(ben)發(fa)明的目的在于提(ti)供一種能夠聯(lian)合聲動力療法(fa)根除幽門螺桿(gan)菌的負載吲哚(duo)菁(jing)綠的殼聚(ju)糖/巖(yan)藻(zao)糖納米材料(liao)及其制(zhi)備(bei)方法(fa)和應(ying)用(yong)。

2、為了實現上(shang)述目的，本發明采用以下技術方案：

3、本發明構建(jian)了負(fu)載吲哚菁(jing)綠(lv)(icg)的(de)殼聚(ju)(ju)糖/巖(yan)藻(zao)糖納(na)米材料(fcs@gnp@icg)，通(tong)過聲動力療(liao)法達到根除幽門螺桿(gan)菌的(de)效果(guo)。納(na)米材料是由吲哚菁(jing)綠(lv)(icg)、殼聚(ju)(ju)糖(cs)、巖(yan)藻(zao)糖(fs)、京尼(ni)平(gnp)、三聚(ju)(ju)磷酸(suan)鈉(na)(tpp)組成。

4、吲哚菁綠(icg)為診斷用藥，是(shi)(shi)用來檢查肝(gan)臟(zang)功能和肝(gan)有效血流量(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)染(ran)料(liao)藥。它具(ju)有優(you)(you)越的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)安全性(xing)，由(you)于(yu)(yu)(yu)排(pai)泄快，一般正(zheng)常(chang)人靜脈注射20分鐘后約有97％從(cong)血中(zhong)排(pai)除、不(bu)參與(yu)(yu)體(ti)(ti)內化學反應(ying)、無(wu)(wu)腸肝(gan)循環，是(shi)(shi)唯一經fda批(pi)準的(de)(de)(de)(de)(de)近紅外(wai)(nir)熒光(guang)染(ran)料(liao)。殼(ke)(ke)聚糖(tang)(tang)(tang)(cs)是(shi)(shi)甲(jia)殼(ke)(ke)素n-脫乙酰基的(de)(de)(de)(de)(de)產(chan)物(wu)，具(ju)有良(liang)好的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)相(xiang)容性(xing)、生(sheng)物(wu)降解(jie)性(xing)及(ji)成(cheng)膜(mo)性(xing)等優(you)(you)點，將其(qi)(qi)制(zhi)備成(cheng)納(na)米(mi)殼(ke)(ke)聚糖(tang)(tang)(tang)粒(li)子(zi)后，利用納(na)米(mi)材料(liao)獨(du)特(te)的(de)(de)(de)(de)(de)尺(chi)寸(cun)效應(ying)在(zai)(zai)保留殼(ke)(ke)聚糖(tang)(tang)(tang)優(you)(you)良(liang)性(xing)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)同時，能明顯提(ti)升其(qi)(qi)力(li)學性(xing)質(zhi)及(ji)抗菌(jun)(jun)(jun)性(xing)。巖(yan)藻糖(tang)(tang)(tang)(fs)是(shi)(shi)六碳糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)(de)(de)(de)一種，并可以(yi)看作(zuo)是(shi)(shi)一種甲(jia)基戊糖(tang)(tang)(tang)，作(zuo)為糖(tang)(tang)(tang)蛋白中(zhong)糖(tang)(tang)(tang)鏈的(de)(de)(de)(de)(de)組成(cheng)部分，廣(guang)泛存(cun)在(zai)(zai)于(yu)(yu)(yu)各類(lei)細(xi)胞表面(mian)的(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)膜(mo)上(shang)。幽(you)(you)(you)門(men)(men)螺(luo)桿菌(jun)(jun)(jun)表面(mian)受體(ti)(ti)含有巖(yan)藻糖(tang)(tang)(tang)殘基，含巖(yan)藻糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)(de)(de)(de)納(na)米(mi)載體(ti)(ti)可與(yu)(yu)細(xi)菌(jun)(jun)(jun)表面(mian)的(de)(de)(de)(de)(de)凝集素受體(ti)(ti)特(te)異(yi)性(xing)結(jie)(jie)合(he)，起到靶向作(zuo)用。京尼平(gnp)可提(ti)高殼(ke)(ke)聚糖(tang)(tang)(tang)-巖(yan)藻糖(tang)(tang)(tang)結(jie)(jie)構(gou)的(de)(de)(de)(de)(de)穩定(ding)(ding)性(xing)，并可降低藥物(wu)釋放(fang)率。據報道(dao)，它還(huan)可以(yi)在(zai)(zai)50-100μg/ml濃度(du)下抑(yi)制(zhi)幽(you)(you)(you)門(men)(men)螺(luo)桿菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)定(ding)(ding)植。三聚磷酸鈉(tpp)具(ju)有螯(ao)合(he)陽離子(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)能力(li)，含有大(da)量(liang)帶負電荷的(de)(de)(de)(de)(de)po-基團，在(zai)(zai)一定(ding)(ding)條件(jian)下，殼(ke)(ke)聚糖(tang)(tang)(tang)分子(zi)鏈上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)nh3+與(yu)(yu)po-發生(sheng)結(jie)(jie)合(he)而形成(cheng)納(na)米(mi)殼(ke)(ke)聚糖(tang)(tang)(tang)顆(ke)粒(li)。聲動(dong)力(li)療法(fa)(fa)(sdt)是(shi)(shi)利用超(chao)(chao)聲(us)激發聲敏劑來產(chan)生(sheng)單線態氧誘(you)導(dao)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞死亡，從(cong)而達(da)(da)到治(zhi)療目(mu)的(de)(de)(de)(de)(de)，其(qi)(qi)作(zuo)為一種非侵入性(xing)腫(zhong)瘤(liu)治(zhi)療方法(fa)(fa)于(yu)(yu)(yu)今年7月被美(mei)國食品藥物(wu)管理局(fda)通(tong)過綠色通(tong)道(dao)批(pi)準其(qi)(qi)用于(yu)(yu)(yu)惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)的(de)(de)(de)(de)(de)臨(lin)床(chuang)診治(zhi)。而sdt用于(yu)(yu)(yu)抗菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)研(yan)(yan)究(jiu)尚不(bu)多見，與(yu)(yu)滅菌(jun)(jun)(jun)領域應(ying)用廣(guang)泛的(de)(de)(de)(de)(de)光(guang)動(dong)力(li)療法(fa)(fa)(pdt)相(xiang)比，它的(de)(de)(de)(de)(de)優(you)(you)勢在(zai)(zai)于(yu)(yu)(yu)可以(yi)到達(da)(da)超(chao)(chao)過10厘米(mi)的(de)(de)(de)(de)(de)軟(ruan)組織(zhi)，同時具(ju)有無(wu)(wu)創的(de)(de)(de)(de)(de)特(te)點。迄今為止，僅有兩篇文(wen)獻報道(dao)過聲動(dong)力(li)療法(fa)(fa)應(ying)用于(yu)(yu)(yu)根(gen)除幽(you)(you)(you)門(men)(men)螺(luo)桿菌(jun)(jun)(jun)，均展(zhan)現了良(liang)好的(de)(de)(de)(de)(de)殺菌(jun)(jun)(jun)性(xing)能(wang?r,song?c,gao?a,et?al.antibody-conjugated?liposomes?loaded?with?indocyanine?green?for?oral?targetedphotoacoustic?imaging-guided?sonodynamic?therapy?of?helicobacter?pyloriinfection.acta?biomaterialia.2022；143:418-427.yu?j,guo?z,yan?j,et?al.gastricacid-responsive?ros?nanogenerators?for?effective?treatment?of?helicobacterpylori?infection?without?disrupting?homeostasis?of?intestinal?flora.adv?sci(weinh).2023；10(20):e2206957.)，但對于(yu)(yu)(yu)實現臨(lin)床(chuang)轉化還(huan)需要大(da)量(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)研(yan)(yan)究(jiu)佐證。

5、本發明首先是利用巖藻糖和殼(ke)聚糖的(de)(de)靶向幽(you)門(men)(men)螺(luo)(luo)桿(gan)菌(jun)的(de)(de)作用與正負電荷(he)相(xiang)互(hu)作用，將材(cai)(cai)料黏(nian)(nian)附于(yu)幽(you)門(men)(men)螺(luo)(luo)桿(gan)菌(jun)表面，再通過體(ti)外超聲照(zhao)射下，激活聚集在細菌(jun)表面的(de)(de)納米(mi)材(cai)(cai)料，產(chan)生(sheng)大量(liang)的(de)(de)單線態(tai)氧來消除幽(you)門(men)(men)螺(luo)(luo)桿(gan)菌(jun)，并(bing)且(qie)此(ci)過程并(bing)不(bu)會(hui)破壞(huai)胃黏(nian)(nian)膜上(shang)皮(pi)，能使感染幽(you)門(men)(men)螺(luo)(luo)桿(gan)菌(jun)的(de)(de)胃黏(nian)(nian)膜組織恢復到正常狀態(tai)。綜(zong)上(shang)，fcs@gnp@icg聯合(he)聲動力療(liao)法提供了根除幽(you)門(men)(men)螺(luo)(luo)桿(gan)菌(jun)的(de)(de)創新性策略，不(bu)僅(jin)可(ke)以解決抗生(sheng)素耐藥問題，而且(qie)具(ju)有良好(hao)的(de)(de)生(sheng)物相(xiang)容性，是一種很有前途的(de)(de)治療(liao)方法。

6、基于(yu)上述技術方(fang)案，本發明的(de)第一(yi)方(fang)面(mian)，提供(gong)一(yi)種抗幽門(men)螺桿(gan)菌(jun)的(de)納米材料的(de)制備(bei)方(fang)法，包括(kuo)以下(xia)步驟：

7、(a)殼聚(ju)糖與巖藻糖交聯：0.5g中粘度(du)殼聚(ju)糖(粘度(du)范(fan)圍在(1000-100)×10-3pa.s)溶解(jie)在50ml甲醇和(he)(he)1.0％醋酸(ph?4.5)1:1的混合物中；取去離(li)子(zi)水10ml，加入0.5g巖藻糖和(he)(he)1.0g氰基氫(qing)化鈉，室溫下連續攪拌6h；樣品(pin)在黑暗中對5l去離(li)子(zi)水進行透析(xi)1天，每2小時(shi)更(geng)換1次(ci)，更(geng)換5次(ci)；合成的fcs在冷凍干燥機中凍干；

8、(b)交聯三聚磷酸鈉(na)(na)(tpp)：配置1mg/ml的(de)(de)fcs溶液(ye)(ye)；配置4ml最(zui)終(zhong)濃度(du)為(wei)0.25mg/ml的(de)(de)三聚磷酸鈉(na)(na)溶液(ye)(ye)；然(ran)(ran)后，在室溫下，在強磁攪拌下，將tpp溶液(ye)(ye)滴(di)加到fcs溶液(ye)(ye)中(0.3ml/min)然(ran)(ran)后將所得(de)懸(xuan)浮液(ye)(ye)凝膠(jiao)化30分鐘(zhong)；

9、(c)交聯京尼平(ping)(gnp)：配置(zhi)0.5mg/ml京尼平(ping)溶(rong)液，將1.0ml?gnp溶(rong)液緩慢滴加(jia)到步(bu)驟b制得的混(hun)合溶(rong)液中，反應2小時(shi)，形(xing)成(cheng)fcs@gnp?nps；

10、(d)連接吲哚菁綠(icg)：將1ml?icg(5mg/ml)加入(ru)4ml?fcs@gnp?nps溶液(1mg/ml)中，在室(shi)溫下(xia)攪拌24小(xiao)時；用10kda的(de)離心管(guan)在室(shi)溫下(xia)進一步離心純化納米顆粒，除去多余的(de)游離icg，得到納米材料fcs@gnp@icg。

11、本發明的第二方面(mian)，提供(gong)一種(zhong)采用如上(shang)所(suo)述的制備方法制備得到的抗幽(you)門螺桿菌的納米材(cai)料(liao)。

12、本發(fa)明的(de)第三(san)方(fang)面，提供一(yi)種如上所述的(de)納米材(cai)料在制(zhi)備抗幽門螺桿菌的(de)藥物(wu)中(zhong)的(de)應用。

13、進(jin)一步(bu)地(di)，所述的抗(kang)幽(you)門(men)螺桿(gan)菌(jun)的藥(yao)物為能夠聯合(he)聲動力療法根(gen)除幽(you)門(men)螺桿(gan)菌(jun)的藥(yao)物。

14、本(ben)發(fa)明的第四方面，提供一種如上所述的納米材料聯合(he)超(chao)聲在(zai)制備抗幽門螺桿菌的藥物中的應用(yong)。

15、本(ben)發明的(de)(de)第五方面，提供(gong)一種(zhong)抗幽門螺桿菌的(de)(de)藥(yao)物，所述的(de)(de)藥(yao)物以(yi)如上所述的(de)(de)納米材料(liao)作為活性(xing)成分(fen)。

16、本(ben)發明優點在于：

17、本(ben)發(fa)明可在(zai)常(chang)溫常(chang)壓下利用(yong)簡(jian)單的工藝制備納(na)(na)米級別的fcs@gnp@icg，并聯合聲動力(li)(li)療(liao)法根除幽(you)門螺(luo)(luo)桿菌(jun)(jun)。本(ben)發(fa)明利用(yong)巖藻糖和殼(ke)聚糖的靶(ba)向幽(you)門螺(luo)(luo)桿菌(jun)(jun)的作(zuo)用(yong)與(yu)正負(fu)電荷相(xiang)互作(zuo)用(yong)，將材料黏附于幽(you)門螺(luo)(luo)桿菌(jun)(jun)表面，再(zai)通(tong)過體(ti)外(wai)超聲照(zhao)射下，激(ji)活聚集在(zai)細菌(jun)(jun)表面的納(na)(na)米材料，產生大量的單線態氧來消(xiao)除幽(you)門螺(luo)(luo)桿菌(jun)(jun)，并且此過程(cheng)并不(bu)會破壞胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)，能使(shi)感染幽(you)門螺(luo)(luo)桿菌(jun)(jun)的胃(wei)黏膜組織(zhi)恢復到正常(chang)狀態。fcs@gnp@icg聯合聲動力(li)(li)療(liao)法提供了根除幽(you)門螺(luo)(luo)桿菌(jun)(jun)的創新(xin)性策(ce)略，不(bu)僅(jin)可以解決抗生素耐藥問題，而且具有良(liang)好(hao)的生物(wu)相(xiang)容性，是一種很有前途的治療(liao)藥物(wu)和方(fang)法。