一種含人參的植物組合物提取方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種含人參的植物組合物提取方法，由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發明還提供了含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用。
【專利說明】一種含人參的植物組合物提取方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥制劑【技術領域】，具體涉及一種含人參的植物組合物提取方法及應用。
【背景技術】
[0002]含人參的植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，收載于衛生部標準(WS3-B-0010-89)，目前的提取方法是以上十味，粉碎成細粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜80~100g，制成大蜜丸，即得，能滋陰益氣，固本培元。用于陰虛氣弱，虛勞咳嗽，心悸氣短，骨蒸潮熱，腰酸耳鳴，遺精盜汗，大便干燥。
[0003]現有技術中，尚未有含人參的植物組合物在提取制備方面采用微波技術的報道，而采用打粉的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應用。

【發明內容】

[0004]發明目的:為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種含人參的植物組合物提取方法。
[0005]本發明的另一個目的在于提供一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用。
[0006]技術方案:本發明的目的是通過如下的方案實現的:
[0007]一種含人參的植物組合物提取方法，植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W,萃取2次,每次4-8分鐘,合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑，每丸4.5g。
[0008]上述一種含人參的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0009]一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用，含人參的植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑。
[0010]上述一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011]現有技術中，含人參的植物組合物每丸9g，每次I丸，一日2次，采用本發明制備成的含人參的植物組合物每丸4.5g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需I丸，一日服用2次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量，本發明以生地黃、熟地黃、酒炙山茱萸滋陰為君藥，人參、山藥益氣為臣藥，澤瀉、牡丹皮、茯苓、麥冬、天冬固本培元為佐使藥，共同達到滋陰益氣，固本培元的作用。
【具體實施方式】
[0012]以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
[0013]實施例1
[0014]取人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑，每片4.5g。
[0015]實施例2
[0016]取人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑。
[0017]實施例3
[0018]取人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑。
[0019]本發明中藥材均為藥典品種。
[0020]實施例4:含人參的植物組合物抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖的實驗研究資料
[0021]I實驗材料
[0022]1.1實驗用細胞株
[0023]大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞，南京醫科大學實驗動物中心實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規培養。
[0024]1.2實驗藥物`
[0025]研究藥物:本發明含人參的植物組合物:按實施例1方法制備。
[0026]藥液儲液:稱取IOOmg含人參的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ I doff管分裝，-20°c存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0027]1.3實驗試劑
[0028]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100-061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號:2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；
[0029]1.4實驗器材
[0030]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ; IOcm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司)；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。
[0031]2實驗方法
[0032]I)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進行常規培養(IOcm培養皿)，當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA, 37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養基中和反應，吹打細胞后將其轉入離 心管中，1000rpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X 104個/ml。
[0033]2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 μ I,培養板放入細胞培養箱中(37 °C，5%C02 )常規培養。
[0034]3)根據細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入含人參的植物組合物溶液，繼續培養 24h。
[0035]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續培養 4h。
[0036]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0037]6)同時設置本底(不加細胞，只加培養液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜)，每組設定6個復孔。
[0038]7)結果以藥物對細胞的抑制率表示:
[0039]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。
[0040]3統計處理
[0041]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以mean+ S.D.表不。
[0042]4實驗結果
[0043]MTT法實驗后統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(Ρ〈0.01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0044]表1含人參的植物組合物對大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖抑制影響研究
[0045]
【權利要求】
1.一種含人參的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥,粉碎,加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4_8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑，每丸4.5g。
2.根據權利要求1所述一種含人參的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
3.一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用，其特征在于含人參的植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成丸劑。
4.根據權利要求3所述 一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【文檔編號】A61K36/8968GK103816368SQ201410091162
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月12日 優先權日:2014年3月12日
【發明者】李正梅 申請人:李正梅