作為缺血性腦損傷的有效神經保護劑并用于治療疼痛的psd-95的高親和力的二聚抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供了nNOS、PSD-95、和NMDA受體的三元蛋白復合物的新穎有效抑制劑以及用于預防和/或治療受試者的與興奮性毒素相關的疾病和慢性疼痛癥狀的包含此抑制劑的醫藥組合物。所述抑制劑是二聚PSD-95抑制劑，其包含通過連接子連接第二肽或肽類似物的第一肽或肽類似物，其中第一肽或肽類似物和第二肽或肽類似物包含至少四個酰胺鍵合的具有序列YTXV或YSXV的殘基，其中a.Y選自E、Q、和A，或其類似物，以及b.X選自A、Q、D、N、N-Me-A、N-Me-Q、N-Me-D、和N-Me-N或其類似物，其中細胞穿透肽(CPP)連接到連接子或第一和第二肽或肽類似物的氨基酸側鏈。所述連接子可為PEG或NPEG連接子。
【專利說明】作為缺血性腦損傷的有效神經保護劑并用于治療疼痛的PSD-95的高親和力的二聚抑制劑
【技術領域】
[0001]支架蛋白PSD-95是一種用于治療缺血性中風和創傷性腦損傷以及用于慢性疼痛癥狀(例如，神經性及炎性疼痛)的潛在標靶。本發明涉及用作與PSD-95-相關的蛋白-蛋白相互作用的抑制劑的二聚肽類似物的供應。
【背景技術】
[0002]蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于重要細胞過程至關重要，并涉及多種病理生理學狀態，其中它們作為治療干預的潛在標祀。PPI已普遍被認為難以成為治療分子的標祀，因為他們常具有大、平坦、及疏水性界面的特征。
[0003]一類PPI為涉及PDZ域的一類[PDZ是突觸后密度蛋白-95(PSD_95)、果蠅同源盤狀巨大腫瘤抑制劑(DlgA)和閉鎖小帶-1蛋白(Z0-1)的縮寫]。PDZ域常用作細胞中大蛋白復合物組裝所涉及的支架蛋白的模塊，并且富含于真核生物中。PDZ域包含約90個氨基酸并常與相互作用蛋白的C-端相互作用。PSD-95含有三個PDZ域(H)Zl-3)，其結合具有共有序列 Glu/Gln-Ser/Thr-X-Val-COOH 的肽配體。
[0004]PDZ域與C-端肽的相互作用的結構基礎先通過與天然肽配體CRIPT(序列:YKQTSV)復合的PSD-95的H)Z3的X-射線結晶結構闡明。TOZ3含有六個反向平行的(6-折疊(PA-PF)和兩個a-螺旋UA和a B)，C-端肽配體以另一個反向平行的P -折疊結合到PB折疊與aB螺旋之間的凹槽中。肽配體的兩個殘基被認為對親和力和特異性特別重要，第一個(P°)和第三個(P—2)氨基酸(從C-端數起)。將P°位置的氨基酸的側鏈伸入疏水性袋中并需要具有脂肪族側鏈的氨基酸(Val、I Ie和Leu)。在H)Z3-CRIPT結構中，Thr(P_2)中羥基氧與His372的咪唑側鏈中的氮形成氫鍵。保守Gly-Leu-Gly-Phe (PDZ3的322-325位)基序和PDZ域中帶正電的殘基(PDZ3中Arg318)調節與C-端羧酸基團的結
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[0005]PSD-95中rozi和H)Z2域與多種蛋白相互作用，包括同時結合N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)型親離子谷氨酸受體和一氧化氮產生酶、神經元型一氧化氮合酶(nNOS)(圖1)。NMDA受體是涉及神經退化性疾病和急性腦損傷的興奮毒性的主要介質，但是NMDA受體的拮抗劑通過阻止谷氨酸介導的離子流來有效降低興奮毒性，它們也阻止重要的生理過程。因此，NMDA受體拮抗劑因為低耐受性并缺乏效力而未能用于中風臨床試驗。但是，可利用PSD-95抑制劑擾亂細胞內nNOS/PSD-95/NMDA受體復合物對興奮毒性特異地抑制(圖1)。PSD-95通過TOZl和TOZ2同時地結合NMDA受體(主要是GluN2A和GluN2B亞單位)和nNOS。使NMDA受體活化產生鈣離子內流，其使nNOS活化，進而產生一氧化氮(NO)。因此，PSD-95介導NMDA受體活化與NO產生之間的特定關聯，如果NO產生持續長時間，會對細胞有害，并且PSD-95為一種谷氨酸介導的神經中毒的關鍵促進劑(圖1)。通過靶向PSD-95抑制nNOS/PSD-95/NMDA受體三元復合物相互作用被認為通過損害鈣離子進入與NO產生之間的功能性聯系來阻止小鼠的缺血性腦損傷，而NMDA受體的生理功能(例如，離子流和促生存信號傳導通道)仍完整。
[0006]先前利用九肽實現了對nNOS/PSD-95/NMDA受體復合物的抑制，所述九肽對應于GluN2B的C-端并融合至HIV-1Tat肽，已知HIV-1Tat肽能夠利于其對膜和血腦屏障的穿透。此20肽(Tat-NR2B9c ;序列:YGRKKRRQRRRKLSSIESDV)在患有缺血性腦損傷的大鼠模型中表現出有前景的神經保護性質(Aarts等，Science298，2002，846-850頁，2002 ；Sun等，Stroke39，2008，2544-2553頁)并且目前在臨床試驗中作為治療缺血性腦血管的潛在藥物，如中風。但是，此化合物因與PSD-95中H)Zl-2的低親和力(1=4.6^;參見后文)，可能使其成為無效的非選擇性化合物。
[0007]W02010/004003描述了通過聚乙二醇連接子(PEG)連接的二聚肽配體，其同時結合psd-95的rozi和roz2域，以及其用于治療缺血性腦血管的用途。仍需要與rozi和roz2域具有更高親和力的PSD-95抑制劑，其對治療缺血性中風和創傷性腦損傷具有改善的體內療效。
[0008]神經性疼痛因創傷性損傷、手術、或例如糖尿病或自體免疫疾病的疾病對周圍或中樞神經系統造成的損傷引起。這些損傷產生急性相反應，其特征在于‘傷害性疼痛’和發炎。在大多數患者中，盡管傷口愈合，但疼痛仍持續，出現了慢性神經性疼痛的狀態。除了神經損傷后所涉及的炎癥，慢性疼痛也可因為免疫細胞所釋放的介質引起的炎癥引發，所述介質使疼痛通道敏化。脊髓感覺神經元的敏化(‘止揚’)是神經性疼痛與慢性炎性疼痛的共同特征，并通過長時間活化傷害感受器引起。此癥狀表現為自發性燒灼痛、對疼痛刺激的夸大反應(痛覺過敏)、和對常見的非疼痛性刺激所反應的疼痛(痛覺異常)。慢性疼痛，尤其因為神經損傷導致的慢性疼痛，不能通過當前藥物(例如類鴉片和非留體抗炎藥(NSAID))很好地處理。NMDA受體拮抗劑在動物模型和臨床環境中阻斷疼痛反應的敏化并表現出良好的止痛性，但它們出現不可接受的副作用并因此不能臨床使用。因此，需要可改善疼痛治療(尤其與NMDA受體相關的疼痛癥狀)但避免當前藥物不可接受的副作用的替代性藥物。

【發明內容】

[0009]本發明的第一個實施方案提供了一種化合物，其包含通過連接子連接第二肽或肽類似物的第一肽或肽類似物，其中所述第一和所述第二肽或肽類似物包含至少四個酰胺鍵合的具有序列YTXV或YSXV的殘基，其中[0010]a.Y選自E、Q、和A、或其類似物，以及
[0011]b.X 選自 A、Q、D、N、N-Me-A, N-Me-Q, N_Me_D、和 N-Me-N 或其類似物，以及
[0012]其中具有細胞穿透肽(CPP)功能的第三肽被連接到所述連接子，其中所述第三肽包含至少4個選自精氨酸和/或賴氨酸的氨基酸殘基。優選地，所述連接子包含PEG，其中所述PEG中至少一個氧原子被氮原子取代得到NPEG，優選地，所述第三肽連接到所述NPEG連接子的氮原子，優選地通過酰胺鍵連接。
[0013]本發明的第二個實施方案提供了一種化合物，其包含通過連接子連接第二肽或肽類似物的第一肽或肽類似物，其中該連接子包含PEG，其中所述第一肽或肽類似物和所述第二肽或肽類似物包含至少4個酰胺鍵合的具有序列YTXV或YSXV的殘基，其中
[0014]a.Y選自E、Q、和A、或其類似物，以及[0015]b.X 選自 A、Q、D、N、N-Me-A、N-Me-Q、N-Me_D、和 N_Me_N 或其類似物，其特征在于所述第三肽連接到所述第一肽或肽類似物和所述第二肽或肽類似物的一個殘基的側鏈，其中所述第三肽包含至少4個選自精氨酸和/或賴氨酸的氨基酸殘基并具有細胞穿透肽(CPP)功能。
[0016]在本發明的上述化合物的另一個實施方案中，所述連接子是包含1-28個乙二醇部分(N=l-28)，優選地，4至12個乙二醇部分(N=4-12)，更優選地，4-6個乙二醇部分(N=4-6)的PEG連接子。在本發明化合物的另一個實施方案中，所述連接子是PEG-二酸或NPEG-二酸，其中所述連接子中每個羧基通過酰胺鍵連接到所述第一肽或肽類似物或所述第二肽或肽類似物中末端殘基的末端氨基。
[0017]在本發明的上述化合物的另一個實施方案中，所述第三肽(CPP)包括逆倒轉肽。在本發明的上述化合物的另一個 實施方案中，所述第三肽(CPP)是Tat肽(YGRKKRRQRRR)或逆倒轉-D-Tat 肽(rrrqrrkkr)。
[0018]在本發明的上述化合物的另一個實施方案中，所述肽或肽類似物是長度達5至10個酰胺鍵合的殘基。在本發明的上述化合物的另一個實施方案中，所述肽由至少4個L-氨基酸殘基組成。在本發明的上述化合物的另一個實施方案中，X選自A、Q和D。在本發明的上述化合物的另一個實施方案中，所述肽或肽類似物被N-烷基化。
[0019]本發明又提供了一種包含PEG-二酸的連接子化合物，其中所述PEG中一個氧原子被氮原子取代得到NPEG- 二酸。在本發明的連接子化合物的另一個實施方案中，所述氮原子連接保護基團。
[0020]本發明又提供了一種用作藥物的醫藥組合物，其包含根據本發明的以上任一個實施方案的化合物。在另一個實施方案中，將包含根據本發明的以上任一個實施方案的化合物的醫藥組合物用于預防和/或治療受試者的與興奮性毒素相關的疾病。
[0021]本發明又提供了一種用于預防和/或治療受試者疼痛的包含根據本發明的上述任一個實施方案的化合物的醫藥組合物。
[0022]本發明又包括一種提供預防和/或治療受試者的與興奮性毒素相關的疾病或疼痛的方法，其包括對受試者施用上述醫藥組合物，其中所述疾病可為CNS的缺血性或創傷性損傷。
[0023]在另一個實施方案中，本發明提供了一種用于預防和/或治療受試者疼痛的醫藥組合物，該組合物包含一種活性化合物，該活性化合物包含通過連接子連接到第二肽或肽類似物的第一肽或肽類似物，其中所述第一肽或肽類似物和所述第二肽或肽類似物包含至少四個酰胺鍵合的具有序列YTXV或YSXV的殘基，其中(a)Y選自E、Q、和A、或其類似物，而(b) X選自A、Q、D、N、N-Me-A, N-Me-Q, N-MeUP N-Me-N或其類似物。在另一個實施方案中，該活性化合物中的連接子是PEG連接子或NPEG連接子并且包含4至28個乙二醇部分(N=4-28)。在另一個實施方案中，該活性化合物中的連接子的羧基連接到所述第一肽或肽類似物或所述第二肽或肽類似物的末端殘基。在另一個實施方案中，該活性化合物選自PEG4 (IETAV)2、NPEG4 (IETAV)2、PEG6 (IESDV) 2、和 PEG4 (IESDV) 2。
[0024]該活性化合物可另外具有第三肽，其包含至少4個選自精氨酸和/或賴氨酸的氨基酸殘基，并具有CPP功能，其中所述第三肽連接到連接子或連接到所述第一肽或肽類似物和所述第二肽或肽類似物的氨基酸側鏈。【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1.PSD-95通過其PDZl和PDZ2域同時結合NMDA受體和nNOS。進而，PSD-95利于NMDA受體活化與NO產生之間的功能性聯系，因為來自NMDA受體的鈣(Ca2+)進入活化nNOS。PSD-95抑制劑(例如所說明的靶向PSD-95中TOZ1-2的二聚配體)抑制三元nNOS/PSD-95/NMDA受體復合物的形成并解除NMDA受體活化與NO產生之間的聯系，從而對興奮中毒起到神經保護作用。
[0026]圖2.PEG4- 二酸和NPEG4- 二酸連接子，以及二聚化合物AB125和AB141的化學結構。
[0027]圖3.二聚配體AB144和AB147的化學結構，提供了它們的完整結構，以及其替代性的展示，其中五肽部分、Tat-序列和逆倒轉-D-Tat序列采用1_字母氨基酸密碼表示。
[0028]圖4.熒光二聚配體AB143和AB145的化學結構，其在熒光偏振試驗中用作探針，和/或用于研究CNS穿透性。
[0029]圖5.通過熒光偏振測定的與PSD-95的TOZ1-2的親和力(左)以及在人血漿中在37°C下的體外穩定性(右)。將Ki親合常數和穩定性半衰期(T1/2)列在表格中。表格及熒光偏振圖(左)中數據表示>3獨立測定值，而來自一個試驗的代表性數據顯示在血漿圖(右圖)中。
[0030]圖6.游離 AB140(等高線:11、E2、T3、A4、V5)和與 PSD-95 的 PDZ1-2 復合的AB140 (其余a/b等高線)的1H-15N相關光譜(NMR)。歸屬(assignment)顯示在光譜中。對于結合形式的二肽，未能確定‘a’峰和‘b’峰分別結合哪個PDZ域。
[0031]圖7.利用程序SSP計算的結合形式的AB140的二級結構偏向性。值一表明完整形成的a-螺旋而值負一表明完整延伸結構，而值接近零表明無規則卷曲。黑條對應于圖6中標識‘a’的殘基而灰色條對應于標識‘b’的殘基。
[0032]圖8.未經操作的小鼠的熒光類似物的血-腦屏障穿透率。(A)靜脈(1.V.)注射2小時后，經5-FAM(F)-標記的化合物的平均熒光強度的條形圖，并與經鹽水處理的小鼠比較。(B)F-Tat-NPEG4(IETDV)2(AB145) (n=2)、F-逆倒轉-D_Tat_NPEG4(IETDV)2(AB148)(n=2)、和 F-Tat-NR2B9c (MS23) (n=2)而非 F-NPEG4 (IETAV) 2 (AB143) (n=2)的檢測結果，并與經鹽水處理的小鼠(n=2)比較。F=5-FAM;Re=逆倒轉。將數據表示為平均值土SEM ;*/**/***:p < 0.05/0.01/0.001 (非參數 Mann-Whitney)。比例尺:100um。
[0033]圖9.pMCAO試驗的時間曲線。手術30分鐘后，靜脈施用所有化合物(3nmol/g)，然后存活5.5或47.5小時。
[0034]圖10.手術存活6小時后，化合物的神經保護效果。條形圖顯示了 pMCA06小時后的平均梗死體積。與經鹽水處理的對照小鼠相比，AB144處理顯著地降低了缺血性腦損傷，而通過單體Tat-NR2B9c處理(n=16_19)不能達到此效果。數據顯示為平均值土SEM;*/**/***:p < 0.05/0.01/0.001 ;非參數 Mann-Whitney 檢驗。
[0035]圖11.手術存活48小時后，化合物的神經保護效果。甲苯胺藍染色顯示出PMCA048小時后的缺血性腦損傷。比例尺:1mm。
[0036]圖12.手術存活48小時后，化合物的神經保護效果。條形圖顯示了，與經鹽水處理的對照小鼠相比，AB144持續更長時間的降低梗死效果，并且與經單體Tat-NR2B9c (n=16_19)處理的小鼠相比，梗死體積明顯更小。同樣，AB147得到與AB144類似的持續更長時間的梗死降低效果。將數據表示成平均值土SEM ;*/**/***:p
<0.05/0.01/0.001 ;非參數 Mann-whitney 檢驗。
[0037]圖13.pMCAO前后(48小時試驗)，記錄生理參數，例如(左)溫度和(右)體重。時間點(X-軸)表示相對手術(Oh)的時間。(左)圖顯示了 PMCA030分鐘后，體溫因麻醉降低，但是在靜脈注射前有此記錄了。手術I和3小時后，每組未出現藥物引起的差異。(右)圖顯示了 pMCAO(Oh)前3天以及pMCAO后24和48小時，每組體重沒有差異。將數據表示成平均值土 SEM。雙向方差分析。
[0038]圖14.對術后存活48小時的小鼠的運動功能的評價。⑷條形圖顯示了 pMCAO前(基線)和后，兩前爪的平均握力。經鹽水和Tat-NR2B9c處理的小鼠顯示了 pMCA048小時后，與基線相比，握力顯著降低。經AB144和AB147處理的小鼠與基線相比，未發現差異。(B)條形圖顯示了前爪因缺血引起的不對稱，在經鹽水和單體Tat-NR2B9c處理的小鼠中都有此發現，但是在經AB144和AB147處理的小鼠中未發現到。(C)四次試驗(T1-T4)的轉桿性能測試顯示了 PMCA048小時后，小鼠短期的運動學習技能。數據表示出每組小鼠試驗的學習成分，但是經AB144和AB147處理后得到比鹽水處理更顯著的改善(參照T2)，與Tat-NR2B9c相比耐受性增強(參見文本)。(A-C)將所有數據顯示成平均值土SEM ；*/**/***:p < 0.05/0.01/0.001，(A-B)配對學生 t 檢驗；(C)Wilcoxon 配對檢驗。
[0039]圖 15.AB144 類似物的化學結構:AB144_B、AB144_C、AB144_D、AB144_E、AB144_H、AB144_I ;相同類型的結構式如圖3所示。
[0040]圖16.方案1.合成經N保護(Ns)形式的NPEG-連接子A_C (Ns_NPEG4- 二酸-連接子)，其用于制造NPEG基的二聚化合物的二聚法。將NS-NPEG4- 二酸-連接子A用于AB141、AB144、AB147、AB144_D、AB144_E、AB143、AB145、和 AB148。將 Ns_NPEG4_ 二酸-連接子B用于AB144_B。將Ns-NPEG`4- 二酸-連接子C用于AB144_C。
[0041]圖17.AB125在炎性疼痛的完全弗氏佐劑模型中的效果。在測試前24小時，使動物經跖內CFA和腹膜內AB125(0、3、10、或30mg/kg)處理。通過von Frey法測量機械性痛覺過敏/痛覺異常。將數據表示成平均值土SEM，顯示出相對于基線值的縮爪閾值(也就是，< 1.0對應于痛覺過敏/痛覺異常)。經鹽水處理的小鼠表現出對CFA的明顯反應，機械閾值降到基線的36% (### ；p < 0.001)。在經3、10、或30mg/kg AB125處理的小鼠中未觀察到此下降。經3、10、或30mg/kg AB125處理的小鼠的閾值明顯不同于經鹽水處理的小鼠(***:p < 0.001)。
[0042]圖18.在同時施用CFA下，AB125(a)和MK_801(b)對CFA引起的痛覺過敏的影響。對于AB125，ANCOVA表現出基線的顯著主效應(F1，47=4.61 ；p=0.037)，處理的顯著主效應(F3，47=5.00 ；p=0.004)，時間的顯著主效應(F1,48=42.02 ；p < 0.001)，而沒有處理和時間的顯著相互作用(F3，48=0.71 ；p=0.552)。既定比較表現出AB125在3mg/kg(p=0.012)和10mg/kg(p=0.03)下I小時后顯著逆轉了 CFA引起的痛覺過敏。在3mg/kg(p=0.008)和10mg/kg(p=0.003)處理組中，24小時后仍觀察到顯著的逆轉。對于MK-801，ANCOVA表現出沒有基線的顯著主效應(Fl，27=0.03 ；p=0.86)，而表現出處理的顯著主效應(F3，27=9.60 ；P < 0.001)，時間的顯著主效應(Fl，28=31.14 ；p < 0.001)，但是沒有處理和時間的顯著相互作用(F3，28=0.90 ；p=0.452)。既定比較揭示 MK-801 在 0.lmg/kg(p=0.004)下 I 小時后顯著逆轉CFA引起的痛覺過敏。在0.lmg/kg(p < 0.001)處理組中，24小時后仍觀察到顯著的逆轉。
[0043]圖19.0?么注射24小時后，施用么8125的效果。ANCOVA表現出基線的顯著主效應(F1，34=15，67 ；p < 0.001)，處理的顯著主效應(F4，34=7.98 ；p < 0.001)，時間的顯著主效應(F2, 70=24.41 ；p < 0.001)，但是沒有處理和時間的顯著相互作用(F1，70=1.31 ；P=0.253)。既定比較揭示 3mg/kg(p=0.002)和 10mg/kg(p=0.001)在 I 小時后對 CFA 引起的痛覺過敏的逆轉。在3mg/kg(p=0.015)和10mg/kg(p < 0.001)處理組中，24小時后仍觀察到顯著的逆轉。72小時后，所有劑量(1、3、和10mg/kg)對痛覺過敏產生顯著逆轉(p
<0.001)。
[0044]圖20.在長期參考記憶的食物偏好的社會傳遞試驗中，AB125和MK-801對食物攝取(a-b)和鑒別指數(c-d)的影響。對于AB125，鑒別指數的單向ANOVA未顯示處理的顯著主效應(F2,22=0.108 ；p=0.898)。既定比較顯示所測試的AB125劑量(所示的30和60mg/kg)沒有顯著效果。對于MK-801，單向ANOVA顯示出處理的顯著主效應(F2，21=5.28 ；p=0.014)。預計平均值的既定比較顯示出0.lmg/kg MK-801明顯降低鑒別指數(p=0.005)。
[0045]圖21.AB125和MK-801對在修改的Y-迷宮的熟悉臂和新穎臂中所耗時間的影響(a-b)，以及對鑒別指數(DI=(新穎-熟悉)/(新穎+熟悉))的影響(c-d)。對于AB125，單向ANOVA揭示AB125對鑒別指數沒有顯著主效應(F3，29=0.85 ；p=0.478)。既定比較顯示所測試的AB125劑量(所示的30和60mg/kg)沒有顯著影響。對于MK-801，單向ANOVA顯示出處理的顯著效果(F3, 23=15.43 ；p < 0.001)。既定比較顯示出0.05 (p=0.019)和0.1mg/kg MK-801均降低鑒別指數(p < 0.001)。
[0046]圖22.在轉桿試驗中，AB125和MK-801對運動性能的效果。對于AB125(所示的30和60mg/kg)，雙向RM ANOVA顯示沒有處理的顯著主效應(F2，48=1.18 ；p=0.333)，沒有時間的顯著主效應(F3，48=0.84 ；p=479),以及沒有處理和時間的顯著相互作用(F6, 48=1.26 ；p=0.293)。對于MK-801，雙向 ANOVA表現出處理的顯著主效應(F2, 66=55.72 ；P < 0.001)，時間的顯著主效應(F3, 66=3.69 ；p=0.016)、以及處理和時間的顯著相互作用(F6, 66=2.25 ；p=0.049)。既定比較顯示出 0.lmg/kg MK-801 在 15 分鐘(p < 0.001)、30 分鐘(p < 0.001)、45分鐘(p < 0.001)、和60分鐘(p=0.006)后在轉桿上的時間明顯減少。
[0047]圖23.AB144在炎性疼痛的完全弗氏佐劑模型中的效果。使動物同時經跖內CFA和腹膜內AB144 (O、3、10、或30mg/kg)處理，并在I和24小時后，通過von Frey法測量機械性痛覺過敏/痛覺異常。將數據表示成平均值土SEM，顯示出相對于基線值的縮爪閾值(也就是，< 1.0對應痛覺過敏/痛覺異常)。經鹽水處理的小鼠表現出對CFA明顯的反應，機械閾值降至基線的25% (### ；p < 0.001)。此降低在經30mg/kgAB144處理的小鼠中施用AB144/CFA1小時后，以及在經10和30mg/kg AB144處理的小鼠中施用AB144/CFA24小時后并未發現到(* =P < 0.05)。
【具體實施方式】
[0048]1.縮寫和術語 的定義:
[0049]如文中定義，“a ( — ) ”可意指一個或多個，取決于其所使用的語境。
[0050]酰胺鍵是由羧酸與胺之間發生的反應(并移除水)形成。當反應在兩個氨基酸殘基之間進行時，將因反應形成的鍵稱為肽鍵；
[0051 ] 氨基酸，具有產蛋白質性，在文中，根據IUPAC推薦，利用其I個字母或3個字母密碼命名，參見例如//www.chem.qmw.ac.uk/iUpac0如果不特指，氨基酸可為D或L-形式。在說明書中(但不在序列表中)，以大寫字母開始的3個字母密碼表示L-形式的氨基酸，而采用小寫字母的3個字母密碼表示D-形式的氨基酸；
[0052]“包括(包含)”應以包含性的方式理解。因此，舉例來說，包括(包含)化合物X的組合物可包括(包含)化合物X和視需要的其它化合物；
[0053]CFA，完全弗氏佐劑；
[0054]CNS，中樞神經系統；
[0055]CPP，細胞穿透肽；其特征在于穿過哺乳動物細胞質膜的能力，進而可細胞內遞送貨物分子，例如其所連接的肽、蛋白、寡核苷酸；
[0056]DCM，二氯甲烷；
[0057]二聚PSD-95抑制劑，其為一種包括兩個肽或肽類似物的PSD-95抑制劑，所述兩個肽或肽類似物通過連接子共價連接，因此，可同時結合到PSD-95的rozi和roZ2，或同時與PSD-95 的 PDZl 和 PDZ2 反應；
[0058]P0,定義為對應于肽/肽類似物的C-端氨基酸的第一個氨基酸殘基或類似物；
[0059]P'定義為從肽/肽類似物的C-端氨基酸數起的第二個氨基酸殘基或其類似物；
[0060]P_2，定義為從肽/肽類似物的C-端氨基酸數起的第三個氨基酸殘基或其類似物；
[0061]P—3，定義為從肽/肽類似物的C-端氨基酸數起的第四個氨基酸殘基或其類似物；
[0062]P_4，定義為從肽/肽類似物的C-端氨基酸數起的第五個氨基酸殘基或其類似物；
[0063]P—5，定義為從肽/肽類似物的C-端氨基酸數起的第六個氨基酸殘基或其類似物；
[0064]DIPEA，二異丙基乙胺；
[0065]DMF, N，N- 二甲基甲酰胺；
[0066]乙二醇部分，文中指構成PEG或NPEG連接子的結構單元。‘乙二醇部分’的更專業名稱是‘氧亞乙基’，此單元的化學式如下:
[0067]
【權利要求】
1.一種化合物，其包含通過連接子連接第二肽的第一肽，其中所述第一肽和所述第二肽包含至少4個酰胺鍵合的具有序列YTXV或YSXV的殘基，其中 a.Y選自E、Q和A，以及
b.X 選自 A、Q、D、N、N-Me-A, N-Me-Q, N_Me_D、和 N_Me_N，以及 其中所述連接子包含PEG，其中所述PEG中至少一個氧原子被氮原子取代得到NPEG， 其中細胞穿透肽(CPP)通過酰胺鍵連接到所述連接子的氮原子，以及 其中所述CPP包含至少4個選自精氨酸和/或賴氨酸的氨基酸殘基。
2.根據權利要求1所述的化合物，其中所述連接子包含4至28個乙二醇部分(N=4-28)。
3.根據權利要求1或2所述的化合物，其中所述連接子是NPEG-二酸連接子，其中所述連接子中每個羧基連接所述第一肽或肽類似物或所述第二肽或肽類似物的末端殘基。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的化合物，其中所述CPP包括逆倒轉肽。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的化合物，其中所述CPP是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR的Tat肽或具有氨基酸序列rrrqrrkkr的逆倒轉-d_Tat肽。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的化合物，其中所述第一肽和/或所述第二肽為長度5-10個酰胺鍵合的殘基。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的化合物，其中所述第一肽和/或所述第二肽由至少4個L-氨基酸殘基組成。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的化合物，其中X選自A、Q和D。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的化合物，其中所述第一肽和/或所述第二肽被N-烷基化。
10.一種用作藥物的醫藥組合物，其包含根據權利要求1至9中任一項所述的化合物。
11.一種醫藥組合物，其包含根據權利要求1至9中任一項所述的化合物，其用于預防和/或治療受試者的與興奮性毒素相關的疾病。
12.根據權利要求11所述的醫藥組合物，其中所述疾病是CNS的缺血性或創傷性損傷。
13.—種醫藥組合物，其包含根據權利要求1至9中任一項所述的化合物，其用于預防和/或治療受試者疼痛。
14.一種試劑盒，其包含根據權利要求11至13中任一項所述的醫藥組合物，還包含將所述組合物遞送給受試者的裝置。
15.一種用于預防和/或治療受試者疼痛的醫藥組合物，其包含化合物，該化合物包含通過連接子連接第二肽的第一肽，其中所述第一肽和所述第二肽包含至少4個酰胺鍵合的具有序列YTXV或YSXV的殘基，其中 a.Y選自E、Q和A，以及
b.X 選自 A、Q、D、N、N-Me-A, N-Me-Q, N_Me_D、和 N_Me_N。
16.根據權利要求15所述的醫藥組合物，其中所述連接子是PEG連接子并包含4至28個乙二醇部分(N=4-28)。
17.根據權利要求16所述的醫藥組合物，其中所述連接子是PEG-二酸連接子并且所述連接子中每個羧基連接所述第一肽或所述第二肽的末端殘基。
18.根據權利要求16所述的醫藥組合物，所述化合物選自PEG4(IETAV) 2、bo S / ? nr\r-1-r \ T r/~r t 1-1 I/ V S / ? nr\r-f-r \ r\r\r-1 t vS / ?TTT/~rx \ T r/~r TkT
【文檔編號】A61P25/00GK103533949SQ201280023754
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年5月11日 優先權日:2011年5月13日
【發明者】A·巴赫, K·斯特羅姆戈德 申請人:哥本哈根大學